HONGOS CONTAMINANTES COMUNES . Ruby N. Gutiérrez 5.1

- Medios de Sabouraud y Mycosel

- El agar Mycosel contiene cicloheximida y cloranfenicol (antibióticos) que inhiben el crecimiento de casi

todas las especies saprofitas de hongos, mientras que el agar Littman contiene estreptomicina y que impide

que se rieguen las colonias de las especies saprófitas.

- Dematiáceos: se pueden obtener abriendo los platos de medios de cultivo, la semana anterior a la práctica por

15 minutos, exponiéndolos al ambiente y luego incubándolos a temperatura ambiente.

- Colonias = contaminantes que pudieran esperarse de un exudado, o cualquier lesión que estuviera en

contacto con el aire.

- Algunas colonias son de color gris o negro-verdoso. Estas representan la familia Dermatiaceae y suelen

constituir alrededor del 50%, o más de los hongos transmitidos por el aire. Las colonias de levaduras que son

blandas y pastosas no deben ser numerosas.

- Colonias con tinte color verde = Aspergillus o Penicillium.

- Características:

o Carencia de clorofila. Se alimentan de materia orgánica = Quimioorganótrofos (Heterótrofos)

o Eucariotas

o Pared celular rígida de polisacáridos, polipéptidos y quitina

o Absorben nutrientes mediante enzimas extracelulares

o Levaduras estructuras unicelulares que se reproducen por gemación

o Presentan talo o micelio, constituidos por hifas (unidad básica)

o Talo o micelio

Vegetativo (desarrollo, nutrición y fijación)

Reproductor (se forman los órganos de reproducción) hifas, levaduras y pseudohifas

o Levaduras: talo disociado produce colonias de crec rápido, suave, aspecto similar a bacterias.

o Mohos: talo filamentoso aéreo entremezclado más o menos largo o agrupado de manera compacta,

de crecimiento lento salvo en los hongos oportunistas.

o Dimórficos: hongos que tienen una fase parasitaria levaduriforme (37ºC) y una saprofítica micelial

(20-25ºC)

- Espora: forma de reproducción asexual en los hongos

- Hifas: filamento que forma el tallo o cuerpo de un hongo

- Micelio: conjunto de hifas entrelazadas y ramificadas

- Conidias: estructura de reproducción asexual en fase micelial de los hongos. Son esporas producidas por

hifas especializadas (llamadas conidióforos) mediante “estrangulamientos” sucesivos en el punto de unión.

- Conidióforo: estructura en los extremos de las hifas vegetativas. Dan origen a las conidias.

Rhizopus

Colonia de rápido crecimiento, de aspecto típicamente algodonoso, de color blanco o blanco ceniza o negruzco

dado por los órganos reproductores (hifas).

Micelio vegetativo formado por hifas sin septos (cenocíticas) hialinas o ligeramente coloreadas a partir de las

cuales se diferencian los conidióforos (esporangioforos) sobre un rizoide típico que le da una apariencia al hongo

de los tallos estoloníferos de la “fresa”. Estos esporangioforos terminan en vesículas (esporangiosporas)

variadas en forma; coloreadas o hialinas.

Especies de amplia distribución, en todos los ambientes; saprófitas en su mayoría.

* Mucor es igual a Rhizopus, sólo que el primero no tiene raicillas*

Aspergillus

Colonias de crecimiento rápido y aspecto variable, afelpado, pulverulento o algodonoso, de colores diversos que

van del blanco al amarillo pálido, del rojo al rojo vinoso o marrón oscuro, de olor característico a “moho”.

Los conidióforos son fácilmente distinguibles del micelio vegetativo, de longitud variable terminando en una

vesícula globosa o clavada, rodeada parcial o totalmente, con sus conidias globosas o elipsoidales, hialinas o

coloreadas. Género con especies saprófitas y algunas parásitas.

Aspergillus fumigatus (el de mayor virulencia dentro del género) y A. flavus, son las que se encuentran

vinculadas con patologías.

Fusarium

Colonias de crecimiento rápido y abundante, generalmente de aspecto algodonoso, de diversos colores que van

del blanco, rosado, salmón o violeta cubriendo toda la superficie del medio.

Conidióforos simples o ramificados; solitarios o agrupados formando esporodoquios; conidas apicales simples

(microconidias) o septadas (macroconidias) típicas de bordes curvados (falcado o apariencia de media luna),

con ápices obtusos o agudos, solitarios o en cadenas; produciendo algunas especies, esporas de resistencia

denominadas clamidosporas, generalmente globosas, intercalares o terminales. Se les encuentra en todos los

ambientes en forma saprófita o parásita.

Penicillium

Descubierto en 1929 por Alexander Fleming

Sólo una especie es patógena: Penicillium marnefeii.

