FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS BIOLOGICAS CIENCIAS

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

ESCUELA PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y

PARASITOLOGÍA

Frecuencia de pescados y moluscos bivalvos con

Vibrio parahaemolyticus virulento que se expenden en

el Mercado Mayorista de Productos

Hidrobiológicos(Trujillo – Perú). 2018.

TESIS

PARA OBTENER EL TITULO DE

BIÓLOGO – MICROBIÓLOGO

AUTORES: Br. TERRONES ALFARO, Jorge Arturo

Br. SILVA REBAZA, Luis Carlos

ASESORA: MSC. VÁSQUEZ VALLES, María Nelly

TRUJILLO-PERÚ

2019

Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.

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AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

Dr. Orlando Moisés Gonzáles Nieves

RECTOR

Dr. Rubén César Vera Véliz

VICE- RECTOR ACADÉMICO

Dr. Steban Alejandro Ilich Zerpa

SECRETARIO



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AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIA BIOLOGICAS

Dr. Freeddy Mejía Coico

DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

Dr. William Zelada Estraver

SECRETARIO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

Dr. Jaime Agreda Callirgos

DIRECTOR DE LA ESCUELA PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y

PARASITOLOGÍA



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DEL ASESOR

El que suscribe: Ms. C. María Nelly Vásquez Valles, asesora de la presente tesis

titulada: “Frecuencia de pescados y moluscos bivalvos con Vibrio parahaemolyticus

virulento que se expenden en el Mercado Mayorista de Productos Hidrobiológicos

(Trujillo – Perú). 2018”

CERTIFICA:

Que esta ha sido desarrollada, de acuerdo al reglamento establecido por la Facultad de

Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, estando en conformidad

con su correspondiente proyecto, y que el informe ha sido redactado acogiendo las

observaciones y sugerencias alcanzadas.

Por lo tanto, autorizo a Jorge Terrones Alfaro y Luis Silva Rebaza, continuar con el

trámite del reglamento correspondiente.

Trujillo, marzo del 2019

________________________

Ms. C. María Nelly Vásquez Valles



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PRESENTACIÓN

SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR:

En cumplimiento con las disposiciones establecidas en el Reglamento de Grados y

títulos de la Universidad Nacional de Trujillo, pongo a vuestra consideración y criterio,

el informe de tesis titulado: “Frecuencia de pescados y moluscos bivalvos con Vibrio

parahaemolyticus virulento que se expenden en el Mercado Mayorista de Productos

Hidrobiológicos (Trujillo – Perú). 2018”, con el propósito de obtener el Título

Profesional de Biólogo Microbiólogo.

Trujillo, marzo del 2019

______________________ ______________________

Br. Jorge Terrones Alfaro Br. Luis Silva Rebaza



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MIEMBROS DEL JURADO

___________________________

Ms. C. Pedro Arnaldo Alvarado Salinas

PRESIDENTE

___________________________

Dr. Luis Alberto Llenque Díaz

SECRETARIO

_________________________


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APROBACIÓN

Los profesores que suscriben, miembros del jurado dictaminador, declaran que el

presente informe de tesis ha cumplido con los requisitos formales y fundamentales,

siendo aprobado por unanimidad.

___________________________

Ms. C. Pedro Arnaldo Alvarado Salinas

PRESIDENTE

___________________________

Dr. Luis Alberto Llenque Díaz

SECRETARIO

_________________________


VOCAL



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DEDICATORIA

A Dios, por darme sabiduría para vencer

todos los obstáculos y adversidades de la

vida, para así poder culminar mi carrera

profesional satisfactoriamente.

A mis padres, Nestor y Marina, y mis

hermanos, Jacqui, Miguel y Alexander, por

apoyarme en todo momento. A ellos les debo

parte de mis triunfos.

JORGE ARTURO TERRONES ALFARO



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DEDICATORIA

A Dios,darme fuerza para continuar en este

proceso de obtener una de mis metas mas

deseadas y por guiarme en aquellos

momentos de dificultad y de debilidad

presentados hasta la culminación de mi

carrera.

