INFORME Nº9 DETERMINACIÓN DE RESIDOU 1 Y 4 (Autoguardado)

UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS Facultad de Farmacia y Bioquímica

E.A.P. Farmacia y Bioquímica

Quinto Año Semestre 2013-I

Profesor Responsable: Q.F. José Llahuilla Quea

Integrantes:

Cano Mori, César Eduardo 08040003

Chávez Carbajal, Lucero 08040103

Gamarra Domínguez, Eliane 08040007

Pérez Guerrero, Fiorella 08040106

Quispe Ibarra Anthony 08040024

Horario de Laboratorio: Martes10:00 am – 2:00

pm

Práctica Nº9: Determinación de Tóxicos Orgánicos Fijos-Identificación de Residuos 1 y 4

Introducción

La toxicología forense ayuda al establecimiento de la relación causa-efecto entre la exposición de un medicamento o sustancia química y los efectos tóxicos o mortales que puedan causar esa exposición, las primeras investigaciones en toxicología forense datan del año 1850 en donde el Conde Hipólito de Bocarmé, asesina a su cuñado administrándole nicotina; para demostrar la causa de esta muerte Stass crea un método de aislamiento y extracción de tóxicos orgánicos fijos.1 A raíz de estos avances químicos y muchos otros, la Toxicología Forense adquiere un gran desarrollo que se va consolidando a medida que sus resultados analíticos pueden ser confirmados mediante la variada tecnología instrumental, cada vez más específica y sensible.

Hoy en día las drogas de abuso han pasado a ser de un problema global que afecta a muchos países, obligando a las naciones a intensificar sus esfuerzos por el control y regulación de algunas drogas3, es por ello que como futuros investigadores en el presente informe vamos a identificar los principales metabolítos producto de la biotransformación de sustancias tóxicas presentes en los fluidos y tejidos corporal.

Para la identificación de estas sustancias previamente es necesario realizar una extracción en un disolvente orgánico ya sea en medio ácido o alcalino de modo que nos permita extraer la mayor cantidad y pureza2 de estos tóxicos. Dentro de estos compuestos vamos a poder encontrar sustancias como las benzodiacepinas, carbamacepina, fenotiazinas, anfetaminas, antidepresivos tricíclicos, alcaloides, plaguicidas organofosforados, barbitúricos, salicilatos y otros analgésicos antipiréticos que hayan sido empleados como sustancias de abuso por el paciente.

Página 2


Objetivos

Identificar los compuestos orgánicos fijos presentes en una muestra biológica de orina mediante reacciones específicas.

Determinar la presencia de salicilatos, fenotiazidicos y benzodiacepinas presentes en una muestra biológica de orina.

Conocer las propiedades, mecanismos de acción y las consecuencias de sus efectos lesivos.

Página 3


Determinación de Tóxicos orgánicos fijos

Identificación de Residuo 1 y 4

1. Marco teórico1.1. Salicilatos

Son sustancias hoy en día ampliamente empleadas por sus propiedades antiinflamatoria y analgésica, por ello se expenden de forma libre en muchos establecimientos farmacéuticos en sus presentaciones de salicilatos, acido acetil salicílico, salicilato de sodio o salicilato de dietilamina.5

Los salicilatos poseen como núcleo fundamental el ácido salicílico (ácido ortohidroxibenzoico) un potente irritante que solo puede usarse por vía tópica; sin embargo para su utilización y mejor absorción se han sustituido grupos carboxilos e hidroxilos dando como resultado la conocida aspirina, paracetamol, salicilato de metilo, entre otros.4

Página 4

Mecanismo de acción y toxicidadAbsorción: GI, Dérmica.Metabolismo: Hepático (depuración 3.9L/h)Unión a Proteína : 50-80%Volumen de distribución: 0.15L/kgExcreta: Orina depende ph alcalino

Efectos tóxicosSNC: hiperventilación, alcalosis respiratoria, deshidratación.S.RESPIRAT: edema pulmonar.S.HEMATO: alteración factor de coagulación, hemorragia.GI:nauseas, emesis, dolor abdominal,


1.2. FenotiazinasLas fenotiazinas son un grupo de fármacos que se emplean principalmente en el tratamiento de la psicosis, se caracterizan por presentar un anillo tricíclico en el cual están ligados dos anillos de benceno por un átomo de nitrógeno y azufre.6 A partir

Página 5

Dosis tóxica

D.TERAPÉUTICA:40-60mg/Kg/día D. AGUDA: 150-200mg/Kg/díaD.SEVERA:300-500mg/Kg

Manifestaciones Clínicas

NauseasDeshidrataciónHipertemiaLetarcoConvulsiones


de esta base se han podido sintetizar más de 30 fenotiazinas con diferentes acciones farmacológicas; uno de los primeros fármacos sintetizados fue la Clorpromazina indicado para estados de ansiedad, psicosis y agitaciones.

