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UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE BAJA CALIFORNIA SUR
ÁREA DE CONOCIMIENTOS DE CIENCIAS DEL MARDEPARTAMENTO ACADÉMICO DE BIOLOGÍA MARINA
TESIS
GENÉTICA FORENSE APLICADA A LA IDENTIFICACIÓN DE TIBURONES ENPRODUCTOS MARINOS MAL ETIQUETADOS EN MERCADOS LOCALES DE LA
PENÍNSULA DE BAJA CALIFORNIA
QUE PARA OBTENER EL TÍTULO DE:
BIÓLOGO MARINO
PRESENTA:ALEXIS ALEJANDRO JIMÉNEZ PÉREZ
DIRECTOR:PhD SERGIO FRANCISCO FLORES RAMÍREZ
LA PAZ, B.C.S., JUNIO DE 2015
Dedicatoria
A mi madre, porque ella me dio las armas para poder enfrentar cualquier batalla y meenseño a nunca rendirme hasta el final. A pesar de cualquier resbalón o caída, ella estabapara ayudarme a levantarme
A mi padre, porque me enseño a como hacer las cosas, por más dificultades que se tepongan el camino, además de todas sus enseñanzas como buen padre.
A mis hermanos y mi sobrino, porque son el futuro y el legado más cercano de la idea ylos sueños en los que he creído, y quiero seguir hacerlos crecer.
A mis abuelos, porque aunque ya no los puedo ver físicamente, siento que están bastanteorgullosos viéndome como el único representante de su legado que aspira a ser como ellos.
A koke, porque fue un vivo ejemplo de la perseverancia y el único recuerdo que tengo dehaber tenido algún hermano mayor en mi vida.
A mi padrino Víctor Nuñez, porque me enseño una segunda forma de motivación en mivida. Porque puedo considerarlo como un segundo padre.
Al sueño vivo de Ícaro Artemis, porque siempre hay que tener una motivación y un sueño,que te motive a dar lo mejor de ti, aún cuando no exista.
A los tiburones de México, porque son la primera y la más grande motivación en mi vida,y sin ellos no hubiera sido posible vivir mi sueño de convertirme en biólogo marino y seguiradelante. Además les debo mucho, y quiero hacer lo más que pueda para protegerlos decualquier amenaza, así como dar a conocer el misterioso y bello mundo en el que viven,para que la gente deje de temerles y empecé a apreciarlos como yo lo hago.
A las futuras generaciones, porque en ellos recae el futuro del planeta tierra y de los seresvivos que habitan en ella. Porque aún creo en que la humanidad puede cambiar, a pesarde todos los males que existen, y que solo hay incentivarlos por el buen camino, para quepueda existir este cambio.
Al amor y a la pasión, porque sin tener la pieza fundamental de mi motivación que veoreflejado en estos dos elementos, no podría haber llegado hasta donde estoy, ni podréseguir adelante en mi camino. Además de que quiero transmitir al mundo mi enseñanza:que el amor es la fuerza más poderosa del universo, más no la única.
A mis sueños, porque ser el mejor investigador de tiburones, es algo que me levanta día adía, cuando estoy por los suelos. Porque el verme en un futuro nadando entre tiburonesconstantemente, es algo que se acerca día a día, y que además dibuja una sonrisa sinceraen mi rostro.
Agradecimientos
A mi familia, desde Estados Unidos hasta Mérida, por todo el apoyo que me han brindadoa lo largo de mi camino, y a pesar de los malos momentos vividos, hemos salido adelante yseguiremos saliendo adelante.
A mi gran amigo, Edgar Becerril, ya que este proyecto no hubiera caído en mis manos deno haber sido por él. Además de ser una gran persona, y compartir momentos no solocomo colegas, sino como amigos del alma, así como una misma pasión que nos motiva asacar lo mejor de cada uno. También un ejemplo a seguir como persona e investigador.Solamente tu sabes amigo, lo importante y especial que eres para mi.
Al Dr. Sergio Flores, ya que desde el momento en el que tome clases con él, sabía que teníaque tener mi formación académica con él. La forma en como piensa y desarrolla lasproblemáticas y posibles soluciones, son un ejemplo a seguir, para mi. Además de estarconmigo y compartir sus enseñanzas conmigo, desde que fui su alumno, hasta ser su colega.
Al M. en C. Jorge Guzmán, por todo lo que me ha enseñado fuera y dentro del laboratorio.Por enseñarme las bases y la forma correcta de trabajar en un laboratorio para obtenerlos mejores resultados posibles. Por enseñarme con sus ejemplos de vida, como debe seruna persona metódica y exitosa. Por ser mi amigo, y compartir alegrías fuera y dentro dela investigación.
Al Dr. Mauricio Hoyos, por señalarme la problemática existente con los tiburones en elmercado negro de Ensenada y brindarme el apoyo para llevar a cabo este trabajo deinvestigación muy importante. Por ser un ejemplo a seguir y motivarnos con sus pláticasde tiburones y personales. Por ser la persona en ayudarme a realizar mi sueño, de estarpor primera vez con los tiburones blancos de Isla Guadalupe.
Al Dr. Carlos Salomón, por enseñarme la forma correcta y propia de realizar trabajos deinvestigación importantes. Además de compartir dos pasiones muy grandes, la de trabajarcon tiburones y la de jugar fútbol al máximo.
Al B.M. Carlos Augusto Aguilar, por el tiempo compartido en la universidad y Pichilingue,así como las enseñanzas que me ha brindado como uno de los mejores maestros deldepartamento de Biología Marina. Así como también por, todas las alegrías yconocimientosfuera y dentro de la investigación
Al Dr. Felipe Galván, por abrirme las puertas de su laboratorio desde el 3er semestre dela carrera y haberme brindado mis primeras enseñanzas académicas de tiburones.También por haber aceptado ser parte de mi comité de investigación.
A José Pérez, por haberme recibido en el laboratorio. Por enseñarme antes que nadie, lasformas de trabajar de un laboratorio, que después fueron pulidas. Por el tiempo quecompartimos como colegas y compañeros.
A Judith Tiscareño, Indhira Terrazas e Isis San Juan, por el tiempo que compartieron ysiguen compartiendo conmigo. Por las enseñanzas que me brindaron y me siguenbrindando, además de las grandes alegrías que compartieron conmigo, así como lossentimientos que decubrí gracias a ellas. Especialmente a Juh.
A Nancy Morales, por ser mi primera amiga de la carrera y haber compartido con ella lossueños y aspiraciones de ser paceños que destaquen de entre los demás comoinvestigadores y como personas. Por el cariño y afecto especial que tenemos como amigos,así como la confianza que hemos tenido para compartir los problemas que nos aquejan.
A Rabindranath Reyes, por ser mi primer amigo de la carrera. Por todo el tiempo quecompartimos como amigos y todas las charlas en las que me hacía ver mis errores.
A todos mis pupilos, encabezados por Dilan Ramos, Oscar Caldera y David López, ya queel haberle enseñado a ellos y compartido de mis experiencias, me motiva para seguircreciendo y seguir enseñando y motivando a más personas.
A la palomilla del fútbol, por todo el tiempo que compartimos en las canchas. Por habercompartido mi pasión fuera de lo académico. Al Oggi, al afro, a Bryan Licona, AdriánSánchez, Miguel Regalado, Daniel Gaxiola, Roberto Taylor, Ember Aybar, Juan CarlosCastro, Iván Hernández, Alfredo López, Carlos Godínez, Gabriel Peña, Salvador Sánchez,José Almazán, Edgar Carmona, José Pagola, Ulises Sifuente y demás jugadores de lacarrera.
A todos mis amigos y compañeros de la carrera, por todas las alegrías, enseñanzas ylocuras que hicimos a lo largo de nuestro tiempo de estudio como estudiantes. A ChristianTorres, Coralinda Angell, Janna Domínguez, Nefertiti Roldán, Zvi Hoffman, RicardoAmaro, Benni, Filius Valle, Mariela Amador, Victor Tinoco, Lizeth Jordán, Luis Jiménez,Nicolás Martínez, Santiago Cadena, Eleazar Valenzuela, Alberto Beylán, Kenia Ramírez,Tefa, Airy González, junto con la generación de la tarde y demás compañeros quecompartieron conmigo un salón de clases.
A mi padrino Victor Nuñez, por el apoyo recibido a lo largo de mi desarrollo dentro de lacarrera, tanto emocional como económico. Por ser una persona noble y generosa conmigo.
A todas las personas que hicieron posible mi primer sueño de estar frente a frente el grantiburón blanco, a Fernando Aguilar hijo y papá, al capitán del Sea Escape, a Shava, a losdemás tripulantes del Sea Escape.
A Francisco García, Elvia Leyva, Mario Amador, Enrique Troyo, Gustavo Jaime,Gerardo Gaspar, Adolfo Sandoval, Antonio Calleja, Francisco Calleja, Luis Angel Real,Miguel Macias, Julieta Benoit, Fray Flores, Ulises Sifuentes
To Washington Western University students, especially Sara Spitzer, Bethany Williamsand Erin Mathews, including Dr. Alejandro Acevedo. For being at La Paz during 5 weekson 2014 summer. For allow me to share with them part of my life and passion.
A Betty, la secretaría del departamento de Biología Marina, por toda la ayudapropocionada para realizar los trámites durante la carrera. Y todo el apoyo que me brindofuera de ella.
A la Unidad Pichilingue, por el tiempo que me permitió estar en sus instalaciones, y en lasnoches más cansadas de trabajo, relajarme con el sonido del viento que tocaba para mí,así como los atardeceres hermosos que me brindaba para seguir adelante.
Al laboratorio de Ecología Molecular y Conservación, por el tiempo en el que pasetrabajando mi tesis y otros proyectos adjuntos. Por ilusionarme y hacerme descubrir migusto por el laboratorio. Por ser mi hogar por varios días.
A la UABCS, por ser la univerdad que me brindó la educación que he recibido, junto alDepartamento Académico de Biología Marina y todas las personas que lo comprenden,desde académicos hasta administrativos.
A todas las personas que no mencionó, por no saber sus nombres o no recordarlos, peroque en su momento me ayudaron, con la más mínima acción a realizar mis sueños y haberestado en mi vida
A Dios, por la vida que me dio. Por todo lo que me ha enseñado. Por todo lo que hecompartido con Él espiritualmente. Por darme una motivación espiritual para darlesentido al modo de vida que llevo.
i
Índice
Lista de figuras iii
Lista de tablas v
Lista de anexos v
Glosario y acrónimos vi
Resumen x
1. Introducción 1
2. Antecedentes 6
3. Justificación 10
4. Hipótesis 13
5. Objetivos 14
5.1 Objetivo General 14
5.2 Objetivos Particulares 14
6. Materiales y métodos 15
6.1 Colecta de porciones de carne de tiburón en mercados locales 15
6.2 Extracción de ADN y verificación de su calidad 22
6.3 Amplificación, secuenciación automática y análisis 24bioinformático de la región ITS2 de las muestras víaReacción en Cadena de la Polimerasa (PCR)
7. Resultados 26
7.1 Colecta de muestras en mercados locales 26
7.2 Perfil genético-forense de las muestras de “marlín”, 27“swordfish” y “cazón”.
8. Discusión 31
8.1 Colecta de muestras en mercados locales 31
8.2 Perfil genético-forense de las muestras de “marlín”, 32“swordfish” y “cazón”.
8.3 Estado de conservación de las especies de tiburones 35
8.4 Caso tiburón blanco 38
ii
8.5 Productos de tiburón que se etiquetan como productos 39De especies de alto valor comercial: Fraude de“Marlín” y “Pez espada”
9. Conclusiones 44
10. Recomendaciones 44
11. Bbliografia 46
12. Anexos 56
iii
Sucesión de pasos implícitos en el protocolo dirigido a amplificargenes de especies protegidas mediante su amplificación utilizandola reacción en cadena de la polimerasa. 1) Toma de biopsia. 2)Extracción de ADN. 3) Reacción en Cadena de la Polimerasa. 4)Verificación de la amplificación de los genes o regiones deseadaspara la identificación de alguna especie.
Sucesión de pasos implícitos en el protocolo dirigido a tipificargenes de especies protegidas mediante su secuenciaciónautomática. Se toman en cuenta los pasos para realizar unareacción en cadena de la polimerasa. 1) Verificación de laamplificación de la región deseada de una especie. 2)Secuenciación automática. 3) Obtención de secuencias.
Sucesión de pasos implícitos en el protocolo forense dirigido aidentificar especies mediante la amplificación y secuenciación desecuencias ITS2. Se toman en cuenta los pasos anteriores desde latoma de biopsia hasta la obtención de la secuencia, en este casoITS2. Los primers Forward y Reverse se anclan en la posiciónanterior y posterior, respectivamente, que corresponden al gen5.8S y al gen 28S. De esta forma se obtiene la secuencia de la regiónITS2 para cada especie.
Mercado Negro de Ensenada, también conocido como mercado deMaricos
“Swordfish” o “Pez espada” que se vende en el Mercado Negro deEnsenada
Quilla caudal (señalada con la flecha roja) de una rebanada detroncho. Fue identificada como I. oxyrinchus.
Rebanada de troncho del Mercado Negro de Ensenada adquiridacomo “Pez espada” (Swordfish). Se aprecia la coloración grisáceaen todo el borde de la piel. Fue identificado como S. zygaena.