Colonias de crecimiento rápido y abundante, de aspecto variable, afelpado, algodonoso o pulverizado, de

colores diversos que van del blanco, azul-verdoso a verde olivo. Con o sin producción de exudado, confiriendo o

no color al medio de cultivo, de olor fácilmente reconocible a “moho”.

Micelio vegetativo con hifas septadas coloreadas o hialinas; micelio reproductor diferenciado a partir de las hifas

vegetativas, formando los conidióforos simples o ramificados simétricos, que dan lugar a las ramas o métulas en

cuyos extremos se tienen los esterigmas o fiálides, los cuales sostienen a las conididas dispuestas en cadenas.

Conidias unicelulares hialinas o coloreadas, globosas y ovoides, de contorno liso o irregular. Género

ampliamente distribuido en todos los ambientes teniendo especies saprófitas y parásitas.

LEVADURAS DE IMPORTANCIA CLÍNICA - Medio agar harina de maíz

- Poseen crecimiento similar a las bacterias

- Se caracterizan por las blastosporas y artrosporas (se dan cuando las hifas se segmentan en células

rectangulares de paredes gruesas, de donde resultan esporas asexuales)

- Hongos superiores poseen hifas y micelios, mientras que las levaduras poseen pseudohifas y pseudomicelios.

Levadura con Azul de Lactofenol Artrosporas

Candida albicans

Pseudohifas

Blastosporas = son esporas asexuales simples que se desarrollan por gemación de la célula madre, y su

separación subsecuente del brote.

Medio de Sabouraud

Clamidospora (TIPICA) = las células de las hifas aumentan de tamaño y se rodean de paredes gruesas.

Estas esporas asexuales son resistentes a condiciones ambientales desfavorables y germinan cuando las

condiciones se hacen más favorables para el crecimiento vegetativo.

Prueba en suero humano = tubo germinativo (UNICA) luego de 2 ó 3 horas en la incubadora

Tinción de Gram Tubos germinales Clamidosporas

Rhodotorula

NARANJA!!

API y VITEC = pruebas de azúcares para levaduras

Cryptococcus neoformans

En pulmones

Contagio por excretas de palomas y otras aves

Cryptococcus gatis eucalipto. No necesariamente en inmunosuprimidos

Microorganismo ENCAPSULADO!!

Tinción de Tinta China Tejido infectado

Malassezia furfur Pityriasis versicolor / Tinea versicolor

Tinción con Azul de Algodón

PREGUNTAS

1. Muestras clínicas que podemos procesar para el hallazgo de levaduras:

a. LCR

b. Sangre

c. Esputo

d. Biopsias

2. Característica de Cryptococcus neoformans: cápsula

3. Pruebas estudiadas para un diagnóstico rápido de Candida albicans: prueba en suero, ya que nos

puede dar tubos germinales en 2 horas a una temperatura de 37°C

4. Pruebas bioquímicas para el diagnóstico de levaduras:

a. Azúcares

b. Asimilación de carbohidratos

5. Método comercial para pruebas de asimilación de azúcares: Disco de azúcares

ESTUDIO DE LOS DERMATOFITOS

Los dermatofitos son hongos que afectan solamente los tejidos superficiales queratinizados como la piel,

pelo y uñas

Tiña el nombre depende del lugar que este afectando. Es lo mismo que mazamorra o pie de atleta

Las colonias de los dermatofitos son algonodosas y poseen color

Habitats de donde proceden:

o Antrofílicos

o Zoofílicos

o Geofílicos

Diagnóstico:

o Limpieza con alcohol al 70%

o Examen directo

KOH 20%

Azul de Algodón

o Cultivo a temperatura ambiente de 2 a 4 semanas

Medio de Sabouraud

Medio de Mycosel

o Observación

Macroscópica = colonias

Microscópica = 10x y 40x

Trichophyton rubrum

MICELIO: crecimiento moderado (14 días); de color blanco con difusión del pigmento; aspecto aterciopelado,

algodonoso o granuloso y plano; al reverso de se puede observar la colonia de color rojo.

HIFAS: pectinadas y con clamidosporas. Los microconidios son piriformes en forma de lágrima a los lados del

filamento; macroconidios escasos, fusiformes, largos, estrechos, en "punta de lápiz".

In vitro perfora pelos y produce pigmento en agar papa y harina de maíz.

Trichophyton mentagrophytes es el agente responsable más frecuente de pie de atleta.

MICELIO: de crecimiento moderado (7 a 10 días); de color blanco marfil; de aspecto polvoriento, granuloso,

plano y centro acuminado.

