IINISTEIUO - BVS Minsa | Biblioteca Virtual en Salud del...

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n~~ INSTITUTO NACIONAL IlE SALUD

] CENTRO NACIONAL nE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TECNICOS PARA EL

DIAGNOSTICO SEROLOGICO DE LA HIDATIDOSIS HUMANA

Red Nacional de Laboratorios de Salud

lt-alMINISTERIODE SALUD

SERIE DE NORMAS TECNICAS Ndeg 22

Lima Diciembre 1997

iD Ministerio de Salud INSTITUTO NACIO~AL HE SAUJH Ir Cuumlpac Yupanqui 140() Jesuacutes Mariacutea Tclf471-3254 I Fax 471-7443

Liacute meacutel Pcruacute 1997

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TECNICOS PARA EL DIAGNOSTICO SEROLOGICO DE LA HIDATIDOSIS

HUMANA

COMITE DE REDACCION LUfo Li(hciexclt LtL SUacuteflche ROI1Ofliacute

DI Ceacutesur Naacuteqllim ~(rde

HJI SOlia Gllrierrc GOlzaacutees Blgo Eduardo Ayao SlIlca Tec Lo) SOlia Meeilla Alvarez

COMITE EDITOR Dr Alfollso Zavaela Martiacutelle~ wlrfas

DI Ceacutesor Caheas Saacutellciexcle

DI Corlos Carrillo Parodi DI Jaime Clwflg Ncyra

MINISTERIO DE SALUD ALTA DIRECCIOacuteN Dr MarillO Costa Balla Ministro

DI Ahjandro Aguinaga Recuenco

Viceministro

INSTITUTO NACIONAL DE SALUD DI Carlos Corrillo Parodi Jefe

CENTRO NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA DI Ceacutesar Cahezas Saacutel1chez Director General

PERFI L DE LOS FIURFS

lKa IUic UiltIJllh III~ ilIacutellcll(~ (11111111

IfUiexclOfU tHlt)htoO 1 11 11 ( r id

cc de )in1fuacuten diacute til(II(1~ ( Uf i (

Or Coacutear Naacuteqllim Hlilnr Aeacutedir(l )lOr iexclI ikdiOld l)n~r(s(1r Pril1cior )cIUrl(IJ(iI[t) 1 lu fH liacuteI~ld ti dli U I di iexcli(iexclud dlt H(diaacutefld UllilCI ido 0

cJOIlU At((iacuterdt Sun 1ltlrcov lJ(ii 1jiexclI In)II Jiexcl t(irilld iiexcliiexclUacuteiexcliexcl n (UIfU LnilCJsiiexclur No (iexclola M(irlll di SillI Milns (( d( IlIJourtorio di Z(I(j(j f)IViexcl(lf iexclle I(IiIIild (llit NUCIIJiexcldl dc iexclJ(lliJrOiexcliexclI d( Jlfllld Piacutellirl INS MINS

BIga SOllia GlIlifrrf~ (ollales Biaacuteloga laquoisfenfe )orafn-io t( Z (t1iexclJsi 1 i lirlfiacute th j)tl OuumliiexclJiexcl rlaacute ((iexclUniexcl NiII 1 iexclwl d LrJonlfomiddot lOS dc Siexclud PliacuteJIim Us i1NSA

Ulga Edllart1I riyaa Sulca lJiuacutelogo asisltIle ruJor(l(OIO dI 7U(JlfOS1 1) ifln de Paravlfologiexcla (enlro iexclv( ltJ1w dt J iexclfh(1 (111

riacuteos de Salud Puacuteiexcliiexclmiddota INS MIN

Teacutec Lab SOlia Medila Alvarez Teacute(lIico ti LaJora(orfo f JolroJ((rio de HiexclWUacute Jiiexcl-()iexcliexcl t PtllIIIOOpiu ((lItfe l Nocionul de LaJoworios de SOlId PuacuteNiUl INS MINS

PERFIL DE LOS EDITORES

Dr Alfonso Zamlefa Marfiacutel1fZ- ~ariexclas Meacutedico Cimjillo Dorlol Fallu(ologi Directo Deneral Celtro Naciolla de Conm de (idl INS MINSiexcl Profesor Principal Senaacutel Farnu(Jtgiexcla )cparllllllcnfO Al(uleacutelllit(J d( Cipiexclumiddotjas Fisioftiacutegi((fs Foclllwd de Ciellcias V Fiexclosojltl UIlIacutel(rsiacutetad Perualu Hendia Miacuteellliexclm Instituto de MediciNa Tmlind lnI Von (JIIIacutel(nidod PetlUlIIII ((1(11110

Heredia

Dr Ceacutesar Cabezas Saacutel1cIlez Meacutedico Cinlillio Maser UI Mediciacutel Lspe(JiIiliI 1 [lnlllcrcl InlecrioliIs r Tmcoel Direco Geocm Centro Nocioo 1 laJol(lloroS de Sold puacuteJIm INS MINSA PIlesor illliltlllo de Medieillil noicol Uniiexclcrsidlld NaiIacutemllll Mllvo de SOl Hilrcos Ulliv(Isidd Pemilllll Cayelilllo Hnediltl

Dr Carlos Carrillo Parodiacute llNrlio Cirujano DoclOr CII Medidll

Principal [)eplIIliexclII1UIIO cadeacutelllico dc MicmJiacuteooiia l-aclIlad de Celrias Filomllo uiexclVena(J PerUlJlUl Carelallo Heredia hfe 111111110 Naciollal (iacutee Sallld

Dr Jaime Clzallg Neyra Meacutedico Cirujano Masel rlfSciellce ill COIIIIIILuacutery iexcliexclCtI ji DeveloJlill1i CouJ)lries Direco tjecuivo t( GOIiIIiacutea de la Clidad CertiicacjiexclI Cmm Naciolal de COllro dc Calidad INS MINSA Illvestiiexcl(adur Instituto de Medicila lolJllIl Alexi1dcr Villl Humbold Ullirersidad Peruallil CareiacutelllO Heredia

La edicioacuten de este Manual se efectuoacute en el marco del Convenio de Cooperacioacuten suscrito entre el Instituto Nacional de Salud y la Universidad Peruana Cayetano Heredia El Comiteacute Editor agradece al Dr Jorge Barnaby Rodriacuteguez por la revisioacuten y los comentarios efectuashydos a esta obra

INDICE

Pnsllllaciiexclmiddotlll 7

Rc~()lucitIacuten Iclalural ()

CAPlTlJLO l InlroduccitIacuten 11

CAPITULO 11 Meacutelodo- scroinmunoloacutegicos para el diagll(iacute~lic() Je la hidalidosis humana I()

CAPITULO 111 Prueha de dohle difusioacuten arco 5 ())5) 21

CAPITULO IV Prueha de inmunohlot 27

CAPITULO V Obtencuumliacuten de muestra de suero 35

CAPITlJLO VI Conservacioacuten y enviacuteo de muestras de suero 41

CAPITULO VII Bioseguridad 43

CAPITULO VIII Referencias Bibliograacuteficas 45

CAPITULO IX ANEXOS 47

ANEXO 1 Materiales equipos reactivos y soluciones para la prueba de DD5 49

ANEXO 2 Materiales equipos reactivos y soluciones para la prueba de inmunohlol 55

ANEXO 3 Materiales para obtencioacuten de muestra de sangre venosa 61

CAPITULO X Glosario 63

5

PRESENTACION

Las referencias hist(lricas descrihen que el paruacutesito JqllillocoCCIIS

grmllloslIs fue introdulido en la eacutepoca de la ColoniL pero es en este siglo que la enfermedad es considerada como un problema emergente de Salud Puacuteblica La rclaci6n epidemioloacutegica hombre -perro- ganado (Bovino Caprino Ovino) no ha podido ser rota hasta la Iccha cn todn elterriacutetorio nacional Se han intentado tratamientos a humanos y perros se ha controlado los animales beneficiados se ha capacitado a personal de Salud escolares y comunidad se ha evaluado el impacto econoacutemico negativo de por lo menos US$ 1000000 por antildeo se han ejecutado estudios investigaciones e intervenshyciones integrales en liacutereas puntuales Pese al desarrollo de diferentes meacutetodos diagnoacutesticos utilizados y fuentes de informacioacuten (necropsias hallazgos operatorios radiologiacutea serologiacutea) no existe auacuten un programa multisectorial multidisciplinario y a nivel nacional que permita el abordaje exitoso de esta patologiacutea No basta con matar al pcrro es necesario que el personal de salud y de otras aacutereas teacutecnicas trabaje en conjunto estrategias de mediano y

largo plazo para limitar eliminar o erradicar un problema endeacutemico que a todas luces puede seguir avanzando en territorio y numero de personas y animales infestados

El Instituto Nacional de Salud dentro de la poliacutetica sectorial presenta el Manual de Procedimientos Teacutecnicos para el Diagnoacutestico Seroloacutegico de la Hidatidosis Humana para su utilizaeioacuten en los laboratorios de diagnoacutestico y referencia a nivel nacional y como parte de las labores de difusioacuten teacutecnica de la Red Nacional de Laboratorios de Salud

EL COJlITE EDITOR

7

SECTOR SALUD

INSTITUTO NACIONAL DE SALUD

bull No ~lL-_~~ iexclll

RESOLUCION JEFATURAL

Lima Z r( de 199 i

CONSIDERANDO

Que el Instituto Nacional de Salud traveacutes de su Centro NaClonal de Laboratorios de Salud Puacuteblica ha formulado el manual normativo relativo al procedimiento teacutecnico de diagnoacutestico seroloacutegico de la Hldatldosis Humana

Que en lal virtud resulla necesario aprobar y difundir dicha manual para su utilizacioacuten y observancia

De conformidad con lo dispuesto en el Reglamento de Organizacioacuten y Funciones delINS aprobado por RM Ndeg 178-95-SAlDM y

Estando a lo acordado

RESUELVE

Articulo 1- Aprobar la publicacioacuten del documento Manual de Procedimientos Teacutecnicos para el Diagnoacutestico Seroloacutegico de la Hidatidosis Humana perteneciente a la Serie de Normas Teacutecnicas de Instituto Nacional de Salud

Articulo 2- Disponer la impresoacuten y distriexcl~ucioacuten del documento a que se refiere el rumeral anterior

Registrese y comuniacuteQu8_iexcl

~-11ft CARLOS CARlllllO PAROOI

J E rE JljSIlU 10 NACloto Ilt lUD

9

CAPITULO I

INTRODUCCION

La hidatidosis es una ~(l(lIlllsis parasitaria que tlelle COlllO agente etioloacutegico la iexclorma larvaria de helminto- de la CIh Ccstoda (eacutenero EcltillocOCCllS (Rudol phi 1-10 I J

Cuatw especies del Geacutencro Echiuococcus pucdcn inlcctar al hombre E gralluloslIS E lIlultiloclIlaris E oligartlws y E vogcli De estas la espeshycie E grallll[oslIS es la de mayor importancia desde el puntn de vista oc la salud puacutehlica y de la produccioacuten animal

la hidatidosis causada por E gratlllluSIIS es un1 de las oonosis maacutes difunshydidas y conocidas mundialmente existiendo en tasas variahles en todos los continentes En Ameacuterica del Sur la infeccioacuten incide preferentemente cn los paiacuteses ganaderos sobre todo con criana de minos principalmente en las aacutereas rurales lid Uruguay Argentina Chile sur dd Brasil Bolivia y Peruacute

En el Peruacute la hidatiollsis estaacute amplianlLntc difundioa en ambientes rurales dc la Sierra y tamhieacuten cn onas urhanas de Arequipa y Lima oebido a la presencia de perros infcctaoos que son traiacutedos de las zonas endeacutemicas a las ciudades o al deficiente control veterinario de JiexcllS carnales

En la mayoriacutea de los casos de infeccioacuten humana el desarrollo del quiste hidatiacutedico es asillt()maacutetico~ La inrcccioacuten humana se produce por la ingesta de los huevos de E grallulosllS que generalmente se da en la infancia y la sintomatologiacutea iraacute u manilcstarse tardiacuteamente esto C- en la edad adulta cuando el quiste hidatiacutedico haya alcanzaJo un (Imantildeo mayor

Las manifestaciones cliacuteniLas de la hioalidosis e relaCIOnan eOI1 el estado fiacutesico oel quiste e integridad dc sus memhranas Isiacute como COI1 la localizacioacuten y tamantildeo oel quiste Generalmente el crecimiento del quiste iexclc manifiesta como masa que causa deknnacioacuten de lo uacutergalH 5 y alteraciones funcionales de los mismos

En casos oc localizacioacuten pulmonar los signos y siacutentomas frecuentemente incluyen tos dolor toniacutexicll hemoptisis yo disnea Cuando la localizacioacuten es hepaacutetica () abdulllinal puede haher dolo masas palpahles ictericia

11

hcpatol11cgalia y() l-pkIlPlllegaliH I()lt Cltlos Jc l(lcaliltlci(iacuten (iacutesca produccn destruccitlll Jc traheacuteculas IlccJ()si~ y Iractura cXf1olltaacutellla El pr(llluacute~tic() se agrava cuanJo la localiacioacutell es en (iacuterganos vitales como el sistema Ilcrvioshy-o central el corauacuten y I(b riacutelloncs

La hiJatiJosiacutes es una Je las pocas iacutenloacute-Xiacuteones parasitarias humanas cuyo diagnoacutestico de lahoratorio es principalmente inmunoseroloacutegico Sin emharshygo cuando la sintomatologiacutea lo indica son utilizados exuacutemenes microscoacutepishycos dirigidos a la huacutesqueda de escltiacuteliccs en la orina o escoacuteliccs yo fragmenshytos de memhrana en la expectoraciacuteoacuten hroacutenquica asiacute eomo en liacutequidos pleurales y abdominales Es importante sentildealar que estaacute contraindicada la puncioacuten del quiste por ser una conducta inductora de choque anarilaacutectico con riesgo de vida para el paciente y de causar diseminacioacuten hidatiacutedica de consecuencias impredecihles

El inmunodiagnoacutestico de la hidatidosis humana es de gran importancia pues complementa el diagnoacutestico cliacutenico en pacientes que presentan manifestashyciacuteones o imaacutegenes compatihles con el quiste hidatiacutedico y consiste en la deshyteccioacuten de anticuerpos circulantes anliacutegenos circulantes o ceacutelulas sensibilishyzadas contra los antiacutegenos Jel quiste hidatiacutedico

CARACTERISTICAS DEL AGENTE ETIOLOGICO

EL VERME ADULTO de E granulosus es el maacutes pequentildeo de los ceacutestodes conocidos pues mide de 3 a 6 mm de longitud Su cuerpo estaacute dividido en tres partes principales el escolex que tiene forma globosa con 4 ventosas y un rostelo armado de dos hileras de ganchos el cuello o regioacuten proglotidoshygeacutenica es delgado y corto y la estroacutebila formada por 3 oacute 4 progloacutetides de las cuales la uacuteltima es graacutevida