A mis padres, Luis y Livia, y a mis hermanas,

Delcy y Giuliana, por ser ejemplos de

perseverancia y constancia, por haberme

apoyado en todo momento, con sus consejos,

valores, y sobre todo por la motivación

constante que me ha permitido ser la persona

que soy actualmente.

A mi familia por estar conmigo y mantener

su apoyo incondicional durante todo este

tiempo, por lapaciencia, buenos valores, los

cuales ayudaron a trazar mi camino.

LUIS CARLOS SILVA REBAZA



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AGRADECIMIENTOS

A mi asesora Ms. C. María Nelly Vásquez Valles, por su orientación, conocimientos,

apoyo, confianza y sobre todo por su valiosa asesoría como profesional, el cual permitió la

realización de la presente tesis.

Al Dr. Wilson Reyes Lázaro, quien nos permitió el uso de sus equipos de laboratorio,

siendo estos de mucha importancia para la ejecución de la presente tesis.

Al Biólogo pesquero Segundo Braulio Gavidia Castro, que nos brindó su ayuda

incondicional en la recolección de las muestras en el Mercado Mayorista de Productos

Hidrobiológicos, además de brindarnos su apoyo y conocimientos en la identificación de

los especímenes de estudio en esta investigación.



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RESUMEN

El objetivo de la investigación fue determinar la frecuencia de pescados y moluscos bivalvos con

V. parahaemolyticus virulento que se expenden en el Mercado Mayorista de Productos

Hidrobiológicos, en los meses de agosto a octubre de 2018. Para ello se obtuvo 205 muestras, 41

por especie, a partir de: Scomber scombrus, Sciaena deliciosa,Trachurus murphyi, Argopecten

purpuratus y Aulacomya atra, las cuales fueron transportadas en un cooler a 4 °C al laboratorio de

Microbiología de Alimentos de la Universidad Nacional de Trujillo. A partir de cada muestras, se

obtuvo 25 g de piel y branquias, en pescados y 25 g del contenido interno, en moluscos; el cual se

colocó en Agua de Peptona Alcalina bufferada estéril e incubó a 37 °C por 10 horas,

posteriormente se sembró en agar TCBS e incubó a 37 °C por 18 horas al término de los cuales se

aislaron colonias con características culturales a V. parahaemolyticus. Cada cultivo fue

identificado fenotípicamente mediante las pruebas de fermentación de carbohidratos,

descarboxilación de la lisina, catalasa, oxidasa, indol, movilidad, acidez, acetil metil carbinol, β-

galactosidasa y evaluación del crecimiento a 0, 1, 3, 6, 8 y 10% en NaCl. La determinación de V.

parahaemolyticus virulento se evaluó mediante la producción de ureasa, y la capacidad hemolítica

en agar Wagatsuma. Del total de muestras analizadas, el 8.3% (17/205) presentaron V.

parahaemolyticus. De ello, la mayor frecuencia de V. parahaemolyticus virulento, en los meses de

agosto a octubre de 2018, en el Mercado Mayorista de Productos Hidrobiológicos, se presentó en

A. atra(100%). Además, se halló una frecuencia idéntica (80%), en el aislamiento de V.

parahaemolyticus virulentoen S. scombrus, S. deliciosa y A. purpuratus, con excepción de T.

murphyi, donde hubo ausencia.

Palabras claves: V. parahaemolyticus, pescados, moluscos bivalvos, virulento.



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ABSTRACT

The aim of the research was to determine the frequency of the fish and bivalve mollusks with

virulent V. parahaemolyticus that are sold in the Wholesale Market of Hydrobiological Products,

in the months of August to October 2018. For this, 205 samples were obtained, 41 by species,

from: Scomber scombrus, Sciaena deliciosa, Trachurus murphyi, Argopecten purpuratus and

Aulacomya atra, which were transported in a refrigerator at 4 ° C to the Food Microbiology

laboratory of the National University of Trujillo, 25g were obtained of skin and gills, in fish and

25g of internal content, in mollusks; which was placed in sterile buffered Peptone Alkaline water

and was incubated at 37 ° C for 10 hours, then seeded on TCBS agar and incubated at 37 ° C for

