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MARCO TEORICO

TINCION GRAM: Las bacterias son incoloras y se observan con dificultad al microscopio

óptico. Los cocos y los bacilos se pueden identificar por su forma, agrupación y por la

afinidad a los colorantes utilizados en la tinción de Gram. Las bacterias Gram positivas

retienen el color azul violeta y las bacterias Gram negativas el color rojo pálido. En general

la tinción de Gram no es aplicable a otros microorganismos como protozoos y hongos,

exceptuando a las levaduras que se tiñen como Gram positivas.

Las diferencias de composición de las paredes de las bacterias grampositivas, que

contienen una gruesa capa de peptidoglucano con numerosos enlaces cruzados de acido

teicoico, y las paredes de las células gramnegativas, en las que la capa de peptidoglucano

es más delgada, explican las diferencias de la tinción de Gram entre estos dos grupos

principales de bacterias es probable que la gran cantidad de enlaces cruzados de acido

teicoico de los microorganismos gram positivos contribuya a su capacidad de resistir la

decoloración con alcohol.(Fig. 2) Si bien el colorante de contraste puede ser captado por

los microorganismos gram positivos, su color violeta no se altera.

*Los microorganismos gram positivos que perdieron la integridad de la pared celular

debido al tratamiento antibiótico, al envejecimiento o a la acción de enzimas autolíticas

permiten que el violeta se elimine durante la decoloración y pueden aparecer como gram

variables, con algunas células coloreadas de rosa y otras de violeta.

Cristal de Violeta: es el colorante primario de la coloración de gram que se adhiere a la

pared celular bacteriana, las bacterias gram positivas absorben este colorante porque

tienen mayor porcentaje de acido teicoico en su estructura y por eso adquieren un color

Fig. 2.- Estructura de paredes bacterianas GRAM(+) y

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violeta en el microscopio, por lo tanto como colorante primario cumple como función

permitir la identificación de bacterias cuya estructura y composición de pared celular se

encuentre mayor proporción y distribución de ácido teicoico.

El Lugol o Mordiente: cumple la función de fijar el colorante primario en la

preparación, es decir facilita la adhesión del cristal violeta en la muestra.

La Safranina: es el colorante de contraste, dado que las bacterias con baja composición

de ácido teicoico y alta composición lipídica en su pared no absorben el cristal violeta

luego de ser removido con el alcohol ácido absorben este colorante color rojizo; las

bacterias que absorben este colorante y que adquieren una composición rosada o rojiza se

conocen como gram negativas. Por lo tanto este colorante facilita la visualización e

identificación de las bacterias no gram positivas (gram negativas) en la muestra y por lo

tanto la diferenciación bacteriana

Aceite de Inmersion: es un aceite especial que se utiliza cuando estás trabajando en

el microscopio el cual tiene un lente que es el más aumento creo que son 100x que se

llama lente de inmersión, y se usa para poder analizar estructuras muy pequeñas en un

microscopio electrónico, como por ejemplo para ver las fases de la mitosis en las células

de la sangre, y es por el índice de refracción que es como el del vidrio

HONGOS: Los hongos constituyen un conjunto de seres vivos que incluye desde

organismos unicelulares a organismos pluricelulares macroscópicos. Están formados por

células eucariotas con pared rígida, son inmóviles, tienen nutrición heterótrofa por

absorción y reproducción asexual y sexual.

Los hongos unicelulares son microscópicos, poseen forma redondeada y se denominan

levaduras. La mayoría de los hongos sin embargo, son pluricelulares, están formados por

células alargadas que se disponen linealmente y forman largos filamentos denominados

hifas. Las hifas al crecer forman micelios visibles macroscópicamente como en los

denominados mohos u hongos filamentosos, en otros las hifas se disponen con un cierto

grado de organización, pero sin llegar a formar una verdadera estructura tisular, y pueden

alcanzar un tamaño macroscópico constituyendo las setas, algunas de las cuales son bien

conocidas por ser comestibles o venenosas.

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II. PARTE EXPERIMENTAL N°1

2.1 OBJETIVO GENERAL

Comprender los pasos necesarios para realizar la tinción de Gram. Reconocer los microorganismos Gram positivos y negativos, de la muestra

bucal. Utilizar colorantes y comprender su utilización.

2.2MATERIALES Y REACTIVOS

Cristal violeta.

Lugol.

Alcohol-cetona.

Safranina.

Aceite de inmersión.

1 Microscopio.

Portaobjetos y cubreobjetos.