12

rosleio ganchos

01 1 ventosa 1 gtri

iexclSCOLEX

CUELLO

masa germinativa

bolsa de cirro ~uacutetero

PROGLOTIDE MADURO

cirro 97~

canal deferente

1ovario

canal viteUno

glandula vitelina

000 ft

uteroIr d

11middot ~f J 1I PJ J PROGLOTIDA1~eiquest ~i GRAVIDA1I-iquestr1I)(~ 1I

~

iexcl-gt ~ (-

~

~ ADULTO DE Echinococcus grmmloslIs (Batsch 1876)

(Fuente Noble amp Nobk 19(5)

13

L IIII)TIUF l- 11 Idl1 111gt11 Ill111e diacutelIJ1 1~Iiacute IOllllatld IHlt dlh IlIllll

hlIIlI~ lIcI1Ullliacutelllda- llIlIl1111 llllIiacuteJllliacuted Piacutellclliacuteqllidu IlILliliacutedil(l

tiacute La IllCll1hrlILI 1ltllllill11 l Id 111iacute- lkma llllulL lliacute rOrlndd1 Ior 111 gnlll ntJlllllll dc Lilllinl lOI1lll1triacutela Su cOl1siacuteslLl1lia L iriacuteil rolllpieacutenduse hiciltlllliI a la lllellO pnsiliacuten

h) La I11l~lllhral1a glTll1illaliva 1 la rlspollsahlc lk la prolikraci(Iacute1l del paraacutesito y lk~ la regulaeiuacuten del movimiento dc Illacrollloleacutecubs del liacutequido hidatiacutedico pUl 1 Illemhrana laminar A parlir de esla mcmhrashyna SOI1 formadas [as csIacuteLulas prnliacutegeras que generalmente prcselllan forma esfeacuterica y visihles COIllO granos dc arena miden oc 250 a 500 pm

A su vez a partir de la l11ll1hrana genninauumlva de las vesiacuteculas proIiacutegeras se originan los Proloescuacuteliccs que vistos al microscopio son pequentildeas cahezas invaginadas de modo que el rostclo y los ganshychos quedan protegidogt Cl las que la corona de ganchos y los dos pares de venlosas son claramenle visihles

c) El liacutequido hidatiacutedico elaborado por la memhrana germinativa cs crisshytalino e incoloro ocupa los espacios intersticiales y hantildea la- memhrashyna germinativa

Tiene composicioacuten quiacutemica variahle conteniendo sales y sustancias proteoliacuteticas y glicoliacuteliclt1s Es loacutexico para el organismo parasitado sicnshydo capaz de sensihilizarlo y consecuentemente provocar la orlllaciltIacuten de anticuerpos especiacuteficos

14

~~~~~~ - c~-lt-~ --~~~~ o I bullbullbullgtbull~ Membrana ~Itmiddot~Jttfi~~middot --=~~~~-- Adventicia

~~~~ ~~~-__-_ bullbull -7~bullbull__ -~_Membrana~~ ~ bull~~_- Laminar ~~iquest-- -- Pedunculo ~ ~ ~ - - bullbull~ Membrana

Germinativa

Cavidad de quiste hidatiacutedico Peduacutenculo de --fl llena de liacutequido protoescoacutelices

Ganchos t1 iacute~ Vesiacutecula proliacutegera

~Ventosa bull ~ Protoescoacutelices en visioacuten terminal

Protoescoacutelices en f visioacuten obliacutecua ~-

ESTRlXTURA DEL QUISTE HIDATIDlClt) (Fuente NOBLE amp NOBLE 1965)

15

El Ji granu(slls e lIll pariacute~il() dl ciIi dc iacuteda hllcnleacutenicu Id Illma

adulta sc lksarmlla v SI [orna slxualllllllll llladula cn UIl hOSPLdcro dcfillishy

tivo (pcrrp) la forma larvaria o quiacuteliGI liclll lugar CI1 los hOSPCliLros illlcr~

lllcdiarios (OVillOS hovinos cqllinl~ enlrl plros) iacutenclllyellcl(l el hombre

~ 1

~ 1

3

CICLO EVOLUTIVO DEL Echinococcus granulosus l hospedero definitivo del paraacutesito (perro) la

verme adulto lb progloacutetida graacutevida le huevos en el medio ambiente 2 desarrollo del quiste en el

hospedero intermediario (ovino) 2a quiste hidatiacutedico 2b protoescoacutelisis invaginado 2e protoescoacutelisis

evaginado 3 hospedero intermediario accidental (hombre) (Fuente GOMES DE MORAES el al1971

modificadO)

16

En el hospedero ddinitivo el verme adulto se encuentra rijo a las vellosidades de la mucosa uc intestino delgado Las proghiacutetides gruacutevidas conteniendo varias eentenas de hucvos son eliminadas con las heces del animal a medida que se desprenden de la estr(Jbila

Los huevos conteniendo la oneoacutesfcra ((J embrioacuten hexaeanto) son ingeridos por los hospederos intermediarios a traveacutes de la vegetacioacuten a partir del suelo contaminado Cuando la oncoacutesfera es liberada en el intestino delgado de este hospedero atraviesa las paredes del intestino y penetra en los vasos sanguiacuteneos y linfaacuteticos mediante los cuales es llevada a los tejidos del orgashynismo

En el hiacutegado o en los pulmones oacuterganos uonde preferentemente se localizan los embriones la gran mayoriacutea es destruida por la respuesta inmune del hosshypedero Aquellos que sobreviven evolucionan como una pequentildea vesiacutecula llena de liacutequido incoloro cercado por ceacutelulas mononucleares del hospedero Esta vesiacutecula es la que al enquistarse en los tejidos del hospedero intermeshydiario iraacute a representar el inicio de la fase larvaria del paraacutesito y finalmente al quiste hidatiacutedico al formarse la membrana adventicia por la fibrosis alreshydedor de la hidaacutetide o larva

Si las viacutesceras del hospedero intennediario conteniendo quistes hidatiacutedicos fueran devoradas por los perros los eseoacutelisis se desarrollaraacuten en su intestino dando oriacutegen a la forma adulta de E granulosus

El hombre es un hospedero intermediario accidental y no cumple ninguacuten papel en el ciclo evolutivo sin embargo es el principal responsable en pershypetuar la infeccioacuten ya que alimenta a los perros por costumbre o por necesishydad eon viacutesceras portadoras de quistes

17

CAPITULO II

METODOS INMUNOLOGICOS PARA EL DIAGNOSTICO DE LA HIDATIDOSIS HUMANA

Lm meacutetodos l1laacute~ utilizauos para el diagn(hlico de la hidatidosis humana son Hemaglutinacioacuten indirecta OIAl) AglulinClciuacuten de Laacutetex (AL) Doble difllsiuacuten arco 5 (D05) Inmllnoclcctroforcsis (lEF) e Inlllunocnsayo (ELISA) (X 11) Los meacutetodos de ])])S e IEF son considerados de relcrencia en las aacutereas endeacutemicas de los paiacuteses de Ameacuterica dcl Sur y estiexclIacuten siendo utilizados en el Laboratorio de Zoonosis de la Divisi(lI1 ue Parasitologiacutea del Centro Nacional ue Laboratorios de Rercrencia El empico del meacutetodo de EUSA presenta un amplio potencial para la uetcccioacuten de portadores asintomaacuteticos en los que se confirmariacutea el uiagnoacutestico inmulloloacutegico con la prueba de DDS e Inmul1obloL

Recientemente estaacute siendo utilizado el meacutetodo de Inmunoblot o Western Blotling para el inmuJ)odiagnoacutestico de la hidatidosis humana ofreciendo alta sensibilidad y especificidad con respecto a las anteriormente mencionadas (5) Los resultados de los estudios realizados hasta el momento en las difeshyrentes aacutereas geograacuteficas empicando la teacutecnica de Inmunoblot en el diagnoacutesshytico de la hidatiuosis humana muestran antiacutegenos especiacuteficos para E granulosus con masas relativas variadas (6 I 1 13)

El patroacuten de reactividau positivo de los pacientes hidatiacutedicos en aacutereas endeacuteshymicas de nuestro paiacutes estaacute conuicionada al reconocimiento de bandas de Mr entre 21 y 31 kDa (12) Coincidentemente estas bandas incluyen peacuteptidos de los dos mayores coniponentes antigeacutenicos dclliacutequido de quiste hidatidico de E granulosus el antiacutegeno B y el antiacutegeno 5 Este uacuteltimo es el mismo usado en la prueba de DD5 ampliamente conocida

19

CAPITULO III

PRUEBA DE DOBLE DIFUSION DEL ARCO 5 (DD5)

Es una reaccioacuten de precipitacioacuten antiacutegcno-anticuerpo en un mcdio semisoacutelido quc consistc cn dctcctar cn el sucro dc un pacicntc anticuerpos contra cl antiacutegcno dcl arco 5 (dccctada por IEF) mcdiantc la idcntidad inmullollIacutegica con un sucro control positivo

31 PROCEDIMIENTO

311 Utilizar laacuteminas portaobjeto dc 25 x 75 cm sumcrgidas en alcohol limpias y secas

312 Rotular cn un cxtrcmo dc las laacuteminas COIl laacutepiz punta de diamante el nuacutemero y fecha corrcspondicntc

t--

~ ~

~ O ~

8

313 Sobre una superficie nivelada colocar en la laacutemina con ayuda de una pipeta 35 mL del gel (Anexo J 43) licuado en Bantildeo Mariacutea (Foto 1)

21

FOTO 1 Colocacioacuten del gel sohre la laacutemina

314 Dejar solidificar el gel a temperatura amhiente durante 10 minutos

315 Colocar la laacutemina en Laacutemara huacutemeda y dejar enfriar por IS minutos a 4degC

316 Retirar la laacutemina de la caacutemara huacutemeda y colocarla sobre el diagrama de corte correspondienlc (Anexo 1 Figuras 1 y

317 Corlar en el gcl los orificios ulilizando los sacabocados con los diaacute-shymelros correspondienles para los dos sueros prohlema ( 10 mm) el suero control posiliv() (6 mm) y el anliacutegeno (1 mm) segllll el diagrashyma (Figura 2) Relirar los geles corlados eon una cspaacutetula fina procushyrando evitar dantildear los hordcs de los orificios (FOlO 2)

318 Colocar la laacutemina cn dunara huacutemeua

319 Llenar los orificios respectivos suero problema (150 jJL) suero conshytrol positivo (SO jJL) y el antiacutegeno (3 pL) utilizanuo pipelas Pasteur (Foto 3) No debe habcr hurbujas en su interior Y el nivel superior debe ser convexo respeclo a la superficie del agar (Anexo J Figuras 3 y 4)

22

la la ua SOPJPO sOl ap wgtp81ojlad Z OJOgtI

~II() 1~1l cl ca-(l del (lrilili(l llLl lIltiacuteglIl(l Ikllar l(lll ulla piplla Il-teur adaptad(l par1 el dialllltro I IIiexcliexclIiexcliexcl) 1lt1 qlle lkhe elltrar Illllgadallllllte cn el orilicio [sinlklorliexcliexclarlo Ili agrandarlo) Illtroducir vcrlicalllllllshyte en el orificio el etremo capilar hasta tocar la superlieic del portaohjllo dejar ecurrir lentamcnte el alltIacutegcno a medida que se retira la pipeta

~III Dejar dilundir el antiacutegeno y los anticuerpos en el agar de la laacutemina a temperatura ambiente durante 40 - 4X horas

3112 Finalizada la difusioacuten sumergir la laacutemina en Soluci(lIl Salina Tamponada (SST) pH 74 (Anexo I 41) a temperatura amhiente por 36 horas Durante este periacuteodo se cambiaraacute 5 veces la sol ucioacuten de lavado (SST) En los dos primeros lavados eliminar de los orilishycios los posibles precipitados que pudiesen haJer Para lo cual con ayuda de una pizeta sc rociaraacute con SST a presioacuten moderada

3113 Concluido el lavad) sumergir la laacutemina cn agua destilada por 10 minutos

3114 Lucgo envolver la laacutemina en papel filtro Watman Ndeg humedecido en agua destilada

previamcnte

3115 Dejarla secar en estufa a 37degC x I X horas

3116 Retirar cuidadosamente el papel que envuelve a la laacutemina humedeshycieacutendolo con agua destilada en caso necesario

3117 Sumergir cn solucioacuten colorante (Anexo 1 44) durante 15-20 minushytos y observar si hay la banda de precipitacioacuten entre antiacutegeno y sueshyro control dc no haberla dejar la laacutemina maacutes tiempo en la solucioacuten y continuar cste paso

3118 Escurrir la laacutemina enjuagar con agua de cantildeo y volver a escurrir

3119 Sumergir en solucioacuten decolorante (Ancxo 1 45) durante 20 - 30 minutos hasta obtener una decoloracioacuten satisfactoria en la laacutemina y apreciar claramcnte la banda entre el antiacutegeno y el suero control

24

2 LECTURA E INTERPIUTAUON

La leclura c()ll~i~t( cn ohservar el llliacutellllTO de banda dc precipilaciuacuten cnlrc lo~ oriricios del suero prohlema y el anliacutegeno Vcriricar si alguna ele ellas presenta identidad con la banda rorlllada entre el orificio del antiacutegeno y el suero conlrol positivo (Foto-l)

La prueba se considera vaacutelida cuando se ohserva la handa de precipitaeiuacuten entre el antiacutegeno y el suero control positivo en cao contrariu la prueba carece de valor y debe repelirsc el ensayo

FOTO 4 Las muestras aplicadas en los orificios 12 y 4 presentan bandas de identificacioacuten del arco 5

33 INFORME DE RESULTADOS

Inrormar la presencia (positivo) () ausencia (negativo) del Arco 5 y el nuacutemeshyro tolal de bandas observadas

25

al P(lsilivo 11) Nc~alivo Anoliexcl la ~I1-llIClltl (lh~l1 iexclviltiacuteIL

El resullado negativo Illl icl1lpre illdica ltluencia de qUlsk hidatiacutedico pUl

esto puede ocurrir en CIS(l (L- quiSll iacutenlegro (hialino) y calciacuteliacutecadumiddot

26

CAPITULO IV

PRUEBA DE INMUNOBLOT

FlJNDAMENTO

Este meacutetodo perl11ite observar la reaccioacuten de lo anticuerpos presentes en el suero de UIl paciente frente a proteiacutenas antigeacutenicas del liacutequiuo hiuatiacutedico 1~as proteiacutenas son se[1arndas pur ekctroforesis y des[1u0s transfcriuas aUlla memhrana de nitrocclulosiexcll La memhrana es entonces incubada con el sllero problema y Illego con Anti-lgG humano marcado con una enzima Si el sueshyro tielle anticuerpos al agregar un substrato crom6gcllo adecuado se origishyna un producto insoluhle que pnxipita fonnanuo bandas en las zonas de proteiacutenas antigeacutenicas

