7/23/2019 Informe Extracción DNA

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1 de Diciembre de 2015

Informe Extracción DNA (Pellet Celular) y Electroforesis

Sergio Andrés Mayorga Barragan 2150119Paula Andrea Monsalve Agudelo 2150226

Jorge Armando Pea Agudelo

!l D"A es el ma#erial gené#ico de las células eucari$#icas cuya mani%ulaci$n yan&lisis es necesario %ara la inves#igaci$n de las bases moleculares en lasen'ermedades( ac#ualmen#e di'eren#es mé#odos de biolog)a molecular %ermi#ene*#raer D"A( el mé#odo usado en la %rac#ica de labora#orio se conoce comoSalting Out + %ara iniciar se #omaron 600 ,- de ./-B seguidamen#e se #omaron10 ,- de %ro#einasa y 10 ,- de SDS 10 es ul#imo siendo un de#ergen#e%ermi#i$ la ru%#ura de las membranas celulares+ mien#ras la %ro#einasa des#ruyolas membranas nucleares liberando los &cidos nucleicos( meclamos con v$r#e*generando asi una mecla mas 3omogénea4 Se in#roduo el vial en una incubadoraa 56 / agi#ando en in#ervalos de 10 minu#os con v$r#e* %or media 3ora+%os#eriormen#e se agregaron 150 ,- de ace#a#o de sodio 7sal8 a%licando vor#e* %or  :0 segundos %reci%i#ando las %ro#e)nas con la ayuda de la incubaci$n en 'rio ;uese 3io %or 5 minu#os4 Pasado el #iem%o #omamos el vial y lo llevamos a lamicrocen#r)'uga %or 10 minu#os a 1:4000 r4%4m4 <erminada la cen#ri'ugaci$n la cualdeo a las %ro#e)nas %reci%i#adas se #omo el sobrenadan#e con una micro%i%e#a#rans'iriendo es#e li;uido a o#ro vial4 A es#e nuevo vial se le agregaron 600 ,- de=so%ro%anol es#e des3idra#o la molécula del D"A+ #al reac#ivo se encon#raba a una#em%era#ura muy baa 7 >20 /8 y se meclo %or inversi$n suavemen#e viendocomo a%arec)a la malla del D"A la cual era larga e incolora y se ve)a decon#e*#ura viscosa4 Se re%i#i$ la cen#ri'ugaci$n %ero 104000 r4%4m %or ? minu#os4Se elimino el sobrenadan#e %or inversi$n de manera r&%ida %ara no dear %erder el%reci%i#ado 'ormado en el an#erior %roceso( luego se #omaron 200 ,- de e#anol conuna concen#raci$n del @0+ #omado con #al concen#raci$n %ara 3idra#ar con el:0 res#an#e el D"A+ %ero igualmen#e de&ndolo %reci%i#ado4 Se re%i#i$ lacen#ri'ugaci$n a 1:4000 r4%4m %or ? minu#os y se elimino el sobrenadan#e %or inversi$n %ara luego ser secado sobre una #oalla de %a%el lim%ia4 Para 'inaliar se#omo el vial con el %elle# y se coloco en el blo;ue seco %ara eliminar %or com%le#oel e#anol %or medio de su ebullici$n4 Des%ués se agregaron @5 ,- de bu''er de <!siendo es#e un solubiliador del D"A y ayudando a evi#ar la degradaci$n de es#e4Se deo en incubaci$n %or una 3ora a 60 / en un blo;ue seco y %or ul#imo 'uealmacenado a >20 / %ara realiar el %roceso de elec#ro'oresis4

-uego de d)as se %rocedi$ a #omar 2 ,- de -B el cual con#en)a aul debromo'enol ;ue serv)a %ara re'erencia en el avance de la se%araci$n+ se de%osi#oen un %a%el ;ue no %ermi#)a la absorci$n de es#e y se meclo con 5 ,- de mues#racon la ayuda de la micro%i%e#a( seguidamen#e se de%osi#o en el %oso 2 del gel deagarosa ;ue #enia una concen#raci$n de 1+5 y en los %osos : y ? del gel deagarosa con concen#raci$n de 1++ #eniendo %resen#e ;ue a una mayor concen#raci$n en #al gel mas se se%araran los &cidos nucleicos( se deo all)corriendo %or una 3ora4

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7/23/2019 Informe Extracción DNA

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1 de Diciembre de 2015

Mien#ras %asaba el #iem%o+ se realio la cuan#i'icaci$n del D"A %or es%ec#rome#r)ala cual arroo lo siguien#e

/oncen#raci$n >5+0 ngC,-

 A 260 710 mm Pa#38 -0,067  260C20  0,!  A 20 710 mm Pa#38 -0,"#7

2:0C260 -0,!$

/on es#os valores 'ue %osible iden#i'icar ;ue no 3ab)amues#ra en el vial usado+ se cree ;ue se %erdi$ enel %roceso de eliminaci$n del sobrenadan#e %or  inversi$n luego de agregar 200 ,- de e#anol al @0y su cen#ri'ugaci$n( es#o debido a ;ue se escurri$ laboca del vial con#ra una #oalla de %a%el de unamanera 'uer#e con#ra el mes$n+ ;ui&s %erdiéndosea;u) el %elle#4

-uego de %asado una 3ora 'ue %osible visualiar elD"A %or elec#ro'oresis en el cuar#ooscuro+ mos#rando lo siguien#e

Figura No 01

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