HIFAS: en raqueta, astas de ciervo, espirales, zarcillos; microconidios abundantes, en racimos y redondos;

macroconidios escasos, en cigarro o salchicha, pared delgada y de 1 a 6 lóculos.

In vitro perfora pelos, es ureasa (+).

Microsporum canis no suelen afectar las uñas (ni canis ni gypseum)

MICELIO: de crecimiento moderado (6 a 10 días); de color blanco amarillento; aspecto velloso, plano, radiado o

lanoso; al reverso color anaranjado.

HIFAS: en raqueta con clamidosporas y cuerpos nodulares; microconidios ocasionales; macroconidios en huso,

extremos afilados, pared gruesa y con 6 o más lóculos.

Microsporum gypseum

MICELIO: de crecimiento rápido (6 días); de color café canela; aspecto polvoriente, granuloso y plano.

HIFAS: con microconidios ocasionales y macroconidios en huso, paredes delgadas y menos de 6 lóculos.

PREGUNTAS

1. Significado de:

a. Microconidias o microaleurisporas: conidias pequeñas unicelulares. Son estructuras de

reproducción asexual en dermatofitos

b. Macroconidias o macroaleurisporas: conidias grandes multicelulares

c. Septas: paredes transversas que se pueden ver en las hifas septadas.

2. Parte del cuerpo atacada por:

a. Microsporum: pelo y piel

b. Trichophyton: pelo, piel y uñas

c. Epidermophyton floccosum: piel y uñas

3. Tineas: son dermatofitosis.

4. Ejemplos:

a. Tinea pedis (pie)

b. T. unguium (uña)

c. T. corporis (piel)

d. T. capitis (cabello)

DEMATIACEOS Proceden del ambiente

Lesiones = protuberancias que asemejan un coliflor.

Examen directo = KOH 20%

Colonias de los dematiáceos

Los cultivos se realizan en medios como Sabouraud simple o con antibióticos; crecen más rápido en agar papa y

fructifican mejor en agar harina de maíz; se desarrollan a la temperatura ambiente o a 37ºC.

El crecimiento es lento, en 7 a 12 días se observan colonias de superficie vellosa o algodonosa, de color negro o

ligeramente gris verdoso, verde oscuro o café desde una vista superior e inferior del plato petri o tubo de ensayo.

Asemejan color centavo chocolate oscuro (CROMOBLASTOMICOSIS)

Phialophora

Fiálides en forma de florero o botella, son sésiles, de base ancha y cuello estrecho, con collarete terminal en el

cual se encuentran las fialosporas, que son ovaladas, hialinas y de pared delgada. Las fialosporas se unen por

un material adhesivo y se aglutinan en forma de ramillete.

Cladosporium

Conidióforos cortos y pigmentados, con formación acropétala de conidios (sólo es terminal) y cada conidio

produce al subsecuente por gemación, de manera que forman cadenas.

Las cadenas pueden ser cortas, de 3 a 4 esporas y son muy ramificados y con conidios elípticos de tamaño

constante.

PREGUNTAS

1. Estructuras observadas en los hongos dimórficos:

a. Fiálides

b. Fialosporas

c. Macroconidias

d. Conidióforos y conidios

2. Tipos de esporulación

a. Cladospórica

b. Phialophórica

c. Acrotheca

3. Defina:

a. Anamorfo: Hongo de reproducción asexual

b. Teleomorfo: Hongo de reproducción sexual

c. Holomorfo: Hongo de reproducción sexual y asexual

4. Diagnóstico con muestras de:

a. Aspirados

b. Material de biopsias

c. Raspado de piel

5. Estructura microscópica patognomónica para un hongo dematiáceo en el examen directo de la

muestra clínica: células furnagoides

Hongos dimórficos

Son dimórficos porque poseen dos fases:

o Vegetativa (micelios) a temperatura ambiente

o Levaduriforme (37°C)

Histoplasma capsulatum

Se encuentra principalmente donde hay guano de murciélago.

Descrito primero en Panamá

Fase micelial muy infectiva

El cultivo se realiza en agar sangre, agar papa, agar con extracto de levadura, sin antibióticos y se

coloca a 25ºC durante 6 a 12 semanas.

Las colonias son lisas, blanquecinas o de color rosado al principio, después son vellosas y de color

blanco o café parduzco.

Hifas son largas, ramificadas y septadas; a los lados hay microconidias esféricas.

Las macroconidias (CARACTERÍSTICO!!) son equinuladas o tuberculadas, redondeadas o piriformes y

nacen en conidióforos tubulares.

La conversión a la fase de levadura se logra al sembrar en agar sangre acondicionado de peptona y

cisteína, a pH de 7,4 o en medio de Kurung; se colocan a 37ºC y se tapan los tubos para aumentar la

tensión de CO2. Al principio aparece pseudomicelio, después la colonia es lisa y se encuentran

levaduras al microscopio con blastosporas de cuello estrecho y un solo núcleo.