Lista de figuras
Figura 1
7
Figura 2
7
Figura 3
8
Figura 4 15
Figura 5 18
Figura 6 19
Figura 7 19
iv
Rebanada de troncho del Mercado Negro de Ensenada adquiridacomo “Pez espada” (Swordfish). Se aprecia la coloración blanca enla parte inferior. Fue identificado como I. oxyrinchus.Mercados locales de La Paz y una cadena comercial nacional. Enla parte superior izquierda se aprecia el Mercado Francisco I.Madero, en la parte inferior izquierda se aprecia el MercadoMunicipal General Agustin Olachea Avilés, en la parte superiorderecha se aprecia el Mercado Municipal Nicolás Bravo y en laparte inferior derecha se aprecia Chedraui Palacio.
Verificación de la calidad de ADN. Se muestra el barrido de ADNconforme a la cantidad que se obtuvo. En la parte superior deizquierda a derecha: ENSM: 4,5,14,22,25, LADDER, ENSM:26,27,28,29,30,31. En la parte inferior de izquierda a derecha:ENSM:33,34,35,36,37, LADDER, ENSM: 38,39,41,42,43,44.
Amplificación de productos de PCR. Se muestra la presencia de laregión amplificada de la región ITS2 para tiburones de lasmuestras de mercado mal etiquetadas. De izquierda a derecha:LADDER, ENSM:44,30,20,10,7,6 LPZM:9,8,7,6.
Sphyrna zygaena, etiquetado como “Cazón Seco” que fue vendidoen una cadena comercial nacional el 14 de julio del 2014.
Tronchos de tiburones que son transportados hacia los puestos deventa en el mercado de Ensenada.
Pedazo de porción de carne adquirida como “Marlín” en estado dedescomposición.
Relación de tiburones identificados en los productos de “marlín”,“pez espada” y “cazón”..
Proporción de las etiquetas falsas en los mercados de productospesqueros de la Península de Baja California.
Relación de tiburones identificados bajo la falsa etiqueta de“Marlín”
Relación de tiburones identificados bajo la falsa etiqueta de “Pezespada”
Figura 8 20
Figura 9 21
Figura 10 23
Figura 11 25
Figura 12 30
Figura 13 31
Figura 14 32
Figura 15 37
Figura 16 39
Figura 17 40
Figura 18 40
Figura 19 Relación de tiburones identificados bajo la etiqueta de “cazón” 41
v
Mercados de la península de Baja California de donde seobtuvieron las porciones de carne
Relación tiburón identificado-producto marino vendido maletiquetado en su totalidad, por ubicación y por temporalidad eneste estudio.
Productos pesqueros ofertados como “Marlín”, “Pez espada” y“Cazón” en el Mercado Negro de Ensenada obtenidos entre el 24de agosto del 2012 y el 13 de septiembre del 2014.
Productos pesqueros ofertados como “Cazón” y “Cazón Seco” enlos mercados de La Paz, obtenidos entre el 14 de julio del 2014 y el20 de marzo del 2015.Estatus de conservación de los tiburones encontrados en estetrabajo en el marco internacional de legislación internacional parala protección de fauna silvestre. S. zyagena fue introducida comoespecie CITES en el apéndice II el 12 de julio del 2013 en 37 países.S. lewini fue introducida como especie CITES en el apéndice II el12 de julio del 2013 en 127 países. *La población de estas especiesse encuentran en decadencia. **Se desconoce la tendencia de lapoblación de estas especies a aumentar o disminuir. ***Lasespecies de Mustelus de la región se encuentran en otras categorías:M. lunulatus, M. henlei y M. californicus están en la categoría dePreocupación Menor y M. albipinnis se encuentra en la categoríaDatos insuficientes.
Método de extracción de ADN de LiCl.
Definición de los estados y apéndices de los organismosinternacionales
Lista de tablas
Tabla I 17
Tabla II 26
Tabla III 28-29
Tabla IV 29
Tabla V 36
Lista de anexos
Anexo I 56
Anexo II 57
vi
GLOSARIO Y ACRÓNIMOS:
La mayoría de los conceptos fueron obtenidos de Rieger et al. 1991 y de la NOM-029-PESC-2006 (DOF 2015).
ADN: Ácido desoxirribonucleico. Un polímero de subunidades llamadasdesoxirribonucleotidos que es el material genético primario de todas las células.
ADN mitocondrial: Es una molécula circular, cerrada y de doble cadena. Presenta una herenciaprincipalmente materna y su tasa de mutación permite introducir una escala temporal en laevolución molecular y estimar el tiempo de divergencia entre ellos.
ADN nuclear: Es una molécula lineal, cerrada y de doble cadena. Se encuentra dentro delnúcleo de las células en organismos eucariotas. Los genes nucleares siguen el patrón mendelianode herencia.
ADN polimerasa: Es una enzima que puede sintetizar una cadena nueva de ADN sobre unacadena molde.
Alelo: Es cada una de las distintas modalidades que puede presentar un gen que informa paraun carácter.
Anillamiento: Hibridación de una cadena simple de ADN a otra cadena simple de ADN, debidoa la unión en pares de las moléculas y la hibridación de secuencias complementarias.
BLASTn: Herramienta básica para la búsqueda de alineaciones locales (nucleótidos), del inglésBasic Local Alignment Search Tool (Nucleotides). Es una herramienta para buscar secuenciassimilares dentro del GenBank. Encuentra el puntaje (score) más alto de las secuencias localesentre las secuencias que son analizadas y las secuencias que se encuentran en la base de datos.
bp: Par de bases, del inglés base pairs. Son dos bases nitrogenadas pareadas dentro de una doblecadena de una molécula de ADN o ARN. Las bases nitrogenadas en el ADN son: Adenina-Timina y Citosina-Guanina. En el ARN se sustituye la Timina por el Uracilo.
CITES: Convención Sobre el Comercio Internacional de Especies Amenazadas de Fauna yFlora Silvestres, del inglés Convention on International Trade in Endangered Species of WildFlora and Fauna. También conocido como la convención de Washington, es un acuerdointernacional entre gobiernos que tiene como objetivo asegurar que en el comercio internacionalde especímenes de fauna y flora silvestres, no habrá ninguna amenaza para su supervivencia.
CONAPESCA: Comisión Nacional de Acuacultura y Pesca.
CSM: Convención sobre la Conservación de las Especies Migratorias de Animales Silvestres,del inglés Convention on the Conservation of Migratory Species of Wild Animals. Es la únicaconvención global especializada en la conservación de las especies migratorias, sus hábitats ysus rutas de migración, la CMS complementa y coopera con varias organizacionesinternacionales, ONGs y socios tanto en los de comunicación como en el sector empresarial.
vii
Desnaturalización: Es el proceso de separación de las cadenas de ADN. Se produce en unestrecho intervalo de temperatura. Las dos cadenas de la doble hélice se separan completamentecuando se rompen todos los puentes de hidrógeno que hay entre ellas.
Dirección Forward: Sentido en el que está orientada una secuencia de ADN que va de 5’ a 3’.Hace referencia a la unión fosfodiester que va de la terminal 5’ de la molécula correspondiente(purina o pirimidina) a la terminal 3’.
Evaluación múltiple de PCR: Es una técnica molecular usada para la amplificación demúltiples regiones en un solo experimento de PCR. Más de una secuencia objetivo puede seramplificada mediante el uso de múltiples pares de primers en una reacción.
Extensión: Proceso posterior al anillamiento, en el cual se sintetiza ADN mediante catálisis conuna ADN polimerasa termoestable, adicionando nucleótidos al extremo 3’ del primer hibridado.Se realiza en ambas cadenas en dirección de la secuencia que se quiere amplificar. El resultadofinal es la obtención de dos cadenas de ADN a partir de la original.
GAP: Es el espacio introducido en una alineación para compensar las inserciones o delecionesen una secuencia relativa a otra.
Gen: Unidad básica Mendeliana. Unidad hereditaria que representa una región contigua deADN (o ARN en el caso de los virus) que corresponde usualmente a una unidad de transcripción.
GenBank: Es la base de datos de secuencias genéticas perteneciente al NIH (InstitutosNacionales de Salud de Estados Unidos, National Institutes of Health). Es una colecciónregistrada de todas las secuencias de ADN disponibles al público.
Genotipificación: Es el procedimiento mediante el cual se obtiene el genotipo (perfil genético)de un organismo.
INAPESCA: Instituto Nacional de la Pesca.
ITS2: Es una subporción del ADN ribosomal nuclear. Es una de las regiones más usadasfrecuentemente para análisis filogenéticos a nivel género y especie (Coleman 2003).
IUCN: Unión Internacional para la Conservación de la Naturaleza, del inglés InternationalUnion for Conervation of Nature. Es la organización más antigua y grande del mundo con másde 1200 miembros de ONGs y gubernamentales en 160 países. Se enfoca en evaluar y conservarla naturaleza, asegurando un uso efectivo y equitativo de los gobernantes y demostrandosoluciones a los retos globales en el clima, el alimento y el desarrollo.
Lista Roja de la IUCN: Es un inventario mundial que permite alertar el estado de labiodiversidad mundial. Provee información taxonómica, el estado de conservación einformación de distribución de las plantas, hongos y animales que han sido evaluados usandolos criterios y las categorías de esta misma lista roja.
Locus: Posición ocupada por un gen en el cromosoma.
viii
Marcador: Alelo usado como una prueba experimental para marcar un núcleo, un cromosomao un gen.
Microsatélite: Conjunto de secuencias repetitivas en tándem, cuya unidad de repetición es deun tamaño comprendido entre 1 a 6 pares de bases. Estas secuencias están compuestas de ADNno codificante. También se les conocen como SSR (Secuencia Repetitiva Sencilla, del inglésSimple Sequence Repeat) o STR (Tandem Repetitivo Corto, del inglés Short Tandem Repeat).
Oofagia: Modo de nutrición en los embriones de los tiburones lamnidos, donde los embrionesse alimentan de ovocitos sin fertilizar que son enviados al útero para su alimentación (Castro2011).
PCR: Reacción en Cadena de la Polimerasa, del inglés Polymerase Chain Reaction. Es unatécnica para amplificar secuencias de ADN in vitro por medio de la separación del ADN en doshebras e incubándolas con primers y ADN polimerasa.
Pellet: Cúmulo compacto de células y/o restos celulares que se producen en el fondo de un tubodespués de una centrifugación o decantación.
Pesca INDNR: Pesca ilegal, no declarada y no regulada.
Pirosecuenciación: Es un método de secuenciación de ADN basado en la monitorización atiempo real de la síntesis de ADN.
Porcentaje de identidad: Es el grado en el cual dos secuencias de nucleótidos tienen losmismos residuos en las mismas posiciones en una alineación expresado en porcentaje.
Primer: Cebador o iniciador en español. Es un oligonucleótido complementario a una de lasdos hebras del ADN. Delimita la región del ADN de la cual se quieren obtener más copias.Normalmente esta constituido por 18 a 25 pares de bases.
PROFEPA: Procuraduría Federal de Protección al Ambiente. Es el organismo encargado delcuidado y preservación del ambiente en todo el país, al igual que la inspección y vigilancia delcumplimiento de leyes para la protección ambiental.
Score: Utilizado en el BLAST. Es la puntuación obtenida de una alineación. Se calcula al tenerla sumatoria de la puntuación de las substituciones y la puntuación de los GAPs.
Secuenciación automática: Es una técnica bioquímica que tiene como finalidad determinar elorden de los nucleótidos, de una moécula de Ácido Nucléico.
SEMARNAT: Secretaría de Medio Ambiente y Recursos Naturales. Es una secretaría de estadodel poder ejecutivo federal encargada de todo lo relacionado a la protección, restauración yconservación del medio ambiente, recursos naturales, bienes y servicios ambientales, así comodel aprovechamiento de los mismos y del desarrollo sustentable de México.
Tiburón: Cualquier especie de elasmobranquio que incluye a los organismos conocidos en ellenguaje común como “tiburones”, “cazones” y “angelitos” y que pertenecen taxónomicamentea la Subclase Elasmobranchii, Superorden Euselachii (Selachimorpha), cuya principal
ix
característica externa es la de poseer generalmente cinco pares de aberturas branquialesdispuestas a los costados de la cabeza, aunque existen especies con seis y siete pares de aberturasbranquiales.
TRAFFIC: Análisis de Registros de Comercio de Flora y Fauna en el Mercado del inglés TradeRecords Analysis of Flora and Fauna in Commerce. Es una red de monitoreo del comercio devida salvaje. Actúa como una organización no-gubernamental a nivel mundial sobre el comerciode flora y fauna silvestre, en el contexto de la conservación de la biodiversidad y el desarrollosustentable.
Troncho: Cuerpo del pez al que se ha eviscerado y se le han cercenado la cabeza y de formatotal o parcial las aletas, con la finalidad de facilitar su almacenamiento y conservación a bordo.
