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INGESTA RICA EN CARBOHIDRATOS
1) MOVILIZACIÓN DE GLUCOSA DEL TORRENTE SANGUÍNEO
2) METABOLISMO DE LA GLUCOSA
GLUCOSA
PIRUVATOGLUCÓLISIS
INGESTA RICA EN CARBOHIDRATOS
GLUCÓGENO
SÍNTESIS DE
GLUCÓGENO
DURANTE EL AYUNO
GLUCONEOGÉNESIS
NADPHRIBOSA 5-FOSFATO
RUTA DE LA
S
PENTOSAS FO
SFATO
METABOLISMO DE LA GLUCOSA
CONDICIONES AERÓBICAS
CICLO DEL ÁCIDOCÍTRICO FOSFORILACIÓN OXIDATIVA
DESTINO DEL PIRUVATO EN CONDICIONES AERÓBICAS:
¿EN DÓNDE SUCEDE ESTO?
RESPIRACIÓN AERÓBICA: INCLUYE GLUCÓLISIS, CICLO DEL ÁCIDO CÍTRICO Y FOSFORILACIÓN OXIDATIVA
PARTE DEL PROCESO DE RESPIRACIÓN ES LLEVADO A CABO EN LA MITOCONDRIA
MATRIZ
MEMBRANA INTERNA MITOCONDRIAL
MEMBRANA EXTERNA MITOCONDRIAL
Espaciointermembranal
Membrana externaPermeable a moléculas pequeñas e iones
Membrana internaImpermeable a moléculas pequeñas e iones (H+)
Presenta:�Complejos I a IV�ADP-ATP translocasa�ATP sintasa (FoF1)�Otros transportadores de membrana
MatrizContiene:�Complejo piruvato deshidrogenasa�Enzimas del ciclo del ácido cítrico�Enzimas de la ββββ-oxidación�Enzimas de la oxidación de aa�DNA, ribosomas�ATP, ADP, Pi, Mg2+, Ca2+, K+
VII. CICLO DEL ÁCIDO CÍTRICO
I. GeneralidadesII. Fuentes del Acetil-CoA. Reacciones anapleróticasIII. RegulaciónIV. Importancia del ciclo como proveedor de esqueletos
carbonados para otras vías metabólicas
CICLO DEL ÁCIDO CÍTRICO
CICLO DE LOS ÁCIDOS TRICARBOXÍLICOS (CICLO TCA)
CICLO DE KREBS (Por su descubridor)
FORMA PARTE DEL PROCESO DE RESPIRACIÓN CELULAR
Procesos moleculares mediante los que las célulasconsumen oxígeno (O2) y producen dióxido de carbono (CO2)
GRASAS POLISACÁRIDOS PROTEÍNAS
ÁCIDOS GRASOSY GLICEROL
GLUCOSA YOTROS AZÚCARES
AMINOÁCIDOS
ACETIL CoA
CICLO DE
KREBS
CoA
FOSFORILACIÓN OXIDATIVAATP
CO2
CICLO DEL ÁCIDO CÍTRICO
CICLO DE LOS ÁCIDOS TRICARBOXÍLICOS (CICLO TCA)
CICLO DE KREBS (Por su descubridor)
Hans Krebs Lipmann
EL CICLO DE KREBS ES UN CICLO ANFIBÓLICO PORQUE:
A) ES CATABÓLICO (Se lleva a cabo la oxidación del carbono proveniente de otras vías)
B) ES ANABÓLICO (Es proveedor de esqueletos carbonadospara otras vías metabólicas)
CICLO DE
KREBS
Acetil-CoA
Proteínas GlucosaLípidos
CO2
SÍNTESIS
SE LLEVA A CABO EN LA MATRIZ MITOCONDRIAL
PARA PODER INICIAR EL CICLO DEL ÁCIDO CÍTRICOES NECESARIA LA PRODUCCIÓN DE
ACETIL-CoA(ACETATO ACTIVADO)
1. EL PIRUVATO SE OXIDA A ACETIL-CoA Y CO21. Es una reacción previa al ciclo de Krebs2. Es una reacción irreversible ∆G’0= -33.4 kJ/mol3. Es una reacción catalizada por el complejo de la PIRUVATO DESHIDROGENASA
(SON TRES ENZIMAS: E1 + E2 + E3)4. El complejo requiere de 5 COENZIMAS: el pirofosfato de tiamina (TPP), el flavinaadenina dinucleótido (FAD), el coenzima A (CoA-SH), el nicotinamida adeninadinucleótido (NAD) y el lipoato.
