Guia de Bioquimica y Nutricion 2015-II

7/26/2019 Guia de Bioquimica y Nutricion 2015-II

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1

Gua de Prcticas

Bioqumicay Nutricin

Lima - Per

2015-II


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FACULTAD DE MEDI CINA GUIA DE BIOQUIMI CA Y NUTRICION

Universidad Ricardo Palma Pgina 2

UNIVERSIDAD RICARDO PALMA

FACULTAD DE MEDICINA HUMANA

Dr. Elio Ivn Rodrguez Chvez

Rector

Dr. Manuel Huamn GuerreroDecano de la Facultad de Medicina Humana

Autores:

Dra. Nancy Jo Vargas

(Coordinadora de Curso)

Q.F. Cecilia Rojas Guerrero

(Coordinadora de Laboratorio)

2015-II


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A.- CONTENIDOS DE BIOQUIMICA:

Actividad Pgina

Interconversin de unidades y manejo de concentraciones de

disoluciones.

08

Buffer:

Capacidad buffer en trminos de pKa. 10

Espectrofotometra Uso de la luz visible y UV en Medicina.

13

Actividad enzimtica: Efecto de factores en la transformacin del

sustrato.

19

Accin de la amilasa en la digestin del almidn. 22

Sobrecarga oral de glucosa y DM (TTG).

25

Determinacin e interpretacin del HCO3-en la cidosis

diabtica.

27

Aislamiento e identificacin de lipoprotenas plasmticas y su

asociacin con el riesgo coronario.

31

Ictericia: Metabolismo de la bilirrubina y pigmentos biliares. 35

Transaminacin. Uso de la cromatografa. 38

B.- CONTENIDOS DE NUTRICIN HUMANA

Actividad Pgina

Valoracin Nutricional: Balance Nitrogenado 44

Evaluacin de la Masa Proteica Visceral y Esqueltica: Marasmo-

Kwashiorkor. 48

Medidas Antropomtricas y signos clnicos que evidencian

desnutricin. Manejo de la Tabla de composicin de alimentos.

52


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Reglamento Interno del Laboratorio

1.La asistencia a las prcticas de laboratorio son de caracter obligatorio e

injustificada

2.

Las justificaciones por enfermedad se realiza

rn dentro de las 48 horas y con l

a

presentacin del ce rtificadomdico del servicio mdico de la URP

3.

Se aplicar una tolerancia mxima de 5 minutos para el ingreso del a lumno y lo

realizar portando unmandil como vestimenta de protecciny la guia de prcticas

respectiva.

4.

Los alumnos rendirn una prueba cognoscitiva de entrada conforme a la tabla de

evaluacin diseada, debiendo para e llo haber ledo la prctica correspondiente

5.En cada practica, los alumnos presentarn, un informe grupal, absolviendo el

cuestionario de la practica realizada durante la prctica.

6.A cada alumno se le asignar una mesa de trabajo, los cambios de grupos o

subgrupos no estn permitidos.

7.

El alumno tomar conocimiento del profesor encuanto al buen manejo del material

y equipo de laboratrio y ser responsable de su integridad y funcionamiento.

8.

Si algn alumno rompe material de vidrio , deber reponerlo, de lo contrario no

podr rendir el prximo examen.

9.En caso de de terioro de algn equipo de laboratorio toda la mesa ser responsable

del dao causado.

10.

Si porta celulares y equipos de sonido (MP3, Ipod, Ipad, etc.) sern apagados,

permaneciendo asdurante el transcurso de la prctica.

11.No se permite ingresar con alimentos y/o bebidas al laboratorio y an menos

ingerirlas

12 .La duracin de desarrollo de la prctica es de 2 horas y todo permiso para salir del

laboratorio deber ser solicitado a su profesor de prcticas, otorgndosele permiso

slo si fuera absolutamente urgente.


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El trabajo en el Laboratorio requiere la observacin de

una serie de normas de seguridad que eviten posibles

accidentes debido a desconocimiento de lo que se

est haciendo o a una posible negligencia de los

alumnos.

1.

Cada grupo de prcticas se responsabilizar de su zona de trabajo y de su material.

2.

Es conveniente la utilizacin de mandil, ya que evita posibles proyecciones de sustancias qumicas

o biolgicas lleguen a la piel. Por supuesto adems, evitars posibles deterioros en tus prendas de

vestir.

3.

Si tienes el pelo largo, es conveniente que lo lleves recogido.

4. Y no harafalta decir esto; pero por supuestoen el laboratorio est terminantemente prohibido

fumar, ingerir bebidas y/o alimentos

1.

Antes de utilizar un compuesto, verifique el nombre con el que figura en el rotulo del compuesto

2.

No devolver a los envases de origen, los remanentes de los reactivos (no utilizados)

3.

El descarte de los reactivos o productos qumicos utilizados se viertan en la pila del desage para

ser arrastrados con abundante agua.

4.

No utilizar la boca para el aspirado de volmenes de reactivos. Utilice pipeteadores automticos o

bombillas de aspiracin

5.

Cuando se haga diluciones de cidos, tener la precaucin de agregar cido al agua y no agua al

cido

6.

Para evitar contaminacin de reactivos, utilice una pipeta seca y limpia para cada sustancia qumica

7.

Utilizar guantes descartables, para manipular material biolgico

8.

Los productos inflamables (gases, alcohol, ter, etc) no deben estar cerca de fuentes de calor. Si

hay que calentar tubos con estos productos, se har al bao Mara,nunca directamente a la llama

.


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9.

Si se vierte sobre ti cualquier cido o producto corrosivo, lvate inmediatamente con mucha agua y

avisa al profesor.

10.

Al preparar cualquier disolucin se colocar en un frasco limpio y rotulado convenientemente.

1. Cuidado con los bordes y puntas cortantes de los tubos u objetos de vidrio.

2. El vidrio caliente no se diferencia a simple vista del vidrio fro. Para evitar quemaduras,

dejarlo enfriar antes de tocarlo.

3. Las manos se protegern con guantes o trapos cuando se introduzca un tapn en un tubo

de vidrio.

4. Si tienes que calentar a la llama el contenido de un tubo de ensayo, observa

cuidadosamente estas dos normas:

Ten sumo cuidado y ten en cuenta que la boca del tubo de ensayo no apunte a

ningn compaero. Puede hervir el lquido y salir disparado, por lo que podras

ocasionar un accidente.

Calienta por el lateral del tubo de ensayo, nunca por el fondo; agita suavemente.

5.

Utilizar material limpio y seco


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Por muchos aos los cientficos expresaron las mediciones en unidades mtricas, relacionadas entre s

decimalmente, es decir, mediante potencias de 10. Sin embargo, en 1960, la Conferencia General de Pesas

y Medidas, la autoridad internacional en unidades, propuso un sistema mtrico revisado y actualizado al cual

se denominSistema Internacional de Unidades (

AbreviadoSI

, del francs Systme Internationale d

Unites). En la tabla N 1 se muestran las siete unidades SI fundamentales; las dems unidades de medicin

se pueden derivar a partir de estas unidades. Como las unidades mtricas, las unidades SI cambian en

forma decimal por medio de una serie de prefijos, como se muestra en la tabla N 2.

En Bioqumica se suele usar ste sistema el cual significa un amplio dominio en su manejo toda vez que lasconcentraciones de los fluidos intra y extracelulares son generalmente en el orden de los submltiplos.

Tabla 1 .- Unidades SI bsicas

CANTIDAD

FUNDAMENTAL

NOMBRE

DE LA UNIDAD SMBOLO

Longitud Metro m

Masa Kilogramo kg

Tiempo Segundo s

Corriente elctrica Ampere A

Temperatura Kelvin K

Cantidad de sustancia Mol mol

Intensidad luminosa Candela cd

Tabla 2.- Prefijos utilizados con unidades SI

Prefijo

Smbolo

F actor Equivalente

MULTIPLOS tera T 10

12

1 000 000 000 000

giga G 10

9

1 000 000 000

mega M 10

6

1 000 000

Kilo K 10

3

1 000

hecto H 10

2

100

deca Da 10 10

SUBMULTIPLOS deci d 10

-1

0,1

centi c 10

-2

0,01

mili m 10

-3

0,001

micro u 10

-6

0,000 001

nano n 10

-9

0,000 000 001

pico p 10

-12

0,000 000 000 001

femto f 10

-15

0,000 000 000 000 001

atto a 10

-18

0,000 000 000 000 000 001


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INFORME DE LA PRACTICA N 1

Nombre del Alumno:------------------------------------------------------------------------------------------------------------

Grupo:---------------------------------- Fecha: ---------------------------

1.- Realice los siguientes conversiones:

X cg = X ug Xug = XHg

X pg = X dg Xpl = Xml

X ul = X pl XnMol = XuMol

X dm = X mm X Hg = X dg

2.- Describa la estructura qumica y calcule el Peso molecular de los siguientes compuestos:

a) Glucosa

b) Cloruro de sodio

c) Cloruro de potasio

d) Cloruro de calcio

e) Lactato de sodio

f) Gluconato de calcio

g) Urea

h) Manitol

3.- Describa las siguientes expresiones:

a) Molaridad

b) Normalidad

c) Equivalente

d) m-Eq

e) Osmolaridad

4.- Calcule la Molaridad de las siguientes soluciones :

a) 500 ml de Cloruro de sodio al 0.9%

b) 1 L de Suero glucosado al 5%

c)

Una ampolla de 20 ml de NaCl al 20%d) Una ampolla de 20ml de NaHCO3al 8.4%

5.- Calcule los mEq de las siguientes soluciones:

a) Cuantos mEq de Na y cuantos mEq de Cl hay en una ampolla de 20ml de NaCl al 20%

b) Cuantos mEq de K y cuantos mEq de Cl hay en una ampolla de 20 ml de KCl al 10%

c) Cuantos mEq de HCO3y cuantos mEq de Na hay en una ampolla de 20ml de HCO3Na al 10%.