Página 6

Mecanismo de acción y toxicidadAbsorción: GI, Parenteral.Metabolismo: Hepático . Efecto anticolinérgico produce taquicardia, y el bloqueo alfa-adrenérgico causa hipotensión ortostática.Concentración plasmática máxima: 2- 4h Unión a Proteína : 80%Volumen de distribución: 20 L/kgExcreta: Orina y bilisVida media: 20-40h

Efectos tóxicosSNC: depresión.S.CARDIO: alteración en la repolarización, conducción auriculo-ventricular, S.DÉRMICO: hipersensisbilidad, reacciones cutáneas.S.METABÓLICO: hipercolesterolemia.


1.3. Benzodiacepinas

Están compuestas por un anillo de benceno unido a un anillo de diazepina de siete miembros, sin embargo presentan una sustitución a nivel del carbono 5. Son tranquilizantes menores empleados con fines terapéuticos en el tratamiento psiquiátrico; sin embargo hoy en día también se emplean con fines delictivos junto con otros depresores del sistema nerviosos como el alcohol llevando al paciente a un estado de coma. Sus efectos más relevantes son la sedación, hipnosis, disminución de la ansiedad, relajación muscular, amnesia y actividad anticonvulsiva.7

Página 7

Dosis tóxica

D.LETAL: 150mg/Kg


MiosisHipotensiónArritmiaDepresión respiratoriaAgitacionesHiper- HiportemiaLetarcoConvulsiones


Página 8

Mecanismo de acción y toxicidadAbsorción: GIMetabolismo: Hepático . Mecanismo de acción: potencian la acción inhibitoria del neurotransmisor (GABA), favoreciendo el ingreso de iones de cloro a la célula, lo cual genera hiperpolarización celular y disminuye la excitabilidad neuronal.Concentración plasmática máxima: 2- 3h Unión a Proteína : 80-90%Volumen de distribución: 1-3.5 L/kgExcreta:RenalVida media: 10h

Efectos tóxicos

SNC: depresión.S.RESPIRATORIO: complicaciones

Dosis tóxica

D.LETAL: ≥2000mg/Kg


AtaxiaLetargiaSomnolenciaMidriasisBradicardiaTaquicardiaHipotensiónHipotermia


2.

Parte experimental

2.1. Reactivos, materiales y equipos

Página 9

REAC

T IVOS

T e t r a c lo r u r o d e fi e r r o C l3 F e 5 %Á c id o c lo r h ídr ic o H C l 1 0 %R v o d e T r in d e rR v o F .P .N .R v o D r a g e nd o r fN it r ito d e s o d io N O 2 N a 0 .1 %S u lfa ma t o d e a m o n io 1 %N -n a ft ile tile n d iam in o c lo r h idr a t o 0 .1 %

MA

T ER IA

L ES

C a p s u la d e p o r c e lan aT u b o d e e n s a y o d e v id r ioB a ñ o m a r iaP la c a c ro m a tog rá fi c a d e s il ic a g e lC á m a ra c ro m a tog rá fi c aC a p ila rP ip e ta d e v id r io d e 1 , 5 y 1 0 m lP ro p ite ta d e p lá s ti c o o b o m b illa

EQUIPOS

C á m a ra e x t ra c to r a d e g a s e s d e la b o r a to r ioE s p e c t ro fo t óm e t r o


2.2. Técnica operatoria 2.2.1. Identificación de Salicilatos (R1)

A. Reacciones Generales

Se basa en la formación de un complejo coloreado de tetrafenol-hierro, por la presencia de hierro (III) y el anillo fenólico de los salicilatos. La formación de una coloración roja, azul o púrpura indica una reacción positiva frente a la presencia de fenoles.

Página 10

Fundamento

Reacción Química

Mecanismo de acción

FeCl3 + 3 C7H6O3 = Fe (C7H6O3)3 + Cl3

Método operatorio

Gts R1 (Disuelto en etanol) Gts Cl3Fe 5%

Coloración azul, roja, púrpura.

Si la reacción es positiva

Agregar HCl 10%

Desaparece el color.