TIAMINA TPPRIBOFLAVINA FADNICOTINAMIDA NADPANTOTENATO CoA-SHV
ITAMINAS
5. Cataliza una DESCARBOXILACIÓN OXIDATIVA, proceso de oxidación irreversible, donde el piruvato pierde un grupo carboxilo en forma de molécula de CO2, mientras que los dos carbonos restantes se transforman en el grupo acetilo del Acetil-CoA
E1= PIRUVATO DESHIDROGENASA
E2= DIHIDROLIPOIL TRANSACETILASA
E3= DIHIDROLIPOIL DESHIDROGENASA
ESTRUCTURA DEL COMPLEJO DE LA PIRUVATO DESHIDROGENASA
E2
E1= PIRUVATO DESHIDROGENASAContiene TPP en su sitio activo
E2= DIHIDROLIPOIL TRANSACETILASAContiene 3 dominios: de unión a lipoilo, de unión a E1 y E3 yel dominio de aciltransferasa
E3= DIHIDROLIPOIL DESHIDROGENASAContiene FAD
LA PIRUVATO DESHIDROGENASA CONSTA DE 3 ENZIMASY CINCO COENZIMAS
Grupos prostéticos
y CoA-SH
y NAD
β-Mercapto-etilamina Ácido pentoténico
Adenina
Ribosa 3’-fosfato
3’-Fosfoadenosina difosfatoCoenzima A
Grupo tiolreactivo
EL COENZIMA CONTIENE UN GRUPO TIOL REACTIVO (-SH) DE IMPORTANCIAFUNDAMENTAL EN SU PAPEL COMO TRANSPORTADOR DE GRUPOS ACILO
EN DIVERSAS REACCIONES METABÓLICASLOS GRUPOS ACILO SE UNEN COVALENTEMENTE AL GRUPO TIOL FORMANDO
TIOÉSTERES QUE SON DE ELEVADA ENERGÍA LIBRE DE HIDRÓLISIS
EL LIPOATO TIENE DOS GRUPOS TIOL QUE PUEDEN SER OXIDADOS REVERSIBLEMENTE FORMANDO UN ENLACE DISULFURO
PUEDE TRANSPORTAR ELECTRONES Y GRUPOS ACILO
LOS NUCLEÓTIDOS DE NICOTINAMIDA
DESHIDROGENACIÓN
OXIDORREDUCTASAS“DESHIDROGENASAS”
260 nm
340 nm
NAD+ + 2e- + 2H+ NADH + H+
NADP+ + 2e- + 2H+ NADPH + H+
E’o
E’o
TIPO DE REACCIONES LLEVADAS A CABO DURANTE LA DESCARBOXILACIÓNOXIDATIVA DEL PIRUVATO:
1. Descarboxilación
2. Oxidación
3. Transferencia
.-El piruvato se combina con el TPP y se descarboxila formandoun hidroxietilo
.- El grupo hidroxietilo se oxida formando un grupo acetilo
.- El acetilo formado se transfiere al lipoato que está unido a un residuo de lisina en E2
E1
E2
DESCARBOXILACIÓN OXIDATIVA DEL PIRUVATO A ACETIL-CoA POREL COMPLEJO DE LA PIRUVATO DESHIDROGENASA
Piruvato Dihidrolipoil Dihidrolipoildeshidrogenasa transacetilasa deshidrogenasa
E1 E2 E3
Hidroxietil-TPP
Piruvato
DURANTE LA DESCARBOXILACIÓN OXIDATIVA, LOS INTERMEDIARIOS NUNCAABANDONAN LA SUPERFICIE ENZIMÁTICA
4 de las 8 reacciones son oxidaciones:requieren coenzimas que entran oxidadas y salen reducidas, lo que implica que los sustratos quedaron oxidados
En una vuelta del Ciclo hay dos descarboxilaciones que no tienen los CARBONOStransportados por la Acetil-Co-A
Los productos del Ciclo son CO2, ATP/GTP, NADH y FADH2