---------------- ----------------- ---------- ---------------- ---------------- --------------- -------- --------------

Firma del Alumno Firma del Profesor Nota


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La curva de titulacin de un cido dbil como actico representa las variaciones de pH con respecto a diferentes proporciones relativas

entre la sal y el cido de una solucin tampn. Antes de adicionar la base, el pH se debe solamente al cido. Tan pronto como se

agregue algo de base sta reacciona con una cantidad equivalente de sal y agua. Pero el cido dbil , mas su sal disuelta constituye

una solucin tampn, cuyo pH puede calcularse mediante el uso de la ecuacin de Henderson - Hasselbach.

pH = pKa + log

OBJETIVO

a) Obtener la curva de valoracin de un cido dbil, HA,CH3COOH O.1N

y una base fuerte NaOH 0.1N

b) Calcular el pH haciendo uso de un potencimetro y la ecuacin de Henderson Hasselbach

POTENCIOMETRIA

El mtodo ms confiable para medir el pH es mediante el uso de un medidor de pH comnmente denominado potencimetro, que mide

la fuerza electromotriz (f.e.m.) de una celda formada por un electrodo de referencia, la solucin problema y un electrodo de vidrio

sensible a hidrogeniones. El electrodo de referencia puede ser de calomel (mercurio, cloruro mercurioso) sumergido en una solucin

concentrada de cloruro de potasio. El electrodo de medida o de vidrio, esta constituido por un tubo de vidrio grueso con un extremo en

forma de bombilla, el cual es selectivo y sensible al paso de iones hidrgeno. Est conectado a un alambre de platino conectado al

electrodo de Ag, Cl2Ag, sumergido en HCl 0.1M. La fuerza electromotriz generada es leda en un galvanmetro es unidades de pH.

ACIDO

SAL


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EXPERIMENTO 1

Medir y mezclar los volmenes de CH3-COOH 0.1N, de NaOH 0.1N y agua indicados en el siguiente cuadro:

Tubo N CH

3

-COOH 0.1N NaOH 0.1N H

2

O DEST. pH

1 10 ml 0.0 ml 10 ml

2 10 1.0 9

3 10 2.0 8

4 10 3.0 7

5 10 4.0 6

6 10 5.0 5

7 10 6.0 4

8 10 7.0 3

9 10 8.0 2

10 10 9.0 1

11 10 10.0 0

a) Medir los valores de pH de cada mezcla, utilizando el potencimetro

b)

Calcular los valores de pH de cada mezcla, aplicando la ecuacin de Henderson Hasselbach. pKa=4.76

EXPERIMENTO 2

Medir y mezclar los volmenes de HCl 0.1N, de NaOH 1N y agua indicados en el siguiente cuadro:

Tubo N

HCl 0.1N NaOH 0.1N H

2

O DEST. pH

1 10 ml 0.0 ml 10 ml

2 10 1.0 9

3 10 2.0 8

4 10 3.0 7

5 10 4.0 6

6 10 5.0 5

7 10 6.0 4

8 10 7.0 3

9 10 8.0 2

10 10 9.0 1

11 10 10.0 0


EXPERIMENTO 3

Titulacin de la Alanina

Tubo N Alanina 0.1N NaOH 0.5M H

2

O DEST. pH

1 10 ml 0.0 ml 10 ml

2 10 1.0 9

3 10 2.0 8

4 10 3.0 7

5 10 4.0 6

6 10 5.0 5

7 10 6.0 4

8 10 7.0 3

9 10 8.0 2

10 10 9.0 1

11 10 10.0 0



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Nombre del Alumno(s):------------------------------------------------------------------------------------------------------------

Grupo:---------------------------------- Fecha: ---------------------------

CURVA DE TITULACION DE LA ALANINA

ALANINA

1. Deduzca la ecuacin de Henderson Hasselbach y calcula los valores del pH de la neutralizacin del CH3COOH con NaOH

2. En papel milimetrado:

a. grafique los valores del pH vs ml de NaOH 0.1N utilizados en la titulacin del cido actico y HCl

b.

compare ambas curvas e interprete.

3. En papel milimetrado:

a. Grafique la titulacin de la Ala

b. Calcule el valor del pK1y pK2

4. La concentracin del H2CO3 en el plasma sanguneo es aproximadamente 0.00125M

a. Calcule la concentracin de HCO3 en el plasma, cuando el pH es 7.4

b. Halle la razn HCO3/ H2CO3 del buffer

------------------------------------------- ------------------------------------------------------- --------------


VALORACION DE UN ACIDO DEBIL MONOPROTICO

pH

ml de NaOH

CH3COOH HCl

pH

ml de NaOH

VALORACION DE UN ACIDO FUERTE

pH

ml de NaOH 1N


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OBJETIVO:

a) Preparar soluciones de concentracin creciente de una solucin estndar de Azul de Metileno y leer %T y calcular sus A

D.O.

Ley de Lambert:

Cuando un rayo de luz monocromtica incide sobre un medio absorvente, su intensidad decrece en forma exponencial al espesor del

medio.

Ley de Beer:

Cuando un rayo de luz monocromtica incide sobre un medio absorvente su intensidad decrece en forma exponencial a la

concentracin.

Ambas leyes se fusionan as:

Ley Lambert Beer

I = I0. 10-abc a = absortividad molecular

b = espesor medio

c = concentracin

I = luz emergente

I0= luz incidente

I/I0 = 10-abc

log(I/I0) = -abc

log I0/I = abc

log 100%/%T= 2-log%T

2-log%T = a.b.c

Abs = a.b.c

si b = k

a.k = K

Abs = K.c


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La Abs es directamente proporcional a la concentracin . Luego establecemos la siguiente proporcionalidad :

Abs x = Abs desconocido

Abs St = Abs standard

Cx = Concentr. Desconocido

CSt = Concentr. Standard

Cx=

Cx=

Concentracin = x Abs desconocido

Desconocido

FACTOR CALIBRACION:

Cuando previamente se ha determinado la linaridad de Absst=k.c:

= Factor

Factor x Abs desconocido = Concentracin desconocido

Definiciones:

1. Absorbancia:

A = log10T = -log = 2-log10% T

2. Absortividad

Coef. Extin.:

a = Absorbancia/Unidad de concentracin y

espesor absorbancia especfica

a = A /b c Concentracin

espesor

3. Energa Radiante:

I0= Luz incidente

4. Transmitancia:

(emergente)

T =

(incidente)

5. % Transmitancia:

%T = 100T

Cx

CSt

xAbs

StAbs

xCstStAbs

xAbs

odesconocidxAbs_StAbs

StC

stAbs

st.nConcetraci

stAbs

st.nConcetraci

T

1

0I

I.


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AM

1

UV Regin espectral de 200-380 nm

IR Regin espectral de 0.7 - 300um

Luz Visible Regin espectral de 380 780nm

Absortividad molar cm Coeficiente de extincin molar o molecular

Absortividad de una solucin 1 Mol/L, en 1 cm espesor cm

La relacin matemtica entre A y concentracin:

A = a.b.c = log 100

por 100 de T

Los espectrofotmetros reportan sus resultados en absorbancia (luz absorbida por las partculas de la solucin) y transmitancia ( luz

absorbida)

A 2 1.0 0.5 0.25 0.125 0.06 0

T 0 10 31 56 75 87 100

La absorbancia o Densidad aplicada se expresa en valores semilogartmicos y la trasmitancia en valores alfanumricos.

EXPERIMENTO N 2

La prctica consiste en preparar soluciones de concentracin creciente de una solucin standart y leer sus D.O. y %T.

N tubo St 1 St 2 St 3 St 4 St 5

ml. de sol standart 2 4 6 8 10 -

ml. Agua destilada 8 6 4 2 - 8.5

ml. muestra problema - - - - - 1.5

% Transmitancia

Calcular Absorbancia

Calcular mg %

Mezclar.

Leer el % de Transmitancia a 540, colocando a 0 con agua destilada.

A= 2 log T

AM

1
http://es.wikipedia.org/wiki/Archivo:Electromagnetic_spectrum-es.svghttp://es.wikipedia.org/wiki/Archivo:Electromagnetic_spectrum-es.svg


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Nombre del Alumno(s):---------------------------------------------------------------------------------------------------------------

Grupo:---------------------------------- Fecha: ------------------------------

CURVA DE CALIBRACION

1.-Calcule las concentracion es en mg de las diluciones de los colorantes utilizados.

2.- Grafique en papel milimetrado A(DO) vs Concentraciny en papel semilogartmico T vs Concentracine interprete.

%T

3.- Calcular el Factor de Calibracin: Concentracin

A (DO)

4.- Calcular la concentracin de una muestra problema, haciendo uso del F.C. y la curva de calibracin.