Valor E: En estadísticos de BLAST, es el valor esperado. Este valor es el número dealineaciones con un score particular que se espera obtener por probabilidad cuando se comparandos secuencias al azar. Entre más bajo sea el valor de E, más significativo será el puntaje (score)y la alineación.
x
RESUMEN
La pesca de tiburones a nivel mundial ha ido en aumento en los últimos años. Los productosque más se venden son sus aletas, su carne y sus mandíbulas. Sin embargo no existe un controladecuado para la contabilización real de tiburones que son pescados diariamente en diferentespartes del mundo. México cuenta con el Plan de Acción Nacional para el Manejo y Conservaciónde Tiburone, Rayas y Especies Afines en México, las Normas Oficiales Mexicanas: NOM-029y NOM-059, entre otros instrumentos regulatorios para el manejo de este recurso pesquero. Apesar de esto, siguen existiendo irregularidades en los registros de captura y en la venta detiburones. En la península de Baja California se encontraron algunas de estas irregularidades.En un sondeo realizado en un mercado de Ensenada y cuatro mercados de La Paz se obtuvieron79 porciones de carne de distintos organismos desde el año 2012 al 2015. Se extrajo el ADN delas muestras con un método casero modificado de extracción de NaCl. Se amplificó la regiónITS2 con primers universales para la identificación de tiburones y se secuenciaron. Del total demuestras que fueron vendidos como: “cazón”, “marlín” o “swordfish” se identificaron 8especies de tiburones: Carcharodon carcharias, Isurus oxyrinchus, Sphyrna lewini, Sphyrnazygaena, Rhizoprionodon longurio, Carcharhinus falciformis, Mustelus mustelus. y Alopiaspelagicus. El tiburón que más vendido en Ensenada como otras especie fue I. oxyrinchus. En LaPaz el tiburón más vendido como “cazón” fue S. zygaena. Este trabajo demuestra el fraude queexiste en algunos mercados de México, ya que se vendió tiburón blanco como “cazón”, especieque esta prohibida comercializar en México. Además de la sustitución de productos deproductos de mayor calidad por especies de tiburón. Lo que hace evidente y necesario la eco-certificación de productos pesqueros en mercados locales.
Palabras clave: Genética forense Productos mal etiquetados- Pesca ilegal, no declarada yno regulada- Expendio fraudulentos- Conservación.
1
IntroducciónLa actividad pesquera se ha extendido a todos los océanos y el impacto de esta actividad sobre
los depredadores que en ellos habitan (e.g. tiburones y rayas) es objetivamente poco conocido
(Baum et al. 2003). Hay evidencia que señala que la explotación pesquera enfocada a los
organismos depredadores genera cambios sustanciales en la población de los depredadores, así
como también en la diversidad de otras especies en los ecosistemas, en los que se realizan tales
pesquerías (Schindler et al. 2002).
La falta de datos sistematizados y específicos para los tiburones, así como los complicados
marcos jurídicos, presentan verdaderos retos para evaluar y conservar la biodiversidad de estos
grupos (Dulvy et al. 2014). Además del reto de encontrar la solución a la pesca incidental de
tiburones, así como el problema que existe con el registro de tiburones al momento de
desembarcar, lo que propicia que las estrategias acerca del manejo de tiburones, se vean
obstaculizadas (Barker & Schluessel 2005). Siendo evidente, que los tiburones pelágicos están
sujetos a niveles altos y no regulados de mortalidad por pesca incidental (Dulvy et al. 2008;
Camhi et al. 2009).
Los tiburones presentan múltiples estrategias de historia de vida, como en su desarrollo
embrionario, ya que pueden ser ovíparos, vivíparos aplacentarios o vivíparos placentarios, o
como en su distribución espacial, ya que habitan en todas las aguas del planeta, desde el Ecuador
hasta las cercanías con los círculos polares árticos, y pueden encontrarse desde la superficie de
las costas, hasta las zonas abisales (Castro 2011). Pero a pesar de la variabilidad en su forma de
vida, tienen una baja fecundidad, viven muchos años y tienen un crecimiento muy lento, por lo
que son altamente vulnerables a la sobreexplotación (Walker 1998).
Acorde a la lista roja de la IUCN 43 especies pertenecientes a cinco órdenes y 16 familias
distintas se encuentran en la categoría de “Vulnerable”, 15 especies pertenecientes a tres órdenes
y seis familias distintas se encuentran en la categoría “En Peligro”, 9 especies pertenecientes a
dos órdenes y cuatro familias distintas se encuentran en la categoría “En Peligro Crítico” y 59
especies pertenecientes a cinco órdenes y 15 familias distintas se encuentran en la categoría
“Casi Amenazado” (Camhi et al. 2009).
2
Basado en los estudios realizados de la lista roja de la IUCN, la tendencia poblacional del tiburón
mako de aleta corta Isurus oxyrinchus es a decrecer. Debido a que es un tiburón que se distribuye
por todo el mundo (Castro 2011), el impacto de las pesquerías a nivel regional dependerá del
nivel de explotación al que esté sometido. Por ejemplo, la pesca del tiburón mako en las aguas
orientales de Canadá es muy alta, pero aún así, no se aprecia que exista un efecto negativo en
su población correspondiente a esa región (Campana et al. 2005).
Las bases de información disponibles respectivas a impactos humanos sobres poblaciones de
grandes depredadores (e.g. TRAFFIC) remarcan las siguientes características de la pesca
INDNR (Pesca Ilegal, No Declarada y No Regulada):
a) La pesca INDNR se ha extendido a nivel mundial, pero la información disponible indica
que los “puntos calientes” de este tipo de pesca se localizan en América Central, América
del Sur y en el Océano Pacífico occidental y central.
b) La pesca INDNR se desarrolla en aguas nacionales por parte de buques nacionales y
extranjeros.
c) La pesca INDNR de tiburones por parte de buques extranjeros en aguas nacionales,
involucra a menudo a países vecinos cercanos.
d) La pesca INDNR extranjera puede resultar de acceso no autorizado o incumplimiento
de las condiciones de acceso.
e) La mayor parte de la pesca INDNR implica la retención de aletas.
f) En la mayoría de los casos de pesca INDNR, las estimaciones nacionales de su efecto
no son especie-específicos, es decir, no especifican el impacto que la actividad tiene en
cada especie particular de tiburones.
g) Las especies objetivo más frecuentes de la INDNR son los tiburones martillo (Sphyrna
spp.) y el tiburón piloto (Carcharhinus falciformis).
h) La pesca con palangre y con red de enmalle son los métodos utilizados con mayor
frecuencia en este tipo de pesca.
Las características de la pesca INDNR, tienen como consecuencia que los países en que se
practican no cuenten con una base sólida para hacer juicios sobre:
a) El impacto relativo de la pesca INDNR comparado al de la pesca legítima en las
poblaciones de tiburones.
3
b) El impacto relativo de la pesca INDNR en diferentes especie de tiburones.
Como resultado de lo anterior, la información disponible a nivel mundial indica que:
a) La mayoría de las poblaciones de tiburones, siguen siendo manejadas pobremente
b) Hay evidencia clara de que la pesca INDNR de tiburón está ocurriendo
c) El alto valor de las aletas es un impulsor de la pesca INDNR
México ha sido señalado como un país que practica la pesca INDNR, junto con Colombia,
Ecuador, Nigeria, Nicaragua y Portugal. Este tipo de pesca y el comercio fraudulento que
realizan, es un obstáculo en los esfuerzos internacionales para tener un manejo sustentable en
las pesquerías, además de que crean una competencia desleal contra otros países donde se pesca
y se venden productos marinos legalmente (Cisneros-Montemayor et al. 2013).
A nivel nacional, la pesca de tiburones se lleva a cabo por medio de redes de enmalle y palangres
en embarcaciones menores, de mediana altura y altura. El 60% de las capturas corresponden a
las embarcaciones de mediana altura y altura, tanto en modalidades de pesca dirigida y pesca no
dirigida (pesca incidental). Los derivados de tiburones destinados al consumo humano fluctúan
entre 30,000 y 35,000 toneladas en las últimas décadas (CONAPESCA-INP 2004).
A nivel nacional la SAGARPA, a través de la CONAPESCA en colaboración con la
INAPESCA, han elaborado instrumentos regulatorios para las pesquerías de tiburones, rayas y
especies afines: 1) la Ley General de Pesca y Acuacultura Sustentables, 2) la Ley General del
Equilibrio Ecológico y Protección al Ambiente, 3) la Carta Nacional Pesquera, 4) el Plan de
Acción Nacional para el Manejo y Conservación de Tiburones, Rayas y Especies Afines en
México (el cual fue derivado del Plan de Acción Internacional para la conservación y ordenación
de tiburones de la FAO), 5) Programa de Sistema de Información, 6) Programa de Difusión,
Educación y Capacitación, 7) Programa de Inspección y Vigilancia, 8) Programa de
Investigación, 9) Programa de Colaboración Interinstitucional y 10) y 11) las Normas Oficiales
Mexicanas NOM-029-PESCA-2006 y NOM-059-SEMARNAT-2010 (INAPESCA 2006).
La verificación del cumplimiento de la regulación pesquera corresponde a la CONAPESCA, en
tanto que a la SEMARNAT le corresponde la formulación, conducción y aplicación de la
política ambiental y a través de la PROFEPA le compete la verificación, inspección y vigilancia
en aspectos ambientales y de conservación de las especies, especialmente de las catalogadas en
4
estatus de protección especial. Asimismo, a la Secretaría de Marina le corresponde la vigilancia
en el ámbito marítimo federal, por lo que interviene en el control y seguimiento relacionado con
el cumplimiento de las leyes federales, reglamentos y normas, conforme a lo establecido por la
Ley Orgánica de la Administración Pública Federal (CONAPESCA-INP 2004).
En la costa occidental de la península de Baja California se han reportado la pesca de juveniles
de tiburones (Cartamil et al. 2011, Santana-Morales et al. 2012). Eso es un gran problema al no
conocer el tamaño de las poblaciones de tiburones, debido a que no se permite que se
reproduzcan y probablemente se está incidiendo en áreas de crianza (Stevens et al. 2000;
Santana-Morales et al. 2012), lo que resulta en una lenta recuperación de las poblaciones, sobre
las especies que son explotadas. En los estados de Baja California y Baja California Sur las
especies que más se pescan son el tiburón azul (Prionace glauca) y el tiburón mako de aleta
corta (Isurus oxyrinchus) (Cartamil et al. 2011, Ramírez-Amaro et al. 2013).
En México, la regulación de captura de tiburones está limitada a dos categorías. La categoría
“cazón”, donde serán reportados todos los tiburones que midan 1.5 m o menos, con esta misma
denominación, sin especificar la especie a la que corresponde. Y la categoría “tiburón”, donde
son reportados todos los tiburones que midan más de 1.5 m, con la denominación de su nombre
científico o nombre común (DOF 2007).
Es necesario encontrar nuevos análisis para evaluar el estado de conservación de los tiburones,
así como métodos prácticos para llevar a cabo un buen manejo en las pesquerías, y de tal manera
determinar stocks pesqueros, así como también evaluar estudios demográficos poblacionales en
el contexto de la pesca INDNR (Dudgeon et al. 2012).
La aplicación de técnicas moleculares en la genética forense se ha ido desarrollando rápidamente
conforme la creación de nuevos análisis y la presión que existe para evaluar el estado de
conservación de las especies que se encuentran amenazadas (Hueter et al. 2004). Entre este tipo
de técnicas, aquellas correspondientes a la genética forense son aplicadas cuando no se pueden
identificar partes de animales por técnicas morfométricas o a simple vista y su importancia recae
en identificar especies que se encuentran en peligro de extinción que están siendo
comercializados a conciencia de los vendedores o, en los casos en que los comerciantes no
tengan el conocimiento adecuado de lo que venden (Alacs et al. 2009).
5
Dentro de la genética forense, existen distintos métodos que además de cumplir con la función
de la identificación de especies, también proporcionan información en a nivel poblacional,
filogeográfico y filogenético (Alacs et al. 2009). Uno de estos métodos es la secuenciación de
ADN mitocondrial y nuclear que es utilizada principalmente para la identificación de especies
(Alacs et al. 2009). La pirosecuenciación es utilizada en la identificación de especies y en la
genotipifación de identidades de poblaciones, identidades a nivel individuo y el grado de
parentesco que puedan llegar a tener los organismos con polimorfismos de nucleótidos sencillos
(SNP) (Ronaghi et al. 1998; Alacas et al. 2009).
Los primers especie-específicos son utilizados como una manera rápida y eficiente de
identificar una especie, sin dar más información a detalle (Pank et al. 2001; Alacs et al. 2009).
Por último, los microsatélites que también son llamados repeticiones cortas del tándem (STR)
o repeticiones sencillas del tándem (SSR), no son óptimas para la identificación a nivel de
especie, pero son excelentes para identificaciones a nivel individuo, población y parentesco
entre individuos (Ellegren 2004; Alacs et al. 2009).
Un problema que en general enfrenta la genética forense consiste en obtener ADN de productos
altamente procesados (Alacs et al. 2009), ya que frecuentemente se intenta extraer ADN de
especímenes que fueron procesados por largo tiempo, lo que conlleva a la degradación o a la
contaminación de los ácidos nucleicos (Holmes et al. 2009).
6
AntecedentesLa genética forense en la vida silvestre es un campo de estudio que tiene como objetivo principal
sintetizar la genética poblacional, la ecología molecular, la filogenética molecular y la
filogeografía de las especies que se encuentran amenazadas, para desarrollar las mejores
soluciones a retos específicos en miras de la conservación de vida silvestre (Ogden et al. 2009).