Reactivo Positivo/Negativo ColoraciónCl3Fe ++ PúrpuraHCl ++ Amarillo

B. Cuantificación

El reactivo de Trinder [HgCl2-Fe(NO3)3] produce un color púrpura, aconsejable para la determinación cuantitativa de salicilatos por espectrofotometría U.V. siendo característico a una absorción cuya longitud de onda es 540 nm

Página 11

Resultado

Fundamento

Método operatorio

MP ST

5ml Rvo Trinder

1ml HCl 1ml MP o St

(5mg Ácido salicílico)

5mg AAS100mlX = 0.05mg AAS 1ml

0.508 A ST0.05mg AAS0.549 AMPX= 0.0540mg AAS


Absorbancia MP 0.549ST 0.508

Página 12

Reacción Química


Resultado

Leer a 540nm por espectrofotometría

FeCl3 + 3 C7H6O3 = Fe (C7H6O3)3 + Cl3

0.0540mg AAS2ml ORINA X100X=2.7mg%


2.2.2. Identificación de Fenotiazínicos (R4)A. Reacción de caracterización

Se basa en la formación de un compuesto coloreado verde oscuro o azul-verde que indica la presencia de compuestos fenólico como el ácido fenilpiruvico (metabolítos) o de ácidos relacionados. El color puede aclararse lentamente pasando al amarillo.

Página 13

Fundamento

Método operatorio

Gts R4(diluido en etanol)

Evaporar II gts Cl3Fe al

5%


B. Reacción específica

Página 14


Resultado

Reacción Química

El color azul-verde no debe desaparecer.

Reactivo Positivo/Negativo ColoraciónCl3Fe ++ Azul HCl 10% ++ No desaparece


Forrest F.M y Forrest F.L, en 1960, propusieron un método de determinación cualitativa basado en el uso de FeCl3, HClO3 y HNO3 (el reactivo FPN, de fierro, perclórico y nítrico), el cual produce un radical libre con coloración variable (azul, azul violáceo).

Página 15

Fundamento

Método operatorio


III Gts del Rvo FPN

5 mlCl3Fe 5% 45ml NO3H C

50ml Ac. Perclórico

Gts R4 (diluido en etanol)

Evaporar


2.2.3. Identificación de Benzodiacepinas (R4)A. Reacción general ( Dragendorff)

Se basa en la identificación de alcaloides, siendo específico para compuestos nitrogenados presentes en la benzodiacepinas que por acción del Reactivo de Dragendorff (yoduro de potasio y bismuto) han de formar un compuesto rojo ladrillo característico.

B. Reacción específica

Página 16

Resultado

Fundamento

Método operatorio

Resultado

III Gts R4

Evaporar III Gts Rvo Dragendorff

Formación de precipitado rojo ladrillo

Reactivo Positivo/Negativo ColoraciónFPN + Rojo violáceo

Reactivo Positivo/Negativo ColoraciónDragendorff +++ Rojo ladrillo


Se fundamenta en el empleo del reactivo de Bratton- Marshall (Nitrito de sodio, sulfamato de amonio y N- (1- Naftil) etilendiamina.) para la determinación de benzodiacepinas por diazotización.Este reactivo fue propuesto originalmente por sus creadores para la determinación de sulfonamidas en orina, en donde previamente la orina debía ser sometida a una hidrólisis ácida con HCl para la producción de una benzofenona, con el medio ácido proporcionado previamente, el nitrito de sodio se convierte a ácido nitroso y se lleva a cabo la reacción de diazotización

Página 17

Fundamento

Método operatorio

Gts R4

5ml HCl 6N

Baño en glicerina

A temperatura de 124ºC

Por 30´min

Enfriar

1ml NO2Na 0.1% 1ml Sulfamato

de amonio 1% 1ml N-

naftiletilendiamino clorhidrato 0.1%

Azul, rojo violáceo

Reacción Química


Página 18


Página 19


Resultado

Reactivo Positivo/Negativo

Coloración

N-naftiletilendiamino

+++ Rojo violáceo


2.2.4. Screenig en Cromatografía de capa fina

La cromatografía en capa fina es la separación de dos o más moléculas presentes en una mezcla en base al principio de reparto entre dos fases. Sirve para hacer una determinación en serie de los metabolítos que queremos evaluar, aunque tienen la ventaja de ser rápidos y de rutina, puede que en algunos casos no sean tan específicos como los métodos anteriormente descritos.