--------------------------------------------- -------------------------------------- -----------


ConcentracinConcentracin

A


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Las enzimas son protenas que intervienen en las reacciones bioqumicas, acelerando la velocidad de la reaccin hasta su punto de

equilibrio.

ACTIVIDAD ENZIMATICA

Es la capacidad de una enzima de acelerar una reaccin qumica.

Se puede expresar de diversas maneras:

(a)

Desaparicin de un sustrato (S)(b) Formacin de producto (P)

(c) Modificacin de cofactores (C)

E + S E S E + P

c' e''

Diversos factores modifican la actividad enzimtica:

1.

pH

2. Concentracin de la enzima

3. Concentracin del sustrato

4. Tiempo de incubacin

5. Temperatura

6. Inhibidores y activadores.

Para la prctica buscamos el efecto de la pepsina, enzima proteica, sobre la albmina. La mayor actividad enzimtica se demostrar

por desaparicin del sustrato (menor turbidez de la albmina por su transformacin en aminocidos).

EXPERIENCIA NRO. 1

EFECTO DEL pH

Cada enzima tiene un pH ptimo de trabajo. Para demostrar el pH ptimo de la pepsina, trabajaremos con 6 tubos de acuerdo al

siguiente esquema:

TUBO Nro. 1 2 3 4 5 6 B

PH 1.0 1.5 6.0 9.5 11.5

Albmina : ml 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0

HCl 1N : ml 2.0 0.5

CO3Na210% : ml 0.5 2.0

Agua dest. : ml 1.5 2.0 1.5 5.0

Pepsina 1% : ml 20

Incubar los Tubos del 1 al 6 a 37C x 5

K1

K2

K3

K4


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Aadir rpidamente del tubo N6; 3ml de pepsina a los tubos N 1,2,3,4 y 5. Mezclar, incubar 37 x 5'

Leer D.O en el espectrofotmetroa 420nm de los tubos N1,2,3,4 y 5 y el tubo Blanco(B). Llevando a cero el instrumento con un

blanco de agua destilada.

Restar la lectura del tubo Blanco (B) menos la lectura de cada uno de los 5 tubos. La diferencia ser asumida como actividad

enzimtica.

EXPERIENCIA NRO. 2

EFECTO DE LA CONCENTRACION DE LA ENZIMA

Demostrar que la velocidad de la reaccin es directamente proporcional a [E]cuando la concentracin del S es constante. Preparar el

experimento de acuerdo al siguiente esquema:

TUBO Nro. B 1 2 3 4 5

Albmina : ml 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0

HCl 1N : ml 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5

Agua dest. : ml 4.5 4.0 3.5 2.5 1.5

Pepsina 1% : ml 10.0

Incubar los Tubos a 37C x 5'. Aadir la pepsina del tubo 5 a los tubos 1 al 4 segn el sgte. esquema:

TUBO Nro.1 B 1 2 3 4

Pepsina incubada 0.0 0.5 1.0 2.0 3.0

Mezclar, incubar a 37C x 5'.Detener la reaccin colocando los tubos en bao de hielo. Leer las D.O en el espectrofotmetroa 420nm.

Llevando a cero el instrumento con un blanco de agua destilada.

La diferencia de las absorbancias entre el tubo Blanco y la lecturas de los otros tubos nos indicar la actividad enzimticca para cada

tubo.|

EXPERIENCIA NRO. 3

EFECTO DE LA T

El incremento de la temperatura acelera la velocidad de las reacciones qumicas por un aumento en nmerode colisiones efectivas

entre los elementos reaccionantes, sin embargo todo incremento de temperatura por encima de la velocidad mxima de reaccin,

produce una desnaturalizacin progresiva de la enzima.

Para la experiencia, prepararemos 2 series de 5 tubos cada una.

Serie N1

TUBO Nro.(1 serie) 1a 2a 3a 4a 5a Blanco

Albmina : ml 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0

HCl 1N : ml 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 -

Agua dest. : ml 3.5 3.5 3.5 3.5 3.5 4.0

Serie N2

TUBO N ro.(2 serie) 1b 2b 3b 4b 5b

Pepsina 1% : ml 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0

Incubar por 5los tubos de acuerdo al siguiente esquema de temperaturas:

TUBO Nro. 1a-1b 2a-2b 3a-3b 4a-4b 5a 5b

T.C 0C Tamb 37 70 37 100Agregar el contenido de los tubos 1b,2b,3b,4b y 5b a sus respectivos tubos 1a,2a,3a,4a y 5a .


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Luego incubar a las T correspondientes 0C, Tamb, 37C, 70C y 100C a cada tubo por 5 minutos.

Colocar los tubos en bao de agua helada para detener la reaccin. Leer D.O. en el espectrofotmetroa 420nm. Llevando a cero el

instrumento con un blanco de agua destilada.

La actividad enzimtica se encontrar restando la lectura del tubo blanco (B) menos la lectura de los otros 5 tubos.

EXPERIENCIA NRO. 4

EFECTOS DE LA CONCENTRACION DEL SUSTRATO

Si aumentamos progresivamente la concentracin del sustrato, aumentaremos la velocidad enzimtica (velocidad inicial) hasta un

punto en que la velocidad llega a una meseta y no se modificar aunque sigamos aumentando el sustrato (saturacin).

Preparar 8 tubos de acuerdo al siguiente esquema:

TUBO Nro. 1 2 3 4 5 6 7 8

Albmina : ml 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 -

HCl 1N : ml 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 -

Agua dest. : ml 8.0 7.0 6.0 5.0 4.0 3.0 2.0 -

Pepsina 1% : ml 5.0

Mezclar. Leer los tubos 1,2,3,4,5,6,7. Considerar las absorbancias como lectura inicial.

Luego incubar los 8 tubos a 37 x 5'.

Aadir 0.5ml de pepsina a cada tubo (del tubo 8 a los tubos 1,2,3,4,5,6 y7) Mezclar.

Incubar 5' a 37C.

Detener la reaccin en un bao de hielo.

Leer D.O en el espectrofotmetroa 420 nm. Considerar las absorbancias como lectura final.

Hacer la diferencia:

Actividad Enzimtica = Lectura Inicial Lectura Final

El resultado de sta diferencia se considerar como actividad Enzimtica.


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Nombre del Alumno(s):---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

Grupo:--------------------------------- Fecha: ------------------------------------

1. Usando los valores de la actividad enzimtica(D.O) obtenidos, Grafique:

EFECTO DEL pH

Act. Enz.

pH

Interpretacin:___________________________________

________________________________________________

________________________________________________

__

EFECTO

DE LA T

Act. Enz.

T

Interpretacin:___________________________________

________________________________________________

________________________________________________

EFECTO DE LA CONCENTRACION DE LA ENZIMA

Act. Enz.

[E]

Interpretacin:___________________________________

________________________________________________

________________________________________________

______________________________________

EFECTO DE LA CONCENTRACION DEL SUSTRATO

Act. Enz.

[S]

Interpretacin:___________________________________

________________________________________________

________________________________________________

__


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FACULTAD DE MEDI CINA GUIA DE BIOQUIMI CA Y NUTRICIN


2.

Determine los valores del Km y Vmax de una inhibicin competitiva y no competitiva de una enzima que mostr los si

guientes datos

experimentales:

S

(mM)

V

1

, sin inhibidor

(mmol.min

-1

)

V

2

, con inhibidor

(mmol.min

-1

)

3,0 4,58 3,66

5,0 6,4 5,12

7,0 7,72 6,18

9,0 8,72 6,98

11,0 9,5 7,60

Grafique la curva de

--------------------------------------------- -------------------------------------- -----------



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INTRODUCCION

El almidn es un polmero de glucosa y se caracteriza por dar un color azul con una solucin de yodo. Estconstituido por amilosa (15-

20%) y amilopeptina (80-85%) ambos constituyentes son hidrolizadas por la alfa-amilasa salival y pancretica produciendo maltotriosa, maltosa y

dextrinas. La presencia de azcares reductores se identifican por la formacin de Cu2O en presencia del reactivo de Benedict.

OBJETIVO

a) Determinar la accin de la amilasa sobre el almidn.

b)

Determinar sustratos y productos producidos por accin de la amilasa salival.c) Efecto del pH sobre la amilasa salival.

HIDRLISIS DEL

ALMIDON (DIGESTION)

Haciendo uso de cuatro tubos, seguir el siguiente esquema:

TUBO N 1 2 3 4

ALMIDON 1%; ml 2.0 2.0 2.0 2.0

BUFFER FOSFATO pH 6.8:ml 1.0 1.0 1.0 -

HCL O,3N : ml - - - 3.4

CL Na 0,9%: ml 3.0 2.4 - -

Agua dest.:ml - - 2.4 -

Bao Mara 37 x 5

Amilasa Salival: ml - 0.6 0.6 0.6

Mezclar, Incubar en Bao Mara 37C x 20

A. DETERMINACION EL SUSTRATO

TUBOS N 5 6 7 8

DIGERIDO DEL TUBO 1: ml 0.5 - - -

DIGERIDO DEL TUBO 2: ml - 0.5 - -

DIGERIDO DEL TUBO 3: ml - - 0.5 -

DIGERIDO DEL TUBO 4: ml - - - 0.5

H CL 0.05N : ml 5 5 5 5

Sol. de Lugol: ml 0.5 0.5 0.5 0.5

Dejar en reposo por 15 minutos. Leer al fotocolorm etro con filtro rojo (660nm)

B. DETERMINACION DEL PRODUCTO

TUBOS 9 10 11 12 13

DIGERIDO DEL TUBO 1: ml 0.5 - - - -

DIGERIDO DEL TUBO 2: ml - 0.5 - - -

DIGERIDO DEL TUBO 3: ml - - 0.5 - -

DIGERIDO DEL TUBO 4: ml - - - 0.5

SOLUCION DE GLUCOSA 1%: ml - - - - 0.5

SOLUCION BENEDICT : ml 2 2 2 2 2

Mezclar, Incubar en Bao Mara a 100C x 5Enfriar en agua helada e interpretar.