Las técnicas moleculares son de gran utilidad para la genética forense de la vida silvestre, ya
que se puede asignar el origen geográfico de productos comerciales, algo que es casi imposible
determinar por métodos morfológicos. Además, se pueden identificar las poblaciones que son
explotadas intensamente en el comercio internacional (Alacs et al. 2009).
Un ejemplo a nivel internacional de la aplicación de técnicas moleculares en la genética forense
es la sobreexplotación de las pesquerías. En este caso, por medio de polimorfismos de
nucleótidos sencillos, los cuales consisten en las variaciones de un nucleótido de una secuencia
del genoma, los pescados que son vendidos en el mercado europeo, pueden ser asignados a su
población de origen con altos niveles de precisión (Nielsen et al. 2012).
De esta manera, pueden aplicarse estas técnicas moleculares enfocadas a la genética forense a
problemas locales. En Dinamarca, se reportó que un barco pesquero había sobrepasado sus
límites de captura de bacalao en el Mar Norte. El capitán de la embarcación aseguró que había
conseguido sus productos legalmente del Mar Báltico. Como la misma especie de bacalao se
encontraba en ambos mares, se usaron marcadores “microsatélites”, para determinar que dicho
cargamento pesquero había violado el límite de captura de bacalao en el Mar Norte. De tal
manera que al capitán de esa embarcación se le fue impuesto una multa por las autoridades
locales (Stokstad 2010).
Los primeros trabajos de biología molecular para la identificación de especies, se llevaron a
cabo, por medio de proteínas (Bunch et al. 1976; McClymont et al. 1982, Mardini 1984). En
general estas técnicas comprendían la identificación de animales a través de la colecta de sus
tejidos, sangre o proteínas fáciles de extraer, con el fin de obtener un método que fuese sensitivo,
replicable, económico y eficiente, con el fin de identificar tejidos de especies que fueran muy
cercanas entre sí. Después se innovaron técnicas para la identificación de especies por medio de
genes (Thommasen et al. 1989; Cronin et al. 1991; Baker & Palumbi 1994).
7
En estos trabajos se ha buscado la identificación de animales mediante el uso de técnicas de
ADN recombinante, como la reacción en cadena de la polimerasa (Fig. 1) y la secuenciación
automática (Fig. 2). De esta forma se podrían reforzar las leyes dirigidas a la conservación de la
vida silvestre.
Fig. 1. Sucesión de pasos implícitos en el protocolo dirigido a amplificar genes de especiesprotegidas mediante su amplificación utilizando la reacción en cadena de lapolimerasa.1) Toma de biopsia. 2) Extracción de ADN. 3) Reacción en Cadena de laPolimerasa. 4) Verificación de la amplificación de los genes o regiones deseadas para laidentificación de alguna especie.
Fig. 2. Sucesión de pasos implícitos en el protocolo dirigido a tipificar genes de especiesprotegidas mediante su secuenciación automática. Se toman en cuenta los pasos pararealizar una reacción en cadena de la polimerasa. 1) Verificación de la amplificación dela región deseada de una especie. 2) Secuenciación automática. 3) Obtención desecuencias.
El locus ITS2 se ha usado como un marcador genético para identificar especies de seres vivos
con la ayuda de evaluaciones de la PCR (Fig. 3), y se han usado principalmente en organismos
microscópicos, algas e invertebrados (Bakker et al. 1992, Lott et al. 1993, Epe et al. 1999).
8
Fig. 3. Sucesión de pasos implícitos en el protocolo forense dirigido a identificar especiesmediante la amplificación y secuenciación de secuencias ITS2. Se toman en cuenta lospasos anteriores desde la toma de biopsia hasta la obtención de la secuencia, en este casoITS2. Los primers Forward y Reverse se anclan en la posición anterior y posterior,respectivamente, que corresponden al gen 5.8S y al gen 28S. De esta forma se obtiene lasecuencia de la región ITS2 para cada especie.
El primer trabajo realizado con este marcador genético para la identificación de tiburones,
consistió en una evaluación múltiple de la PCR con dos especies que son muy similares entre
sí: C. plumbeus y C. obscurus. Se usaron 26 muestras de C. obscurus y 51 muestras de C.
plumbeus para generar los primeros primers especie-específicos de la región ITS2 y pudieran
ser utilizados como un método rápido de identificación de estas especies (Pank et al. 2001).
Este trabajo sirvió como línea base para la elaboración de primers especie-específico para dos
especies de tiburones: tiburón blanco (Chapman et al. 2003) y tiburón peregrino (Magnussen et
al. 2007).
En el 2005 se detuvo a un comerciante de la costa este de Estados Unidos con un cargamento
de 900 kg de aletas secas de tiburón destinados a mercados asiáticos. Se identificaron 21
tiburones blancos, por medio de ensayos quíntuples de PCR con las regiones ITS2 y citocromo
b (Shivji et al. 2005)
Este mismo marcador molecular se ha usado en otras partes del mundo. En Chile se colectaron
654 aletas secas de tiburones de dos diferentes puntos de venta en el puerto de Coquimbo.
9
En este estudio se realizaron evaluaciones múltiples de la PCR usando los primers universales
del locus ITS2 para conocer la identidad de los tiburones a los cuales pertenecían las aletas. Se
usaron 10 primers especie-específicos para la identificación de 10 especies diferentes: Alopias
vulpinus, A. superciliosus, C. obscurus, Isurus oxyrinchus, I. paucus, Prionace glauca, S. lewini,
S. zygaena y S. mokarran. Debido a la complejidad de identificar aletas de tiburones que son
comercializadas internacionalmente, esta herramienta genética-forense es utilizada para
resolver estos tipos de problemas. (Sebastián et al. 2008). Se realizó un estudio similar en Hong-
Kong, donde se colectaron 596 aletas secas de 11 mercados distintos. Se usaron primers especie-
específicos y universales de la región ITS2 y por medio de una evaluaciones múltiples de PCR,
se identificaron a las especies correspondientes de cada aleta adquirida, en las que figuran las
especies: P. glauca, I. oxyrinchus, C. falciformis, C. plumbeus, C. leucas, C. longimanus,
Galeocerdo cuvier, S. Lewini, S. zygaena y Alopias. Spp (Clarke et al. 2006)
10
JustificaciónEn las secciones previas se hace referencia a la incidencia de pesca de tiburones catalogada
como ilegal, no declarada y no regulada tanto a nivel internacional como nacional. Esta actividad
se señala como la causa principal de la situación precaria que guardan las poblaciones de
tiburones más explotadas. Debido a la falta de trabajos constantes y de peso científico a nivel
nacional, en cuanto a la toma de datos en las pesquerías de tiburones, cabe mencionar que existe
un vacío de información importante respecto a la cuantificación objetiva del impacto que tienen
las actividades pesqueras en las poblaciones de tiburones en México.
Lo anterior indica la idoneidad de explorar a escala regional, qué especies de tiburones son las
más impactadas por la pesca ilegal, y los incentivos que la impulsan. Y así revelar posibles
actividades de apoyo a estrategias de gestión más eficientes en varios niveles de la cadena de
valor, desde el momento en que el animal es capturado hasta el momento en que sus productos
son comercializados.
Además cabe destacar la importancia de los tiburones en su medio natural como depredadores
en la cima de la cadena trófica y el efecto que causaría el impacto de este tipo de pesca, debido
a que presentan estadíos de madurez sexual tardíos, fecundidad baja y períodos de gestación
largos y por consecuente propiciaría una recuperación muy lenta en sus poblaciones ante dicho
impacto.
En este contexto, se percibió que una tarea fundamental es la identificación de especies que son
pescadas ilegalmente, lo cual constituye una herramienta muy valiosa para su seguimiento,
control y vigilancia.
Un incentivo importante que impulsa la pesca INDNR es el intento de eludir la limitación de las
capturas, lo que indirectamente propicia la venta de pescado:
1. Falseando el nombre de su especie.
2. Falseando su fecha de captura.
3. Con etiqueta falsa.
4. Falseando el reporte de su origen geográfico.
11
Por lo tanto la identificación a nivel de especie de productos pesqueros con la apariencia de
tiburón, se percibe aquí como una de las tareas esenciales en las que debe sustentarse el marco
jurídico contra las actividades ilegales.
Por otra parte, esta trazabilidad también representa una garantía para la salud pública y la
protección del consumidor, siendo una herramienta útil para asegurar la vigilancia y certificar
el origen de los peces a lo largo de la cadena de suministro de alimentos.
Lo descrito previamente, cobra especial importancia en el marco del creciente interés por vender
y consumir productos, cuya extracción es amigable con la ecología (Brécard et al. 2009). Esto
se basa en un sistema de etiquetado ecológico, que asegura a los consumidores que el producto
que adquieren se ha producido de acuerdo con normas ambientales dirigidas a la sustentabilidad,
y reduce el impacto sobre los ecosistemas en el método de producción.
La comunidad europea ha puesto en marcha un amplio debate sobre los sistemas de etiquetado
de los productos pesqueros, el cual ha derivado en el reglamento (CE) no 104/2000 y 2065/2001.
El cual dicta que los productos pesqueros deben ser etiquetados con el nombre de la especie, dar
información correcta sobre su zona de captura e incluso su clase de edad, aplicando en todos los
estados de la Unión Europea.
Independientemente de las presiones internacionales que señalan a México como un país que
practica la pesca INDNR, sería deseable, para los consumidores, la propuesta de normas de
etiquetado en los productos que se venden en los mercados de pescado y mariscos, así como un
control previo que certifique la aplicación correcta de tales normas.
Por lo anterior, se decidió explorar la dificultad de desarrollar tal tarea, desde un punto de vista
superficial, a través de la identificación a nivel de especie de los productos de pescado semi-
procesados o congelados, que no son directamente identificables, pero que se sospechó que
correspondían a especies de tiburones.
La aplicación de técnicas moleculares y químicas han revelado herramientas poderosas para este
fin, y han aportado evidencia contundente de la gran frecuencia del etiquetado incorrecto de
mariscos y tiburones en la industria europea, especialmente en términos de sustitución de
especies (Blanco et al. 2008; Filonzi et al. 2010; Miller & Mariani 2010; Miller et al. 2011).
12
Además de que en algunos casos son el único medio de identificación de especies, debido a que
no se pueden detectar por guías de identificación, ya que los productos están procesados, o se
venden en partes (tronchos, aletas, mandíbulas, etc) que son muy difíciles de identificar.
México ha sido señalado como uno de los principales países en los se efectúa la pesca INDNR.
A nivel internacional y nacional acorde a evidencias reportadas (Cisneros-Montemayor et al.
2013; Worm et al. 2013), este tipo de pesca tiene impactos nocivos en las especies de tiburones
que son su objetivo. El incentivo que impulsa a este tipo de actividades es el intento de eludir la
imitación de capturas, lo que indirectamente propicia la venta de productos etiquetados de
manera fraudulenta y de esta forma, generar ganancias que no corresponden a la venta del
producto “tiburón” al ofrecerlo como especies de mayor valía comercial, lo que se tipifica como
fraude.
Lo anterior justifica el desarrollo un trabajo como el presente, dirigido a verificar si en los
mercados de productos pesqueros importantes de la península de Baja California se incurre en
estas actividades irregulares, mediante el uso de técnicas forenses genéticas aplicadas a la vida
silvestre.
13
HipótesisAcorde a lo descrito en la sección de justificación se derivaron las siguientes hipótesis de
trabajo:
Ho: Las muestras de productos pesqueros, que se ofrecen en mercados importantes en la
península de Baja California como especies pelágicas de alto valor (e.g. Xiphias gladius, Kajikia
audax, Tetrapturus angustirostris, Makaira nigricans), se tipificarán como la especie ofertada
y no como alguna especie de tiburón.
HA: Las muestras de productos pesqueros, que se ofrecen en mercados importantes en la
península de Baja California como especies pelágicas de alto valor (e.g. Xiphias gladius, Kajikia
audax, Tetrapturus angustirostris, Makaira nigricans), se tipificarán como pertenecientes a
alguna especie de tiburón.
Ho1: Las muestras tipificadas como pertenecientes a especies de tiburón, no corresponderán a
especies de tiburones que estén protegidas por la NOM-029-PESC-2006, se encuentren en la
lista roja de la IUCN o en algún apéndice del CITES y/o CSM.
HA1: Entre las muestras tipificadas como pertenecientes a especies de tiburón se identificarán
especies protegidas por la NOM-029-PESC-2006, referenciadas en la lista roja de la IUCN o en
algún apéndice del CITES y/o CSM.
14
ObjetivosObjetivo General
I. Verificar por medio de análisis genético forense, si se utilizan especies de tiburones
para suplantar productos pesqueros de mayor calidad en algunos de los principales
mercados locales de la península de Baja California, y de ser así, si las especies de
tiburones con que se realiza este tipo de fraude se encuentran protegidas por algún
organismo nacional o internacional.