VISIÓN GENERAL DEL CICLO DEL ÁCIDO CÍTRICO
REACCIÓN 1. Formación de citrato
1. Primera reacción del ciclo de Krebs2. Es una reacción irreversible ∆G’0= -32.2 kJ/mol3. Es catalizada por la CITRATO SINTASA4. Cataliza la condensación de Acetil-CoA con oxalacetato para dar lugar a citrato
ESTRUCTURA DE LA CITRATO SINTASA
ES UN HOMODÍMERO
EL ENZIMA SIN SUSTRATOS
EL ENZIMA CON OXALACETATO YUN ANÁLOGO DEL ACETIL-CoA
LA UNIÓN DEL OXALACETATOINDUCE UN CAMBIO CONFORMACIONAL
COO-
MECANISMO CATALÍTICO DE LA CITRATO SINTASA
LA REACCIÓN CATALIZADA POR LA CITRATO SINTASA ES UNA CONDENSACIÓN MIXTA ALDÓLICA-CLAISEN
1. Formación de un intermediario enólico a través de una catálisis ácido-base (Asp375)y estabilizado por una His 274 (FORMACIÓN DE UN CARBANIÓN)
2. El carbanión realiza un ataque nucleofílico sobre el C-2 del oxalacetato3. El intermediario resultante (S-Citril-CoA) es hidrolizado, dando citrato
REACCIÓN 2. Formación de isocitrato vía cis-aconitato
1. Es una reacción reversible ∆G’o=13.3 kJ/mol2. Es catalizada por la aconitasa (aconitato hidratasa)3. Requiere de un centro ferro-sulfurado (no es una reacción redox)4. Cataliza la isomerización reversible del citrato y el isocitrato, con el cis-aconitato
como intermediario
MODELO PARA EL MECANISMO DE REACCIÓN CATALIZADA POR LA ACONITASA
Lloyd et al. (2008)Protein Science 8:2655
REACCIÓN 3. OXIDACIÓN DEL ISOCITRATO A αααα-CETOGLUTARATO Y CO2
1. Es una reacción irreversible2. Es catalizada por la isocitrato deshidrogenasa (IDH)3. Requiere de Mg2+ o Mn2+ y NAD+ o NADP+ (dependiendo de la especie)4. Cataliza la descarboxilación oxidativa del isocitrato dando lugar a la formación
de α-cetoglutarato
ES UN HOMODÍMERO
Ceccarelli et al. (2002)J. Biol. Chem. 277:43454
IDH (NADP+) de corazón de mamíferos
MECANISMO CATALÍTICO DE LA ISOCITRATO DESHIDROGENASA
EL ISOCITRATO PIERDE UN CARBONO POR DESCARBOXILACIÓN OXIDATIVA
1. El isocitrato se une al enzima y es oxidado a través de una transferencia de hidruro al NAD+ O NADP+ formando oxalosuccinato
2. El carbonilo resultante favorece el paso de descarboxilación junto con la interacción con el Mn2+
3. Reordenamiento del intermediario enol para generar α-cetoglutarato
REACCIÓN 4. OXIDACIÓN DEL αααα-CETOGLUTARATO A SUCCINIL-CoA Y CO2
1. Es una reacción irreversible ∆G’0= -33.5 kJ/mol2. Es catalizada por el complejo de la α-cetoglutarato deshidogenasa3. Cataliza la descarboxilación oxidativa del α-cetoglutarato liberando los
segundos CO2 y NADH del ciclo4. EL COMPLEJO ES ANÁLOGO AL DE LA PIRUVATO DESHIDROGENASA
