INDUCCIÓN EX VIVO DE DEPÓSITOS DE C5B9 SOBRE … · 1 Instituto de Investigación de la leucemia...
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LVIII SEHH XXXII SETH Colaboración limitada a la impresión, gestión y acceso on-line de los posters, sin derivarse responsabilidad alguna sobre los contenidos u opiniones vertidas en ellos por sus autores CARACTERÍSTICAS DEL USO DE PLASMA COMO REACTIVO La inducción de depósitos de C5b9 se inhibe mediante: Marta Palomo 1,2 , Miquel Blasco 3 , Patricia Molina 2 , Ginés Escolar 2 , Josep M Campistol 3 , Maribel Diaz-Ricart 2 1 Instituto de Investigación de la leucemia Josep Carreras, Servicio de Hemoterapia-Hemostasia, Hospital Clínico / Universidad de Barcelona Campus 2 Servicio de Hemoterapia-Hemostasia, Instituto de Investigaciones Biomédicas August Pi i Sunyer (IDIBAPS), Hospital Clínico, Universidad de Barcelona, España. 3 Servicio de Nefrología y trasplante renal, Hospital Clínico, Universidad de Barcelona, España. INDUCCIÓN EX VIVO DE DEPÓSITOS DE C5B9 SOBRE CÉLULAS ENDOTELIALES COMO TÉCNICA PARA LA EVALUACIÓN DE LA ACTIVACIÓN DEL SISTEMA DEL COMPLEMENTO Y MONITORIZACIÓN DEL TRATAMIENTO CON ECULIZUMAB EN EL SHUa INTRODUCCIÓN El Síndrome Hemolítico Urémico atípico (SHUa) es una enfermedad ultrarrara, de naturaleza sistémica y elevada morbi-mortalidad asociada. Esta patología está causada por una pérdida de regulación de la vía alternativa del complemento que conduce a la formación del complejo de ataque a la membrana (C5b9) y la lisis celular del endotelio 1 . En los años 80 se inició su tratamiento con terapia plasmática y en el año 2011 se aprobó el eculizumab, un fármaco que bloquea la fase final del complemento 2 . Pese a que este último tratamiento ha supuesto un cambio en la historia natural del SHUa, en la actualidad no existen marcadores que sirvan para detectar aquellos pacientes que puedan estar sobre- o infra-tratados. OBJETIVOS Desarrollar una nueva técnica ex vivo para medir la fase final de la activación del sistema complemento en el plasma de pacientes con SHUa, sobre células endoteliales (CE). SETH - MÉTODOS DE DIAGNÓSTICO Y MARCADORES COMPARACIÓN CON LA TÉCNICA DE NORIS et al. 3 APLICACIÓN DIAGNÓSTICA Y VALORACIÓN DEL TRATAMIENTO Control P1 Debut P1 Post Ecu SUERO PLASMA La exposición de CE a suero y plasma de pacientes con SHUa resulta en un aumento de los depósitos de C5b9. Los depósitos de C5b9 disminuyen tras el tratamiento con eculizumab. El plasma como reactivo produce unos resultados mucho más concluyentes, reproducibles y objetivos que el suero. Control P2 Debut P2 Post RP P2 Post Ecu RESULTADOS VALIDACIÓN PARA LA MONITORIZACCIÓN DEL TRATAMIENTO 0 1 2 3 4 5 6 P1 P2 P3 CONCLUSIONES C5b9 Contacto: Marta Palomo [email protected] MATERIAL Y MÉTODOS INDUCCIÓN EX VIVO DE DEPÓSITOS DE C5B9 SOBRE CE C5b9 Fibrina DAPI Overlay Los resultados obtenidos apuntan a que esta técnica podría consolidarse como una herramienta asistencial tanto para determinar cuándo es necesario el tratamiento con eculizumab, como para ajustar la dosis del fármaco y sus intervalos de administración. 