41 PROCEDIMIENTO

411 ETAPA 1 Separacioacuten de las proteiacutenas dd antiacutegeno por c1cctroforesis en gc de poliacrilamida conteniendo dodecil sulfato de sodio (SDSshyPAGE)

La separacioacuten de las proteiacutenas componentes antigeacutenicos por SDSshyPAGE es realizada siguiendo la metodologiacutea descrita por Tang et al ( 1983-1986) empleando un sistema discontinuo en el gel de seshyparaci6n y en el gel de empaquetamiento Un sislema vertical (MinishyProtean 11 elcctroforesis Cel nfO-RADl resulla apropiado para reashylizar la separacioacuten de las proteiacutenas (Folo 5)

FOTO s Sistema Mini-Protean 11 Cell BIO-RAD

27

cf l I AIlI iacutegUHl El allliacutegelll) 1(lal dll Illlllidu hldallllilPlk (iIHI (fTIIImiddot()L 1 ioliacute I iacute~ad( es suspclldidn CII UIl hulkr TriJI ICI ()J) 1 pll XO (AlIlXO 11 3 1) en COllcclllraciLl1l de i( IlIg tlld Ycllllrilugado a 3i()() riexcl1 1ll por 1) mishyIlulos E 1 sohrenadantc es C( lSen auo entrc -JOC -70C hasta el 1110shy

mento de su liSO

4112 Tratamiento de I anl iacutegel10 El ATLH-O es diluido volumen eacutel volumen con una solucioacuten de tratamiento de Illuestra (AIlLXO 11 32) El antiacutegeno es entonces soshy

metido en Bailo Mariacutea a 1()()OC por 5 minutos Luego se adiciona un colorante marcador de corrida (Anexo lL 33) a razoacuten de l pL por cada 30 f-lL de muestra (Lacmmli 1(70)

4 l 13 Preparacioacuten del gel de scparaciuacuten () de corrida para el modelo MinishyProtean JI BlO-RAD - Usar 2 placas de vidrio de 73 mm de allo x 102 mm de ancho x I

mm de espesor y 2 espaciadores de plaacutestico de 075 mm de espeshysor

- Limpiar las placas de vitlrio con alcohol y secarlas - Montar las placas empleando los espaciadores untados eon una

eapa fina de vaselina neutra para unir las placas Preparar el gel en la concentracioacuten de IY7r seguacuten la formula del Anexo TI 310

- Encajar las placas en un soporte - Con auxilio de una jeringa coloear el gel en el espacio de las plashy

cas montadas hasta 65 mm de altura e inmediatamente completar con agua destilada

- Dejar polimerizar a temperatura ambiente por 30 minutos

4114 Aplicaei6n del gel de empaquetamiento - Eliminar el agua destilada de la parte superior del gel con ayuda

de una jeringa Secar con papel filtro la superricie del gel de separaei6n Preparar el gel de empaquetarniento corno se indica (Anexo 11 310)

- Colocar el gel de empaquetamiento preparado sobre el gel de seshyparacioacuten e inmediatamente insertar un pcinc preparativo de (j71

2R

111111 de l~pe~()r dejando un lpaei(l llllrl ll IOlld(l del pellle yel gel ue ~epeacutelraliiacutell (h)(o h)

- Dejar polillleriacutear a temperatura alllhielllc por JO l11intlll--

FOTO 6 Gel preparativo para SDS-PAGE Observe el peine en la parte superior

4 J J5 Preparacioacuten de la ekctroforcsi- Retirar el peine y lavar las cavidades que deja con Buffer TrisshyGlicina-SDS o de corrida (Anexo n 39) Aplicar en la cavidad del gel de empaquetamiento 40 IJL de susshypensioacuten de antiacutegeno en una concentracioacuten 4 fJgIJL de proteiacutenas En las cavidades del extremo derecho de estc gel colocar 5 fJL de proteiacutenas de peso molecular patroacuten y 3 uL de peso molecular pashytniacuten pretentildeido Adicionar aproximadamente 200 mL buller de corrida en el recishypiente superior y 300 mL del mismo buffer en el recipiente infeshyrior de la cubeta para iniciar la corrida electroforeacutetIacuteCa (Foto 7)

19

FOTO 7 Aplicacioacuten del antiacutegeno en el gel para la corrida c1cdrofreacutetinl

(A)

(B)

FOTO 8 Equipo para electrofoacuteresis en el gel de Poliacrimida (A) y Ilerfil proteacuteico de antiacutegeno de liacutequido hidatiacutedico definidos por SDSshyPAGE Coloracioacuten Coomassie blue (8)

30

-111 () ( )ITiacutedil lkTtn d( lid iacute COllccLlI lo krlllillltlk 1lldric(l Lll 11 1111111 de [HlLkL 1lt1 llcctroloICi e ekcluacuteiexcl ~1 11 IllA pOI

PrLldr alLilCi()1l al colorante 111arLltJlh r dc ulrrida - ClIando lo complejos S DS-prolliacutenltl entran uniformel1lcnte en el

~el de separaci(lI1 () ue corriJa la corrientc c aumentada a JO lilA

por gel - Descollectar el sistema cuanuo el colorante marcador de corrida

alcanza la hase del gel de cparaci(lll

412 ETAPA 11 Tranrcrellcia de proteiacutenas del gel de poliacrilamida a la memhrana de nitrocelulosa

Las proteiacutenas son transreridas e leclroloreacuteticamenle del gel para la membrana de nitrocelulosa con poros de 012 pm empicando un recipiente de ecLlrororesis (Foto 9)

FOTO 9 Sistema Mini Trans-Blot Electroforetk Transfer Cells BlO-RAD

4 121 Pnparaci(iacuten de la transferencia

- En un recipiente conteniendo huffer de transferencia (Anexo n 41) se coloca el gel sobre una membrana de nitrocelulosa Estos a su vez se colocan entrc dos hojas dI papel li Iro embehidas en el mil11o bulle

31

- EllIlIljulllO tic l Illlll lcIUIgt JldJllllillnl se l(lllll lnlll dogt c-punjagt lk 3 Illlll dl l-plSll lt1 su L lndl Lslc lPl1ll1lll11 quda cll1paeadn CII I1l1a pilt pluacutesliacuteca e11 Illllolaciol1cs LIl eacute1111hus Ltshydos Ell-cguida cste Cllllllnlo se ellGlja en una cimar de lransferenshycia elln LI geleolocad(l l1acia el CUacuteIOllo y la 111CJllhrana de nitroceshylulosa hacia el iIacutenodo

4122 Elcctmlranslerencia

La clectrol ransCrenLIacutea se clccluacutea a una corricnte variando dc J5 ampcrios a 10degC al inicio hasta 205 amperios a 35degC al final del proceso mantcniendo el vollaje constante de 55 vultios por una hora (Foto lO)

FOTO 10 Transferencia del antiacutegeno del gel al papel de nitrocelulosa mediante electroforesis

- Finalizada la electrotransfcrencia retirar la memhnma de nitroccshylulosa y lavar 5 veces por 5 minutos cada una con hurrer fosfato salino (PBS) 001 M pH 72 (Anexo Il 42) conteniendo O3 Gk de tween 20 (PBS-T) (Anexo 11 53) Y 1 vcz maacutes con PBS sin tween

- Cortar la tira de nitrocelulosa que contiene los patrones de peso molecular y colorear con solucioacuten al 1 de tinta China

- A continuacioacuten cortar la memhrana uc nitrocelulosa cCgtI1tcniendo las proteiacutenas del antiacutegcno en tiras dc 3 mm de ancho y guardar a -20degC entre hojas de papel filtro humedecidos en PBS hasta el momento de su uso

32

-t13 ETAPA 111 Rlaccillll 1I11111II111lJ1lllldliliexcl

- ICIllIlIL-lr placa dc pIUacuteIIL(l dllldldl cn C(llllllartilllcnt(lS - Cul(lclr tira dc nitwcclul(la c(lntcnlCnd(l el antiacutegenu hidatiacutedicu

en l(ls clllllpartilllcnlos de las Illaca i Fot(l 11)

FOTO 11 Placa de incubacioacuten de las tiras de nitrocelulosa

- Incuhar las tiras con PBS-T contenicndo 5k de leche descremada (PBS-TL) (Anexo) por 30 minutos a temperatura amhiente y agishytando

- Descartar el PBS-TL y colocar 1m sueros prohlemas diluidos a 1 100 en PBS-TL e incuhar por I hora

- Lavar las tiras 5 veces por 5 minutos cada una con PBS-T - Adicionar una soluciliacuten de anti-IgG humano marcado con

peroxidasa diluido al 1000 en PBS-TL c incubar por I hora - Lavar las tiras 5 vcces pllr ) minutos cada una con PBS-T y l vez

maacutes con PBS soacutelo - Revclar la rcacciliacuten adicionando una soluciuacuten conteniendo 5 rng

de Diamino hencidina (DAB) H)flL de HP2 (30) por cada 10 mL de PBS

- Luego de visualizar las han das lavar las tiras varias vcces con agua deionizada

- Dcjar secar las tiras a tcmperatura arnhicllte en la oscuridad

( (llhhil (1) hudiiexclI (11 11 tiriexcl de l)itl(uacutelul(l~a 1lt1 prelmlltI

11Illlliiexcl ltIv hlIldd (k 11IUacutellildLioll 111 l() dI prl~lllliiexcliexcl lL- hall

dj- iexcllIlolar tI rlpTliacuted IIld rllatih (111) lxpnsadll ell 1I111shy

hd(~ tll kiloiexcl(dtoll k)iexcl) ihto 11

bull

I

FOTO 12 Bandas de precipitacioacuten antiacutegeno-anticuerpo en el inllumoblot Obsrrnsc la bandas 21-31 kDa

4 I nfornu dc esulfados

FI nitlri) Jl pnsitIacute Idad para el diagnoacutestico de la hiJatidosis humashyn1 emplcandl) antiacutegenn hidatiacutedico preparado en el INS estaacute condishyIPllad) al nlonoCllllienlp de lIIhl (1 muacutes peacuteptidos antigeacutenicos dc MI cntre ~ 1 1 na 111 ltlntinhrpus presentes en el suero del pashy 1l111

CAPITULO V

OBTENCION DE LA MUESTRA DE SUERO SANGUINEO

U liCIO 1I1guiacutellll es ll malcli~tI qtlo e -oltjld pald ll 111111 -gtlUItgtu

de la hidalidois Illllllal1lti la clIal C ohlIacutellle k augll IIUSiexcl siguilIdo ll

proccdimiellto que a cOlllimweiuacutell sc il1dicl

1 Col(lLar sohre la Ille do llahajo lodo 01 llalond que se lleceil1 para

ohleuer la muestra (AnLxo l J[)

1 Si el paCiilllC sc encuenlra en LI lahoralorio haga qUi c sienle de manera que el hrlo quede colocado paraklltlIl11Ilh a la lIlesa de Ira hao donde se hariexcliacute la exlractIacutem de sallgre PUl1ga el hraz() del pacienshyle sohre la mesa de lrahajo apuYltIacutellllolo el1 un pequdio cojiacuten hajo el codo con la palma dc la mano vuelta hacia arriha

3 Si el paciente se encuentra en cama eXllenda el hrazo del paciente en una posicioacuten descansada

35

~t 1lt1 ~ili(l llilS atn Udtu lar1 la ltliexcldnirlll de sall~n l la Lllltl qlle ~l

LIlUIClllra l~ll ll pliql ll1lcrl(1 (lcl codo ell el punlo tolldl es ll1iacute~

gruesa y visihle

5 Coloque la ligadura alrededor del hnvo y sujete firmemente los extreshymos

6 Con la mano iZljuierda tire del extremo de la ligadura cruzaacutendola y a continuacioacuten introduzca este extremo por dehajo de la parte principal de la ligadura De acuerdo a la Figura la ligadura se deberaacute ajustar soacutelo lo suficiente para aminorar la corriente sanguiacutenea y dilatar las venas sin apretarlo tanto que reduzca el paso de sangre por las arteshynas

36

11

7 I~diacute 11 Plllll1k qUl lhr1 iacuteLIIC 11 Illdl]( arugt lCgt Plfa ravllrL shy

ler Iiexcl dilalltlliacute11 lk Liexcl 111gt

X C()11 Li kdo iacutendiacuteLc dc b mallo iacutequlLTda palllL la Clla Cll quc intrm]ushyciruacute la aguja

lJ Dcsinfectar la ZUlla de la piel (hll1de se rcaliaruacute la punciliacutell con un pedazo dc algodoacuten emhehido en acohol yodado

10 Usando guantes tomar la jeringa con la mano derecha colocando la yema ucl dedo Iacutenuice sobre la base ue la aguja

Colocar la aguja sobrc la vcna Cln el hisel hacia arriba inlroduzca la aguja en el centro de la vena sin tiacutetuhc(ls )-15 cm aproximadamenshyte

r

1 Cin la llallO jljlll~nlltl lill lu Ii 1111 t1 01111Htlo dl bkl illga IlHI

kl1lalllllltc Ikhlj l1llal 1ltlIII~I lll 11 ~Ijllga ha-ll ~lllllpkliexclr

1111 si lO Illrltl 11 lt1I1~1~ iacutenlL-Ilillp 11IIla11l~lltl

13 Retirar la liadur1 tirand) dcl [I1l1U duhbtlu

14 Aplicar un pedazo de algodoacuten seco sobre la zona por donde se punzoacute la piel Saque la aguja cun un movimiento raacutepido

15 Pedir al paciente que presione firmemente el algodoacuten durante tres minutos con el hrazo cxtcndiuacuteo

16 Luego de extraiacuteda la sangre por puncioacuten venosa retire la aguja de la jeringa y eoluacutequela en un depoacutesito de metal (para autoclavar yelimishynar) vierta lentamente la sangre en un tubo de prueba sin anticoashygulanle y taacutepelo Deje reposar el tuho con la sangre en posicioacuten vertishycal en una gradilla por un lapso de m minutos a 2 horas centrifugar la sangre de 2000 a 2500 rpm durante 5 minutos Si no dispone de centriacutefuga la sangre se puede uacuteejar varias horas en la rerrigcradora el suero se separaraacute uacuteel coaacutegulo

17 Destapar el tuho y aspirar el suero con una pipeta de Pasteur

1 g Depositar el suero en un tubo limpio y seco asiacute estaraacute listo para reali shyzar la prueha