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REACCION DE BENEDICT:

TUBOS 1 2 3 4

ml Reactivo de Benedict 5 5 5 5

Gotas Glucosa 0.1 M 8 - - -

Gotas Fructosa 0.1 M - 8 - -

Gotas Maltosa 0.1 M - - 8 -

Gotas Sacarosa 0.1 M - - - 8

Mezclar, Incubar en Bao Mara a 100C x 5

Enfriar en agua helada e interpretar.


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Nombre del Alumno(s):--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

Grupo:-------------------------- Fecha: ----------------------------

1.- Determinacin del sustrato:

Tubo N 1 Color...........................................................................Interprete el resultado...........

Tubo N 2 Color.......................................................................... Interprete el resultado...........

Tubo N 3Color .......................................................................... Interprete el resultado...........

Tubo N 4Color......................................................................... Interprete el resultado.............

Reste las DO de los tubos de aquel que tuvo la DO ms alta y grafique:

a) Actividad0.500 b) Interpretacin de la curvaEnzimtica

0.400

0. 300

0.200

0. 100

5 6 7 8 Tubo

2.- Determinacin del producto:

a) Tubo N 1 Color........................................................................ Interprete el resultado...........

Tubo N 2 Color......................................................................... Interprete el resultado...........

Tubo N 3 Color......................................................................... Interprete el resultado...........

Tubo N 4 Color.......................................................................... Interprete el resultado...........

b) Identifique cul es la condicin para una mejor hidrlisis enzimtica del almidn soluble.

3.- Interprete la reaccin de los carbohidratos frente al reactivo de Benedcit

Carbohidrato Glucosa Fructosa Maltosa Sacarosa

Reaccin ( + - )

----------------------------------- ------------------------------------- ---------------



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La prueba de tolerancia a la glucosa (TTG) es empleada para evaluar pacientes en quienes se sospechan anormalidades del metabolismo de los

carbohidratos. Esto es particularmente til para la diabetes mellitus. La prueba de tolerancia a la glucosa por va oral es ms funcional , msconfiable y ms fcil de llevar a cabo que la prueba de tolerancia a la glucosa por va intravenosa. La secrecin de insulina como respuesta a la

administracin de glucosa es mayor debido a la estimulacin de la secrecin de hormonas entricas, las cuales a su vez estimulan la secrecin

de insulina.

OBJETIVO:

1 Determinar la concentracin de glucosa srica basal ( 0' ) y a los 30', 60', 90' y 120' despus de una sobrecarga oral de glucosa ( 75 g ).

2 Determinar el umbral renal de reabsorcin de glucosa

3 Presencia de Cuerpos Cetnicos

DETERMINACION DE GLUCOSA SERICA:

La glucosa oxidasa cataliza la oxidacin de la glucosa de acuerdo con la siguiente ecuacin:

El perxido de hidrgeno formado reacciona con 4 amino-antipirina y fenol en presencia de peroxidasa, formando una quinonaimina coloreada, la

cual es directamente proporcional a la concentracin de glucosa en sangre.

EXPERIMENTO 1

Determinar la concentracin de glucosa srica siguiendo el siguiente esquema:

N Tubo 1 2 3 4 5 6 7

ST. Glucosa: 200 mg | dl: (ul) - 10 - - - - -

Suero : 0' (ul) - - 10 - - - -

30' (ul) - - - 10 - - -

60' (ul) - - - - 10 - -

90' (ul) - - - - - 10 -

120' (ul) - - - - - - 10

Reactivo de glucosa: ml 1 1 1 1 1 1 1

1. Mezclar. Incubar 37 C x 10' o 20 minutos a Tambiente

2. Leer D.O. en el espectrofotmetro a 505 nm, frente al Bl


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CALCULO.- Haciendo uso del factor de calibracin expresar la glucosa en mg/dl

VN = 70 - 110 mg/dl

EXPERIMENTO 2

Para determinar la presencia de glucosa en orina, seguir el siguiente esquema:

Tubo N 1

Orina ml 0.5

React. Benedict. ml 2.0

1. Mezclar. Colocar a 100 C x 5'.

2. Enfriar ( hielo). Observar la formacin de precipitado.


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INFORME PRACTICA N 6


Grupo: ------------------------------------------------------------------ Fecha: ---------------

1.- Calcule y grafique la concentracin de glucosa (mg/100ml) en condiciones basales y 30`, 60`, 90`, 120`del TTG del sujeto normal y con DM.

2.- Compare las curvas obtenidas e interprtelas.

CURVA DEL T.T.G.

3.-Explique la formacin de Cu2O en la orina del sujeto con DM.

--------------------------------------------------------- ------------------------------------- --------


Glucosamg | dl

Tiempo : minutos


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El sujeto diabtico se caracteriza por presentar alteracin del metabolismo de los carbohidratos, protenas y de los lpidos. La liplisis produceuna elevacin de los cidos grasos libres y consecuentemente el incremento de cuerpos cetnicos. La cetonemia ocasiona una disminucin

del pH sanguneo lo cual ocasiona una disminucin de la concentracin del HCO3- sanguneo. (Acidosis diabtica)

DETERMINACIN DEL BICARBONATO

FUNDAMENTO:

El CO3H srico o plasmtico es neutralizado con HCl desprende CO2. El cido que no reacciona se determina a travs de una titulacin con

NaOH, obtenindose por diferencia la concentracin de HCO3-

PROCEDIMIENTO

Se usa suero o plasma obtenido en anaerobiosis , empleando aceite mineral en el momento de su obtencin.

I. NEUTRALIZACION DEL BICARBONATO

Colocar en un beacker o matraz los siguientes componentes:

a) 5 ml de HCl 0.01N

b) 1 ml de suero plasma

c) 1 gota de alcohol caprlico.

d) Agitar suavemente por rotacin por 2

e) Incubar 15 a 37C

f) Aadir 20 ml agua destilada hervida y fra.

g)

Aadir 3 gotas del colorante fenosulfonthaleina(PSP).

II. TITULACION

Usando una bureta, agregar solucin de NaOH 0.01 N hasta que el color del colorante cambie de color amarillo(ph 6.8) al rosado (ph

8.2)

III.

EXPRESION

Calcular los m Eq/L del sujeto normal y compararla con un sujeto diabtico descompensado

VN= 26-32 m Eq/L

IV. CETONURIA

FUNDAMENTO

La presencia de cuerpos cetnicos se determina por el test de Rothera, frente al reactivo de nitroprusiato de Na forma un anillo

prpura rojizo.

PROCEDIMIENTO

En un tubo de prueba colocar

a) 1 ml orina

b) 1 gr de SO4(NH4)2

c) 3 gotas de nitroprusiato de Na al 10%

d) Mezclar

e) 1 ml de NH4 (OH) en zona

Observar:

Aparicin de un anillo prpura o morado = (+)


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INFORME DE PRACTICA N. 7

Nombre del alumno(s) ......................................................................................

Grupo ..............................................

DETERMINACIN DE BICARBONATO

1. Calcule los mEq/L de HCO-3 del sujeto normal

2. Calcule los mEq/L de HCO-3 del sujeto D.M.

3. Compare e interprete los resultados.

DETERMINACION DE CETONURIA

COMENTARIO

1. Explique la disminucin del bicarbonato en el sujeto diabtico

2. Interprete, la formacindel anillo rojo-violceo (test de rothera) en la orina del sujeto diabtico.

--------------------------------------------------------- ------------------------------------- -----------



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La enfermedad cardiaca coronaria ( E.C.C.) sigue siendo la principal causa de morbilidad prematura. Un factor de riesgo importante es el

incremento del colesterol plasmtico. Sin embrago el colesterol por si mismo no es un elemento de prediccin en el paciente individual. Otros

parmetros lipdicos como el HDL y triglicrido tambin son necesarios para cuantificar el riesgo de ECC con mayor precisin.

Aplicando la formula de Friedewald podemos calcular las otras lipoprotenas sricas VLDL y LDL que completan la informacin de prediccin de

alteracin vascular.

OBJETIVO

a) Determinar la concentracin de colesterol total, triglicrido, HDL, LDL y VLDL.

b) Determinar el RC a travs del perfil lipdico ( segn Castelli )

DETERMINACION DE COLESTEROL TOTAL

Fundamento

El colesterol se determina por accin de la enzima colesterol ster hidrolasa y colesterol oxidasa. La primera libera el colesterol de los esteres de

colesterol, y la segunda oxida el colesterol libre producindose perxido dehidrogeno, el cual en presencia de la enzima peroxidasa reacciona

con el sistema cromognico dando origen a un compuesto coloreado que absorbe 505nm.