Compuesto en estudio

Revelador

Salicilatos Reactivo de Trinder

Página 20

Fundamento

Método operatorio

Soporte: Silicagel G

Sistema de solvente

Reveladores

Compuesto en estudio

Sistema de solvente

Proporción

Salicilatos Metanol 5mlAgua 5ml

FenotiazinicosBenzodiacepínico

Metanol 5mlAgua 5ml

Trietanolamina 0.03ml

Rf: Mide la retención de un componente.Rf= Distancia de la muestra desde el origen

Distancia del eluyente desde el origen


Fenotiazinicos Reactivo de FPNBenzodiacepínico Reactivo de Dragendorff

Página 21

Se realiza la siembra hasta 15 veces de las muestras problemas y los estándares con ayuda de un capilar pequeño.El punto de siembra debe estar por encima del nivel de la fase móvil.

Introducir las placas o soportes de silicagel G en la cámara cromatográfica para realizada la corrida.

Se procede a secar con cuidado las placas y se revela, tienen que colocarse en distintos roceadores para evitar mezclas.

Resultado


3. Discusión de resultados

Para la identificación de tóxicos orgánico fijos como los salicilatos, fenotiazinas y benzodiacepinas se emplearon métodos químicos de reacciones cualitativas y cuantitativas colorimétricas que fueron específicas para cada uno de estos compuestos, los resultados fueron positivos; sin embargo las cantidades encontradas en los residuos R1 Y R4 fueron mínimos según los valores obtenidos al confirmar con los calores limites. Para una mejor identificación de

Página 22

Rx: Mide la relación entre el estándar

Rx= Distancia recorrida por el compuesto de referencia

Distancia recorrida por el eluyente

Sustancia Rf RxSalicilatos 0.46 0.53

Fenotiazinicos 0.52 0.50Benzodiacepinas 0.70 0.66


estos compuestos se realizó una determinación por cromatografía en capa fina empleando sílica gel-G que permitió comparar nuestras muestras problema frente a un compuesto estándar; para ello se emplearon diferentes reactivos como el Rvo de Trinder, Rvo FPN y Rvo de Dragendorff los cuales fueron potenciados al agregar nitrato de sodio en el proceso de revelado.

4. Conclusiones

Se determinó la presencia de salicilatos, benzodiacepinas y fenotiazinas en los residuos R1 y2 de una muestra biológica de orina mediante reacciones específicas colorimétricas.

Las concentraciones encontradas de salicilatos no sobrepasa el límite tolerado, por lo tanto no podrían causar grandes consecuencias de efectos lesivos a corto plazo.

La presencia de benzodiacepinas y fenotiazinas podría causar efectos lesivos si se encuentran a altas concentraciones en el organismo.

5. Bibliografía

1. Drogas en pelo: sus alcances y limitaciones I" Perkins de Piacentino, A. M.; Locani, O. A.; Lorenzo, J. L. LABORATORIO DE TOXICOLOGÍA Y QUÍMICA LEGAL. Cuerpo Médico Forense, Corte Suprema de Justicia de la Nación Argentina.

2. Repetto, Manuel; Repetto, Guillermo. Toxicológica fundamental. 4a ed. Sevilla: Editorial Diaz de Santos; 2009. Pág. 526

Página 23


3. Osvaldo Romo Pizarro. Medicina legal: elementos de ciencias forenses. 1ª edición. Santiago de Chile. 2000. Pág. 5

4. Lorenzo F.P. Moreno G.I Hernández J.C. Farmacología: Básica y Clínica. 18ª edición. Buenos Aires: Editorial Médica Panamericana. 2008. Pág. 532

5. Secretaria de salud del Gobierno del estado de Veracruz. Guía de diagnostico y tratamiento intoxicación por salicilato. 2012. Disponible en [www.ssaver.gob.mx./cilver]

6. Mencías R.E. Mayero F.L. Manual de toxicología básica. 1ª edición. Madrid: Editorial Díaz de santos. 2000. Pág. 123- 124

7. Rozo U.R. Alvarado B.J. Guía de Práctica clínica Toxicología. 1ª edición. Volumen II, Tomo IV. Bogotá: Editorial Médica Latinoamericana. 2004. Pág 76-78.

Página 24

INFORME Nº9 DETERMINACIÓN DE RESIDOU 1 Y 4 (Autoguardado)

Documents

Transcript of INFORME Nº9 DETERMINACIÓN DE RESIDOU 1 Y 4 (Autoguardado)