FUNDAMENTO Y PRINCIPIOS DEL METODO DE ELISA

Que es ELISA La tcnica ELISA (Enzyme Linked Inmunoabsorvent Assay) se basa en ladeteccin de un antgeno inmovilizado sobre una fase slida mediante anticuerpos que directa o indirectamente producen una reaccin cuyo producto, por ejemplo un colorante, puede ser medido espectofotomtricamente

Dispositivos empleados en ELISAFase solidaLos lectores ELISA son espectrofotmetros

Fases de un ensayo ELISA

Tipos de ELISA Directo Indirecto Sandwich

Elisa. 1. Generacin: Primeros ensayos usaban lisados de VIH purificado, a menudo les faltaba sensibilidad y especificidad. 2. Generacin: Los ensayos mejorados basados en protenas recombinantes y/o los peptidos sintticos, que tambin permitieron la produccin de VIH 1 y 2 combinado. 3. Generacin: tipo sndwich, usan un antgeno marcado como conjugado, muy sensibles. 4. Generacin: detectan antgenos y anticuerpos, reducen el perodo de ventana.

p55

gp160

Enzimas p51/p66/p32/p10

gp41 Ncleo capsideop17/p24/p6/p7

Glicoproteinas

Capsideo p24

gp120

Substrato

HIV-1y HIV-2Antigeno conjugado Anti-HIV-1 p24 conjugado

Anti-1/ Anti-2 en la muestra de Px. HIV-1 p24 en muestra de pacientes

Anticuerpos monoclonales anti-p24

HIV-2 antgeno unido a los micropososo HIV-1 antgeno unido a los micropososo