Objetivos Particulares
i. En cinco mercados de productos pesqueros representativos de la península de Baja
California Sur, determinar mediante la amplificación y secuenciación automática de
la región ITS2 si los productos pesqueros que se expenden etiquetados como
“marlín”, “pez espada” (“Swordfish”) o “cazón” en realidad son especies de
tiburones que se venden de manera fraudulenta.
ii. Identificar, en su caso, a las especies de tiburones que se expenden de manera
fraudulenta como “marlín”, “pez espada” o “cazón” y verificar con qué frecuencia
se encuentran entre las mismas, especies protegidas por organismos internacionales
y nacionales de conservación.
iii. Generar información genética y de capturas ilegales, no declaradas y/o no reguladas
acerca de las especies de tiburones que están siendo pescadas y vendidas como
“marlín”, “pez vela” o “cazón”, con el fin de sugerir modificaciones de inspección y
vigilancia en la NOM-029 a la SAGARPA a través de la INAPESCA y
CONAPESCA, utilizando análisis genéticos forenses en este tipo de mercados, en
vista de este tipo de pesca y comercio.
iv. Crear una base de datos de las secuencias de la región ITS2 para las diversas especies
de tiburones que se hayan identificado.
15
Materiales y métodos
Colecta de porciones de carne de tiburón en mercados localesEn el año 2012, una persona de nacionalidad inglesa que trabaja en la industria de la filmación
llegó al mercado negro de Ensenada (Fig. 4) con la preocupación de creer haber encontrado
cuerpos de juveniles de tiburón blanco que se vendían en ese mismo mercado, por lo cual
contactó a distintos investigadores, entre ellos al Dr. Mauricio Hoyos, experto en tiburones en
México, para hablar sobre el tema.
Fig. 4. Mercado Negro de Ensenada, también conocido como mercado de Mariscos.
Tras haber recibido dicho llamado y con observaciones previas realizadas en tal mercado, el
Dr. Hoyos confirmó que existía la probabilidad de poder encontrar juveniles de tiburón blanco
que fueran vendidos como “marlín” o “pez espada”. Ese mismo año Dr. Hoyos y su estudiante
Edgar Becerril compraron 10 rebanadas de troncho de los productos que ofertaban como “pez
16
espada” y “marlín”. Esas rebanadas de tronchos fueron conservadas en alcohol etílico al 96% y
llevadas a La Paz.
Las rebanadas de tronchos fueron entregadas al Dr. Sergio Flores y a su alumno Alexis Jiménez.
En ese momento se platicaron sobre los avistamientos que se creían tener de juveniles de tiburón
blanco siendo vendidos en el mercado negro de Ensenada, por lo que surgió el proyecto de
evaluar las rebanadas de tronchos que se obtuvieran por medio de análisis de genética forense y
verificar si corresponderían a tiburón blanco.
En el 2013, Edgar Becerril proporcionó dos rebanadas de troncho más a la colección que se
tenían del mercado negro de Ensenada.
En el 2014, se realizaron las evaluaciones de las 12 rebanadas de troncho obtenidas. Al verificar
los resultados y observar que no había ninguna evidencia genética de que alguna rebanada de
troncho correspondiera a tiburón blanco y al encontrar una especie de tiburón martillo, especie
protegida a nivel internacional, se tomó la decisión de ampliar el estudio a las especies de
tiburones que pudieran estar protegidas por instituciones internacionales, además de ampliar el
número de mercados de donde se pudieran obtener porciones de carne de tiburón, donde se
sospechara que hubiera algún comercio fraudulento.
17
En todo el estudio se visitaron 5 mercados locales de productos pesqueros en dos localidades de
la península de Baja California. Un mercado en Ensenada y cuatro en La Paz (Tabla I).
Tabla I. Mercados de la península de Baja California de donde se obtuvieron las porciones de
carne
Mercado Ubicación DirecciónPuestos de
ventaNegro o Mercado deMariscos
Ensenada Boulevard costero esquina Miramar 14
Municipal NicolásBravo
La PazNicolás Bravo esquina con GuillermoPrieto
5
Francisco I. Madero La PazRevolución de 1910 entre SantosDegollado y Melchor Ocampo
4
Municipal GeneralAgustin Olachea Avilés
La PazIgnacio Allende entre VenustianoCarranza y Juan Dominguez Cota
3
Chedraui "Palacio" La PazIsabel La Católica #1915 entre NicolásBravo y Antonio Rosales
1
En el año 2014 en Ensenada, se compraron rebanadas de troncho frescas de “Marlín”,
“Swordfish” (o pez espada, el etiquetado del producto en ocasiones solo estaba en inglés) (Fig.
5) o “cazón”, bajo una falsa identidad. Esta identidad correspondía a un chef del interior de la
república mexicana, que tenía un trabajo temporal en Ensenada y se dedicaba a preparar
diariamente platillos elaborados exclusivamente con “marlín” y “swordfish”. En los primeros 5
días de la aparición del falso chef en el mercado, este les hacía preguntas a los vendedores sobre
cuales productos pesqueros de marlín o pez espada que ofertaban en sus puestos de venta, tenían
la mejor calidad para consumo. Con el paso de los días, los vendedores se acostumbraron a su
presencia y le vendían sus productos sin tener sospecha alguna, de que las rebanadas de troncho
eran compradas con otro fin.
18
Fig. 5. “Swordfish” o “Pez espada” que se vende en el Mercado Negro de Ensenada a $60.00
M.N por kilogramo.
19
Se puso atención en los tronchos que se veían sospechosos y tuvieran alguna de estas
características:
A.) La presencia de una quilla caudal lateral (Fig. 6).
Fig. 6. Quilla caudal (señalada con la flecha roja) de una rebanada de troncho. Fue identificada
como I. oxyrinchus.
B.) Una coloración grisácea en todo el borde de la piel (Fig. 7).
Fig. 7. Rebanada de troncho del Mercado Negro de Ensenada adquirida como “Pez espada”
(Swordfish). Se aprecia la coloración grisácea en todo el borde de la piel. Fue identificado como
S. zygaena.
20
C.) Una coloración blanca en la parte inferior (Fig. 8).
Fig. 8. Rebanada de troncho del Mercado Negro de Ensenada adquirida como “Pez espada”
(Swordfish). Se aprecia la coloración blanca en la parte inferior. Fue identificado como
I. oxyrinchus.
Todas las muestras de Ensenada se cortaron en pequeñas rebanadas y se conservaron en alcohol
etílico 96%.
21
La obtención de porciones de carne de tiburón en La Paz empezó en el verano del 2014 y
concluyó en el mes de marzo del 2015. Todas las porciones de carne de tiburón fueron obtenidas
mediante la compra directa en los mercados (Fig. 9), además de qué se conservaron en un
congelador a -20 °C.
Fig. 9. Mercados locales de La Paz y una cadena comercial nacional. En la parte superiorizquierda se aprecia el Mercado Francisco I. Madero, en la parte inferior izquierda seaprecia el Mercado Municipal General Agustin Olachea Avilés, en la parte superiorderecha se aprecia el Mercado Municipal Nicolás Bravo y en la parte inferior derecha seaprecia Chedraui Palacio.
Todas las muestras se transportaron al laboratorio de Ecología Molecular y Conservación de la
Universidad Autónoma de Baja California Sur, unidad Pichilingue, donde se efectuaron los
siguientes procedimientos:
22
Extracción de ADN y verificación de su calidadEl ADN de las porciones de carne se extrajo siguiendo el protocolo de extracción modificado
de NaCl (Aljanabi & Martinez 1997) descrito en el ANEXO I.
La integridad del ADN se verificó mediante electroforesis en un gel de agarosa de 1%, con 1.5
μL de bromuro de etidio [10 mg/mL], cargando 10 μL de ADN genómico por 2 μL de buffer de
carga (Azul de bromo-fenol). Cada gel se corrió a 110 V por dos horas (Fig. 10).
23
Fig. 10. Verificación de la calidad de ADN. Se muestra el barrido de ADN conforme a lacantidad que se obtuvo. En la parte superior de izquierda a derecha: ENSM: 4,5,14,22,25,LADDER, ENSM: 26,27,28,29,30,31. En la parte inferior de izquierda a derecha:ENSM:33,34,35,36,37, LADDER, ENSM: 38,39,41,42,43,44.
24
Amplificación, secuenciación automática y análisis bioinformático de la regiónITS2 de las muestras vía Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR)
Para amplificar y secuenciar la secuencia diagnóstica especie específica de las muestras
colectadas se utilizaron los primers universales para la identificación de tiburones FISH28SR:
5’-TCC TCC GCT TAG TAA TAT GCT TAA ATT CAG C-3’ y FISH5.8SF: 5’-TTA GCG
GTG GAT CAC TCG CGT CGT-3’ (Pank et al. 2001) que amplifican completamente la región
del gen ITS2, así como pequeñas porciones de los genes 5.8 S (anterior a la región ITS2) y 28
S (posterior a la región ITS2) en los límites de 800 y 1500 bp.
Para una reacción de 25 μL se utilizaron 13.5 μL de agua destilada, 5 μL de GoTaq® Flexi
Buffer 5X, 2 μL de MgCl2 25 mM, 1 μL de dNTP’s [10 mM], 1 μL de cada primer [12.5 pm], 1
μL de ADN y 0.25 μL de GoTaq® DNA Polymerase [0.25u] El perfil de termociclado constó
de tres fases: en la primera fase una desnaturalización inicial a 95 °C por 2 minutos, en la
segunda fase se corrieron 35 ciclos de tres pasos: el primer paso correspondiente a una
desnaturalización a 95 °C por 1 minuto, el segundo paso al anillamiento a 65 °C por 1 minuto y
el tercer paso a la extensión de 72 °C por 1 minutos, en la tercera y última fase se corrió una
extensión final de 72 °C por 5 minutos.
Los resultados se verificaron en un gel de agarosa de 1%, con 1 μL de bromuro de etidio [10
mg/mL], cargando 3 μL de producto de PCR por 1 μL de buffer de carga (Azul de bromo-fenol).
El gel se corrió a 80 V por tres horas (Fig. 11).
25
Fig. 11. Amplificación de productos de PCR. Se muestra la presencia de la región amplificadade la región ITS2 para tiburones de las muestras de mercado mal etiquetadas. Deizquierda a derecha: LADDER, ENSM:44,30,20,10,7,6 LPZM:9,8,7,6.
Todos los productos de PCR del tamaño esperado, se mandaron a secuenciar automáticamente
(Macrogen, Corea) en dirección Forward, seleccionando aquellas con cromatogramas de alta
calidad, las que se editaron mínimamente con el Software ChromasPro. Las secuencias editadas
se analizaron con BLASTn para determinar las especies de tiburones a las que pertenecen,
mediante el porcentaje de identidad, el puntaje (score) y el valor esperado (Valor E) que
presentaron.
26
Resultados
Colecta de muestras en mercados localesSe obtuvieron 79 muestras en 5 mercados de productos marinos locales de la península de Baja
California. De La Paz se consiguieron un total de 18 muestras y de Ensenada 60 muestras. En
el año 2012, 10 muestras fueron conseguidas, en el 2013, dos muestras, en el 2014, 40 muestras
y en el 2015, 16 muestras (Tabla II).
Tabla II. Relación tiburón identificado-producto marino vendido mal etiquetado en su
totalidad, por ubicación y por temporalidad en este estudio.
Ubicación Año
Especies de tiburónVendido
como No. individuos La Paz Ensenada 2012 2013 2014 2015
Isurus oxyrinchus"Swordfish/
Marlin"45 1 44 8 2 34 1
Sphyrna zygaena"Swordfish/Marlin" y
”Cazón seco”18 9 9 2 0 7 9
Alopias pelagicus"Swordfish/
Marlin"5 0 5 0 0 5 0
Mustelus mustelus "Cazón" 4 4 0 0 0 0 4
Carcharhinusfalciformis
"Cazón seco"&
“Swordfish3 2 1 0 0 2 1
Carcharodoncarcharias
“Cazón” 1 0 1 0 0 1 0
Sphyrna lewini "Cazón" 1 1 0 0 0 0 1
Rhizoprionodonlongurio
"Cazón" 1 1 0 0 0 1 0
78 18 60 10 2 50 16
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Perfil genético-forense de las muestras de “marlín”, “swordfish” y “cazón”.
De un total de 79 secuencias analizadas, 78 pertenecen a ocho especies de tiburones:
Carcharodon carcharias, Isurus oxyrinchus, Sphyrna lewini, Sphyrna zygaena, Rhizoprionodon
longurio, Carcharhinus falciformis, Mustelus mustelus y Alopias pelagicus. La otra secuencia
corresponde a Rhinobatos productus (Pez Guitarra).
Las especies identificadas en Ensenada corresponden a: I. oxyrinchus, S. zygaena, A. pelagicus,
C. falciformis y C. carcharias. En la muestra que fue obtenida como “cazón” se identificó a C.
carcharias, especie protegida a nivel nacional e internacional (Tabla III).
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Tabla III. Productos pesqueros ofertados como “Marlín”, “Pez espada” y “Cazón” en el MercadoNegro de Ensenada obtenidos entre el 24 de agosto del 2012 y el 13 de septiembredel 2014.