38

6f

eJll o Opl~llIll~lPd Illh~d Wl op

-1I1~110 Aacute l~(h~1 El llllllllnl~lpllIl1l 0PIlllOIO) pepllldlD 1p JIU lt 111 -Jll lt)IS) 11I111JllI1d ndlJ p (l [j(iq]l p O1S1llIl1 ( ldlJ lHU ()lll~Pld p

sleL 111 OJ1lls F nhul UUO]lJOljl1 lt)Jlli 1 JJl~Il1l1l PI ~llllllJ l IS (ll

CAPITULO VI

CONSERVACION y ENVIO DE MUESTRAS DE SUERO

Las llluestras lHltenidas en viales (l raquitos pucden COI1SlIvarse cn rlfriacutegerashyci6n (4() por periacuteodo de tiempo cortos (hasta I duacute) Ydeben congelarse (freezer a (JC) si se requiere cUl1snvarlas por ll1ayor tieml)() y siacute e cuenta con el equipo necesario a ~20)C

Cuando las muestra no pueden ser procesadas en clmisl1lo lahuratorio () cuando se desea ulla confirmacioacuten del diagnoacutestico eacutestas dehen ser enviadas a otro lanoshyratorio

Para efeduar el cnviacuteo de las muestras de suero se dehcn seguir los siguientes pasos

Colocar los frasquitos con las muestra de suero rotulados apropiadamente en una nolsa plaacutestica y luego acondicionarlas en un contenedor secundario (recipiente de plaacutestico) rodeado de hielo seco () cubos de hielo El recipiente secundario debe ser colocado en una caja de [ecnopor u otro material que conserve temperaturas najas Se dene adjuntar la ficha epidemiol6gica envuelta cn una nolsa plaacutestica o mica cuidando que no se moje el papeL Cerrar y sellar hermeacuteticamente la caja teacutermica Rotular la caja teacutermica con los siguientes dalos en caso de ser enviado al Laboratorio de Relerencia Nacional

URGENTE INSTITUTO NACIONAL DE SALUD

LABORATORIO DE REFERENCIA NACIONAL Ir Caacutepac Yupanqui 1400 Jesuacutes Mariacutea - Lima

Teleacutefono 471-9920 Fax 471-2529 contiene MATERIAL BIOLOGICO PERECIBLE

41

Matenai absorbente do em~laJo --~

RecipioOle exterior

Eliacutequeta para la direccioacuten --+----Bliexcliexcl1amp71lt11tV

Embalado ideal de sustancias infecciosas para el enviacuteo por correo (seguacuten OMS)

42

CAPITULO VII

BIOSEGURIDAD

I~ 1111 cOlljunto de IIlLdida prLYClltia deliniexcldiexclgt ~I prutqLT la salud y Id sluridaJ del 1ersl lniexclt durante ~u trahtjl en lo Ihlra(mios donde se lIlashynipulal1 producto hioloacutegic(ls

l-I suero sanguiacuteneo y en ocasiol1cs liacuteqllldocLfalorraquiacutedeo son los producshy(ps hiol(iexclgicos principalLs que l ProcLSltin Cl las pnlebas de diagn(iexclstIacuteLo illlllllnoluacutegil(iexcl de la lIidatidosis human

Los laboratorios donde se realizan las pruthas dehen ser de nivel de hioseguridad 2 esto implica las siguientes Illcdidas

l DEL PERSONAL DE LABORATORIO

Toda persona que manipula sangre () sus derivados dehe estar vashycunada contra el virus de la Hepatiacutetigt B Al lTIomento de extraer la sangre dehe vestir mandil amarrarse el cabello largo o usar gorro y evitar tener hmaletes y collares Usar guantes jeringas y agujas descartahlc () vaeutainers Nunca utilizar soacutelo la aguja para la extraccioacuten (k~ sangre evitar riretear fj 1I idos

11 Manipulacioacuten y eliminacioacuten de sangre y sus productos

La extraccioacuten centriluacutegaciuacuten y separacioacuten de suero deben hacershyse usando guantes descartables Las agujas usadas no dehen devolverse al Laruchoacuten de plaacutestico sino colocarlas en lejiacutea para luego cremarlas juntamente con las jeringas usadas Estas dehen tol()car~e en un recipiente metaacutelico o recirientuumlquc resista la estcrilizaciiacuteIacutel1 en autoclave antes de elimishynarlas El operador es el responsahle de desinfectar el aacuterea de trahajo anshytes y despueacutes de cada sesioacuten de trahajo con fenol al Yk cresol al 3(k u otro desinfectante dejuacutendolo~ actuar durante 30 minutos Durante este proceso lO comer El coaacutegulo y suero innecesarios dehen eliminarse a un recipiente con desinfectilllte lejiacutea por ejemplo Los tuhos de prueha pipetas y luacutemlllas de microscopio pueden decontaminarse sumergieacutendolas en mezcla sultocroacutemica () lejiacutea antes de lavarlas

2 DEL AMBIENTE DE LABORATORIO

Las paredes y pisos deben ser lisos d preferencia paredes enchashy

4-

padas con 1111 dic1 pi) dl IJlIIIlHdlll1 ( lClllCllIll que facililan la lill1pica pI] oluci(lllc dLil1iLlII1L

Los pisos lkhcn liiexclllpriexclrsc Ipdo lo diacuteas eln sllluciacuteOIlC ksiacutenkeshytallles (p i nou CllS(iexcl Lnl rv (JI ro) No l dchL harrer cn SL(l ni encerar Al sistema lk dLilk s(lo se dehL eliminar lo a~clltes hioI6iishycos II quiacutemico rl~eial1lelltc descol1taminado nCutraliacuteado () inaclivados El amhiente dehe ser ampli() con suficiente i1U1ninaciuacuten adecuashydamente vcntilachiacuten v quc los scrvicios de agua luz y gas lul1ioshylen satislactoriamentc Las mesas de trahajo dehen estar confeccionadas de material siacutelishydo con supclIicies lisas impermcables y resistentes a las sustanshycias corrosivas y de r(iexclcil IimpiCa

3 ACCIDENTES

31 Inoculacioacuten accidental cortes o abrasiones queacutemaduras pequeshyntildeas

La persona accidentada dehe lavarse las Ionas arccLadas y concurrir al servicio meacutedico maacutes cercano para el tratamiento adecuado del prohleshyma

32 Ingestioacuten de material posiblemente peligroso

La persona acudiraacute inmediatamente al servicio meacutedico maacutes cercano para el tratamiento adecuado

33 Contacto con material sospechoso de poder contener virus de la hepatitis B o virus de la inmunodeficiencia humana dengue fieshybre amarilla influenza etc

Se dehe lavar la zona afectada con agua y jaboacuten favoreciendo el sangrado de la lesioacuten si es necesario se cubre la herida con un apoacutesito Se concurriraacute al servicio meacutedico maacutes cercano para determinar la gravedad y la posible contaminacioacuten con sangre Se informaraacute del accidente a las autoridades competentes Se tomaraacute una muestra inicial de sangre del trabajador que seraacute examinada seroloacutegicamente para Hepatitis B VIH dengue y fieshyhre amarilla entre otros Se dehe examinar de la misma manera una muestra del material con que se contaminoacute el personal Si la serologiacutea de VIH del trabajador es negativa este examen debe repetirse mensualmente hasta el sexto mes La continuidad de la serologiacutea negativa indica que el trabajador no se ha contaminado

44

CAPITULO VIII

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

l CENTRO PANAMERICANO DE ()ONOSIS 197) Prueba de doble difusioacuten arco 5 para el diacuteagnuacutesiexclico de la hidatidosis hUlllana (Nota Teacutecnica Ndegn) Buenos Aires Ramos Mcjiacutea

2 COLTORTI E amp VARELA-IgtIAZ V 197X Inmullologiacutea e il1111ul1odiagnoacutestico de la hiacutedatidosiacutes humana Med Argelll la Serie (6) 135-147

) GOMES DE MORAES RUY 1)71 Parasitologiacutea lvleacutediacuteca Rio de Janeiacutero Athellcu 219 p

4 KAGAN 1 1968 A review 01 scrolpgiacutecaltcs[s lor lhe diagnosis (Jf hydalid discasc Bull WHO 39 25-37

5 LAEMMU U 1970 Cleavage 0[ estructural proteiacutens during the assemhly of the head of hacteriophage T4 Nature 227 680- 615

6 MADDISON S SLEMENDA S SCHANTZ P FRJED J WILSON M amp TSANG V 1989 A specifiacutec diagnostic antigcn 01 Echinoeoecus granulosus with an apparenl molecular weighl 01 8 kDa Am J Trop Med Hyg 40 (4) 377-313

7 NAQUIRA c BULLON E BALVIN G REYES N amp SANCHEZ E 1989 Epidemiologiacutea de la hidatidosis en el Peruacute En Anales del seminario nacional de zoonosis y enfermedades de alimentacioacuten alimentaria Ministerio de Salud 122-134

8 NOBLE E amp NOBLE G 1965 Parasitologiacutea Biologiacutea de los Paraacutesitos animales 2 ed Mexico Interamericana 258-262

9 ORGANIZACION PANAMERICANA DE LA SALUD 1986 Zoonosis y enfermedades transmisihles comunes al homhre y a los animales Washington OPS (Puhlicacioacuten Cientiacutefica 5(3)

10 PEREZ FONTANA V 1944 Tratado de la hidatidosis En Arch Inter Hidatid Vol 1 Fase 1 Imprenta Nacionales Uruguay 174 p

45

11 PLANCHAlrl S BOTm c IIC()N DI j( )Y lL IH )NlhCliH) R VIVAS L SIINCI~r L ( IVS S 1)lJ-J halualionllllll doubk dilTusioll el1yllll iacuteIllIllUIl(la~a ll1d iacutel1lllUIHlhlollill lechlliljlles 101 lile

uiagl10sis 01 human hyJalld lscaL ilJ (roIWmiddott ar(middota~ Rn Insl MeLl TroJ Sao paulo 36 (3)20)-211

12 SANCHEZ E l tJ()) Detelmi n iexcliexclel( ue antiacutegellos lekval1les da forllla larval do EchiIlOlOCClIS granlllous Padroniacao e aplicarao do lmmUlloblol no uiagnostico da hidatidose humanD Inslitulo Oswaldo Cnl-FIOCRU7 Rio de Janciw Tese Ul Meslriacutea

13 SHAMBESH M GRAING P GUSBI A ECHTUlSH E amp WEN H 19tJ5 Immunohlol evalualion nI Ihe 1(JO and 130 kDa anligllls in camel hydatid eysl fluid rOl lhe serodignosis 01 human cysl ecllinoeoeosis in Libya Trans Roy Soc Trop Med Hyg X9 276-27tJ

i4 TSANG v HANCOCK K o WILSON M PALMER D WHALEY S McDOUGAL 1 amp KENNEDY S 1986 Enzyme-linked inmunoshycectrotransfer blollecnique (weslern blol) for human T-Iympholropic virus Lype 1lIlymphadenopathy- associaled virus (HTLV-IHLAV) anLibodies Immunology series No 15 proccdual guide 1-25

5 TSANG v PERALTA M amp SIMONS R 1983 Enzyme-linked inmllnoeleclrotransfcr blot tecniques (ElTl3) ror sllldying lhe specifieitics of antigens and antibodies separaled by gel electrophoresis Mct Enzymol 92 377-391

16 VARELA-DIAZ V amp COLTORTI E 1974 Teacutecnicas para el diagnoacutestico inmunoloacutegico de la hidatidosis humana Centro Panamericano de Zoonosis OPSOMS (Monog Cient Tec 7) Ramos Mcjia Provincia de Bs As Argentina

17 VARELA-DIAZ v GUARNERA E amp COLTORTI E 1986 Ventajas y limitaciones de los meacutetodos inmunoloacutegicos y de deteccioacuten por imaacutegenes para el diagnoacutestico dc la hidatidosis Bol 01 Sanie Panam 100(4) 369shy383

18 VARELA-DIAZ v GUISANTES l RICARDES M YARZABAL L amp COLTORTI E 1975 Evaluation 01 whole and purified hydatid fluid antigens in the diagnosis 01 human hydatidosis by the immunoelectroshyphorcsis test Am J Trop Med Hyg 24 304-311

46

SOX~NV

XI OIn~IdV~

ANEXO 1

lIATEIUALES EQUIPOS REACTIVOS Y SOLUCIONES PARA DDS

l MATERIALES Y EQUIPOS

I~aacutem inas portaobjeto Tubos de ensayo de 16 x 125 mm tapa rosca Pipetas Pasteur Pipeta de mL

- Placas petri 100 x 15 mm - Tubos de vidrio en U por 5 mm de diaacutemetro

Beaker de I L Frasco eopl in

- Frasco de vidrio de boca ancha con tapa de I (H) x 80 mm aproximashydamente Laacutepiz con punta de diamante Papel filtro (Whatman Ndeg 1) Pizeta de 500 mL

- Guantes de laacutetex - Bulbo para pipetas - Sacabocados para corte de 1 6 Y 10 mm de diaacutemetro

Diagrama para corte (005) Reloj de laboratorio

- Refrigeradora Estufa Balanza Potencioacutemetro

2 REACTIVOS Y SOLUCIONES

Antiacutegeno Hidatiacutedico Suero problema Suero control positivo a antiacutegeno del Arco 5 Agar Noble (Difco)

- Alcohol Etiacutelico 95deg - MerthioIate en polvo

Cloruro de Sodio Fosfato dibaacutesieo de potasio

- Fosfato monobaacutesico de potasio - Colorante amido Schwarz (negro mnido)

49

- Aciacutedo acclicgt Iaciacuteal - Agua dcliacutelada - Lejiacutea

3 PREPARACION [)E ANTlGENO HUATlDleO

El antiacutegeno del arco i sc cllcuentra en el liacutequido hidatiacutedico

31 Obtencioacuten del liacutequido Hidatiacutedico

El liacutequido extraiacutedo aseacuteplicamellle (con jeringa) de quistes hidatiacutedicos de animales se dcja decantar en probeta para permitir la sedimentaciltiacuten de arenilla hidatiacutedica y posibles restos de membranas que hayan sido arrastrados en la aspiracioacuten Una ve sedimentados los elementos maacutes gruesos el sobrenadante se transfiere a frascos para centrifugar a 2iOO rpm durante 30 minutos El liacutequido sobrenadante ~e congela inmediashytamente

32 Diaacutelisis y Liofilizacioacuten

El liacutequido hidatiacutedico descongelado se transfiere a una bolsa de diaacutelisis y se dializa a 4degC contra un volumen 25 veces mayor de agua destilada Conviene dializar no menos de un litro de liacutequido hidatiacutedico proveniente de varios quistes El agua contra la cllal se dializa dicho liacutequido se camshybia cuatro veces a intervalos de 24 horas En consecuencia la diaacutelisis completa requiere cuatro diacuteas y la relacioacuten entre el volumen de agua empleada y el volumen de liacutequido hidatiacutedico Jializado es de 100 a 1