E1 (α-cetoglutarato deshidrogenasa)E2 (dihidrolipoil transuccinilasa)E3 (dihidrolipoil deshidrogenasa) idéntica al de la piruvato deshidrogenasa
αααα-cetoglutarato Succinil-CoA
Complejo de laα-cetoglutaratodeshidrogenasa
Succinil- CoA sintetasa : Fosforilación a nivel de sustrato – Rotura tioester y formacion de GTP
REACCIÓN 5. CONVERSIÓN DE SUCCINIL-CoA EN SUCCINATO
Succinil-CoA Succinato
Succinil-CoAsintetasa
REACCIÓN 5. CONVERSIÓN DE SUCCINIL-CoA EN SUCCINATO
1. Es una reacción reversible ∆G’0= -2.9 kJ/mol2. Es catalizada por la succinil-CoA sintetasa (Succínico tiocinasa) indicando
la participación de un nucleósido trifosfato3. Es la hidrólisis del enlace tioéster favoreciendo la síntesis de un enlace fosfoanhídrido
del GTP (MAMÍFEROS) o del ATP (PLANTAS Y BACTERIAS)
Es un heterotetrámero
CoA
Wolodko et al. (1994)J. Biol. Chem. 269:10883
Las subunidades αααα contienen el residuo His246 y el sitio de unión para el CoA
Las subunidades ββββ confieren especificidad por ADP o GDP
MECANISMO CATALÍTICO DE LA SUCCINIL-CoA SINTETASA
1. El succinil-CoA reacciona con Pi formando succinilfosfato y CoA
2. El grupo fosforilo delsuccinil fosfato se transfierea un residuo de His delenzima
3. El grupo fosforilodel enzimase transfiere al GDP, formándose GTP
LA ENERGÍA LIBRE DE HIDRÓLISIS DEL SUCCINIL-CoA SE CONSERVAMEDIANTE LA FORMACIÓN SUCESIVA DE COMPUESTOS DE “ALTA ENERGÍA”
1 MOLÉCULA DE ACETIL-CoA
OXIDADO HASTA:2 MOLÉCULAS DE CO2
2 NADHs
1 GTP
PARA COMPLETAR EL CICLO EL SUCCINATO DEBE SER CONVERTIDO ENOXALOACETATO, LO CUAL SE CONSIGUE MEDIANTE LAS TRES REACCIONES
RESTANTES DEL CICLO
REACCIÓN 6. OXIDACIÓN DEL SUCCINATO A FUMARATO
1. Es una reacción reversible ∆G’0= 0 kJ/mol2. Llevada a cabo por la succinato deshidrogenasa (COMPLEJO II: succinato:quinona
oxidoreductasa)Es una proteína unida a la membrana interna mitocondrial (en procariotas unida a la
membrana plasmática)
3. Requiere de FAD+ y de agrupaciones Fe-Sulfurados
Es un tetrámero
Agrupaciones Fe - S
FAD+ Y QUINONAS
Oyedotun y Lemire (2004)J. Biol. Chem. 279:9424
Oyedotun y Lemire (2004)J. Biol. Chem. 279:9424
La Succinato deshidrogenasa es una proteína unida a la
membrana interna mitocondrial
(en procariotas unida a la membrana plasmática)
LA SUCCINATO DESHIDROGENASA CATALIZA LA OXIDACIÓNDEL SUCCINATO PARA FORMAR FUMARATO
ESPECIE OXIDADA: SUCCINATO
ESPECIE REDUCIDA: FADH2
PASO DE ELECTRONES DESDE EL SUCCINATO A TRAVÉS DEL FAD Y LOSCENTROS Fe-S HACÍA LA CADENA DE TRANSPORTE DE ELECTRONES