Muestra Localidad FechaVendido
comoEspecie
ValorE
Identidad
E1 Ensenada 24-ago-12 “Marlin” I. oxyrinchus 0.0 92%E2 Ensenada 25-ago-12 “Marlin” I. oxyrinchus 0.0 92%E3 Ensenada 10-sep-12 “Marlin” I. oxyrinchus 0.0 93%E4 Ensenada 11-sep-12 “Marlin” I. oxyrinchus 0.0 90%E5 Ensenada 11-sep-12 “Swordfish” I. oxyrinchus 0.0 93%E6 Ensenada 08-nov-12 “Swordfish” S. zygaena 0.0 99%E7 Ensenada 08-nov-12 “Marlin” I. oxyrinchus 0.0 94%E8 Ensenada 08-nov-12 “Marlin” S. zygaena 0.0 99%E9 Ensenada 08-nov-12 “Marlin” I. oxyrinchus 0.0 90%
E10 Ensenada 08-nov-12 “Marlin” I. oxyrinchus 0.0 95%E11 Ensenada 18-sep-13 “Swordfish” I. oxyrinchus 0.0 93%E12 Ensenada 18-sep-13 “Swordfish” I. oxyrinchus 0.0 91%E13 Ensenada 25-ago-14 “Marlin” I. oxyrinchus 2e-96 88%E14 Ensenada 26-ago-14 “Marlin” I. oxyrinchus 3e-168 89%E15 Ensenada 26-ago-14 “Marlin” A. pelagicus 4e-74 78%E16 Ensenada 27-ago-14 “Marlin” I. oxyrinchus 0.0 89%E17 Ensenada 27-ago-14 “Swordfish” A. pelagicus 0.0 99%E18 Ensenada 27-ago-14 “Marlin” I. oxyrinchus 0.0 96%E19 Ensenada 28-ago-14 “Swordfish” I. oxyrinchus 4e-19 69%E20 Ensenada 28-ago-14 “Swordfish” I. oxyrinchus 0.0 90%E21 Ensenada 28-ago-14 “Marlin” S. zygaena 0.0 97%E22 Ensenada 29-ago-14 “Marlin” S. zygaena 0.0 93%E23 Ensenada 29-ago-14 “Swordfish” I. oxyrinchus 2e-81 78%E24 Ensenada 29-ago-14 “Swordfish” I. oxyrinchus 0.0 95%E25 Ensenada 09-sep-14 “Cazón” C. carcharias 0.0 88%E26 Ensenada 30-ago-14 “Swordfish” S. zygaena 0.0 92%E27 Ensenada 30-ago-14 “Swordfish” A. pelagicus 0.0 99%E28 Ensenada 30-ago-14 “Swordfish” I. oxyrinchus 0.0 90%E29 Ensenada 30-ago-14 “Swordfish” I. oxyrinchus 0.0 91%E30 Ensenada 31-ago-14 “Marlin” I. oxyrinchus 0.0 92%E31 Ensenada 31-ago-14 “Swordfish” S. zygaena 0.0 96%E32 Ensenada 31-ago-14 “Swordfish” I. oxyrinchus 1e-170 90%E33 Ensenada 31-ago-14 “Swordfish” S. zygaena 0.0 92%E34 Ensenada 31-ago-14 “Swordfish” S. zygaena 0.0 91%E35 Ensenada 01-sep-14 “Marlin” I. oxyrinchus 0.0 86%E36 Ensenada 01-sep-14 “Swordfish” I. oxyrinchus 3e-96 78%E37 Ensenada 01-sep-14 “Swordfish” I. oxyrinchus 0.0 94%E38 Ensenada 02-sep-14 “Marlin” I. oxyrinchus 0.0 95%E39 Ensenada 02-sep-14 “Swordfish” I. oxyrinchus 4e-112 82%E40 Ensenada 02-sep-14 “Swordfish” I. oxyrinchus 0.0 96%E41 Ensenada 03-sep-14 “Swordfish” I. oxyrinchus 0.0 83%E42 Ensenada 03-sep-14 “Swordfish” I. oxyrinchus 0.0 89%E43 Ensenada 03-sep-14 “Marlin” I. oxyrinchus 6e-64 82%E44 Ensenada 03-sep-14 “Marlin” I. oxyrinchus 0.0 89%E45 Ensenada 04-sep-14 “Swordfish” I. oxyrinchus 2e-160 88%E46 Ensenada 09-sep-14 “Marlin” I. oxyrinchus 2e-60 73%E47 Ensenada 09-sep-14 “Swordfish” I. oxyrinchus 6e-157 88%E48 Ensenada 09-sep-14 “Swordfish” I. oxyrinchus 0.0 91%E49 Ensenada 09-sep-14 “Swordfish” I. oxyrinchus 0.0 88%
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Tabla III. ContinuaciónE50 Ensenada 29-ago-14 “Swordfish” S. zygaena 0.0 92%E51 Ensenada 09-sep-14 “Swordfish” A. pelagicus 0.0 99%E52 Ensenada 10-sep-14 “Swordfish” I. oxyrinchus 2e-109 88%E53 Ensenada 10-sep-14 “Swordfish” I. oxyrinchus 0.0 94%E54 Ensenada 11-sep-14 “Marlin” I. oxyrinchus 4e-139 84%E55 Ensenada 11-sep-14 “Swordfish” C. falciformis 0.0 90%E56 Ensenada 12-sep-14 “Swordfish” A. pelagicus 0.0 99%E57 Ensenada 12-sep-14 “Swordfish” I. oxyrinchus 7e-149 85%E58 Ensenada 12-sep-14 “Swordfish” I. oxyrinchus 6e-55 80%E59 Ensenada 13-sep-14 “Swordfish” I. oxyrinchus 1e-140 84%E60 Ensenada 13-sep-14 “Swordfish” I. oxyrinchus 6e-138 83%
Las especies de tiburón identificadas en La Paz correspoden a: S. lewini, S. zygaena, I.
oxyrinchus, R. longurio, C. falciformis y M. mustelus. La distribución de esta última especie no
pertenece al océano Pacífico. La especie R. productus es la única que no pertenece al grupo de
los tiburones (Tabla IV).
Tabla IV. Productos pesqueros ofertados como “Cazón” y “Cazón Seco” en los mercados de La
Paz obtenidos entre el 14 de julio del 2014 y el 20 de marzo del 2015.
Muestra Localidad FechaVendido
comoEspecie
ValorE
Identidad
LP1 La Paz 14-jul-14 “Cazón” R. longurio 0.0 91%
LP2 La Paz 14-jul-14"Cazónseco"
C. falciformis 0.0 97%
LP3 La Paz 14-jul-14"Cazónseco"
S. zygaena 0.0 97%
LP4 La Paz 14-jul-14 "Cazón" R. productus 0.0 94%LP5 La Paz 21-mar-15 "Cazón" M. mustelus 0.0 92%LP6 La Paz 21-mar-15 "Cazón" M. mustelus 0.0 92%LP7 La Paz 21-mar-15 "Cazón" M. mustelus 0.0 93%LP8 La Paz 21-mar-15 "Cazón" C. falciformis 0.0 91%LP9 La Paz 21-mar-15 "Cazón" M. mustelus 0.0 91%
LP10 La Paz 21-mar-15 "Cazón" I. oxyrinchus 0.0 93%LP11 La Paz 21-mar-15 "Cazón" S. lewini 0.0 99%LP12 La Paz 28-mar-15 "Cazón" S. zygaena 0.0 98%LP13 La Paz 28-mar-15 "Cazón" S. zygaena 0.0 97%LP14 La Paz 28-mar-15 "Cazón" S. zygaena 0.0 98%LP15 La Paz 28-mar-15 "Cazón" S. zygaena 0.0 99%LP16 La Paz 28-mar-15 "Cazón" S. zygaena 0.0 98%LP17 La Paz 28-mar-15 "Cazón" S. zygaena 0.0 99%LP18 La Paz 28-mar-15 "Cazón" S. zygaena 0.0 98%LP19 La Paz 28-mar-15 "Cazón S. zygaena 0.0 98%
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Se extrajo ADN de dos muestras procesadas y empaquetadas en una cadena comercial nacional
etiquetadas como “Cazón Seco” (Fig. 12) y su secuencia correspondió a dos especies diferentes:
S. zygaena y C. falciformis.
Fig. 12. Sphyrna zygaena, etiquetado como “Cazón Seco” que fue vendido en una cadena
comercial nacional el 14 de julio del 2014.
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Discusión
Colecta de muestras en mercados locales
Este trabajo se realizó con miras a la conservación de los tiburones dentro de las aguas de
jurisdicción mexicanas correspondientes al Océano Pacífico, siendo el primero en su tipo.
El mercado de Ensenada cuenta con 14 puestos de venta, en donde se comercializan productos
marinos de 08:00 AM a 04:00 PM. Estos productos son guardados en hieleras y ofrecidos al
público en unas tablas de madera inclinadas al aire libre. En ocasiones se podían observar
cuerpos de tiburones sin cabezas, ni aletas siendo transportadas por medio de una carretilla hacia
los puestos de venta (Fig. 13).
Fig. 13. Tronchos de tiburones que son transportados hacia los puestos de venta en el mercado
de Ensenada.
En los mercados de La Paz, tres eran locales, en donde se vendían los productos marinos a la
vista del público, pero cubiertos con un plástico o dentro una vitrina, para evitar cualquier tipo
de contaminación. Estos mercados contaban con un horario de 08:00 AM a 04:00 PM.
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El cuarto mercado era una cadena comercial nacional y vendían productos marinos que estaban
procesados, empaquetados y etiquetados como “Cazón Seco”. Esta cadena comercial contaba
con un horario de 08:00 AM a 11:00 PM.
Al obtener muestras del mercado de Ensenada, en algunas ocasiones se conseguían en estado de
descomposición (Fig. 14). El estado sanitario de la carne vendida se debe a las pobres
condiciones de preservación en los puestos de venta, lo cual derivaría en la obtención de un
ADN degradado (Holmes et al. 2009). Por tal motivo se desechó una de las muestras
conseguidas (debido a su olor fétido).
Fig. 14. Pedazo de porción de carne adquirida como “Marlín” en estado de descomposición.
Para el caso de las muestras conseguidas durante el 2014 en los mercados de La Paz, se
obtuvieron en una fecha correspondiente a la veda de la NOM-029-PESC-2006 para el Pacífico
Mexicano (DOF 2007). Por lo que tendría que haberse determinado si este producto fue extraído
durante la veda con bas en características de textura y organolépticas, para verificar si se estaba
rompiendo con la veda o este producto había estado almacenado, y había sido capturado durante
el periodo permitido.
Perfil genético-forense de las muestras de “marlín”, “swordfish” y “cazón”.
En el caso de la identificación de una muestra conseguida en un mercado de La Paz y vendida
como “cazón”, se obtuvo R. productus, especie que corresponde a la familia Rhinobatidae y es
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endémica del Pacífico Oriental, desde San Francisco hasta el Golfo de California (Ebert 2003).
En este caso se observa que por lo menos una especie de raya también es vendida como “cazón”.
En algunos lados de Baja California Sur es comercializada como cazón (Villavicencio-Garayzar
1996).
Se identificaron 4 individuos como M. mustelus en este trabajo, especie cuya distribución no
corresponde al océano Pacífico. M. mustelus y M. punctulatus son los únicos tiburones del
género Mustelus que aparecen en el Gen Bank con el marcador ITS2. Pero en la parte occidental
y oriental de la península de Baja California solo se tienen registradas a las especies: M.
californicus, M. henlei, M. lunulatus y M. albipinnis (Castro 2011). Por lo cual las secuencias
que se obtuvieron podrían ser de estas cuatro especies.
M. lunulatus junto con M. californicus son de los tiburones más abundantes en aguas someras
en el Golfo de California. M. lunulatus tiene una posible área de crianza en la parte superior del
Golfo de California. Esta misma especie es pescada en gran abundancia de manera local en el
Golfo de California. Es vivíparo placentario con un periodo de gestación puede durar hasta 11
meses. En el Golfo de California, su temporada de dar a luz es de a mediados de febrero a finales
de abril. El ciclo de reproducción de los tiburones del género Mustelus es anual (Pérez Jiménez
2006).
M. henlei se distribuye desde la Bahía de Humboldt en California hasta el Golfo de California.
Es un vivíparo placentario con un periodo de gestación de 10 meses (Pérez Jiménez & Sosa-
Nishizaki 2008). En marzo los embriones alcanzan su máximo desarrollo (Pérez Jiménez 2006).
M. californicus se distribuye desde la parte norte de California hasta el Golfo de California
(Pérez Jiménez et al. 2005). Es un vivíparo placentario con un periodo de gestación de 11 meses.
En el Golfo de California da a luz en los meses de abril y mayo (Pérez Jiménez 2006). Se cree
que puede haber un área de crianza en la parte superior del Golfo de California (Pérez Jiménez
2006).
M. albipinnis se distribuye a lo largo de toda la península de Baja California. Es un vivíparo
placentario. Solo se han registrado reportes de embriones en el mes de marzo (Pérez Jiménez et
al. 2005).
Las demás especies identificadas si cuentan con una distribución en el Pacífico Mexicano.
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C. falciformis habita en aguas cálidas tropicales y sub-tropicales. En el Pacífico Oriental se
distribuye desde la península de Baja California hasta el sur de Perú. Es un vivíparo placentario.
Su periodo de gestación es de 12 meses (Castro 2011).
R. longurio habita las aguas tropicales del Pacífico Oriental desde el sur de California hasta Perú
(Kano et al. 1967). Es muy común en el Golfo de California y en el Pacífico Mexicano. Ha sido
descrito como el tiburón más abundante de la familia Carcharhinidae dentro del Golfo de
California (Thomson et al. 1979). Existen registros de que esta especie es altamente migratoria,
ya que hacen movimientos por temporadas donde van de norte a sur de la península de Baja
California (Kato & Hernández Carvallo 1967; Márquez-Farías et al. 2005). Es un tiburón
vivíparo placentario con un periodo de gestación de 10 a 12 meses. Su ciclo reproductivo es
anual y las hembras dan a luz de abril a junio (Márquez-Farías et al. 2005).