Colesterol ester CEH Colesterol + cidos grasos

Colesterol + O2 CHOD Colest-4-en-3-ona + H2O2

2H2O2 + 4-AAP + p-HBA PA P Comp. Coloreado + 4H2O

Tubo N Blanco Standard Muestra 1 Muestra 2

St-Colesterol: 200 mg/dl - 30 ul - -

Suero Pb - - 30 ul 30 ul

Reactivo Color 3.0 ml 3.0 ml 3.0 ml 3.0 ml

Mezclar. Incubar 10 minutos a 37C o 20 minutos a Tambiente

Leer en espectrofotmetro el St y Pb frente al BL a 505 nm.

Expresin

Haciendo uso del factor de Calibracin, expresar el colesterol en mg/dl :

VN = 160 - 200 mg / dl


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DETERMINACION DE TRIGLICERIDOS

Fundamento

Los triglicridos presentes en la muestra, segn las reacciones acopladas descritas a continuacin, son un complejo coloreadoque se cuantifica

por espectrofotometra.

Triglicridos + H20 lipasa Glicerol + cidos grasos

Glicerol + ATP Glicerol-Kinasa Glicerol-3-P + ADP

Glicerol 3 fosfato + O2 GPO Dihidroxiacetona fosfato + H2O2

2H2O2+ 4-aminoantipirina + 4-clorofenol Peroxidasa Quinonaimina

Esquema


St-Triglicrido: 200 mg| dl - 30 ul - -

Suero -Pb - - 30 ul 30 ul

Reactivo Color 3.0 ml 3.0 ml 3.0 ml 3.0 ml

Agitar. Incubar 10 minutos a 37C o 20 minutos a TambienteLeer en espectrofotmetro el St yPb frente al BL a 520 nm.

Expresin

Haciendo uso del factor de Calibracin, expresar los triglicridosen mg/dl :

VN = 60 - 200 mg / dl

DETERMINACION DE COLESTEROL - HDL

Fundamento del Mtodo

El HDL - Colesterol es obtenido precipitando selectivamente las lipopotrenas LDL y VLDL, quedando el primero en solucin.

El HDL - Colesterol en solucin se determina por accin de las enzimas Colesterol ester hidrolasa y Colesterol oxidasa. La primera libera el

colesterol de los steres de colesterol, y la segunda oxida el colesterol libre, producindose perxido de hidrgeno, el cual en presencia de la

enzima peroxidasa reacciona con el sistema cromognico dando origen a un compuesto coloreado que absorbe a 505 nm.

Colesterol ester CEH Colesterol + cidos grasos

Colesterol +O2 CHOD Colest-4-en-3-ona + H202

2H2O2+ 4-AAP + p-HBA PAP Comp. Coloreado + 4H2O


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Tcnica

Precipitacin: Agregar en un tubo de centrfuga 0.5 ml de reactivo precipitante y 0.2 ml de muestra, mezclar y esperar 15 minutos a temperatura

ambiente. Centrifugar 15 minutos a 3000 r.p.m. o 3 minutos a 10.000 r.p.m

Colorimetra.-

LLevar el reactivo colesterol CHOD- PAP a la temperatura que se realizara el ensayo.


Sobrenadante (ml) - - 0.30 0.30

Standard (ml) - 0.03 - -

Reactivo (ml) 3.00 3.00 3.00 3.00

Mezclar e incubar 10 minutos a 37 o 20 minutos a temperatura ambiente (20 a 25 C). Leer las absorbancias a 505 nm. llevando a cero el

espectrofotmetro con el blanco del reactivo. El color resultante es estable por lo menos 30 minutos.

Clculos

.-

HDL-Colesterol : (mg%)=F.D. x D.O. Pb

FD =76.5/D.O standard

Ecuacin de Friedewald:

VLDL (mg/dl) = TG

5

Esta frmula es vlida cuando los Tg son menores de 400 mg/dl.

Observaciones

- Despus de centrifugar, el sobrenadante debe ser claro.

- Sueros con concentraciones de triglicridos superior a 1000 (mg/dl) deben diluirse con suero fisiolgico antes de precipitar. El

resultado obtenido se multiplica por el factor de dilucin.

Interpretacin del Perfil Lipdico Mnimo

LIPIDO

(mg/dl)

DESEABLE RIESGO POTENCIAL ALTO RIESGO

CT < 200 200-239 >= 240

LDL < 130 130-159 >= 160

HDL : Hom : > 35 25-35 < 25

Muj : > 45 40-45 < 40

TG < 200 > 200 > 200 (*)

(*) Si se acompaa de HDL < 35 mg/dl o relacin CT/HDL >5

LDL-C (mg/dl)=C.Tot.(mg/dl)-HDL(mg/dl)-VLDL. (mg/dl)


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Nombre del Alumno(s)--------------------------------------------------------------------------------------------------------------

Grupo: ----------------------------------------------------------------------- Fecha: ---------------

1. Calcular , en el sujeto normal y patolgico , la concentracin en mg/ dl del :

C T :

T G :

H D L :

L D L :

VLDL :

2. Calcular el R. C.:

CT/HDL :

LDL/HDL :

3. Describa el perfil electrofortico de las lipoprotenas plasmticas:

Origen

( - ) ( + )

--------------------------------------- ---------------------------------------------------------- --------------



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Las alteraciones del Metabolismo de la bilirrubina pueden evaluarse haciendo su dosaje en suero o plasma sanguneo en forma fraccionada.

Dichas alteraciones se deben a:

1. - Aumento de la produccin del pigmento (hemlisis: incremento de la destruccin de los hemates circulantes)

2. - Disminucinde la captacin heptica de la bilirrubina (medicamentosa, sndrome de Gilbert, dficit de glucoronil transferasa).

3. -Alteracin de la conjugacin heptica, disminucin de la actividad de la glucoronil transferasa ictericia neonatal (ictericia fisiolgica del recin

nacido).

4. - Excrecin deficiente (obstruccin intraheptica o extraheptica clculos).

Por ltimo permite el estudio de las enfermedades hepatocelulares: hepatitis o cirrosis, enfermedades en las cuales suelen estar interferidas

todos los pasos del metabolismo de la bilirrubina (captacin conjugada y excrecin).

OBJETIVO:

a) Determinar la concentracin de Bilirrubina Total, Directa e Indirecta

b) Determinar Urobilingeno y Urobilinas

Mtodo de Malloy y Evelyn

Fundamento:

La bilirrubina reacciona especficamente con el cido sulfanlico diazotado produciendo un pigmento color rojo violceo (azobilirrubina) que se

mide fotocolorimtricamente a 530 nm.

Si bien la bilirrubina conjugada (directa) reacciona directamente con el diazorreactivo, la bilirrubina no conjugada (indirecta) requiere la presencia

de un desarrollador acuoso que posibilite su reaccin. De forma tal que, para que reaccione la bilirrubina total (conjugada y no conjugada)

presente en la muestra, debe agregarse benzoato de cafena al medio de reaccin.

VALORES NORMALES:

BT = 0.3 1.1 mg/dl

BD (Conjugada) = 0.1 0.4 mg/dl

BI = 0.2

0.7 mg/dl

PROCEDIMIENTO:

Preparar St. 2mg% .D.O. st =0.09

Blanco Directa Total

Muestra 200 ul 200 ul 200 ul

Agua Destilada 2.4 ml 2.4 ml -

Desarrollador - - 2.4 mlReactivo sulfanlico

200 ul - -

Diazorreactivo - 200 ul 200 ul

Mezclar por inversin suave e Incubar por 5 minutos a T ambiente. Leer las absorbancias a 530nm, llevando a cero el instrumento con un

blanco de agua destilada. La bilirrubina directa debe leerse exactamente a los 2 minutos.

CALCULOS:

FC = Conc. St

Abs St.

BT = FC x (Abs Total Abs Blanco) = mg/dl

BD = FC x (Abs D irecta

Abs Blanco) = mg/dl

BI = BT

BD = mg/dl


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Determinacin de Urobilingeno y Urobilinas:

REACCION DE EHRLICH

En un tubo de prueba se colocan 5 ml de orina. Se aade 0.5 ml de reactivo de Ehrlich.Si hay urobilingeno en cantidad anormales, a los 3 minutos se presenta un color rojo cereza.

REACCION DE GMEL IN

En un tubo de prueba se coloca 2 ml de orina y con una pipeta se hacellegar al fondo 2 ml de acido ntrico nitroso, procurando que se formedos capas.

En la lneas de unin aparecen una serie de colores, comenzando con verdeque luego puede cambiar a azul, violeta, anaranjado, si existe bilirrubina en la orina. En la orina normal solo aparecen bandasde color anaranjado o bruno, debido a la oxidacin del urocromo.


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Nombre del Alumno(s): --------------------------------------------------------------------------------------------------------------

Grupo: ----------------------------------------------------------------------- Fecha: ---------------

1.

Calcule los mg/dl de Bilirrubina Total, Bilirrubina Directa y Bilirrubina Indirecta en cada sujeto estudiado

2. Explique bioqumicamente, la reaccin deconjugacin de la bilirrubina directa

3. Indique cuales son los pigmentos biliares

--------------------------------------- ---------------------------------------------------------- --------------



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La reaccin de transaminacin consiste en la transferencia de un grupo amino de un aminocido a un cetocido con la consiguiente formacin de

nuevos aminocidos y cetocidos.El objetivo es entender como el organismo a travs de este proceso los carbohidratos se transforman en

aminocidos o como los aminocidos se interconvierten.