Hisopos de laboratorio.

Muestra bucal.

Muestra de hogos.

2.3 PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

1.- Prepare un extendido de la muestra bucal sobre la superficie central del porta

objeto.

2.- Dejar secar el extendido en el porta objeto

3.- Cubra el extendido con la solución de violeta de cristal y deje actuar por 1 minuto.

4.- Lavar con agua.

5.- Cubrir el preparado con lugol por 1 minuto.

6.- Lavar con agua

7.- Descolore la muestra con alcohol acetona hasta que desprenda colorante.

8.- Lavar con agua

9.- Aplique la safranina y deje actuar 1minuto

10.- Lavar con agua

11.- Secar la preparación y observar con el objetivo de inmersión.

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2.4OBSERVACIONES

III. RESULTADOS

Realizar una tinción de Gram se pueden diferenciar las los cocos, diplococos y bacilos gram positivos (azul, violetas) típicas de la muestra bucal. Ver dibujos

IV. CONCLUSION

En el microscopio se pudo apreciar sus formas bien definidas y diferenciadas. Gram + violetas y las Gram - rojas.

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V. PARTE EXPERIMENTAL N°2

5.1 OBJETIVO GENERAL Observar las hifas del hongo. Aprender a preparar muestras de hongos.

V.2 MATERIALES Y REACTIVOS Portaobjetos y cubreobjetos. Muestra de hogos. Microscopio. Asa de siembra.

5.3 PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL1.-Con un asa de siembra sacar una muestra de hongo2.- colocar la muestra en el portaobjeto3.- cubra la muestra con 2 gotas de lugol4.- cubra con el cubre objeto a 15grados aproximando5.- observar en el microscopio

VI. RESULTADOS

Se observa las hifas de los hongos tanto en la muestras de papa y de melocotón.

VII. CONCLUSION

La muestra de papa u melocotón presentan Hifa, filamento en los hongos que se presenta en forma de redes laxas, formando micelio,

CUESTIONARIO1.- ¡Que función cumple el Lugol en la coloración Gram?La función del yodo- lugol, funciona como fijación de la preparación, y tambien actua sobre la pared de las bacterias Gram(+) de tal manera ke al agregar el decolorante (alcohol-cetona) no se destiñan las bacterias ke ia se tiñeron, al agregar la Safranina, las restantes bacterias se teñiran, siendo estas ultimas Gram (-). 2.- ¡Cual es la función de la fucsina fenicada en la coloración ZIHEL NEELSENAlgunos géneros microbianos dentro de los que se incluyen las microbacterias, tienen la propiedad de retener el colorante con que han sido teñidas, aunque sean sometidos a la acción de solventes tan fuertes como los ácidos para su decoloración, el primer método de coloración para este tipo de microorganismo

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3.- ¡A que denomina colorante primario y colorante de contraste?Primer colorante.- Un colorante básico (+) que en contacto con las células cargadas negativamente, reacciona con ellas coloreándolas. El más utilizado es el cristal violeta.

Colorante contraste.- Es un colorante básico de distinto color que el primer colorante, por ejemplo,la safrina.

4.- ¡Mencione 05 ejemplos de bacterias G+ y 05 ejemplos de bacterias G-

Gram positivas Bacillus anthrasis causante del Antrax, Clostridium, perfringens, causante de enteritis necrosante y gangrena, Clostridium tetani, causante del tétanos, Clostridium botulini, causante del Botulismo, Corynebacterium pyogenes, causante de abscesos hepáticos, Lactobacillus acidofillus, usados en la fabricación de yogurt y quesos, Listeria monocytogenes, causante de la Listeriosis, Staphylococcus aureius causante de amigdalitis, atritis y muchas otras infecciones y Streptococcus epidermidis causante de forúnculos, acné y abscesos cutáneos.

Gram negativas la gonorrea (Neisseria gonorrhoeae), meningitis (Neisseria meningitidis) y síntomas respiratorios (Moraxella catarrhalis), entre otros. Los bacilos Gram-negativos incluyen un gran número de especies. Algunos de ellos causan principalmente enfermedades respiratorias (Hemophilus influenzae, Klebsiella pneumoniae , Legionella pneumophila, Pseudomonas aeruginosa), enfermedades urinarias (Escherichia coli, Proteus mirabilis, Enterobacter cloacae, Serratia marcescens) y enfermedades gastrointestinales (Helicobacter pylori, Salmonella enteritidis, Salmonella typhi).