Despueacutes de dializado el liacutequido hiJatiacutedico presenta un aspecto opalesshycente debido a la precipitacioacuten de ciertas fracciones proteiacutenicas El conshytenido total Je la bolsa de diaacutelisis (incluido el precipitado) se trasvasa a frascos de tamantildeo adecuado para su liofilizacioacuten (ejemplo frascos tipo penicilina) Es conveniente llenar los frascos solamente hasta un cuarto de su capacidad para facilitar la congelacioacuten del liacutequido sobre las pareshydes lo que se consigue realizando la congelacioacuten mediante rotacioacuten del frasco en un bantildeo de mezcla refrigerante (hielo seco- alcohol) o manteshynieacutendolos a -80degC Despueacutes de congelado el liacutequido hidatiacutedico se proshycede a su liofilizacioacuten tomanJo las precauciones necesarias para que durante este proceso la temperatura externa no exceda de los 20degC

El liacutequido hidatiacutedico liofilizado que contiene el antiacutegeno del arco 5 deberaacute guardarse en rrascos perfectamente cerrados en un lugar seco y fresco hasta el momento de su empleo

50

J (ol1tlOl ltk (alidad (1IIntiacutegcno In)(ltuido

11 anliacuteglIHl dclliacutequidll hideacutetliacutedic() ()hlLnid(l ~eglll1 11rocLdilllilnlo qu l ha indiLad(l -e conllllla IlllLlidlllL leacutel pnllha de illlllunuecc(mluacuteresis para buslar la presencia del Arco 5 para clip -c cOlllpamll el anliacutegeno prmlucitlo y 111m de 1krCIllIlt1 IrClllL a Ull Ulm usilio

El anlIacutegcllo producido se cOllsidera sali ralorio cuando se verifica la formacioacuten de la banda del arco) y de no menos dc olras cinco handas La banda de preeipitaei6n correspondiente al arco) debe ser bien defi shynida y su morfologiacutea y ubiCiexclll ilIacuten dehe estar una imagen en espejo de la morfoloda v ubicacioacuten del arco 5 rLsullanle de la interaccioacuten del sueshyro y anliexclgen~) de reICrencia (Folll J))

FOTO 13 Perfil electroforeacutetico del antiacutegeno hidatiacutedico La flecha indica el arco 5

4 PREPARACION DE SOLlJCIONES PARA DD5

41 Solucioacuten Salina Tamponada (Sst) O1M - pH 74

Solucioacuten Fisioloacutegica (NaCl 085 grtk) 900 mL Fosfalo de pOlasio dibaacutesico (K

2HPO4) 01 M 100 mL

Ajustar pH 74 uacutem solucioacuten KHp04 0 I M

42 Preparacioacuten de Solucioacuten Antigeacutenica

Pesar 50 f1g de anliacutegeno hidaliacutedico liofilizado y disolver en I mL de SST 0 I M pH 74 Esta soJuciuacuten puede ser conservada en congelacioacuten a ~2()OC o a 4deg e hasla 10 diacuteas

L~ Pnpanuitiacuten del Agal Nohk

Ilar 12 gr de Agar Nuble ()ilcn ltl siacutellliLiriexcl y dl~olverell lOO lllL dc SST (l 1M pH 7 A aL iLjolladiexcl de un L 11l~LT ldor ( 10 Illg de Illerlh ioJale j

1

44 Solucioacuten Colorante

Alniuo Schvarz (Negro Alnido) ()~ I g Acido aceacutetico glacial 200 mL Agua destilada esp I(lOOO mL

Conservar a tcmperatura amhlente en frasco color caramelo perfectashymente cerrado

45 Solucioacuten Decolorante

Alcohol etiacutelico de 95 4000 mL Acido aceacutetico glacial 1000 mL Agua destilada esp 10000 mL

Conservar a temperatura amhiente en frasco perfectamente cerrado

52

DIAGRAMA PARA EL CORTE DEL AGAR EN LA PRlJEBA DE DOBLE DlFUSION ARCO 5

lnnl

-1 iexclshy ) - -0 (()

Figura 1 Diagrama (ampliado a escala) para la prueba de Doble Difusioacuten Arco 5

C)Uuml ()

Figura 2 Plantilla tamantildeo natural para el corte de Agar en la prueba de Doble Difusioacuten

Arco 5 en portaobjeto de 25 x 7s cm

53

lJ

CARGA CORRECTA bull CARGA INCORRECTA

Figura ~ I Jenado ltId orilido del antiacutegeno

CARGA CORRECTA CARGA INSUFICIENTE

Figura 4 Llenado dtgt los orifkios con suero control ~gt problema

54

ANEXO II

MATERIALES EQUIPOS REACTIVOS Y SOLUCIONES PARA INMUNOBLOT

l IIATERIALES y EQlJIPOS

- 2 placas de vidrio de 73 mm dc allo x 102 mm de ancho x l mm de espesor 2 espaciadore- de pluacuteslico dc O7i mm de espesor Jeringas de i mL

- Peines separadores de espcciacutemenes Nitrocelulosa con [loros dc 022 pm Esponjas dc 3 mm de espesor Papel filtro (Blolling paper)

- Placas de plaacutestico divididas en compartimentos (Mini-Incubation Trays) Un sistema vertical Tipo Mini-Prolean 11 electrophoretic cell BI0shyRAO

- Mini-Trans-Blot Electrophoretic Transfer Cells Tipo BIO-RAD USA


- Antiacutegeno de liacutequido hidatiacutedico de ovino (ATLH-Ol liofilizado - Suero problclla - Sueros control positivo - Sueros control negativo

Anti-IgG humano marcado con peroxidasa Tris o Trizma base 2-mercaptoctanol Azul de bromofenol Peso molecular estaacutendar

- Acrilamida B is-acri lamida Temed Oodecil ~ulrato de sodio (SOS)

55

Metanol Ak(lhol et iacuteI iu

- Diamillo-hLncidina (DA) Pcniacutex iuacuteo de hidroacutegello L~()(iexcl )

Fosfato dI sodio dihasico - Fosrato de sodio nmnobuacutesic()

Tween 20 - Leche descrcmada - Coomassiacutee blue R-250

Solucioacuten decolorante

3 PREPARACION BUFFER l SOLUCIONES PARA SDS-PAGE

31 Buffer TrislHCI 00511 pH 80

Tris 06 g NaCI 06 g Agua destilada qSp 1000 mL Ajustar pH 80 Ion HCI concentrado

32 Solucioacuten de tratamiento de muestra

TrisHeJ 05 M pH 680 95 mL 2 mereapto-etanol 005 g SDS 002 g

33 Solucioacuten colorante marcador de corrida

Azul de bromolcnol 005 g Glicerol 800 mL TrisHCI OS M pH 80 100 mL Agua deionizada 100 mL

Diluir la muestra 12 en el tampoacuten de tratamiento hervir por 10 minushytos Adicionar solucioacuten marcador de corrida 3 JL por cada 100 JL de la muestra

56

Solllduacuten stock (k polimTilamicla

Acri lamida 146 (f

N N bis-acrilallliuacutea 04 Agua dcionuacuteada qs(l 500 rnL

Pesar en luho de plaacutestico disolverlm cn agua calienle esperar hasta que se enrriacutee y completar el volull1ln COllservar a 4degC

35 Butrer de gel de empaquetamiento 05 M pH 68

Tris 05 M 60 g Agua deionizauacutea 1000 mL

36 Buffer de gel de separacioacuten o de corrida ]5 M I)H 8

Tris 15 M 1815 g Agua deionizada 10000 rnL

37 Solucioacuten de persulfato de amonio (APS) a 10

Persulfato de amonio 100 g Agua deionizada 1000 mL Aliacutecuotar y conservar a -20degC

38 Solucioacuten de Dodecil sulfato de sodio (SDS) a 10

SDS (950c) 100 g Agua deionizada 1000 mL Conservara 40degC o a temperatura ambiente

39 Buffer de corrida (superiorinferior) Tris 005M

Tris oacute Trizma base 300 g Glicina 0192 M 144 g SDS a 10or) 100 mL Agua deionizada 10000 mL

57

amp

310 F(iacuterlllllla de Ulllllmiddotlllralmiddotiulllk gll dc llllpeacutelqUlLllllillll() y de slpareacutelliuacuten () de corrida al I)I ) 15 1r

----shy

Solucioacuten 1----shy

E11lflaquetam lenlo

Cid

Seraraciuacuten

~Wy 12~ -5( Soluci6n Stock floliacuteacrilamida In m e mL

Buffer de gel inferior () de separacioacuten-_~_~___ shy

Buffer de gel superior o de empaquetamiento

-_shy

25 mL -----

45 mL

- shy -

SDS 10 IDO ~--

JL 120 JL i 120 JL

Ag desionizada 61 mL 36 mL 15 mL Persulfato de amonio APS al 10 50 JI 60 ~IL 60 JL

Temed 5 JL 4 JL 4 JL

4 PREPARACION DE BUFIltER y SOLUCIONES PARA LA TRANSIltERENCIA

41 Buffer de transferencia Tris 05 M

Tris o trizma base 102g g Metanol middot4000 mL Agua deionizada 20000 mL Ajustar pH 918 con Hel concentrado

58

2 BUfftT Ioslato salino UtlI11pll 72 (BS i

Preparar -iexcl SOhllionl~ COllllllt-lI

ltTA NaHPO+HO (fosfato mOl1ohaacutesil() dc sodio) 137 NaCI 176 Agua dcionizada qsp 100000 mL

B NaPO 7H~O 268 g NaCI 876 g Agua dcionizada 100000 mL

Mezclar las soluciones A y B (aproximadamente 5 partes de A para 6 partes de B) Ajustar el pH 72

5 PREPARACION DE SOLUCIONES PARA REACCION INMUNOENZIMATICA

51 Conjugado anti-IgG humano diluido al 1000 en PBS-TL

52 Sueros controles negativo positivo y suero problema diluidos a 1100 en PBS-TL

53 PBS-T

PBS 00111 pH 72 1000 mL Tween 30 mL

54 PBS-TL

PBS 1000 mL Leche descremada 50 g

55 Solucioacuten reveladora

33 diaminobenzidina tctraeloridrato 50 mg PBS OOIM pH 72 100 mL HP2 (30 voluacutemenes) 100 fJL

59

Lo

ANEXO III

MATERIALES PARA OBTENCION DE MUESTRA DE SANGRE VENOSA

ScgLIacuteI1 d procedimienlo que elllplcl Tuhos vaculainer csleacuteri les Jeringa dcsearlahlc Je 5 mI gto

Agujas dcscarlahles 20 x I( Ligaduras de 25 mm de diaacutemclro Algoduacuten Akohol yodado IkpuacutesilO de melal (Iarros) para desearlar las agujas Frasco de vidri() de hoca ancha (part Lolncar jeringas en solucioacuten dc lejiacutea) Lejiacutea al 3-Yiacutei Gradillas Mascarillas (opcional) Guanles Cuaderno de regislro

61

1

CAPITULO X

GLOSARIO

ntiacutegcllo Sustancia extraflltl al organil1lp que imluLT la respuesta oel ltiexcliteshyma 111 IllLl ne

Anticuerpo Proteiacutenas (illlllUlloglohu Ii nas) producidas por e I organismo en respuesta al ingreso de una sustancia extrantildea (antiacutegeno)

llilucioacuten Mezcla de una sustancia con una () lllUacuteS parlLs de otra (diluyente) que no altere las caracteriacutesticas de la primera y que redllca su COllCcntrashyciuacuten

Enfermedad Proces(l moacuterhido con siacutentomas delinid(l~ que afecta a todo el organismo o parte del mismo

Enzima Proteiacutena que actuacutea como catalizador orgaacutenic() sohre un suhstrato cspeciacutefico

Embrioacuten hexacanto Emhrioacuten de tenia eDn -cis ganchos (oncoacutesfera)

Estroacutebilo Toda la cadena de progloacutetides de la tenia

Escoacutelex Cabeza de una tenia puede adherirse a la pared intestinal mediante ventosas o ganchos

Helminto Gusano que puede ser ncmaacutetodo ceacuteslodo o Iremaacutetodo

Hospedero Organismo en el cual vive un paruacuteslto

Hospedero intermediario Ser que se requiere en el ciclo vital en el cual debe veririearse el desarrollo larval esencial ante- de quc un paraacutesito infecte a su hospedero definitivo () a hospedcro~ intermediarios adicionales

Infeccioacuten Penetracioacuten y multiplicacioacuten de un microorganismo en un hosshypedero independientemente de la presentacioacuten de siacutentomas yo patologiacutea

Inmunoglobulinas Proteiacutena con actividad de mticucrpo especiacutefica resshyponsahle de la inmunidad humoraL hay cinco clases distintas IgG IgM IgA IgEIgD

(l3

t

PIogloacutetide SCglllClltl dc Id klliacutea ljUL C()lltiacuteLI1C Ins ~istclllas rcprodlll(peshymasculino y rClllcnillu plIcdLllSCr illmaduros 1ll1llullls y griacutevid()s

Quiste hidatiacutedico Estado larval de la tcnia dcl geacutellcru r~chin()c()cus c()nshysiste en una vesiacutecula grandc que posec 1) una memhrana germinal intcrna desde la cual los cscolises y los quiste hijos se desarrollan avanzan pma proyectarse en la vcsiacutecula una membrana circular y 3) una membrana adventicia

Quiste multilocular Quistes que Lontienen muchas vesiacuteculas

Quiste unilocular Quiste que contiene soacutelo una vesiacutecula

Tiacutetulo seroloacutegico La cantidad de suero necesaria para produumlcir una reacshycioacuten bioloacutegica con otra sustancia medida generalmente como la maacutexima dilucioacuten del suero testigo que auacuten mantiene dicha reactividad

Zoonosis Enfermedad de animales transmisible a los seres humanos

Esta publicacioacutell se teacutermino de imprimir en Diciembre de 1997 en los

Talleres Graacuteficos de Art Lautrec SRLlda Av Paseo de la Repuacuteblica 731 Lima D

TclFax 423-761()

64

iD Ministerio de Salud INSTITUTO NACIO~AL HE SAUJH Ir Cuumlpac Yupanqui 140() Jesuacutes Mariacutea Tclf471-3254 I Fax 471-7443

Liacute meacutel Pcruacute 1997


HUMANA









Viceministro















Heredia






INDICE
















5

PRESENTACION





EL COJlITE EDITOR

7

SECTOR SALUD




Lima Z r( de 199 i

CONSIDERANDO





RESUELVE






9

CAPITULO I

INTRODUCCION








11






12

rosleio ganchos

01 1 ventosa 1 gtri

iexclSCOLEX

CUELLO

masa germinativa


PROGLOTIDE MADURO

cirro 97~

canal deferente

1ovario

canal viteUno

glandula vitelina

000 ft

uteroIr d


~

iexcl-gt ~ (-

~



13








14



Germinativa






15





~ 1

~ 1

3





modificadO)

16






17

CAPITULO II





19

CAPITULO III



31 PROCEDIMIENTO



t--

~ ~

~ O ~

8


21








22







previamcnte






24







25




26

CAPITULO IV


FlJNDAMENTO


41 PROCEDIMIENTO




27


mento de su liSO













2R





19


(A)

(B)