0 0,5 1 1,5 2 2,5 P4 P5 P6 P7 P8 P9 REFERENCIAS HMEC-1 activadas con ADP SUERO Paciente (4h 37ºC) PLASMA Paciente + SUERO Control C5b9 DAPI PFA 3% Anticuerpo primario (C5b9) Anticuerpo secundario (Alexa 590) DAPI DAPI Control + eculizumab C5b9 0 0,5 1 1,5 2 2,5 Control SHUa debut SHUa en remisión Fold increase C5b9 C5b9 C5b9 Fold increase Fold increase * * * * * *# Suero Plasma Debut RP Remisión Los depósitos de C5b9 co-localizan con las fibras de fibrina • Eculizumab • Heparina litio • Quelantes de calcio 1. Loirat C. et al. Management of hemolytic uremic syndrome. Presse Med. 2012; 41:e115-35. 2. Rother RP et al. Discovery and development of the complement inhibitor eculizumab for the treatment of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria. Nat Biotechnol. 2007;25:1256-64. 3. Noris M et al. Dynamics of complement activation in aHUS and how to monitor eculizumab in therapy. Blood. 2014:124:1715-26 0 0,4 0,8 1,2 Debut Post-RP Post Ecu Hb [120-170 g/L] 74 ± 26 68 126 ± 10 Plq [130-400 x109] 77 ± 35 248 198 ± 13 LDH [250-450 U/L] 2389 ± 948 460 364 ± 88 Hapto [0.320-1 U/L] 0.019 ± 0.018 0.664 1.12 ± 0.18 Esquistocitos 10 ± 5 3 - 4 0 Media ± DS de los parámetros de hemólisis de los tres pacientes con SHUa incluídos en el estudio. Los parámetros de hemólisis eran negativos en 5 de los 6 pacientes tratados con eculizumab. P9 presentaba hemólisis activa, proteinuria y pérdida progresiva de función renal. (*, p<0.05 vs. Control) 459--P Marta Palomo de Udaeta DOI: 10.3252/pso.es.58SEHH.2016 SETH - MÉTODOS DE DIAGNÓSTICO Y MARCADORES
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Colaboración limitada a la
impresión, gestión y
acceso on-line de los
posters, sin derivarse
responsabilidad alguna
sobre los contenidos
u opiniones vertidas en
ellos por sus autores
CARACTERÍSTICAS DEL USO DE PLASMA COMO REACTIVO
La inducción de depósitos de C5b9 se inhibe mediante:
Marta Palomo1,2, Miquel Blasco3, Patricia Molina2, Ginés Escolar2, Josep M Campistol3, Maribel Diaz-Ricart2
1 Instituto de Investigación de la leucemia Josep Carreras, Servicio de Hemoterapia-Hemostasia, Hospital Clínico / Universidad de Barcelona Campus2 Servicio de Hemoterapia-Hemostasia, Instituto de Investigaciones Biomédicas August Pi i Sunyer (IDIBAPS), Hospital Clínico, Universidad de Barcelona, España.
3 Servicio de Nefrología y trasplante renal, Hospital Clínico, Universidad de Barcelona, España.
INDUCCIÓN EX VIVO DE DEPÓSITOS DE C5B9 SOBRE CÉLULAS ENDOTELIALES
COMO TÉCNICA PARA LA EVALUACIÓN DE LA ACTIVACIÓN DEL SISTEMA DEL
COMPLEMENTO Y MONITORIZACIÓN DEL TRATAMIENTO CON ECULIZUMAB EN EL
SHUa
INTRODUCCIÓN
El Síndrome Hemolítico Urémico atípico (SHUa) es una enfermedad
ultrarrara, de naturaleza sistémica y elevada morbi-mortalidad asociada.
Esta patología está causada por una pérdida de regulación de la vía
alternativa del complemento que conduce a la formación del complejo de
ataque a la membrana (C5b9) y la lisis celular del endotelio1.
