Instituto Politécnico NacionalEscuela Nacional de Ciencias Biológicas

Laboratorio de Microbiología 6FV1

EQUIPO 626- MAYO-2015

Seminario de práctica No. 7Aislamiento y Cultivo de Hongos filamentosos y Levaduras

INTRODUCCIÓN

Los hongos son microorganismos:

Eucarióticos. Cenocíticos, unicelulares.

Heterótrofos. NO fotosintéticos.

Aerobios o anaerobios facultativos

En base a sus características morfológicas, forma de reproducción y modo de crecimiento se dividen en dos grandes grupos:

Hongos filamentosos

Levaduras

Hongos filamentosos

Tienen pared celular constituida por polisacáridos. Hemicelulosas y quitina.

Forman filamentos o hifas (crecen longitudinalmente y se ramifican). 5-10 um de diámetro.

Las hifas forman micelios.

Clasificación de Hifas

De acuerdo al pigmento producido: Hifas hialinas Hifas mielínicas. Pigmento pardo oscuro (fulginoso)

Diferencia morfológica: Septadas No septadas.

Posición en el medio: Sumergidas Aéreas

De acuerdo a su función: Vegetativas (de crecimiento) Fértiles (de reproducción)

Requerimientos nutritivos. Condiciones ambientales requeridas.

Tienen la capacidad de elaborar enzimas hidrolíticas : lipasas, pectinasas, proteinasas.

Obtiene el carbono de materiales orgánicos sencillos como glucosa, sacarosa y maltosa.

Y complejos como almidón y la celulosa.

Son capaces de utilizar nitrógeno no orgánico como sales de amonio.

La mayoría de los hongos requieren menos agua que las bacterias. Lugares de baja humedad.

Oxígeno: La mayoría son estrictamente aerobios.

pH: Crecen mejor en un pH ácido (5.6 óptimo), pero resisten condiciones drásticas en un rango de 2.0 a 9.0.

Temperatura: temperatura óptima entre 22 y 30 °C; hongos patógenos para el hombre entre 30 y 37°C. Algunos resisten condiciones drásticas como 0°C a 62°C.

Concentración de solutos: Tolerancias a altas concentraciones de azúcar o de sal, a diferencia de las bacterias.

Reproducción asexual.

Origen

Estructuras especializadas, esporóforos.

Fragmentación de las hifas

Esporas

Esporangiosporas

Conidiosporas

Artrosporas

Clamidosporas

Reproducción sexual.

Esporas

Oosporas

Zigosporas

Ascosporas

Basidiosporas

Importancia de los hongos

ALGUNOS HONGOS UTILIZADOS POR EL HOMBRE

Hongo Uso

Penicillium comemberti Elaboración de queso Camembert. Actúa en la maduración

Penicillium roqueforti Elaboración de queso Roquefort. Actúa en la maduración.

Agaricus campestris Hongo comestible, conocido como champiñón.

Aspergillus tamarii Preparación de una salsa japonesa elaborada con soya

Aspergillus fischeri Producción de vitamina D

Aspergillus niger Producción de ácido cítrico a partir de remolacha o caña.

Mucor rouxii Producción de amilasas

Levaduras

Hongos unicelulares. Algunas pueden formar filamentos (Candida albicans)

Son ovales, esféricas o cilíndricas.

Tienen crecimiento isodiamétrico (uniforme en toda la superficie de la célula).

Reproducción asexual por gemación o fisión.

Tienen aspecto húmedo y consistencia cremosa.

Típicos de hábitat con azúcares.

Requerimientos nutritivos. Condiciones ambientales requeridas.

Los azúcares son el mejor alimento energético de las levaduras.

Las levaduras pueden obtener el nitrógeno que requieren para síntesis de proteínas a partir de sustancias orgánicas e inorgánicas.

La mayoría crece mejor en medios donde esta disponible el agua. Algunas requieren baja cantidad de agua, pero altas concentraciones de solutos.