Las enzimas que catalizan estas reacciones se llaman transaminasas, que tienen como coenzima al fosfato de piridoxal (B6). La glutmico

pirvico y oxalactico son de importancia en el diagnstico de enfermedades hepticas y cardiacas toda vez que se produce aumento en el

torrente circulatorio tras la muerte celular del rgano.

COOH COOH

| |

CH

2

CH

2

| |

CH

2

CH

2

| |

HC NH

2

C=O

| |

Ac Glutmico COOH COOH Ac. Cetoglutarato

PO

4

B

6

COOH

GLUTAMICO

OXALACETICA

COOH

|

TRANSAMINASA

|

CH

2

CH

2

| |

C=O HC NH

2

| |

Ac Oxalactico COOH COOH Ac Asprtico

1) REACCION DE TRANSAMINACION

Para demostrar la reaccin de la transaminacin, se extraer la enzima de homogenizado de hgado de pollo y se aplicar a el siguiente

esquema :

Tubo N 1 1 2

PIRUVATO 0.2 M (ml) 0.3 0.3

GLUTAMATO 0.2 M (ml) 0.3 0.3

ARSENITO 0.2 M (ml) 0.4 0.4

ENZIMA ACTIVA 0.2 M (ml) 0 1

ENZIMA INACTIVA 0.2 M (ml) 1 0

Incubar a 37 x 45min . Agregar 6 ml. alcohol etlico en cada tubo centrifugar y usar los sobrenadantes para la cromatografa.Demostrar si hubo transaminacin, utilizando el proceso de cromatografa ascendente.


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2) EVIDENCIA DE LA TRANSAMINACION POR CROMATOGRAFIA:

Cromatografa ascendente en placas con Silicagel:

Por cromatografa en capa fina se entiende la tcnica capaz de separar los componentes de una m uestra entre dos fases, una m vil, que suele

ser lquida y otra estacionaria, que puede ser lquida o slida, y que est dispuesta como una capa de material poroso de un espesor

determinado, colocada sobre un soporte plano inerte, de vidrio o de aluminio. Dos principios fisico-

qumicos participan en esta separacin:

particin por solvente y adsorcin.

Los aminocidos Alanina, Ac. As prtico, y Ac. Glutmico, se van a separar en funcin de sus diferentes solubilidades entre la f ase mvil lquida,

constituida por propanol:agua (80/20), y la fase estacionaria, tambin lquida al estar c onstituida por el agua ads orbida por el material slido de la

capa fina, en este caso celulosa.

Por tanto, el fundamento de la separacin implica que los aminocidos cuya cadena lateral (R) tenga un carcter ms apolar, tendrn tendencia

a desplazarse con la fase mvil, mientras que los aminocidos que sean polares, ya sean con carga o sin carga, sern retenido

s por la fase

estacionaria. Ello es as, porque la fase mvil est formada por solventes que son ms apolares que el agua, que es el solvente de la fase

estacionaria.

2. Cmo realizar una cromatografa en capa fina?

Primera etapa: Aplicacin de las muestras a analizar.

La primera precaucin que hay que tener en el m anejo de la placa

es la de procurar no tocar con los dedos la capa de celulosa. La

placa fina se coge siempre por los bordes de la misma.

Se coloca la placa encima de la mesa, y con un lpiz se traza una

lnea muy dbil a unos 1,5 cm del bord e inferior de la placa,

procurando daar lo mnimo posible la c apa de celulosa.


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En la lnea se sealan dbilmente cuatro puntos, distribuidos equitativamente a lo ancho de la placa.

En cada punto de ellos se aplica cada uno de los muestras: patrn o standares y las muestras problemas con probable transaminacin. La

aplicacin se realiza mediante capilares.

La segunda precaucin a considerar es la de no contaminar las disoluciones de los aminocidos patrn y la muestra problema. P ara ello, se

utiliza un capilar para cada uno de las soluciones a aplicar. El capilar se introduce en el tubo de m uestra y por capilaridad va a a scender la

muestra a aplicar.

Se aplica en la placa una gota de la muestra, procurando que se extienda lo menos posible y no dae la capa. Se seca a continuacin con el

secador de aire. Se aplica una segunda gota y se v uelve a secar. Esta operacin se repite para cada unas de las tres muestras restantes.

Segunda etapa: Elucin de las m uestras.

La cromatografa se realiza en la cubeta o cmara de desarrollo. La cubeta contiene un volumen de fase mvil, cuya altura de lquido debe de

estar siempre por debajo de la lnea de aplicacin de las m uestras.

La tcnica de elucin que se va a utilizar para la realizacin de la cromatografa es la ascendente, puesto que la fase mvil asciende por

capilaridad por los poros e intersticios de la celulosa.

La placa que contiene las muestras se introduce en la cubeta. Se coloca la tapa de la cubeta y se espera que la fase m vil ascienda por la capa

hasta que alcance una altura de hasta unos 2 -3 cm del ex tremo opuesto a la parte sumergida. Una vez realizada la elucin, se abre la tapa de la

cubeta y se saca la placa.


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Tercera etapa: Secado y visualizacin de los aminocidos.

Inmediatamente que se ha sacado la placa, con el lpiz se m arca en un borde el nivel alcanzado por el solvente y que constituye el frente

de solvente (FS). Se introduce en la estufa durante unos 5 min para que se seque. A continuacin, con ayuda de un pulverizador y una

solucin de ninhidrina al 0.1

en butanol visualizar

los aminocidos

estandart y de la muestra problema.

Calculo de los valores del Rf.

Rf = distancia (cm) recorridos por la sustancia

distancia (cm) recorridos por el solvente (FS)


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Nombre del Alumno(s): --------------------------------------------------------------------------------------------------------------

Grupo: ----------------------------------------------------------------------- Fecha: ---------------

PROCESO DE TRANSAMINACIN:

1.-

Indique, la reaccin de transaminacin producida en la prctica realizada

2.- Medidas de los Rf

, identificacin de am inocidos en las cromatolmi

nas obtenidas

e interpretacin de los resultados

3.-

Qu

relacin existe entre las transaminasas y las enfermedades hepticas?

4.- Como se encuentran las transaminasas en el infarto agudo de m iocardio?

Discusin y/o com entarios

--------------------------------------- ---------------------------------------------------------- --------------



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El objeto de la presente prctica es evaluar el metabolismo proteico empleando el Balance Nitrogenado. Explicaremos losparmetros mas representativos de la excreta nitrogenada en general.

Se evala los egresos de N mediante el nitrgeno ureico urinario en 24 horas y la excrecin de nitrgeno protenico urinario en24 horas empleando la formula de nitrgeno total estimado (NTE).

FORMULA:

BN = N INGERIDO( NTE + 2 )

NTE = g. N. UREICO + g. N.CREATI NI NI CO

2 = Excrecin fecal (g / 24 hr s.)N. I ngeri do = g. de protenas

6.25

Nota : Si el paciente presenta Albuminuria,aadir a la excreta : Protena urinaria6.25

PROCEDIMIENTO:DETERMINACIN DE CREATININA URINARIA.-FUNDAMENTO:

La creatinina en presencia del cido pcrico en medio alcalino forma un complejo de color amarillo anaranjado cuya intensidadde color es proporcional a la concentracin de creatinina.(R. JAFFE).

NTUBO BL ST Muestra 1 Muestra 2

ORINA 1/10 ml 0.04 0.04

AGUA ml 0.8 0.2 0.8 0.8

St. 1.5 mg/dl ml 0.2

R. Pcrico ml 1.6 0.8 1.6 1.6

Buffer Alcalino ml 0.4 0.2 0.4 0.4

Incubar a T ambiente por 20 min.y leer las Absorbancias a 505 nm.

Urinario 24 hs. Urinario 24 hs.


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Calculo:

Cr.Or ina (mg/dl)=Abs. Muestra x 150Abs. standard

Cr.Uri naria 24 hs = Cr.Orina (mg/dl) x Vol 24h(L) x 10

N Creatinni co en 24 hs.= Cr .Ur inar ia 24hs x 0.37

VN = 0.8 a 1.5 g. en 24hs

DETERMINACION DE UREA URINARI A.-

FUNDAMENTO:

La urea presente en la muestra, es desdoblada a amonio por accin de la enzima ureasa, segn la proposicin de Faucett yScott.

(NH2)2CO + 2H2O UREASA 2NH3+ CO2+ H2O

El amonio producido reacciona con salicilato e hipoclorito en medio alcalino, formndose un complejo de color verde; laintensidad del color producido es directamente proporcional a la cantidad de urea presente en la muestra y su absorvancia selee a 600nm (580 - 620).

TCNI CA:

Preparacin Reactivo de trabajo.-

Mezclar 1 ml. de Reactivo Salicilato + 1 gota (50uL) de Suspensin Ureasa. Preparar el volumen de reactivo necesariomanteniendo la proporcin (p.e. 30 ml. Reactivo Salicitato + 30 gotas (1.5 ml.) de Suspencin Ureasa). Mantener protegido dela luz.

El Reactivo de trabajo es estable por 30 das entre 2 y 8 C y protegido de la luz. Mantener en frasco color ambar.

Tcn ica: Nitrgeno Ureico en orina.