REACCIÓN 7. HIDRATACIÓN DEL FUMARATO A MALATO
1. Es una reacción reversible ∆G’0= -3.8 kJ/mol2. Llevada a cabo por la Fumarasa (Fumarato hidratasa)3. Cataliza la hidratación del doble enlace del fumarato a través de un estado de
transición de un carbanión
Fumarato
Malato
Fumarasa
Fumarasa
REACCIÓN 8. OXIDACIÓN DE MALATO A OXALOACETATO
1. Última reacción del ciclo2. Es una reacción reversible3. Catalizada por la malato deshidrogenasa4. Requiere de NAD+
5. El enzima unido al NAD+ cataliza la oxidación del malato a oxalacetato,mediante la oxidación del grupo hidroxilo del malato para formar una cetona
Malato Oxaloacetato
Malatodeshidrogenasa
DESHIDRATACIÓN
HIDRATACIÓN
DESHIDROGENACIÓN
FOSFORILACIÓN ANIVEL DE SUSTRATO
DESCARBOXILACIÓN OXIDATIVA
DESCARBOXILACIÓN OXIDATIVA
CONDENSACIÓN
ISOMERIZACIÓN
GLUCOSA
PIRUVATO
ACETIL-CoA
CITRATO
OXALOACETATO ISOCITRATO
α-CETOGLUTARATO
MALATO SUCCINIL-CoA
FUMARATO SUCCINATO
REACCIONES IRREVERSIBLESÁCIDOS GRASOS AMINOÁCIDOS
POR UNA VUELTA DEL CICLO DEL ÁCIDO CÍTRICO SE PRODUCEN LAS SIGUIENTES TRANSFORMACIONES:
1. Un grupo acetilo es oxidado a dos moléculas de CO2, un proceso en el que participan 4 pares de electrones (los átomos de carbono del acetilo entrante al ciclo “Acetil-CoA” NO SE OXIDAN)
2. Tres moléculas de NAD+ son reducidas a NADH (3 pares de e-)
3. Una molécula de FAD+ es reducida a FADH2 (1 par de e-)
4. Se produce un grupo fosfato de “alta energía” en forma de GTP (o ATP)
8 electrones CADENA TRANSPORTADORA DE ELECTRONES
NADH (2 e-) rinde 3 ATP por lo tanto de 3 NADH se producen 9 ATP
FADH2 (2 e-) rinde 3 ATP
UNA VUELTA DEL CICLO DE KREBS GENERA 12 ATP
REGULACIÓN DE LA PRODUCCIÓN DE ACETIL-CoA A TRAVÉS DEL COMPLEJO DE LA PIRUVATO DESHIDROGENASA
E1 + E2 +E3
1) POR ALOSTERISMO
ES INHIBIDA ALOSTÉRICAMENTEPOR LOS METABOLITOS QUE INDICAN UNASUFICIENCIA DE ENERGÍA METABÓLICA(ATP, Acetil-CoA, NADH y ácidos grasos)
ES ACTIVADA CUANDO LAS DEMANDASENERGÉTIAS SON MAYORES(AMP, CoA, NAD+, Ca2+
2) POR MODIFICACIÓN COVALENTEEL COMPLEJO ES INHIBIDO POR LA FOSFORILACIÓN DE E1
REGULACIÓN DEL CICLO DEL ÁCIDO CÍTRICO
ENZIMAS QUE CATALIZANLAS REACCIONESIRREVERSIBLES DELCICLO:CITRATO SINTASA
ISOCITRATODESHIDROGENASA
αααα-CETOGLUTARATO DESHIDROGENASA
MECANISMOS DE REGULACIÓN DEL CICLO DE KREBS
3 MECANISMOS:
1) DISPONIBILIDAD DE SUSTRATO
2) INHIBICIÓN POR PRODUCTO
3) INHIBICIÓN COMPETITIVA POR RETROALIMENTACIÓN DE LOS INTERMEDIARIOS QUE SE LOCALIZAN MÁS ADELANTE A LO LARGO DEL CICLO