S. zygaena habita en aguas templadas de todo el mundo y es raro encontrarlo en aguas tropicales.
En el Pacífico Oriental es encontrado desde California Central hasta Chile (Miller & Lea 1972).
Es localmente abundante en el Golfo de California. Es un vivíparo placentario. Tiene un ciclo
reproductivo cada dos años (Castro 2011).
S. lewini es un tiburón circumtropical de aguas costeras y oceánicas. En el Pacífico Oriental se
distribuye desde California hasta Chile. Es vivíparo placentario con un ciclo reproductivo anual
y un periodo de gestación de 10 meses (Castro 2011). Los juveniles son capturados en altas
proporciones en la zona costera con redes de enmalle por sus habitos alimenticios y la forma de
la cabeza que los hace altamente vulnerables al arte de pesca (Anislado y Robinson 2001).
A. pelagicus se distribuyen en el Pacífico Oriental desde California hasta el sur de México,
incluyendo el Golfo de California. Es un vivíparo aplacentario con alimentación por oofagia en
su desarrollo embrionario. Se reproduce durante todo el año y tiene un ciclo reproductivo anual
(Castro 2011).
I. oxyrinchus se encuentra en aguas tropicales, sub-tropicales y templadas de todos los océanos.
Es un vivíparo aplacentario con alimentación por oofagia en su desarrollo embrionario. Su
periodo de gestación es de un año (Castro 2011).
Además de la identificación a nivel especie, sería deseable la asignación de cada uno de los
tiburones a su población de origen, ya que se sabe que todas estas especies se pescaron en el
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Pacífico Mexicano. Por lo que sería importante ver si son tiburones que tienen poblaciones
locales o son tiburones migratorios de poblaciones fuera del Pacífico Mexicano. Por ejemplo,
se sabe que en la región sur del Golfo de California, C. falciformis, R. longurio, S. zygaena y S.
lewini se reproducen principalmente en Bahía Santa María-Altata, Sinaloa (Salomón-Aguilar et
al. 2009), por lo que algunas de las porciones de carne obtenidas como “cazón” pudieran
pertenecer a estas zonas de reproducción.
En GenBank solo se encuentran 59 secuencias de tiburones reportadas con la región ITS2,
mientras que para citocromo oxidasa I (COI) hay 262 secuencias de tiburones, para citocromo
b (CYTB) hay 97 secuencias de tiburones y para el gen ribosomal 16S hay 181 secuencias de
tiburones.
Antes del presente trabajo, se refería al código de barras de ADN como un método promisorio
para la identificación de especies específicas (Hebert et al. 2003). Esta técnica se basa en el
análisis de la variabilidad de una secuencia de nucleótidos corta (en animales) que constituye la
subunidad 1 del gen mitocondrial Citocromo Oxidasa para evaluar diferencias entre especies
(Hebert et al. 2003). La técnica se ha utilizado con éxito en numerosos taxa desde invertebrados
(Hebert et al. 2004 (b); Hogg & Hebert 2004; Hajibabaei et al. 2006) a vertebrados (Hebert et
al. 2004; Clare et al. 2006; Yoo et al. 2006), permitiendo diferenciar entre distintas especies, a
menudo de manera consistente con las clasificaciones morfológicas (Ward et al. 2005; Ferri et
al. 2009).
En las 262 secuencias de tiburones del gen COI, no se encontró a la especie R. longurio, especie
que si se pudo identificar con la región ITS2 y que es considerada coloquialmente como cazón
junto con las cuatro especies del género Mustelus. Cabe resaltar la importancia de usar un solo
tipo de marcador genético para la identificación de especies. En el caso de los marcadores
mitocondriales, estos acumulan sustituciones en las secuencias mucho más rápido que los
marcadores ribosomales ITS. Por otro lado, los marcadores ribosomales ITS son una
herramienta excelente para la identificación rápida de especies conocidas, debido a su bajo nivel
de polimorfismo intraespecífico (Blouin 2002).
Estado de conservación de las especies de tiburonesEl estado de conservación de las especies de tiburones de este estudio (Tabla V) dictamina que
las especies C. carcharias y S. lewini son las que reciben mayor protección a nivel internacional,
36
por parte de 3 instituciones mundiales para la conservación de la naturaleza: en el estado de
“Vulnerable” y “En peligro” respectivamente, de la lista roja de la IUCN, ambos en el apéndice
II del CITES y S. lewini en el apéndice II, mientras que C. carcharhias en el apéndice I y II del
CSM.
En México, S. lewini, no se encuentra en ninguna de las Normas Oficiales Mexicanas para su
protección especial (DOF 2007; DOF 2010) a diferencia de C. carcharias que es la única
especie, de este estudio, que recibe protección a nivel nacional, ya que queda estrictamente
prohibida la venta total o parcial de tiburón blanco en México (DOF 2007; DOF 2010; DOF
2014). Hasta el 14 de septiembre del 2014 se incluye a S. zygaena y S. lewini como especies
CITES en el apéndice II (Sosa-Nishizaki et al. 2014), un día después del último muestreo de
este estudio.
Tabla V. Estatus de conservación de los tiburones encontrados en este trabajo en el marcointernacional de legislación internacional para la protección de fauna silvestre. S.zyagena fue introducida como especie CITES en el apéndice II el 12 de julio del 2013en 37 países. S. lewini fue introducida como especie CITES en el apéndice II el 12 dejulio del 2013 en 127 países. *La población de estas especies se encuentran endecadencia. **Se desconoce la tendencia de la población de estas especies a aumentaro disminuir. ***Las especies de Mustelus de la región se encuentran en otrascategorías: M. lunulatus, M. henlei y M. californicus están en la categoría dePreocupación Menor y M. albipinnis se encuentra en la categoría Datos insuficientes.
AutoridadesInternacionales
C.carcharias
I.oxyrinchus
S. zygaena A. pelagicusM.
mustelus***
C.falciformis
S. lewiniR.
longurio
Lista Roja deIUCN
Vulnerable**
Vulnerable*
Vulnerable* Vulnerable* Vulnerable*Casi
amenazados*
Enpeligro**
Datosinsuf.**
CITES Apéndice II N/A Apéndice II N/A N/A N/AApéndice
IIN/A
CSMApéndices I
y IIApéndice II N/A Apéndice II N/A Apéndice II
ApéndiceII
N/A
De los tiburones identificados a nivel especie, en varios casos se trató de especies que se
encuentran protegidas por organismos internacionales. El 92.1% de estos tiburones se
encuentran en una categoría de riesgo de la lista roja de la IUCN, el 87.2% se encuentra en la
categoría de vulnerable, el 3.7% en la categoría Casi Amenazados y el 1.2% se encuentra en la
categoría En Peligro. El 23.9% de estos tiburones se encuentran en el apéndice II del CITES. El
37
71.2% de estos tiburones se encuentran en el apéndice II del CSM y solo el 1.2% se encuentra
en el apéndice I de la misma autoridad internacional (Fig. 15).
Fig. 15. Relación de tiburones identificados en los productos de “marlín”, “pez espada” y
“cazón”.
En el Pacífico Mexicano la veda de tiburones y rayas corresponde desde el 01 de mayo hasta el
31 de agosto, entrando en vigor en el año 2013 (DOF 2007). En este trabajo se detectó una
violación a esta Norma Oficial Mexicana, ya que se vendieron productos frescos de cazón el 14
de julio del 2014.
Es muy importante tener una vigilancia constante en la identificación de especies de tiburones
y/o rayas comerciales, ya que es un tema relevante para asegurar un correcto etiquetado de
productos marinos y mejorar el conocimiento de las especies capturadas, en cuestión de los
volúmenes que son pescados por temporalidad, además de mejorar el manejo de las pesquerías
de tiburones, frente a las respectivas autoridades (Blanco et al. 2008).
Isurus oxyrinchus (58.2%)
Sphyrna zygaena (21.5%)
Alopias pelagicus (6.3%)
Mustelus mustelus (5%)
Carcharhinus falciformis(3.7%)
Carcharodon carcharias(1.2%)
38
Caso tiburón blanco
Como se mencionó anteriormente, el tiburón blanco es la única especie que recibe protección a
nivel nacional. La muestra en la que se encontró la identidad genética de tiburón blanco fue en
una porción de carne de “Cazón” vendida en Ensenada.
Su distribución es cosmopolita y tiene poblaciones importantes en el Pacífico Nororiental
(California, Isla Guadalupe, Hawaii), en el Indo-Pacífico (Autralia-Nueva Zelanda) y en las
costas occidentales y orientales de Sudáfrica. Cuando son juveniles es más probable
encontrarlos en aguas costeras (Compagno 2001).
Para la región que comprende el Pacífico Mexicano existen avistamientos de juveniles de
tiburón blanco en la parte occidental de la península de Baja California (Santana-Morales et al.
2012), mientras que en el Golfo de California se tienen registros de 38 avistamientos (Galván-
Magaña et al. 2010).
De 1999 al 2010 se pescaron en la parte occidental de la península de Baja California 111
individuos juveniles, lo cual sugiere que la región correspondiente a San Sebastián Vizcaíno
pueda ser una posible área de crianza (Santana-Morales et al. 2012).
Con la evidencia que se obtuvo en este trabajo, respecto a esta especie, se tendrán que
implementar medidas de acción y vigilancia en los mercados de productos pesqueros locales de
la península de Baja California.
39
Productos de tiburón que se etiquetan como productos de especies de alto valorcomercial: Fraude de “Marlín” y “Pez espada”.
Los resultados de este estudio apuntan casos de sustitución de especies de tiburones en mercados
productos pesqueros de la península de Baja California. La totalidad de pruebas genéticas
realizadas a las muestras de productos pesqueros ofertadas como marlín y pez espada señalaron
inequívocamente que no se trataban de los productos ofertados si no de diferentes especies de
tiburones y particularmente de las especies I. oxyrinchus y S. zygaena (Tabla II). El 27.84% de
muestras obtenidas fueron de “Marlín”, el 46.83% fueron de “Pez espada” y el 25.31% fueron
de “Cazón” (Fig. 16.)
Fig. 16. Proporción de las etiquetas falsas en los mercados de productos pesqueros de la Penísula
de Baja California.
De tal modo que, de los productos obtenidos como “Marlín” (22 productos), el 81.81%
correspondió a I. oxyrinchus (18 productos), el 13.63% correspondió a S. zygena (Tres
productos) y el 4.54% correspondió a A. pelagicus (Un producto) (Fig. 17).
"Cazón" (25.31%) "Marlín" (27.84%) "Pez espada" (46.83%)
40
Fig. 17. Relación de tiburones identificados bajo la falsa etiqueta de “Marlín”.
De los productos obtenidos como “Pez espada” (37 productos), el 70.27% correspondió a I.
oxyrinchus (26 productos), el 16.21% correspondió a S. zygaena (Seis productos), el 10.81%
correspondió a A. pelagicus (Cuatro productos) y el 2.70% correspondió a C. falciformis (Un
producto) (Fig. 18).
Fig. 18. Relación de tiburones identificados bajo la falsa etiqueta de “Pez espada”.
I. oxyrinchus (81.81%) S. zygaena (13.63%) A. pelagicus (4.54%)
I. oxyrinchus (70.27%) S. zygaena (16.21%)
A. pelagicus (10.81%) C. falciformis (2.70%)
41
De los productos obtenidos como “Cazón” (20 productos), el 45% correspondió a S. zygaena
(Nueve productos), el 20% correspondió a M. mustelus (Cuatro productos), el 10%
correspondió a C. falciformis (Dos productos) y el 25% restante correspondió a C. carcharias,
I. oxyrinchus, S. lewini, R. longurio y a R. productus equitativamente (Con un producto cada
uno) (Fig. 19).
Fig. 19. Relación de tiburones identificados bajo la etiqueta de “Cazón”.
Actualmente, las naciones preocupadas por practicar la pesca sustentable y los consumidores
que buscan promoverla, presentan una creciente tensión a los temas de calidad y seguridad
alimentaria. La comunidad científica a través de los medios masivos de comunicación y redes
sociales están promoviendo dicho conocimiento en la sociedad. En lo que respecta a los
alimentos se ha evidenciado que de tener conocimiento, los consumidores son reacios a
consumir alimentos alterados, cuya modificación puede ocurrir durante los procesos de
manufactura estándar, y cada vez es más frecuente el que se preste atención a los ingredientes
con que se preparan los alimentos. En especial cuando se busca satisfacer determinados
requerimientos nutrimentales o cumplir con requerimientos médicos específicos.
Debido a lo anterior, las naciones y los consumidores son cada vez más demandantes respecto
a la calidad de sus alimentos, en particular en lo que corresponde a casos como los que aquí se
tratan respecto a la trazabilidad y el etiquetado detallado de los productos. En años recientes,
los medios de comunicación han resaltado la existencia de fraudes en el rubro de los productos
S. zygaena (45%) M. mustelus (20%) C. falciformis (10%) I. oxyrinchus (5%)
S. lewini (5%) C. carcharias (5%) R. longurio (5%) R. productus (5%)
42
pesqueros comestibles (Marko et al. 2004; Smith et al. 2008; Wong & Hanner 2008), fomentado
por lo difícil que es reconocer las especies de este tipo de productos, los que se expenden
altamente procesados para satisfacer los requerimientos de los consumidores (Blanco et al.