30











31








32

















bull

I




CAPITULO V









35



gruesa y visihle



36

11







r










38

6f




CAPITULO VI









41


RecipioOle exterior



42

CAPITULO VII

BIOSEGURIDAD










4-



3 ACCIDENTES







44

CAPITULO VIII












45










46

SOX~NV

XI OIn~IdV~

ANEXO 1















49










50








2HPO4) 01 M 100 mL






1







52


lnnl

-1 iexclshy ) - -0 (()


C)Uuml ()



53

lJ





54

ANEXO II











55














56


Acri lamida 146 (f













57

amp


----shy


E11lflaquetam lenlo

Cid

Seraraciuacuten




-_shy

25 mL -----

45 mL

- shy -

SDS 10 IDO ~--

JL 120 JL i 120 JL






58









53 PBS-T


54 PBS-TL




59

Lo

ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









TclFax 423-761()

64


HUMANA









Viceministro















Heredia






INDICE
















5

PRESENTACION





EL COJlITE EDITOR

7

SECTOR SALUD




Lima Z r( de 199 i

CONSIDERANDO





RESUELVE






9

CAPITULO I

INTRODUCCION








11






12

rosleio ganchos

01 1 ventosa 1 gtri

iexclSCOLEX

CUELLO

masa germinativa


PROGLOTIDE MADURO

cirro 97~

canal deferente

1ovario

canal viteUno

glandula vitelina

000 ft

uteroIr d


~

iexcl-gt ~ (-

~



13








14



Germinativa






15





~ 1

~ 1

3





modificadO)

16






17

CAPITULO II





19

CAPITULO III



31 PROCEDIMIENTO



t--

~ ~

~ O ~

8


21








22







previamcnte






24







25




26

CAPITULO IV


FlJNDAMENTO


41 PROCEDIMIENTO




27


mento de su liSO













2R





19


(A)

(B)


30











31








32

















bull

I




CAPITULO V









35



gruesa y visihle



36

11







r










38

6f




CAPITULO VI









41


RecipioOle exterior



42

CAPITULO VII

BIOSEGURIDAD










4-



3 ACCIDENTES







44

CAPITULO VIII












45










46

SOX~NV

XI OIn~IdV~

ANEXO 1















49










50








2HPO4) 01 M 100 mL






1







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lnnl

-1 iexclshy ) - -0 (()


C)Uuml ()



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lJ





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ANEXO II











55














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Acri lamida 146 (f













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amp


----shy


E11lflaquetam lenlo

Cid

Seraraciuacuten




-_shy

25 mL -----

45 mL

- shy -

SDS 10 IDO ~--

JL 120 JL i 120 JL






58









53 PBS-T


54 PBS-TL




59

Lo

ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









TclFax 423-761()

64













Heredia






INDICE
















5

PRESENTACION





EL COJlITE EDITOR

7

SECTOR SALUD




Lima Z r( de 199 i

CONSIDERANDO





RESUELVE






9

CAPITULO I

INTRODUCCION








11






12

rosleio ganchos

01 1 ventosa 1 gtri

iexclSCOLEX

CUELLO

masa germinativa


PROGLOTIDE MADURO

cirro 97~

canal deferente

1ovario

canal viteUno

glandula vitelina

000 ft

uteroIr d


~

iexcl-gt ~ (-

~



13








14



Germinativa






15





~ 1

~ 1

3





modificadO)

16






17

CAPITULO II





19

CAPITULO III



31 PROCEDIMIENTO



t--

~ ~

~ O ~

8


21








22







previamcnte






24







25




26

CAPITULO IV


FlJNDAMENTO


41 PROCEDIMIENTO




27


mento de su liSO













2R





19


(A)

(B)


30











31








32

















bull

I




CAPITULO V









35



gruesa y visihle



36

11







r










38

6f




CAPITULO VI









41


RecipioOle exterior



42

CAPITULO VII

BIOSEGURIDAD










4-



3 ACCIDENTES







44

CAPITULO VIII












45










46

SOX~NV

XI OIn~IdV~

ANEXO 1















49










50








2HPO4) 01 M 100 mL






1







52


lnnl

-1 iexclshy ) - -0 (()


C)Uuml ()



53

lJ





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ANEXO II











55














56


Acri lamida 146 (f













57

amp


----shy


E11lflaquetam lenlo

Cid

Seraraciuacuten




-_shy

25 mL -----

45 mL

- shy -

SDS 10 IDO ~--

JL 120 JL i 120 JL






58









53 PBS-T


54 PBS-TL




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Lo

ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









TclFax 423-761()

64

INDICE
















5

PRESENTACION





EL COJlITE EDITOR

7

SECTOR SALUD




Lima Z r( de 199 i

CONSIDERANDO





RESUELVE






9

CAPITULO I

INTRODUCCION








11






12

rosleio ganchos

01 1 ventosa 1 gtri

iexclSCOLEX

CUELLO

masa germinativa


PROGLOTIDE MADURO

cirro 97~

canal deferente

1ovario

canal viteUno

glandula vitelina

000 ft

uteroIr d


~

iexcl-gt ~ (-

~



13








14



Germinativa






15





~ 1

~ 1

3





modificadO)

16






17

CAPITULO II





19

CAPITULO III



31 PROCEDIMIENTO



t--

~ ~

~ O ~

8


21








22







previamcnte






24







25




26

CAPITULO IV


FlJNDAMENTO


41 PROCEDIMIENTO




27


mento de su liSO













2R





19


(A)

(B)


30











31








32

















bull

I




CAPITULO V









35



gruesa y visihle



36

11







r










38

6f




CAPITULO VI









41


RecipioOle exterior



42

CAPITULO VII

BIOSEGURIDAD










4-



3 ACCIDENTES







44

CAPITULO VIII












45










46

SOX~NV

XI OIn~IdV~

ANEXO 1















49










50








2HPO4) 01 M 100 mL






1







52


lnnl

-1 iexclshy ) - -0 (()


C)Uuml ()



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lJ





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ANEXO II











55














56


Acri lamida 146 (f













57

amp


----shy


E11lflaquetam lenlo

Cid

Seraraciuacuten




-_shy

25 mL -----

45 mL

- shy -

SDS 10 IDO ~--

JL 120 JL i 120 JL






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53 PBS-T


54 PBS-TL




59

Lo

ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









TclFax 423-761()

64

PRESENTACION





EL COJlITE EDITOR

7

SECTOR SALUD




Lima Z r( de 199 i

CONSIDERANDO





RESUELVE






9

CAPITULO I

INTRODUCCION








11






12

rosleio ganchos

01 1 ventosa 1 gtri

iexclSCOLEX

CUELLO

masa germinativa


PROGLOTIDE MADURO

cirro 97~

canal deferente

1ovario

canal viteUno

glandula vitelina

000 ft

uteroIr d


~

iexcl-gt ~ (-

~



13








14



Germinativa






15





~ 1

~ 1

3





modificadO)

16






17

CAPITULO II





19

CAPITULO III



31 PROCEDIMIENTO



t--

~ ~

~ O ~

8


21








22







previamcnte






24







25




26

CAPITULO IV


FlJNDAMENTO


41 PROCEDIMIENTO




27


mento de su liSO













2R





19


(A)

(B)


30











31








32

















bull

I




CAPITULO V









35



gruesa y visihle



36

11







r










38

6f




CAPITULO VI









41


RecipioOle exterior



42

CAPITULO VII

BIOSEGURIDAD










4-



3 ACCIDENTES







44

CAPITULO VIII












45










46

SOX~NV

XI OIn~IdV~

ANEXO 1















49










50








2HPO4) 01 M 100 mL






1







52


lnnl

-1 iexclshy ) - -0 (()


C)Uuml ()



53

lJ





54

ANEXO II











55














56


Acri lamida 146 (f













57

amp


----shy


E11lflaquetam lenlo

Cid

Seraraciuacuten




-_shy

25 mL -----

45 mL

- shy -

SDS 10 IDO ~--

JL 120 JL i 120 JL






58









53 PBS-T


54 PBS-TL




59

Lo

ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









TclFax 423-761()

64

SECTOR SALUD




Lima Z r( de 199 i

CONSIDERANDO





RESUELVE






9

CAPITULO I

INTRODUCCION








11






12

rosleio ganchos

01 1 ventosa 1 gtri

iexclSCOLEX

CUELLO

masa germinativa


PROGLOTIDE MADURO

cirro 97~

canal deferente

1ovario

canal viteUno

glandula vitelina

000 ft

uteroIr d


~

iexcl-gt ~ (-

~



13








14



Germinativa






15





~ 1

~ 1

3





modificadO)

16






17

CAPITULO II





19

CAPITULO III



31 PROCEDIMIENTO



t--

~ ~

~ O ~

8


21








22







previamcnte






24







25




26

CAPITULO IV


FlJNDAMENTO


41 PROCEDIMIENTO




27


mento de su liSO













2R





19


(A)

(B)


30











31








32

















bull

I




CAPITULO V









35



gruesa y visihle



36

11







r










38

6f




CAPITULO VI









41


RecipioOle exterior



42

CAPITULO VII

BIOSEGURIDAD










4-



3 ACCIDENTES







44

CAPITULO VIII












45










46

SOX~NV

XI OIn~IdV~

ANEXO 1















49










50








2HPO4) 01 M 100 mL






1







52


lnnl

-1 iexclshy ) - -0 (()


C)Uuml ()



53

lJ





54

ANEXO II











55














56


Acri lamida 146 (f













57

amp


----shy


E11lflaquetam lenlo

Cid

Seraraciuacuten




-_shy

25 mL -----

45 mL

- shy -

SDS 10 IDO ~--

JL 120 JL i 120 JL






58









53 PBS-T


54 PBS-TL




59

Lo

ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









TclFax 423-761()

64

CAPITULO I

INTRODUCCION








11






12

rosleio ganchos

01 1 ventosa 1 gtri

iexclSCOLEX

CUELLO

masa germinativa


PROGLOTIDE MADURO

cirro 97~

canal deferente

1ovario

canal viteUno

glandula vitelina

000 ft

uteroIr d


~

iexcl-gt ~ (-

~



13








14



Germinativa






15





~ 1

~ 1

3





modificadO)

16






17

CAPITULO II





19

CAPITULO III



31 PROCEDIMIENTO



t--

~ ~

~ O ~

8


21








22







previamcnte






24







25




26

CAPITULO IV


FlJNDAMENTO


41 PROCEDIMIENTO




27


mento de su liSO













2R





19


(A)

(B)


30











31








32

















bull

I




CAPITULO V









35



gruesa y visihle



36

11







r










38

6f




CAPITULO VI









41


RecipioOle exterior



42

CAPITULO VII

BIOSEGURIDAD










4-



3 ACCIDENTES







44

CAPITULO VIII












45










46

SOX~NV

XI OIn~IdV~

ANEXO 1















49










50








2HPO4) 01 M 100 mL






1







52


lnnl

-1 iexclshy ) - -0 (()


C)Uuml ()



53

lJ





54

ANEXO II











55














56


Acri lamida 146 (f













57

amp


----shy


E11lflaquetam lenlo

Cid

Seraraciuacuten




-_shy

25 mL -----

45 mL

- shy -

SDS 10 IDO ~--

JL 120 JL i 120 JL






58









53 PBS-T


54 PBS-TL




59

Lo

ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









TclFax 423-761()

64






12

rosleio ganchos

01 1 ventosa 1 gtri

iexclSCOLEX

CUELLO

masa germinativa


PROGLOTIDE MADURO

cirro 97~

canal deferente

1ovario

canal viteUno

glandula vitelina

000 ft

uteroIr d


~

iexcl-gt ~ (-

~



13








14



Germinativa






15





~ 1

~ 1

3





modificadO)

16






17

CAPITULO II





19

CAPITULO III



31 PROCEDIMIENTO



t--

~ ~

~ O ~

8


21








22







previamcnte






24







25




26

CAPITULO IV


FlJNDAMENTO


41 PROCEDIMIENTO




27


mento de su liSO













2R





19


(A)

(B)


30











31








32

















bull

I




CAPITULO V









35



gruesa y visihle



36

11







r










38

6f




CAPITULO VI









41


RecipioOle exterior



42

CAPITULO VII

BIOSEGURIDAD










4-



3 ACCIDENTES







44

CAPITULO VIII












45










46

SOX~NV

XI OIn~IdV~

ANEXO 1















49










50








2HPO4) 01 M 100 mL






1







52


lnnl

-1 iexclshy ) - -0 (()


C)Uuml ()



53

lJ





54

ANEXO II











55














56


Acri lamida 146 (f













57

amp


----shy


E11lflaquetam lenlo

Cid

Seraraciuacuten




-_shy

25 mL -----

45 mL

- shy -

SDS 10 IDO ~--

JL 120 JL i 120 JL






58









53 PBS-T


54 PBS-TL




59

Lo

ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









TclFax 423-761()

64

rosleio ganchos

01 1 ventosa 1 gtri

iexclSCOLEX

CUELLO

masa germinativa


PROGLOTIDE MADURO

cirro 97~

canal deferente

1ovario

canal viteUno

glandula vitelina

000 ft

uteroIr d


~

iexcl-gt ~ (-

~



13








14



Germinativa






15





~ 1

~ 1

3





modificadO)

16






17

CAPITULO II





19

CAPITULO III



31 PROCEDIMIENTO



t--

~ ~

~ O ~

8


21








22







previamcnte






24







25




26

CAPITULO IV


FlJNDAMENTO


41 PROCEDIMIENTO




27


mento de su liSO













2R





19


(A)

(B)


30











31








32

















bull

I




CAPITULO V









35



gruesa y visihle



36

11







r










38

6f




CAPITULO VI









41


RecipioOle exterior



42

CAPITULO VII

BIOSEGURIDAD










4-



3 ACCIDENTES







44

CAPITULO VIII












45










46

SOX~NV

XI OIn~IdV~

ANEXO 1















49










50








2HPO4) 01 M 100 mL






1







52


lnnl

-1 iexclshy ) - -0 (()


C)Uuml ()



53

lJ





54

ANEXO II











55














56


Acri lamida 146 (f













57

amp


----shy


E11lflaquetam lenlo

Cid

Seraraciuacuten




-_shy

25 mL -----

45 mL

- shy -

SDS 10 IDO ~--

JL 120 JL i 120 JL






58









53 PBS-T


54 PBS-TL




59

Lo

ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









TclFax 423-761()

64








14



Germinativa






15





~ 1

~ 1

3





modificadO)

16






17

CAPITULO II





19

CAPITULO III



31 PROCEDIMIENTO



t--

~ ~

~ O ~

8


21








22







previamcnte






24







25




26

CAPITULO IV


FlJNDAMENTO


41 PROCEDIMIENTO




27


mento de su liSO













2R





19


(A)

(B)