4) POR MODIFICACIÓN COVALENTE (ISOCITRATODESHIDROGENASA SE REGULA POR FOSFORILACIÓN)
REGULACIÓN DE LA CITRATO SINTASA
1) LA ACTIVIDAD DE ESTE ENZIMA VARÍA EN FUNCIÓN DE LA CONCENTRACIÓN DE SUSTRATOS (OXALACETATO Y ACETIL-CoA)
DISPONIBILIDAD DE SUSTRATO
ES INHIBIDA POR NADH3)
2) EL CITRATO ES UN INHIBIDOR COMPETITIVO, ÁSÍ COMOEL SUCCINIL-CoA (POR RETROALIMENTACIÓN)
4) EL ATP
REGULACIÓN DE LA ISOCITRATO DESHIDROGENASA
1) POR MODIFICACIÓN COVALENTE:
LA FOSFORILACIÓN DEL RESIDUOSER113 (SITIO ACTIVO)INACTIVA EL ENZIMA
2) POR ALOSTERISMO
MODULADOR POSITIVO ES EL ADP
3) ES ACTIVADA POR Ca2+
REGULACIÓN DE LA αααα-CETOGLUTARATO DESHIDROGENASA
1) ES INHIBIDA POR SU PRODUCTO EL SUCCINIL-CoA
2) POR NADH
3) ES ACTIVADA POR Ca2+
EL CICLO DE KREBS ES UN CICLO ANFIBÓLICO PORQUE:
A)ES CATABÓLICO (Se lleva a cabo la oxidación del carbono proveniente de otras vías)
B) ES ANABÓLICO (Es proveedor de esqueletos carbonadospara otras vías metabólicas)
CICLO DE
KREBS
Acetil-CoA
Proteínas GlucosaLípidos
CO2
SÍNTESIS
VÍAS QUE UTILIZAN INTERMEDIARIOS DEL CICLO:
1. LA BIOSÍNTESIS DE GLUCOSA (GLUCONEOGÉNESIS)SE UTILIZA EL MALATO
2. LA BIOSÍNTESIS DE LÍPIDOS (ÁCIDOS GRASOS Y ESTEROLES)SE UTILIZA CITRATO Y SUCCINIL-CoA
3. LA BIOSÍNTESIS DE AMINOÁCIDOSSE UTILIZA EL αααα-CETOGLUTARATO, EL OXALOACETATO
(POR TRANSAMINACIÓN)
4. LA BIOSÍNTESIS DE PORFIRINASUTILIZA EL SUCCINIL-CoA
EL CICLO ES PROVEEDOR DE ESQUELETOS CARBONADOS
REACCIONES QUE REPONEN LOS INTERMEDIARIOS DEL CICLO DE KREBS
DENOMINADAS REACCIONES ANAPLERÓTICAS (RELLENAR)
1)Piruvato carboxilasa
2) Fosfoenolpiruvato +CO2 + GDP Oxalacetato + GTP
3) FOSFOENOLPIRUVATO + HCO3- OXALACETATO + Pi
4) PIRUVATO + HCO3- + NAD(P)H MALATO + NAD(P)+
PEP carboxicinasa
PEP carboxilasa
Enzima málico
DIAGRAMA DEL CICLO DEL ÁCIDO CÍTRICOQUE INDICALASPOSICIONESEN LAS QUE SE RETIRANALGUNOS METABOLITOS (VÍAS ANABÓLICAS)
Y LOS PUNTOS EN LOSQUE LAS REACCIONESANAPLERÓTICASREPONEN LOS INTERMEDIARIOSDEL CICLO QUE SEHAN AGOTADO
malato
oxalacetato
Gluconeogénesis
CPO. PROTEÍCOProteasasaa libres
Transaminasas
CPO. LIPÍDICOTAG
LipólisisAc.grasos libres
β-oxidación
MS
MDH
αααα-cetogl DH
PEPK
ALMIDÓNAmilasasglucosa
α-cetoácidos
EL CICLO DEL GLIOXILATO ES ACTIVO EN LAS SEMILLAS EN GERMINACIÓNY CIERTOS MICROORGANISMOS
LA VÍA SE LLEVA A CABO EN LOS GLIOXISOMAS
ESTÁN VARIOS ENZIMAS DEL CICLO DE KREBS Y DOS ENZIMAS ADICIONALES:LA ISOCITRATO LIASA Y LA MALATO SINTASA
EVITA LAS DOS DESCARBOXILACIONES DEL CICLO DE KREBSPERMITIENDO LA FORMACIÓN NETA DE SUCCINATO, OXALACETATO, Y OTROSA PARTIR DE ACETIL-CoA