2008).
Por ejemplo, numerosas especies de peces tienen un sabor y textura similares, y es muy difícil
identificar a la especie correcta cuando el pescado se entrega sin sus partes corporales
diagnósticas (e.g. piel, escamas, cabeza y aletas), especialmente cuando es procesado en filetes
o rebanadas. Se ha observado también la sustitución o el etiquetado erróneo de productos
pesqueros en el mercado (como en este caso), expendedoras de pescado y restaurantes. Lo que
puede llegar a ser peligroso, debido a la presencia de sustancias tóxicas o alergénicas e incluso
dañina como en el caso de la comercialización de especies amenazadas (Holmes et al. 2009;
Ward et al. 2008; Wong & Hanner 2008).
Otro problema implícito en la trazabilidad de productos pesqueros se relaciona al hecho de que
en las mesas de los que consumen estos productos, es cada vez más común la presencia de peces
que han sido capturados no solo en distintos países, sino que también en distintos continentes.
A pesar de ello, la nomenclatura de los peces que se comercializan no está estandarizada
globalmente; de hecho, distintas especies pueden ser identificadas bajo el mismo nombre
vernáculo como se aprecia en este trabajo. En el caso de nombre cazón, que se identificaron
especies como C. carcharias, S. zygaena, S. lewini, I. oxyrinchus, C. falciformis, R. longurio,
Mustelus sp. e inclusive una especie de raya, R. productus. Asimismo, una sola especie puede
recibir distintos nombres dependiendo de la región, dentro del mismo país como la especie C.
falciformis que puede recibir el nombre de tiburón sedoso, tiburón tunero, tiburón piloto o
tiburón aleta de cartón en varias regiones de México.
Los resultados demuestran que este enfoque de identificación basado en una secuencia especie-
específica de ADN, es altamente coherente para encontrar elasmobranquios entre productos
pesqueros que se ofertan como “Marlín” y “Pez espada” en el mercado mexicano a nivel de
especies.
El porcentaje de fraudes comerciales basados en la venta de productos de tiburones en vez de
los productos pesqueros ofertados como “Marlín” y “Pez espada” es extremadamente alto en
los mercados de Ensenada.
43
Lo descrito merece consideración respecto a los siguientes aspectos económicos: el marlín y el
pez espada son productos pesqueros valorados en la Pesquería del Pacífico Mexicano en
120$/kg desde el 2013.
Como se aprecia en este trabajo estos productos son sustituidos por especies de menor valor,
por ejemplo el precio de valor del tiburón mako (que usan para hacer tacos) en el mismo
Mercado Negro de Ensenada oscila entre $50.00 y $70.00 el kilogramo. La discrepancia en los
precios es evidente, y el impacto económico en los vendedores y consumidores es claro. Sin
embargo, independientemente de los aspectos económicos, una de las alamas que emergen de
este estudio es relativa a los problemas potenciales para la salud humana (alérgenos y parásitos)
debido a las substituciones de especies.
En el mercado global de productos pesqueros estas sustituciones no pueden considerarse de
importancia secundaria.
Atendiendo a esta consideración, los temas de conservación implícita en el manejo de las
especies de peces comercializadas (especialmente especies amenazadas, en peligro o en su
defecto, en el caso de especies desconocidas que están siendo diezmadas) emergen como una
gran preocupación (Ward et al. 2008; Wong & Hanner 2008; Holmes et al. 2009)
44
Conclusiones-Se detectó la sustitución de productos de “Marlín” o “Pez espada”, por especies de tiburones.
-Los tiburones que se encontraron reciben protección a nivel internacional, y en mayor medida
el tiburón blanco y los tiburones martillo. A nivel nacional solo el tiburón blanco recibe
protección a nivel nacional.
-La presencia de tiburón blanco en una de las muestras obtenidas incita a realizar más proyectos
de investigación de este tipo, para conocer los lugares de donde provienen dichos organismos,
si corresponden a áreas de crianza o no, en caso de ser juveniles, como lo sugiere la literatura.
-Se encontró fraude en los productos pesqueros de Ensenada al ofertarse productos de mayor
calidad.
-Se confirmó el uso de marcados moleculares para la identificación de especies comerciales, de
tal modo que sea un paso para certificar el mercado legalmente. De esta forma, se podría poner
en práctica la eco-certificación en la calidad de los productos que son vendidos, en este caso,
usando marcadores moleculares que certifiquen la venta real de marlín.
Recomendaciones-Usar un marcador genético más amplio, en cuestión de número de especies, o en su defecto,
hacer la comparación con dos tipos de marcadores distintos.
-Realizar muestreos en época de veda, para ver si existe la venta ilegal de tiburones y rayas.
-Usar primers especie-específicos de los tiburones que se distribuyen en el Pacífico Mexicano,
como un método más económico de identificación de los tiburones que están siendo pescados
en este tipo de mercados
-Que en cada desembarque, investigadores de las autoridades pertinentes (INAPESCA), realicen
muestreos al azar de los tronchos, en el mercado de Ensenada, durante un periodo de tiempo
constante, con el fin de tener una caracterización de los tiburones que son vendidos de manera
fraudulenta.
-Ampliar este estudio a más mercados, en todo el país.
45
-Asignar a la población de origen, cada uno de los tiburones que son encontrados, con el fin de
evaluar el impacto que conlleva este tipo de pesca INDNR.
46
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Zhang C.G, Musikasinthon K. & K. Watanabe. 2002. Channa nox, a new channid fish lacking
pelvic fin from Guanxi, China. Ichthyol. Res. 49(2):140-146.
56
ANEXOS
ANEXO IMétodo de extracción de ADN de LiCl.
1. Cortar finamente ~100 mg de tejido y colocarlos en un tubo Eppendorf.
2. Añadir 300-400 μL de buffer de extracción (100 mM NaCl, 50 mM Tris-Hcl, 50 mM EDTA,
1% SDS, pH 8.0).
3. Añadir 7-10 μL de proteinasa-K [10 mg/mL].
4. Poner las muestras en incubación a 56 ºC con agitación por inversión constante manual
por 2-3 horas.
5. Añadir 300 μL de LiCl [3M] y agitar por 1 minuto en el vortex.
6. Añadir 600 μL de cloroformo-alcohol isoamílico 24:1.
7. Poner en agitación durante 30 minutos a 700 rpm.
8. Centrifugar a 14,000 rpm por 20 minutos a 4°C.
9. Transferir la fase acuosa sobrenadante a un nuevo tubo, con cuidado de no tomar parte
de la fase acuosa inferior.
10. En caso de tomar parte de la fase acuosa inferior, centrifugar por 5 minutos a máxima
velocidad.
11. Repetir los pasos 6, 7 y 8, y transferir la fase acuosa a un nuevo tubo.
12. Añadir 1000 μL de alcohol etílico al 100% y 50 μL de acetato de sodio [3M] y mezclar
por inversión.
13. Dejar en precipitación a -20°C por una noche (18 horas).
14. Centrifugar a 14,000 rpm por 40 minutos a 4°C.
15. Decantar el supernadante y agregar 750 μL alcohol etílico al 70%.
16. Poner en agitación por 10 minutos a 700 rpm.
17. Centrifugar a 14,000 rpm por 20 minutos a 4°C y decantar el supernadante.
18. Evaporar los residuos de alcohol en un horno a 50-60 °C por una hora.
19. Resuspender el pellet de ADN en 50-100 μL de TE 1X en el horno a 40°C por 30
minutos.
La integridad del ADN se verifica por electroforesis en gel de agarosa 1%, cargando 10 μL de
ADN con 2 μL de buffer de carga (Azul de Bromo-Fenol).
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ANEXO II
Definición de los estados y apéndices de los organismos internacionales
Lista roja de la IUCN
Casi Amenazado: Un taxón está Casi Amenazado cuando ha sido evaluado según los criteriosy no satisface, actualmente, los criterios para En Peligro Crítico, En Peligro o Vulnerable, peroestá próximo a satisfacer los criterios, o posiblemente los satisfaga, en un futuro cercano.
Datos Insuficientes: Un taxón se incluye en la categoría de Datos Insuficientes cuando no hayinformación adecuada para hacer una evaluación, directa o indirecta, de su riesgo de extinciónbasándose en la distribución y/o condición de la población. Un taxón en esta categoría puedeestar bien estudiado, y su biología ser bien conocida, pero carecer de los datos apropiados sobresu abundancia y/o distribución. Datos Insuficientes no es por lo tanto una categoría de amenaza.Al incluir un taxón en esta categoría se indica que se requiere más información y se reconoce laposibilidad de que investigaciones futuras demuestren apropiadamente una clasificación deamenazada. Es importante hacer un uso efectivo de cualquier información disponible. Enmuchos casos habrá que tener mucho cuidado en elegir entre Datos Insuficientes y una condiciónde Amenaza. Si se sospecha que la distribución de un taxón está relativamente circunscrita, y siha transcurrido un período considerable de tiempo desde el último registro del taxón, lacondición de Amenazado puede estar bien justificada.
En Peligro: Un taxón está En Peligro cuando la mejor evidencia disponible indica que cumplecualquiera de los criterios “A” a “E” para En Peligro y, por consiguiente, se considera que seestá enfrentando a un riesgo de extinción muy alto en estado de vida silvestre.
Criterios:
A.- Reducción del tamaño poblacional observada, estimada, inferida o sospechada entreel 50% y el 70% de la población en los últimos o los próximos 10 años.
B.- Distribución geográfica con una extensión de presencia estimada menor a 5,000 km2
o una distribución geográfica con un área de ocupación estimada menor a 500 km2.
C.- Tamaño de la población estimada en menos de 2500 individuos maduros.
D.- Se estima que el tamaño de la población es menor de 250 individuos maduros.
E.- El análisis cuantitativo muestra que la probabilidad de extinción en estado de vidasilvestre es de, al menos un 20% dentro de 20 años o cinco generaciones, dependiendode cuál sea el período más largo (hasta un máximo de 100 años).
Preocupación Menor: Un taxón se considera de Preocupación Menor cuando, habiendo sidoevaluado no cumple ninguno de los criterios que definen las categorías de En Peligro Crítico,En Peligro, Vulnerable o Casi Amenazado. Se incluye en esta categoría taxones abundantes yde amplia distribución.
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Vulnerable: Un taxón está Vulnerable cuando la mejor evidencia disponible indica que cumplecualquiera de los criterios “A” a “E” para Vulnerable y, por consiguiente, se considera que seestá enfrentando a un riesgo de extinción muy alto en estado de vida silvestre.
Criterios:
A.- Reducción del tamaño poblacional observada, estimada, inferida o sospechada entreen un 30% y el 50% de la población en los últimos o los próximos 10 años.
B.- Distribución geográfica con una extensión de presencia estimada menor a 20,000km2 o una distribución geográfica con un área de ocupación estimada menor a 2,000km2.
C.- Tamaño de la población estimada en menos de 10,000 individuos maduros.
D.- Población muy pequeña o restringida con un tamaño de la población estimado enmenos de 1,000 individuos maduros
E.- El análisis cuantitativo muestra que la probabilidad de extinción en estado de vidasilvestre es de, al menos un 10% dentro de 100 años.
CITES
Apéndice II: Incluye especies no necesariamente amenazadas de extinción, pero cuyo comerciodebe controlarse para evitar que así sea. También incluye especies que necesitan regularse porsu similitud con otras. El comercio internacional se permite, pero bajo ciertos requisitos:
-Requerir la previa concesión y presentación de un permiso de exportación otorgado poruna Autoridad Científica del Estado manifestando que la exportación no perjudicará a lasupervivencia de esa especie, por una Autoridad Administrativa del Estado verificandoque el espécimen no fue obtenido en contravención de la legislación vigente en dichoEstado sobre la protección de su fauna y flora y por una Autoridad Administrativa delEstado de exportación verificando que todo espécimen vivo será acondicionado ytransportado de manera que se reduzca al mínimo el riesgo de heridas, deterioro en susalud o maltrato.
-Que una Autoridad Científica de cada parte vigilará los permisos de exportaciónexpedidos por ese Estado para especímenes de especies incluidas en el Apéndice II y lasexportaciones efectuadas de dichos especímenes.
-La importación de cualquier espécimen de una especie incluida en el Apéndice IIrequerirá la previa presentación de un permiso de exportación o de un certificado dereexportación.
- La reexportación de cualquier espécimen de una especie incluida en el Apéndice IIrequerirá la previa concesión y presentación de un certificado de reexportación.
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-La introducción procedente del mar de cualquier espécimen de una especie incluida enel Apéndice II requerirá la previa concesión de un certificado expedido por unaAutoridad Administrativa del Estado de introducción.
CSM
Apéndice I: Incluye a las especies migratorias que presenten evidencia confiable, tomando encuenta la mejor evidencia científica posible, que indique que tales especies están en peligro.
Apéndice II: Incluye a las especies migratorias que tienen un status de conservación nofavorable y que requieren acuerdos internacionales para su conservación y manejo, así comoaquellas especies que tienen un status de conservación que podrían beneficiarsesignificativamente de la cooperación internacional que puede ser alcanzada por acuerdosinternacionales.