NTUBO Blanco Standard Muestra 1 Muestra 2

Orina:1/100 (ml) 0.02 0.02

St:66mg/dl (ml) 0.02

Reactivo de trabajo (ml) 2.0 2.0 2.0 2.0

Mezclar incubar 3' a 37C o 5 a T ambiente

Reactivo de Hipoclorito (ml) 2.0 2.0 2.0 2.0

Mezclar incubar 5' a 37C o 10 a T ambiente

Leer las Absorvancia a 600 n.m.

Expresin: mg urea/24 hs.


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Clculo:

a) Factor = 66

D.O. St

b)Urea Ur /24h= F actor x D .O. Pb x 100x Vol.24 hs(ml)100

c) Nitrgeno Urico 24hs.= Urea Ur/24hs x 0.455

RANGO DE REFERENCIA

UREA : 15 a 30g /24hs.N. URICO : 7 a 14g /24hs.

BN =IngestaNitrogenada - [N urico + N creatinnico + 2]

BN = g N / 24hs

VARIACIONES EN ALGUNOS CONSTI TUYENTESNITROGENADOS URINARIOS CON DI FERENTE INGESTAPROTICA

Dieta Proteica normal(mixta)

Dieta rica en Protenas Dieta pobre enProtenas

g. %N g %N g %N

N. Urinario Total 13.2 100 23.28 100 4.2 100

N. Proteico 82.5 145.5 26.25

Urea (N) 11.36 86.1 20.45 87.9 2.9 69.1

Amoniaco (N) 0.4 3.0 0.82 3.5 0.17 4.0

Creatininico (N) 0.61 4.6 0.64 2.7 0.6 14.3Urico (N) 0.21 1.6 0.3 1.3 0.11 2.6N indeterminado 0.62 4.7 1.07 4.6 0.42 10.0


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INFORME PRACTICA N11


Grupo: ---------------------------------------------------------------------- Fecha: ---------------

Determine el Balance Nitrogenado del sujeto Normal y del paciente empleando la siguiente frmula:

BN = Ingesta Nitrogenada- [gN urico + gN creatinnico + 2]

INTERPRETACIN Y DIAGNOSTICO NUTRICIONAL:

-------------- ----------------- ----- --------- ---------------- ------------- -----------Firma del Alumno Firma del Profesor Nota


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INTRODUCCION.-

- Utilizamos el metabolismo proteico (sntesis y degradacin) para evaluar el estado nutricional de unapersona.

- Sealamos didcticamente dos compartimientos de distribucin de las protenas en el organismo:a) Compartimiento Proteico Visceral.b) Compartimiento Proteico Somtico o esqueltico.

Las protenas del compartimiento visceral se evalan mediante los niveles de Transferrina, Pre - Albmina, ProtenaTotal y Albmina en suero, que por su relativamente corto tiempo de vida (Albmina 20 das) rinde una estimacinrazonable del compartimiento proteico visceral. En esta prctica utilizaremos la Protena total y Albmina srica.

Las protenas del compartimiento somtico esqueltico la evaluaremos mediante la excrecin de la creatinina urinaria24 hrs./Talla, relacin que es fiel ndice de masa muscular esqueltica.

Asi mismo mediremos el Peso y la Talla para evaluar la masa corporal total.

1) DETERMI NACION DE LA PROTEINA TOTAL.-

Fundamento:

Las protenas en presencia del reactivo de Biuret forman un complejo Biuret cuprosdico color azul violeta, que indicala presencia de enlaces peptdicos, cuya intensidad de color es proporcional a la concentracin de protena en lamuestra.

BL Muestra 1 M uestra 2 St

Agua destil. 20 ul

Suero 20 ul 20 ul

St. Prot. Tot 5.7 g/dl 20 ul

R. Color 2.0 ml 2.0 ml 2.0 ml 2.0 ml

Mezclar. Incubar 10 min a 37 C o 20 min a T ambiente. Leer 540 n.m.Clculos : Factor de Calibracin y Concentracin del Problema.

Valores Normales : 6-8 g/dl

2) DETERMI NACION DE ALBUM INA SERICA.-

BL Problema Problema St

Agua destil. 20 ul

Suero 20 ul 20 ul

St. Albmina 3.3 g/dl 20 ul

R. Color 2.0 ml 2.0 ml 2.0 ml 2.0 ml


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Mezclar. Incubar 3 min a Temperatura ambiente. Leer 620 nm.

Clculos : Factor de Calibracin y Concentracin del Problema.

Valores Normales : 3.5 a4.7 g/dl

3) DOSAJE DE CREATINI NA URINARIA..-

Empleremos el mismo mtodo usado para la creatinina urinaria de la prctica anterior. Dividir la excrecin urinaria24 hs. entre la Talla.

NTUBO BL ST Muestra 1 Muestra 2

ORINA 1/10 ml 0.04 0.04

AGUA ml 0.8 0.2 0.8 0.8

St. 1.5 mg/dl ml 0.2

R. Picrico ml 1.6 0.8 1.6 1.6

Buffer Alcalino ml 0.4 0.2 0.4 0.4

Incubar a T ambiente por 20 min.y leer las Absorvancias a 505 nm.

Calculo:

Cr.Ori na (mg/dl)=Abs. Muestra x 150Abs. standard

Cr.Uri naria 24 hs = Cr.Orina (mg/dl) x Vol 24h(L) x 10

Muestra 1: Muestra 2:

Peso : Peso :

Talla : Talla :

Relacin : Relacin :

Vol. Orina/24 h = Vol. Orina/24 h =


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Nomograma de Valoracin del Estado Nutr icional

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INFORME PRACTICA N12


Grupo: ---------------------------------------------------------------------- Fecha: ---------------

En el nomograma de valoracin del estado nutricional, marque :

El Indice Cr. Ur. / 24hs / Talla encontrado o interprete el diagnstico del paciente.

El Indice Peso / Talla encontrado e interprete el resultado.

El Indice Prot. Tot. Srica y albmina Srica encontrado e interprete.

DIAGNOSTICO FINAL.

-------------- ----------------- ----- --------- ---------------- ------------- -----------Firma del Alumno Firma del Profesor Nota


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Debido a que el estado nutricional del paciente juega un papel importante para determinar sucapacidad de tolerancia a la ciruga y a otros procedimientos teraputicos, la adecuada evaluacindel estado nutricional es de gran importancia. Las siguientes mediciones son valiosas en ladeterminacin del estado del paciente:

A.DI AGNOSTICO CLI NI CO.Los mejores elementos para un correcto diagnostico nutricional son una buena historia

clnica nutricional y un buen examen fsico. Ayuda de manera especial, el consignar en la

anamnesis el estado socio-econmico del enfermo y de los antecedentes patolgicos,especialmente la presencia de enfermedades debilitantes crnicas como la tuberculosispulmonar, diabetes mellitus, infecciones o parsitos intestinales.

Es importante consignar la historia diettica con una apreciacin semicuantitativa de laingesta calrico y proteica; el peso habitual en el estado de salud y el peso actual en estado deenfermedad, la fecha de inicio de la enfermedad, as como la fecha de inicio de sntomas que seasocian a la desnutricin, a saber; anorexia, nauseas, vmitos o diarreas. Se debe anotartambin la presencia de depresin como factor anorexigeno y la actitud familiar frente a laenfermedad, desde que la rehabilitacin debe ser psicolgica y orgnica.

Completa el diagnostico de desnutricin el examen fsico. La flacidez es caractersticas, conperdida de grasa y de la masa muscular de la cara, ojos hundidos que aparecen de mayortamao El trax adelgazado, con atrofia mamaria y desaparicin del tejido graso y muscular,

se observan las costillas y dificultad en los movimientos respiratorios. El abdomen mostrarahepatomegalia, edema, ascitis.

B.DI AGNOSTICO DE LABORATORIO.

B.1 Mtodos Antropomtricos.

B.1.1 Peso Corporal .-Los individuos cuyos estados nutricionales sean cuestionables debenser pesados (peso actual), debiendo adems buscarse en las tablas pertinentes el peso idealque corresponde a su talla. El peso ideal varia para una misma tala de acuerdo al sexo.

Mediante la confrontacin del peso actual del paciente con su peso ideal se puedeobtener el porcentaje del peso corporal ideal, utilizando la siguiente frmula:

Peso actual% Peso I deal = X 100

Peso ideal


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Se comparara este valor con la tabla 1. Esto nos dar el estado nutricional delpaciente. Debe recordarse, sin embargo, que el edema es uno de los efectos de lamalnutricin proteica y puede falsear una apreciacin cuantitativa.

La integridad orgnica y funcional del organismo no se compromete durante

perdidas medianas de peso y el equilibrio del organismo se restituye espontneamente. Lasperdidas extremas de peso, que suceden en enfermedades graves medicas o quirrgicas seacompaan de una mortalidad elevada, as por ejemplo: la mortalidad de un paciente que

sufre una prdida de peso de 20% o ms es el 37%, es contraste con el 3.5% en pacientescon prdidas de peso al 20%.