30











31








32

















bull

I




CAPITULO V









35



gruesa y visihle



36

11







r










38

6f




CAPITULO VI









41


RecipioOle exterior



42

CAPITULO VII

BIOSEGURIDAD










4-



3 ACCIDENTES







44

CAPITULO VIII












45










46

SOX~NV

XI OIn~IdV~

ANEXO 1















49










50








2HPO4) 01 M 100 mL






1







52


lnnl

-1 iexclshy ) - -0 (()


C)Uuml ()



53

lJ





54

ANEXO II











55














56


Acri lamida 146 (f













57

amp


----shy


E11lflaquetam lenlo

Cid

Seraraciuacuten




-_shy

25 mL -----

45 mL

- shy -

SDS 10 IDO ~--

JL 120 JL i 120 JL






58









53 PBS-T


54 PBS-TL




59

Lo

ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









TclFax 423-761()

64



Germinativa






15





~ 1

~ 1

3





modificadO)

16






17

CAPITULO II





19

CAPITULO III



31 PROCEDIMIENTO



t--

~ ~

~ O ~

8


21








22







previamcnte






24







25




26

CAPITULO IV


FlJNDAMENTO


41 PROCEDIMIENTO




27


mento de su liSO













2R





19


(A)

(B)


30











31








32

















bull

I




CAPITULO V









35



gruesa y visihle



36

11







r










38

6f




CAPITULO VI









41


RecipioOle exterior



42

CAPITULO VII

BIOSEGURIDAD










4-



3 ACCIDENTES







44

CAPITULO VIII












45










46

SOX~NV

XI OIn~IdV~

ANEXO 1















49










50








2HPO4) 01 M 100 mL






1







52


lnnl

-1 iexclshy ) - -0 (()


C)Uuml ()



53

lJ





54

ANEXO II











55














56


Acri lamida 146 (f













57

amp


----shy


E11lflaquetam lenlo

Cid

Seraraciuacuten




-_shy

25 mL -----

45 mL

- shy -

SDS 10 IDO ~--

JL 120 JL i 120 JL






58









53 PBS-T


54 PBS-TL




59

Lo

ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









TclFax 423-761()

64





~ 1

~ 1

3





modificadO)

16






17

CAPITULO II





19

CAPITULO III



31 PROCEDIMIENTO



t--

~ ~

~ O ~

8


21








22







previamcnte






24







25




26

CAPITULO IV


FlJNDAMENTO


41 PROCEDIMIENTO




27


mento de su liSO













2R





19


(A)

(B)


30











31








32

















bull

I




CAPITULO V









35



gruesa y visihle



36

11







r










38

6f




CAPITULO VI









41


RecipioOle exterior



42

CAPITULO VII

BIOSEGURIDAD










4-



3 ACCIDENTES







44

CAPITULO VIII












45










46

SOX~NV

XI OIn~IdV~

ANEXO 1















49










50








2HPO4) 01 M 100 mL






1







52


lnnl

-1 iexclshy ) - -0 (()


C)Uuml ()



53

lJ





54

ANEXO II











55














56


Acri lamida 146 (f













57

amp


----shy


E11lflaquetam lenlo

Cid

Seraraciuacuten




-_shy

25 mL -----

45 mL

- shy -

SDS 10 IDO ~--

JL 120 JL i 120 JL






58









53 PBS-T


54 PBS-TL




59

Lo

ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









TclFax 423-761()

64






17

CAPITULO II





19

CAPITULO III



31 PROCEDIMIENTO



t--

~ ~

~ O ~

8


21








22







previamcnte






24







25




26

CAPITULO IV


FlJNDAMENTO


41 PROCEDIMIENTO




27


mento de su liSO













2R





19


(A)

(B)


30











31








32

















bull

I




CAPITULO V









35



gruesa y visihle



36

11







r










38

6f




CAPITULO VI









41


RecipioOle exterior



42

CAPITULO VII

BIOSEGURIDAD










4-



3 ACCIDENTES







44

CAPITULO VIII












45










46

SOX~NV

XI OIn~IdV~

ANEXO 1















49










50








2HPO4) 01 M 100 mL






1







52


lnnl

-1 iexclshy ) - -0 (()


C)Uuml ()



53

lJ





54

ANEXO II











55














56


Acri lamida 146 (f













57

amp


----shy


E11lflaquetam lenlo

Cid

Seraraciuacuten




-_shy

25 mL -----

45 mL

- shy -

SDS 10 IDO ~--

JL 120 JL i 120 JL






58









53 PBS-T


54 PBS-TL




59

Lo

ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









TclFax 423-761()

64

CAPITULO II





19

CAPITULO III



31 PROCEDIMIENTO



t--

~ ~

~ O ~

8


21








22







previamcnte






24







25




26

CAPITULO IV


FlJNDAMENTO


41 PROCEDIMIENTO




27


mento de su liSO













2R





19


(A)

(B)


30











31








32

















bull

I




CAPITULO V









35



gruesa y visihle



36

11







r










38

6f




CAPITULO VI









41


RecipioOle exterior



42

CAPITULO VII

BIOSEGURIDAD










4-



3 ACCIDENTES







44

CAPITULO VIII












45










46

SOX~NV

XI OIn~IdV~

ANEXO 1















49










50








2HPO4) 01 M 100 mL






1







52


lnnl

-1 iexclshy ) - -0 (()


C)Uuml ()



53

lJ





54

ANEXO II











55














56


Acri lamida 146 (f













57

amp


----shy


E11lflaquetam lenlo

Cid

Seraraciuacuten




-_shy

25 mL -----

45 mL

- shy -

SDS 10 IDO ~--

JL 120 JL i 120 JL






58









53 PBS-T


54 PBS-TL




59

Lo

ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









TclFax 423-761()

64

CAPITULO III



31 PROCEDIMIENTO



t--

~ ~

~ O ~

8


21








22







previamcnte






24







25




26

CAPITULO IV


FlJNDAMENTO


41 PROCEDIMIENTO




27


mento de su liSO













2R





19


(A)

(B)


30











31








32

















bull

I




CAPITULO V









35



gruesa y visihle



36

11







r










38

6f




CAPITULO VI









41


RecipioOle exterior



42

CAPITULO VII

BIOSEGURIDAD










4-



3 ACCIDENTES







44

CAPITULO VIII












45










46

SOX~NV

XI OIn~IdV~

ANEXO 1















49










50








2HPO4) 01 M 100 mL






1







52


lnnl

-1 iexclshy ) - -0 (()


C)Uuml ()



53

lJ





54

ANEXO II











55














56


Acri lamida 146 (f













57

amp


----shy


E11lflaquetam lenlo

Cid

Seraraciuacuten




-_shy

25 mL -----

45 mL

- shy -

SDS 10 IDO ~--

JL 120 JL i 120 JL






58









53 PBS-T


54 PBS-TL




59

Lo

ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









TclFax 423-761()

64








22







previamcnte






24







25




26

CAPITULO IV


FlJNDAMENTO


41 PROCEDIMIENTO




27


mento de su liSO













2R





19


(A)

(B)


30











31








32

















bull

I




CAPITULO V









35



gruesa y visihle



36

11







r










38

6f




CAPITULO VI









41


RecipioOle exterior



42

CAPITULO VII

BIOSEGURIDAD










4-



3 ACCIDENTES







44

CAPITULO VIII












45










46

SOX~NV

XI OIn~IdV~

ANEXO 1















49










50








2HPO4) 01 M 100 mL






1







52


lnnl

-1 iexclshy ) - -0 (()


C)Uuml ()



53

lJ





54

ANEXO II











55














56


Acri lamida 146 (f













57

amp


----shy


E11lflaquetam lenlo

Cid

Seraraciuacuten




-_shy

25 mL -----

45 mL

- shy -

SDS 10 IDO ~--

JL 120 JL i 120 JL






58









53 PBS-T


54 PBS-TL




59

Lo

ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









TclFax 423-761()

64







previamcnte






24







25




26

CAPITULO IV


FlJNDAMENTO


41 PROCEDIMIENTO




27


mento de su liSO













2R





19


(A)

(B)


30











31








32

















bull

I




CAPITULO V









35



gruesa y visihle



36

11







r










38

6f




CAPITULO VI









41


RecipioOle exterior



42

CAPITULO VII

BIOSEGURIDAD










4-



3 ACCIDENTES







44

CAPITULO VIII












45










46

SOX~NV

XI OIn~IdV~

ANEXO 1















49










50








2HPO4) 01 M 100 mL






1







52


lnnl

-1 iexclshy ) - -0 (()


C)Uuml ()



53

lJ





54

ANEXO II











55














56


Acri lamida 146 (f













57

amp


----shy


E11lflaquetam lenlo

Cid

Seraraciuacuten




-_shy

25 mL -----

45 mL

- shy -

SDS 10 IDO ~--

JL 120 JL i 120 JL






58









53 PBS-T


54 PBS-TL




59

Lo

ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









TclFax 423-761()

64







25




26

CAPITULO IV


FlJNDAMENTO


41 PROCEDIMIENTO




27


mento de su liSO













2R





19


(A)

(B)


30











31








32

















bull

I




CAPITULO V









35



gruesa y visihle



36

11







r










38

6f




CAPITULO VI









41


RecipioOle exterior



42

CAPITULO VII

BIOSEGURIDAD










4-



3 ACCIDENTES







44

CAPITULO VIII












45










46

SOX~NV

XI OIn~IdV~

ANEXO 1















49










50








2HPO4) 01 M 100 mL






1







52


lnnl

-1 iexclshy ) - -0 (()


C)Uuml ()



53

lJ





54

ANEXO II











55














56


Acri lamida 146 (f













57

amp


----shy


E11lflaquetam lenlo

Cid

Seraraciuacuten




-_shy

25 mL -----

45 mL

- shy -

SDS 10 IDO ~--

JL 120 JL i 120 JL






58









53 PBS-T


54 PBS-TL




59

Lo

ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









TclFax 423-761()

64




26

CAPITULO IV


FlJNDAMENTO


41 PROCEDIMIENTO




27


mento de su liSO













2R





19


(A)

(B)


30











31








32

















bull

I




CAPITULO V









35



gruesa y visihle



36

11







r










38

6f




CAPITULO VI









41


RecipioOle exterior



42

CAPITULO VII

BIOSEGURIDAD










4-



3 ACCIDENTES







44

CAPITULO VIII












45










46

SOX~NV

XI OIn~IdV~

ANEXO 1















49










50








2HPO4) 01 M 100 mL






1







52


lnnl

-1 iexclshy ) - -0 (()


C)Uuml ()



53

lJ





54

ANEXO II











55














56


Acri lamida 146 (f













57

amp


----shy


E11lflaquetam lenlo

Cid

Seraraciuacuten




-_shy

25 mL -----

45 mL

- shy -

SDS 10 IDO ~--

JL 120 JL i 120 JL






58









53 PBS-T


54 PBS-TL




59

Lo

ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









TclFax 423-761()

64

CAPITULO IV


FlJNDAMENTO


41 PROCEDIMIENTO




27


mento de su liSO













2R





19


(A)

(B)


30











31








32

















bull

I




CAPITULO V









35



gruesa y visihle



36

11







r










38

6f




CAPITULO VI









41


RecipioOle exterior



42

CAPITULO VII

BIOSEGURIDAD










4-



3 ACCIDENTES







44

CAPITULO VIII












45










46

SOX~NV

XI OIn~IdV~

ANEXO 1















49










50








2HPO4) 01 M 100 mL






1







52


lnnl

-1 iexclshy ) - -0 (()


C)Uuml ()



53

lJ





54

ANEXO II











55














56


Acri lamida 146 (f













57

amp


----shy


E11lflaquetam lenlo

Cid

Seraraciuacuten




-_shy

25 mL -----

45 mL

- shy -

SDS 10 IDO ~--

JL 120 JL i 120 JL






58









53 PBS-T


54 PBS-TL




59

Lo

ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









TclFax 423-761()

64


mento de su liSO













2R





19


(A)

(B)


30











31








32

















bull

I




CAPITULO V









35



gruesa y visihle



36

11







r










38

6f




CAPITULO VI









41


RecipioOle exterior



42

CAPITULO VII

BIOSEGURIDAD










4-



3 ACCIDENTES







44

CAPITULO VIII












45










46

SOX~NV

XI OIn~IdV~

ANEXO 1















49










50








2HPO4) 01 M 100 mL






1







52


lnnl

-1 iexclshy ) - -0 (()


C)Uuml ()



53

lJ





54

ANEXO II











55














56


Acri lamida 146 (f













57

amp


----shy


E11lflaquetam lenlo

Cid

Seraraciuacuten




-_shy

25 mL -----

45 mL

- shy -

SDS 10 IDO ~--

JL 120 JL i 120 JL






58









53 PBS-T


54 PBS-TL




59

Lo

ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









TclFax 423-761()

64





19


(A)

(B)


30











31








32

















bull

I




CAPITULO V









35



gruesa y visihle



36

11







r










38

6f




CAPITULO VI









41


RecipioOle exterior



42

CAPITULO VII

BIOSEGURIDAD










4-



3 ACCIDENTES







44

CAPITULO VIII












45










46

SOX~NV

XI OIn~IdV~

ANEXO 1















49










50








2HPO4) 01 M 100 mL






1







52


lnnl

-1 iexclshy ) - -0 (()


C)Uuml ()



53

lJ





54

ANEXO II











55














56


Acri lamida 146 (f













57

amp


----shy


E11lflaquetam lenlo

Cid

Seraraciuacuten




-_shy

25 mL -----

45 mL

- shy -

SDS 10 IDO ~--

JL 120 JL i 120 JL






58









53 PBS-T


54 PBS-TL




59

Lo

ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









TclFax 423-761()

64


(A)

(B)


30











31








32

















bull

I




CAPITULO V









35



gruesa y visihle



36

11







r










38

6f




CAPITULO VI









41


RecipioOle exterior



42

CAPITULO VII

BIOSEGURIDAD










4-



3 ACCIDENTES







44

CAPITULO VIII












45










46

SOX~NV

XI OIn~IdV~

ANEXO 1















49










50








2HPO4) 01 M 100 mL






1







52


lnnl

-1 iexclshy ) - -0 (()


C)Uuml ()



53

lJ





54

ANEXO II











55














56


Acri lamida 146 (f













57

amp


----shy


E11lflaquetam lenlo

Cid

Seraraciuacuten




-_shy

25 mL -----

45 mL

- shy -

SDS 10 IDO ~--

JL 120 JL i 120 JL






58









53 PBS-T


54 PBS-TL




59

Lo

ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









TclFax 423-761()

64











31








32

















bull

I




CAPITULO V









35



gruesa y visihle



36

11







r










38

6f




CAPITULO VI









41


RecipioOle exterior



42

CAPITULO VII

BIOSEGURIDAD










4-



3 ACCIDENTES







44

CAPITULO VIII












45










46

SOX~NV

XI OIn~IdV~

ANEXO 1















49










50








2HPO4) 01 M 100 mL






1







52


lnnl

-1 iexclshy ) - -0 (()


C)Uuml ()