Oxígeno: La mayoría son estrictamente aerobias y algunas facultativas.

pH: Crecen mejor en un pH ácido (3.8-5.6), pero resisten condiciones drásticas en un rango de 2.0 a 8.0.

Temperatura: temperatura óptima entre 22 y 30 °C.

Concentración de solutos: Tolerancias a altas concentraciones de azúcar o de sal.

Reproducción asexual Reproducción sexual

Reproducción por gemación Reproducción por formación de esporas sexuales(ascosporas o basidiosporas)

Reproducción de las levaduras

Importancia de las levaduras

ALGUNAS LEVADURAS UTILIZADAS POR EL HOMBRE

Levadura Uso

Saccharomyces cervisiae Utilizada en la panadería, producción de cervezas y vinos y como suplemento alimenticio del ser humano y animales

Candida utilis Producción de la proteína microbiana

Kluyveromyces fragilis y K. lactis Utilizados para el cultivo de derivados de los lácteos

Medios de cultivo

Agar SABOURAUD Agar ROSA DE BENGALA Agar PAPA DEXTROSA

Neopeptona 10 g/LDextrosa o maltosa 40 g/LAgar 15 g/L

Extracto de soya 5 gDextrosa 10 gFosfato monopotásico 1 gSulfato de magnesio 0.5 gAgar 20 gRosa de Bengala 0.035 g

Infusión de 250 g de papaDextrosa 20 gAgar 15 g

pH=5.6 pH=6.0 pH =5.6

OBJETIVOAislar, cultivar y reconocer la morfología colonial y microscópica de algunos hongos.

METODOLOGÍA EXPERIMENTAL

I. Aislamiento por diluciones

Azul de algodón lactofenol

II. Preparación de Microcultivos.

PDA

Glicerol 10%28°C 72 a 96 hrs.Desechar glicerol.Inactivar con formaldehído durante una hora.

Azul de algodón lactofenol

III. Cultivo y descripción de la morfología colonial de levaduras.

Gelosa Sabourad

Sacharomyces cerevisiae 28°C 24 a 48 hrs.

IV Observación de las ascosporas

Sacharomyces cerevisiae

Teñir con técnia Ziehl-Neelsen modificada.Decolorar con alcohol láctico.Nigrosina al final.

RESULTADOS

Morfología macroscópica de hongos filamentosos

Característica colonial Colonia 1 Colonia 2

Textura Pulvurulenta Aterciopelada

Superficie Plegada Plegada

Color Anverso Café Verde-blanco

Reverso Negro Amarillo

Pigmento difusible No No

Imágenes

Morfología microscópica de hongos filamentosos

Micelio NO septado. Micelio septado

Morfología colonial de las levaduras

Característica colonial Saccharomyces cerevisiae

Tamaño 6 mm

Color Blanco

Forma Circular

Elevación Umbunada

Superficie Lisa

Bordes Entero

Luz reflejada Mate

Luz trasmitida Opaco

Aspecto Húmedo

Consistencia Cremoso

Morfología colonial de hongos filamentosos

CARACTERÍSTICA COLONIAL Geotrichum sp. Penicillium sp. Fusarium

Textura Algodonosa Pulvurulenta Algodonosa

Superficie Plegada Plana Acuminada

Color Anverso Blanco Verde Blanco

Reverso Amarillento Amarillento Guinda

Pigmento difusible Amarillento Amarillento Guinda

Imagen de la muestra

Conidiosporas(Penicillium sp.)

Conidiosporas(Penicillium sp.)

Artrosporas(Geotrichum sp.)

Esporas asexuales observadas

Esporas sexuales observadas

Zigosporas(Zygorrhynchus sp.)

Esporangio(Mucor sp.)

Ascosporas(Saccharomyces sp.)

BIBLIOGRAFÍA

• Vera, García. INTRODUCCIÓN A LA MICROBIOLOGÍA, 2ª edición. EUNED Editorial Universitaria Estatal a Distancia. pp 86-114

• http://www.diversidadmicrobiana.com/index.php?option=com_content&view=article&id=694&Itemid=767