En los años 80 se inició su tratamiento con terapia plasmática y en el año
2011 se aprobó el eculizumab, un fármaco que bloquea la fase final del
complemento2.
Pese a que este último tratamiento ha supuesto un cambio en la historia
natural del SHUa, en la actualidad no existen marcadores que sirvan para
detectar aquellos pacientes que puedan estar sobre- o infra-tratados.
OBJETIVOS
Desarrollar una nueva técnica ex vivo para medir la fase final
de la activación del sistema complemento en el plasma de
pacientes con SHUa, sobre células endoteliales (CE).
SETH - MÉTODOS DE DIAGNÓSTICO Y MARCADORES
COMPARACIÓN CON LA TÉCNICA DE NORIS et al. 3 APLICACIÓN DIAGNÓSTICA Y VALORACIÓN DEL TRATAMIENTO
Control P1 Debut P1 Post Ecu
SU
ER
OP
LA
SM
A
La exposición de CE a suero y plasma depacientes con SHUa resulta en un aumentode los depósitos de C5b9.
Los depósitos de C5b9 disminuyen tras eltratamiento con eculizumab.
El plasma como reactivo produce unosresultados mucho más concluyentes,reproducibles y objetivos que el suero.
Control P2 Debut P2 Post RP P2 Post Ecu
RESULTADOS
VALIDACIÓN PARA LA MONITORIZACCIÓN DEL TRATAMIENTO
0
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CONCLUSIONES
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Contacto: Marta Palomo [email protected]
MATERIAL Y MÉTODOS
INDUCCIÓN EX VIVO DE DEPÓSITOS DE C5B9 SOBRE CE
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Los resultados obtenidos apuntan a que esta técnica podría
consolidarse como una herramienta asistencial tanto para
determinar cuándo es necesario el tratamiento con
eculizumab, como para ajustar la dosis del fármaco y sus
intervalos de administración.
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0,5
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P4 P5 P6 P7 P8 P9
REFERENCIAS
HMEC-1 activadas con ADP
SUERO
Paciente
(4h 37ºC)
PLASMA
Paciente
+
SUERO
Control
C5b
9D
AP
I
PFA 3%
Anticuerpo primario (C5b9)
Anticuerpo secundario (Alexa 590)
DAPI
DA
PI
Control + eculizumab
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Control SHUadebut
SHUa enremisión
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Suero Plasma
Debut RP Remisión
Los depósitos de C5b9 co-localizan con las fibras de fibrina
• Eculizumab
• Heparina litio
• Quelantes de calcio
1. Loirat C. et al. Management of hemolytic uremic syndrome. Presse Med. 2012; 41:e115-35. 2. Rother RP et al. Discovery and development of the complement inhibitor eculizumab for the treatment of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria. Nat Biotechnol. 2007;25:1256-64. 3. Noris M et al. Dynamics of complement activation in aHUS and how to monitor eculizumab in therapy. Blood. 2014:124:1715-26
0
0,4
0,8
1,2
Debut Post-RP Post Ecu
Hb [120-170 g/L] 74 ± 26 68 126 ± 10
Plq [130-400 x109] 77 ± 35 248 198 ± 13
LDH [250-450 U/L] 2389 ± 948 460 364 ± 88
Hapto [0.320-1 U/L] 0.019 ± 0.018 0.664 1.12 ± 0.18
Esquistocitos 10 ± 5 3 - 4 0
Media ± DS de los parámetros de hemólisis de los tres
pacientes con SHUa incluídos en el estudio.
Los parámetros de hemólisis eran negativos en 5 de
los 6 pacientes tratados con eculizumab. P9
presentaba hemólisis activa, proteinuria y pérdida
progresiva de función renal. (*, p<0.05 vs. Control)
459--PMarta Palomo de Udaeta DOI: 10.3252/pso.es.58SEHH.2016
SETH - MÉTODOS DE DIAGNÓSTICO Y MARCADORES