53

lJ





54

ANEXO II











55














56


Acri lamida 146 (f













57

amp


----shy


E11lflaquetam lenlo

Cid

Seraraciuacuten




-_shy

25 mL -----

45 mL

- shy -

SDS 10 IDO ~--

JL 120 JL i 120 JL






58









53 PBS-T


54 PBS-TL




59

Lo

ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









TclFax 423-761()

64








32

















bull

I




CAPITULO V









35



gruesa y visihle



36

11







r










38

6f




CAPITULO VI









41


RecipioOle exterior



42

CAPITULO VII

BIOSEGURIDAD










4-



3 ACCIDENTES







44

CAPITULO VIII












45










46

SOX~NV

XI OIn~IdV~

ANEXO 1















49










50








2HPO4) 01 M 100 mL






1







52


lnnl

-1 iexclshy ) - -0 (()


C)Uuml ()



53

lJ





54

ANEXO II











55














56


Acri lamida 146 (f













57

amp


----shy


E11lflaquetam lenlo

Cid

Seraraciuacuten




-_shy

25 mL -----

45 mL

- shy -

SDS 10 IDO ~--

JL 120 JL i 120 JL






58









53 PBS-T


54 PBS-TL




59

Lo

ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









TclFax 423-761()

64

















bull

I




CAPITULO V









35



gruesa y visihle



36

11







r










38

6f




CAPITULO VI









41


RecipioOle exterior



42

CAPITULO VII

BIOSEGURIDAD










4-



3 ACCIDENTES







44

CAPITULO VIII












45










46

SOX~NV

XI OIn~IdV~

ANEXO 1















49










50








2HPO4) 01 M 100 mL






1







52


lnnl

-1 iexclshy ) - -0 (()


C)Uuml ()



53

lJ





54

ANEXO II











55














56


Acri lamida 146 (f













57

amp


----shy


E11lflaquetam lenlo

Cid

Seraraciuacuten




-_shy

25 mL -----

45 mL

- shy -

SDS 10 IDO ~--

JL 120 JL i 120 JL






58









53 PBS-T


54 PBS-TL




59

Lo

ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









TclFax 423-761()

64

CAPITULO V









35



gruesa y visihle



36

11







r










38

6f




CAPITULO VI









41


RecipioOle exterior



42

CAPITULO VII

BIOSEGURIDAD










4-



3 ACCIDENTES







44

CAPITULO VIII












45










46

SOX~NV

XI OIn~IdV~

ANEXO 1















49










50








2HPO4) 01 M 100 mL






1







52


lnnl

-1 iexclshy ) - -0 (()


C)Uuml ()



53

lJ





54

ANEXO II











55














56


Acri lamida 146 (f













57

amp


----shy


E11lflaquetam lenlo

Cid

Seraraciuacuten




-_shy

25 mL -----

45 mL

- shy -

SDS 10 IDO ~--

JL 120 JL i 120 JL






58









53 PBS-T


54 PBS-TL




59

Lo

ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









TclFax 423-761()

64



gruesa y visihle



36

11







r










38

6f




CAPITULO VI









41


RecipioOle exterior



42

CAPITULO VII

BIOSEGURIDAD










4-



3 ACCIDENTES







44

CAPITULO VIII












45










46

SOX~NV

XI OIn~IdV~

ANEXO 1















49










50








2HPO4) 01 M 100 mL






1







52


lnnl

-1 iexclshy ) - -0 (()


C)Uuml ()



53

lJ





54

ANEXO II











55














56


Acri lamida 146 (f













57

amp


----shy


E11lflaquetam lenlo

Cid

Seraraciuacuten




-_shy

25 mL -----

45 mL

- shy -

SDS 10 IDO ~--

JL 120 JL i 120 JL






58









53 PBS-T


54 PBS-TL




59

Lo

ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









TclFax 423-761()

64

11







r










38

6f




CAPITULO VI









41


RecipioOle exterior



42

CAPITULO VII

BIOSEGURIDAD










4-



3 ACCIDENTES







44

CAPITULO VIII












45










46

SOX~NV

XI OIn~IdV~

ANEXO 1















49










50








2HPO4) 01 M 100 mL






1







52


lnnl

-1 iexclshy ) - -0 (()


C)Uuml ()



53

lJ





54

ANEXO II











55














56


Acri lamida 146 (f













57

amp


----shy


E11lflaquetam lenlo

Cid

Seraraciuacuten




-_shy

25 mL -----

45 mL

- shy -

SDS 10 IDO ~--

JL 120 JL i 120 JL






58









53 PBS-T


54 PBS-TL




59

Lo

ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









TclFax 423-761()

64










38

6f




CAPITULO VI









41


RecipioOle exterior



42

CAPITULO VII

BIOSEGURIDAD










4-



3 ACCIDENTES







44

CAPITULO VIII












45










46

SOX~NV

XI OIn~IdV~

ANEXO 1















49










50








2HPO4) 01 M 100 mL






1







52


lnnl

-1 iexclshy ) - -0 (()


C)Uuml ()



53

lJ





54

ANEXO II











55














56


Acri lamida 146 (f













57

amp


----shy


E11lflaquetam lenlo

Cid

Seraraciuacuten




-_shy

25 mL -----

45 mL

- shy -

SDS 10 IDO ~--

JL 120 JL i 120 JL






58









53 PBS-T


54 PBS-TL




59

Lo

ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









TclFax 423-761()

64

6f




CAPITULO VI









41


RecipioOle exterior



42

CAPITULO VII

BIOSEGURIDAD










4-



3 ACCIDENTES







44

CAPITULO VIII












45










46

SOX~NV

XI OIn~IdV~

ANEXO 1















49










50








2HPO4) 01 M 100 mL






1







52


lnnl

-1 iexclshy ) - -0 (()


C)Uuml ()



53

lJ





54

ANEXO II











55














56


Acri lamida 146 (f













57

amp


----shy


E11lflaquetam lenlo

Cid

Seraraciuacuten




-_shy

25 mL -----

45 mL

- shy -

SDS 10 IDO ~--

JL 120 JL i 120 JL






58









53 PBS-T


54 PBS-TL




59

Lo

ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









TclFax 423-761()

64

CAPITULO VI









41


RecipioOle exterior



42

CAPITULO VII

BIOSEGURIDAD










4-



3 ACCIDENTES







44

CAPITULO VIII












45










46

SOX~NV

XI OIn~IdV~

ANEXO 1















49










50








2HPO4) 01 M 100 mL






1







52


lnnl

-1 iexclshy ) - -0 (()


C)Uuml ()



53

lJ





54

ANEXO II











55














56


Acri lamida 146 (f













57

amp


----shy


E11lflaquetam lenlo

Cid

Seraraciuacuten




-_shy

25 mL -----

45 mL

- shy -

SDS 10 IDO ~--

JL 120 JL i 120 JL






58









53 PBS-T


54 PBS-TL




59

Lo

ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









TclFax 423-761()

64


RecipioOle exterior



42

CAPITULO VII

BIOSEGURIDAD










4-



3 ACCIDENTES







44

CAPITULO VIII












45










46

SOX~NV

XI OIn~IdV~

ANEXO 1















49










50








2HPO4) 01 M 100 mL






1







52


lnnl

-1 iexclshy ) - -0 (()


C)Uuml ()



53

lJ





54

ANEXO II











55














56


Acri lamida 146 (f













57

amp


----shy


E11lflaquetam lenlo

Cid

Seraraciuacuten




-_shy

25 mL -----

45 mL

- shy -

SDS 10 IDO ~--

JL 120 JL i 120 JL






58









53 PBS-T


54 PBS-TL




59

Lo

ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









TclFax 423-761()

64

CAPITULO VII

BIOSEGURIDAD










4-



3 ACCIDENTES







44

CAPITULO VIII












45










46

SOX~NV

XI OIn~IdV~

ANEXO 1















49










50








2HPO4) 01 M 100 mL






1







52


lnnl

-1 iexclshy ) - -0 (()


C)Uuml ()



53

lJ





54

ANEXO II











55














56


Acri lamida 146 (f













57

amp


----shy


E11lflaquetam lenlo

Cid

Seraraciuacuten




-_shy

25 mL -----

45 mL

- shy -

SDS 10 IDO ~--

JL 120 JL i 120 JL






58









53 PBS-T


54 PBS-TL




59

Lo

ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









TclFax 423-761()

64



3 ACCIDENTES







44

CAPITULO VIII












45










46

SOX~NV

XI OIn~IdV~

ANEXO 1















49










50








2HPO4) 01 M 100 mL






1







52


lnnl

-1 iexclshy ) - -0 (()


C)Uuml ()



53

lJ





54

ANEXO II











55














56


Acri lamida 146 (f













57

amp


----shy


E11lflaquetam lenlo

Cid

Seraraciuacuten




-_shy

25 mL -----

45 mL

- shy -

SDS 10 IDO ~--

JL 120 JL i 120 JL






58









53 PBS-T


54 PBS-TL




59

Lo

ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









TclFax 423-761()

64

CAPITULO VIII












45










46

SOX~NV

XI OIn~IdV~

ANEXO 1















49










50








2HPO4) 01 M 100 mL






1







52


lnnl

-1 iexclshy ) - -0 (()


C)Uuml ()



53

lJ





54

ANEXO II











55














56


Acri lamida 146 (f













57

amp


----shy


E11lflaquetam lenlo

Cid

Seraraciuacuten




-_shy

25 mL -----

45 mL

- shy -

SDS 10 IDO ~--

JL 120 JL i 120 JL






58









53 PBS-T


54 PBS-TL




59

Lo

ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









TclFax 423-761()

64










46

SOX~NV

XI OIn~IdV~

ANEXO 1















49










50








2HPO4) 01 M 100 mL






1







52


lnnl

-1 iexclshy ) - -0 (()


C)Uuml ()



53

lJ





54

ANEXO II











55














56


Acri lamida 146 (f













57

amp


----shy


E11lflaquetam lenlo

Cid

Seraraciuacuten




-_shy

25 mL -----

45 mL

- shy -

SDS 10 IDO ~--

JL 120 JL i 120 JL






58









53 PBS-T


54 PBS-TL




59

Lo

ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









TclFax 423-761()

64

SOX~NV

XI OIn~IdV~

ANEXO 1















49










50








2HPO4) 01 M 100 mL






1







52


lnnl

-1 iexclshy ) - -0 (()


C)Uuml ()



53

lJ





54

ANEXO II











55














56


Acri lamida 146 (f













57

amp


----shy


E11lflaquetam lenlo

Cid

Seraraciuacuten




-_shy

25 mL -----

45 mL

- shy -

SDS 10 IDO ~--

JL 120 JL i 120 JL






58









53 PBS-T


54 PBS-TL




59

Lo

ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









TclFax 423-761()

64

ANEXO 1















49










50








2HPO4) 01 M 100 mL






1







52


lnnl

-1 iexclshy ) - -0 (()


C)Uuml ()



53

lJ





54

ANEXO II











55














56


Acri lamida 146 (f













57

amp


----shy


E11lflaquetam lenlo

Cid

Seraraciuacuten




-_shy

25 mL -----

45 mL

- shy -

SDS 10 IDO ~--

JL 120 JL i 120 JL






58









53 PBS-T


54 PBS-TL




59

Lo

ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









TclFax 423-761()

64










50








2HPO4) 01 M 100 mL






1







52


lnnl

-1 iexclshy ) - -0 (()


C)Uuml ()



53

lJ





54

ANEXO II











55














56


Acri lamida 146 (f













57

amp


----shy


E11lflaquetam lenlo

Cid

Seraraciuacuten




-_shy

25 mL -----

45 mL

- shy -

SDS 10 IDO ~--

JL 120 JL i 120 JL






58









53 PBS-T


54 PBS-TL




59

Lo

ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









TclFax 423-761()

64








2HPO4) 01 M 100 mL






1







52


lnnl

-1 iexclshy ) - -0 (()


C)Uuml ()



53

lJ





54

ANEXO II











55














56


Acri lamida 146 (f













57

amp


----shy


E11lflaquetam lenlo

Cid

Seraraciuacuten




-_shy

25 mL -----

45 mL

- shy -

SDS 10 IDO ~--

JL 120 JL i 120 JL






58









53 PBS-T


54 PBS-TL




59

Lo

ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









TclFax 423-761()

64







52


lnnl

-1 iexclshy ) - -0 (()


C)Uuml ()



53

lJ





54

ANEXO II











55














56


Acri lamida 146 (f













57

amp


----shy


E11lflaquetam lenlo

Cid

Seraraciuacuten




-_shy

25 mL -----

45 mL

- shy -

SDS 10 IDO ~--

JL 120 JL i 120 JL






58









53 PBS-T


54 PBS-TL




59

Lo

ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









TclFax 423-761()

64


lnnl

-1 iexclshy ) - -0 (()


C)Uuml ()



53

lJ





54

ANEXO II











55














56


Acri lamida 146 (f













57

amp


----shy


E11lflaquetam lenlo

Cid

Seraraciuacuten




-_shy

25 mL -----

45 mL

- shy -

SDS 10 IDO ~--

JL 120 JL i 120 JL






58









53 PBS-T


54 PBS-TL




59

Lo

ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









TclFax 423-761()

64





54

ANEXO II











55














56


Acri lamida 146 (f













57

amp


----shy


E11lflaquetam lenlo

Cid

Seraraciuacuten




-_shy

25 mL -----

45 mL

- shy -

SDS 10 IDO ~--

JL 120 JL i 120 JL






58









53 PBS-T


54 PBS-TL




59

Lo

ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









TclFax 423-761()

64

ANEXO II











55














56


Acri lamida 146 (f













57

amp


----shy


E11lflaquetam lenlo

Cid

Seraraciuacuten




-_shy

25 mL -----

45 mL

- shy -

SDS 10 IDO ~--

JL 120 JL i 120 JL






58









53 PBS-T


54 PBS-TL




59

Lo

ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









TclFax 423-761()

64














56


Acri lamida 146 (f













57

amp


----shy


E11lflaquetam lenlo

Cid

Seraraciuacuten




-_shy

25 mL -----

45 mL

- shy -

SDS 10 IDO ~--

JL 120 JL i 120 JL






58









53 PBS-T


54 PBS-TL




59

Lo

ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









TclFax 423-761()

64


Acri lamida 146 (f













57

amp


----shy


E11lflaquetam lenlo

Cid

Seraraciuacuten




-_shy

25 mL -----

45 mL

- shy -

SDS 10 IDO ~--

JL 120 JL i 120 JL






58









53 PBS-T


54 PBS-TL




59

Lo

ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









TclFax 423-761()

64


----shy


E11lflaquetam lenlo

Cid

Seraraciuacuten




-_shy

25 mL -----

45 mL

- shy -

SDS 10 IDO ~--

JL 120 JL i 120 JL






58









53 PBS-T


54 PBS-TL




59

Lo

ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









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64









53 PBS-T


54 PBS-TL




59

Lo

ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









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ANEXO III




61

1

CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









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CAPITULO X

GLOSARIO














(l3

t









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