IDENTIFICACIÓN DE GENOMAS VIRALES

94 ºC DESNATURALIZACIÓN DEL ADN

55-60 ºC ADHESIÓN DE LOS PRIMERS

5´ 3´

3´5´

3´ 5´

5´ 3´

72 ºC EXTENSIÓN (La Taq. polimerasa agrega nucleótidos)

5´ 3´

5´3´

3´ 5´

5´ 3´

AMPLIFICACIÓN DEL ÁCIDO NUCLEICO - PCR

http://www.youtube.com/watch?v=Kuy4PDb6bdU

http://www.cienciahoy.org.ar/hoy23/reaccion.htm

TERMOCICLADORTERMOCICLADOR

AQUÍ SE REALIZAN LOS 3 PASOS DE AMPLIFICACIÓN DEL DNA:

1.- DESNATURALIZACIÓN DEL DNA2.- PEGADO DE LOS PRIMERS3.- EXTENSIÓN DE LAS CADENAS DE DNA

ESTE PROCESO SE REPITE 30 A 40 VECES

ARMADO DEL GEL DE AGAROSA PARA VISUALIZACIÓN POR ELECTROFORESIS DE LOS PRODUCTOS DE LA PCR http://www.youtube.com/watch?v=SahgDkDSutk

Agregado deBromuro de etidio en el gel

Se cubre el gel con buffer de corrida

Siembra de las muestras

Lectura en el transiluminador

TECNICAS DE BLOTEO o TRANSFERENCIA:Southern blot http://www.nucleomilenio-emba.cl/index.php?option=com_content&view=article&id=43:tecnica-southern-blot&catid=9:tecnicas-moleculares

Northern blot http://www.youtube.com/watch?v=KfHZFyADnNg

Western blot http://www.youtube.com/watch?v=nqspgMGNsrU

Papel absorbente

Membrana de nylon

Papel absorbente

gel

Membrana de nylonHibridación con sondas marcadas (ácidos nucleicos)Agregado de anticuerpos marcados (proteínas)

Las bandas que aparecen corresponden al ácido nucleico o a las proteínas buscadas

http://www.youtube.com/watch?v=zYSPnSwT6LQ