Paracoccidioides brasiliensis PANAMA!!

El examen directo con KOH o Lugol se realiza en esputo, exudado o triturado de la biopsia.

Se observan levaduras esféricas u ovales de doble pared y con gemación múltiple (UNICA LEVADURA

MULTIGEMANTE)

Las blastosporas a veces forman cadenas de 4 a 12 esporas adoptando una disposición en "timón de

barco" u "orejas de Mickey Mouse"; también puede observarse en frotis y teñirse con Giemsa o Wright.

La colonia micelial muestra filamentos septados y ramificados, hifas en espiral, clamidosporas y

microaleuriosporas no características. En la fase de levadura se encuentran las células multigemantes

Blastomyces dermatitidis Europa, EUA, Asia

Para el examen directo se obtiene esputo, lavado bronquial o pus. Se practica con solución salina o

KOH.

La fase levaduriforme es igual a la de P. brasiliensis.

Se observa una levadura con brote germinativo de base muy ancha; la blastospora generalmente crece

sin separarse de la célula madre y se presentan en pares.

Al principio del cultivo llevado a cabo a 25ºC, el micelio se encuentra fragmentado, después aparecen

conidios ovoides o piriformes, laterales o terminales que semejan una "paleta".

La colonia a 37ºC es cremosa y plegada, microscópicamente se encuentran levaduras de 8 a 15 um con

blastosporas de base ancha.

Sporotrix schenkii

Dimórfico, pero no sistémico. Afecta al haber pinchanzos de plantas.

En el examen directo se pueden encontrar levaduras o cuerpos asteroides en solución salina con 1 gota

de formol 10%; que de manifiesto la levadura rodeada por la Inmunoglobulina del huésped.

El crecimiento del cultivo se da entre 3 a 5 días en gelosa de Sabouraud y agar sangre a 25ºC. Al

principio la colonia es cremosa y brillante, después tornan beige, marrón o negra. A 35-37ºC adopta

color gris o crema.

En su forma micelial, posee hifas delgadas, septadas y ramificadas; la reproducción es por conidios

acrógenos o simpodulosporas que se forman a los lados del filamento y dan la imagen de "duraznos en

floración" o conidióforos en forma de margarita.

Pneumocystis jirovecii no es dimórfico, pero es sistémico

No se puede cultivar

Tinción de plata (Gimori)

Se creía antes como parásito

Trofozoítos = esporas

Invade pulmones

PREGUNTAS

1. Muestras clínicas para el hallazgo de Histoplasma capsulatum

a. Orina

b. Esputo

c. Biopsia

d. Raspado

e. Lesiones

2. Población más expuesta a infección por Sporothrix schenckii: jardineros

3. Medios de cultivo adecuados para trabajar hongos dimórficos:

a. Littman

b. Mycosel

c. BHI

4. Características morfológicas de Coccidiodes immitis en ambas fases:

a. Fase micelial = hifas con autoconidias intercaladas

b. Fase levaduriforme = cridosporas

5. Diferencias entre P. brasiliensis y B. dermatitides en forma de levadura: P. brasiliensis es

multigemante

6. Cultivo en lámina, definición y valor en el diagnóstico micológico: sirve para identificar dermatiasis.

Se puede hacer en agar harina de maíz o agar dextrosa de papa.

VIROLOGIA Células Vero

Efecto citopático

Ojo de búho por CMV

En infección por CMV se observan células más grandes que las normales, con inclusiones intranucleares

basofílicas. Dicha inclusión tiene apariencia de un "ojo de búho". El CMV es un virus de ADN, por ello su daño

es a nivel nuclear.

Cuerpos de Negri

Sucede por Rabdovirus. En esta muestra de tejido cerebral se observa la formación de inclusiones

intracitoplasmáticas conocidas como "cuerpos de Negri".

Coilocitos

Cuerpo de Cowdry

Dilución del suero del paciente

Se colocan microplatos con cultivo de células, se les añade a cada uno una cantidad constante del virus y luego

el suero del paciente. Si el paciente tiene anticuerpos para el virus se evitará la formación de Placas líticas (se

observan como manchas transparentes en el medio azul). A mayor concentración de suero del paciente, mayor

cantidad de anticuerpos y menor formación de Placas líticas.

Dilución de una suspensión viral

En este caso se toma la muestra al paciente, se hace una suspensión del virus de la muestra y luego se hacen

varias diluciones las cuales se añaden a este medio células cultivadas. En este caso, a mayor dilución de la

suspensión viral, menor será la formación de las Placas líticas (las placas líticas son producto del efecto del virus

sobre las células).