Valor Standard Estado Nutri cional

> 120 % - Obesidad

110-120 % - Sobrepeso

90-110 % - Normal

80-90 % - Desnutricin leve

70-80 % - Desnutricin moderada

< 69 % - Desnutricin grave

PESO IDEAL SEGN TALLA HOMBRES

Talla Peso Talla Peso Talla Peso

(cm) (Kg) (cm) (Kg) (cm) (Kg)1.45 51.9 1.59 59.9 1.73 68.71.46 52.4 1.60 60.5 1.74 69.41.47 52.9 1.61 61.1 1.75 70.11.48 53.5 1.62 61.7 1.76 70.81.49 54.0 1.63 62.3 1.77 71.61.50 54.5 1.64 62.5 1.78 72.41.51 55.0 1.65 62.9 1.79 73.31.52 56.6 1.66 64.0 1.80 74.21.53 56.7 1.67 64.6 1.81 75.01.54 56.8 1.68 65.2 1.82 75.8

1.55 57.2 1.69 65.9 1.83 76.51.56 57.9 1.70 66.5 1.84 77.31.57 58.6 1.71 67.3 1.85 78.11.58 59.3 1.72 68.0 1.86 78.5

Evaluacin de Peso


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PESO IDEAL SEGN TALLA MUJERES

Talla Peso Talla Peso Talla Peso(cm) (Kg) (cm) (Kg) (cm) (Kg)1.40 44.9 1.50 50.4 1.60 56.21.41 45.4 1.51 51.0 1.61 56.91.42 45.9 1.52 51.5 1.62 57.61.43 46.4 1.53 52.0 1.63 58.31.44 47.0 1.54 52.5 1.64 58.91.45 47.5 1.55 53.1 1.65 59.51.46 48.0 1.56 53.7 1.66 60.1

1.47 48.6 1.57 54.3 1.67 60.71.48 49.2 1.58 54.9 1.68 61.41.49 49.8 1.59 55.5 1.69 62.1

B.1.2.Indice de Masa Corporal (I MC).-Esta medida es la que predice mejor el porcentajede grasa corporal. Anteriormente para el diagnstico de obesidad se consideraban la edad,estatura, sexo y peso corporal; ahora se acepta el IMC que se obtiene dividiendo el peso(Kg) entre la altura al cuadrado (m2):

IMC= P/A2

Un IMC entre 25 y 30 se considera como sobrepeso, y por arriba de 30 como

obesidad. El sobrepeso indica simple aumento de la masa corporal; en cambio de la

obesidad representa un exceso de grasa corporal por depsito de triglicridos en losadipocitos.

IMC Kg/m Estado Nutri cional

> 40 - Obesidad mrbida

3539.9 - Obesidad severa

3034.9 - Obesidad moderada

>2530 - Sobrepeso> 1925 - Normal

1719 - Desnutricin leve

16 _ 16,9 - Desnutricin moderada

< 16 - Desnutricin grave


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B.1.3. Almacenamiento de Lpidos.-La medicin del pliegue cutneo del trceps arroja unestimado del almacenamiento corporal de lpidos. La medicin se realiza con calibraciones.

Deben tomarse tres medidas y promediarse los resultados.

PLI EGUE SUBCUTANEO DEL TRICEPS

Acromion

Olecranon


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Adulto (mm)Espesor del pliegue del Triceps (EPT)

Standard90%

Standard80%

Standard70%

Standard60%

Standard

HombreMujer

12.516.5

11.314.9

10.013.2

8.811.6

7.59.9

B.1.4. Masa Magra Corporal.-Representa a la masa corporal total exenta de grasa. Enotras palabras la masa msculo-esqueltica, la que puede ser determinada mediante dosmtodos:- circunferencia muscular del brazo (CMB)- ndice de creatinina urinaria (mtodo bioqumico).

Circunferencia Muscular del Brazo.- Se mide toda la circunferencia de la parte superior

del brazo no dominante, tomando el punto medio del mismo. Por la presencia de la capa detejido adiposo subyacente se modifica esta medida de acuerdo a la siguiente formula:

CMB = CB (3.14 x PCT)

CMB: circunferencia muscular del brazo, en cm.CB: circunferencia del brazo, en cm.

PCT: pliegue cutneo del trceps, en cm.

Luego se usa la tabla para calcular el grado de deplecin.


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CIRCUNFERENCIA DEL BRAZO (cm)

Standard90%

Standard80%

Standard70%

Standard60%

Standard

HombreMujer

29.328.5

26.325.7

23.422.8

20.520.0

17.617.0

CIRCUNFERENCIA MUSCULAR DEL BRAZO (cm)Adulto (cm)

Standard90%

Standard80%

Standard70%

Standard60%

Standard

HombreMujer

25.323.2

22.320.9

20.219.0

17.716.2

15.213.9

MANEJO DE TABLA DE COMPOSICION DE ALIMENTOS

1) Sujeto de anlisis Edad: Peso: Talla:2) Gasto calrico diaria:

Actividad Horas KcalorasDurmiendoMuy Ligera

LigeraModeradaPesada

Total:3) Ingesta Calrica y Proteica:

Encuesta Dietti ca de 24 Hrs:Desayuno

Alimento Porcin(g) Protena Lpido Carbohidrato


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AlmuerzoAlimento Porcin(g) Protena Lpido Carbohidrato

CenaAlimento Porcin(g) Protena Lpido Carbohidrato

OtrosAlimento Porcin(g) Protena Lpido Carbohidrato

Total Protenas X 4 Kcal/g = Kcal obtenidas de protenasTotal Carbohi dratos X 4 Kcal/g = Kcal obtenidas de carbohidratosTotal Lpidos X 9 Kcal/g = Kcal obteni das de lpidos

Kcal obtenidas de protenas + Kcal obtenidas de carbohidratos + Kcal obtenidas de lpidos


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Descripcin de algunas preparaciones cul inarias autctonas

Aceitunas preparadas: Las aceitunas se lavan y se cuecen en poco agua con sal, seaderezan con cebolla, aj, vinagre y aceite.

Aj panca: El aj fresco se pone a secar al sol varios das.

Cancha:Es el maz uniformemente tostado en una olla de barro con la abertura al costado.

Ccaya (oca helada): La oca fresca es expuesta a la intemperie, a bajas temperaturas,(heladas) por espacio de varios das.

Carne seca de venado: La carne de venado se corta en porciones pequeas y delgadasagregndole sal, y luego se pone a secar colgndola de cordeles.

Chancaca: Es el jugo de caa de azcar, hervido, y concentrado hasta que tome laconsistencia requerida y luego vaciado en moldes

Chaquepa:Es la cebada tostada y molida, pero no siempre cernida.

Chicharrn: Carne de chancho cortada en trozos, con sal y sancochada hasta que seconsume el agua, luego empiezan a freirse los trozos en su propia grasa hasta que se doren

por todos lados.

Chochoca: Es el maz en grano, semi-cocido en pequea cantidad de agua y por poco

tiempo, y luego secado al aire.

Chuo:Es una forma indgena de preparacin y preservacin de la papa, para lo cual se lacoloca en depresiones del terreno por las que corre agua lentamente, all permanece dos otres semanas y luego es secada al aire. Esta operacin se efecta en la poca de fro, con locual se consigue una deshidratacin por congelamiento.

Chuo negro:Humedecidas las papas, se extiende en campo abierto uno o dos das. Unavez que se han congelado, se pisan para extraerle toda el agua y parte de la cscara. Luego

se secan al sol.

Jamn del pas:La carne de cerdo se enrolla, se le agrega condimentos y sal, y se amarra;luego es hervida por espacio de dos horas.

Jora:El maz colorado se hace germinar hasta conseguir el rote de los granos; a los diezdas hasta quemar los brotes debido al calor intenso que se desarrolla. Luego esenfriado, al aire primero, y secado al sol despus. Es la materia prima para elaborar laChicha de Jora.

Llunka: Con este nombre se conoce el producto lavado, remojado durante dos horas yluego sobado suavemente en el batn hasta eliminar la cscara; enseguida se deja secar alaire. Se prepara de cebada o trigo.

Machka:Es el producto tostado, slido y cernido, que se prepara de cebada o trigo.


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Mansancochado:Es el man en su vaina cocido en agua con sal.

Mote:Es el producto al que se le ha eliminado la cscara de un modo ms completo que enel caso de la Llunka; para esto se le cuece en una solucin de cenizas (generalmente usan

madera de Molle, Schinus molle), y luego es sobado fuertemente con la pa lma de lasmanos, enjuagado y secado al aire. El mote de maz es preparado con una solucin decenizas ms dbil y con menor tiempo de coccin que el trigo. Para el mote de cebada la

solucin de cenizas es ms fuerte y el tiempo de coccin ms largo. Con frecuencia seadiciona cal.

Pltano seco (orejn): Es el pltano maduro, pelado, y cortado en rebanadas,deshidratado parcialmente.

Papa helada:La papa fresca es expuesta a la intemperie a bajas temperaturas (heladas)por espacio de varios das.

Papa seca: Es la papa sancochada, pelada y secada al aire. Posteriormente puede sermolida o partida en trozos pequeos.

Tocash:Es una forma de preservar el maz fresco, usada por los indgenas. Consiste enenterrrar el maz fresco en el lecho de un arroyuelo a unos 30 o 40 cm. De profundidad,durante varias semanas. La muestra analizada se extrajo de uno de estos sitios.

Yuca fermentada (masato):Las yucas se pelan y se ponen a cocer, luego se muelen, o semastican hasta formar una pasta, diluyndola en el agua de coccin; si no es masticada se

le agrega azcar. Esta preparacin se deposita en tinajas, varios das, para que fermente.


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TABLA DE GASTO ENERGTICO POR ACTIVIDAD FISICA

TABLA DE COMPOSICIN DE LOS AL IMENTOS PERUANOSINSTI TUTO NACIONAL DE SALUD 2009

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Guia de Bioquimica y Nutricion 2015-II

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