18 hours. At the end of it, colonies with cultural characteristics of were isolated V.

parahaemolyticus. Each culture was phenotypically identified by carbohydrate fermentation tests,

lysine decarboxylation, catalase, oxidase, indole, mobility, acidity, acetyl methyl carbinol, β-

galactosidase and growth evaluation at 0, 1, 3, 6, 8 and 10 % in NaCl. The determination of

virulent V. parahaemolyticus was evaluated by the production of urease and the hemolytic

capacity in Wagatsuma agar. Of the total samples analyzed, 8.3% (17/205) presents V.

parahaemolyticus. Hence, the highest frequency of virulent V. parahaemolyticus, in the months of

august to october 2018, in the Wholesale Market of Hydrobiological Products, was presented in A.

atra (100%). In addition, an identical frequency (80%) was found in the isolation of virulent V.

parahaemolyticus in S. scombrus, S. deliciosa and A. purpuratus, with the exception of T.

murphyi, where there was absence.

Keywords V. parahaemolyticus, fish, molluscs, bivalves, virulent.



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INDICE

DEL ASESOR ......................................................................................................................................... iv

PRESENTACIÓN .................................................................................................................................... v

MIEMBROS DEL JURADO ..................................................................................................................... vi

APROBACIÓN ...................................................................................................................................... vii

DEDICATORIA .................................................................................................................................... viii

AGRADECIMIENTOS..............................................................................................................................x

RESUMEN ............................................................................................................................................ xi

ABSTRACT ........................................................................................................................................... xii

INDICE ................................................................................................................................................ xiii

I. INTRODUCCIÓN ......................................................................................................................... 1

II. MATERIAL Y MÉTODOS ................................................................................................................... 5

2.1 Material biológico………………………………………………………………………………………………………………..5

2.2. Obtención y transporte de la muestra………………………………………………………………………………..5

2.3. Aislamiento e identificación fenotípica de V. parahaemolyticus…………………………………………6

A.Aislamiento de V. parahaemolyticus ..................................................................................... 6

B. Identificación fenotípica ....................................................................................................... 7

2.4. Expresión de resultados…………………………………………………………………………………………………….11

III. RESULTADOS ......................................................................................................................... 12

IV. DISCUSIÓN .............................................................................................................................. 14

V. ENUNCIADO RESUMEN ................................................................................................................. 19

VI. RECOMENDACIONES .................................................................................................................... 20

VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS .................................................................................... 21

ANEXOS ............................................................................................................................................. 27



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I. INTRODUCCIÓN

V. parahaemolyticus es un bacilo halófilo marino el cual habita las costas y estuarios de

múltiples países1. Esta especie, es causante de gastroenteritis aguda en el hombre, relacionada

con el consumo de pescados y mariscos crudos, insuficientemente cocinados o contaminados

durante su preparación 2; este microorganismo fue aislado e identificado por primera vez en el

continente asiático, en Japón, en el año 1953, desde entonces ha sido reportado en otros países

dentro del continente3 y posteriormente en Europa y América4-6.

En el continente americano, esta especie ha sido detectada como causante de procesos

patológicos entéricos en Costa Rica, Venezuela, Chile y Perú 6,7. En Perú, el primer caso se

originó en la ciudad de Trujillo, en 1996 y, el primer brote en la ciudad de Lima en 1998 6. En

diversos estudios, donde se aisló esta especie a partir de pescados y moluscos bivalvos, el

porcentaje de aislamiento de cepas virulentas fue variado; como el realizado en Malasia por

Tan CW et al., que al evaluar pescados, provenientes de diferentes mercados locales, obtuvo un

16.2% de Vibrio parahaemolyticus virulento8; asimismo, Depaola A et al, en Estados Unidos,

detectó un 21.8 % de este, en ostras9, Pereira CS et al, en Brasil, hasta un 28.5 % en

mejillones10; por lo que estos resultados indicarían una baja cantidad de la forma virulenta de

esta especie, provenientes de pescados y moluscos bivalvos.

Estudios, como el de Chen et al.11, realizada en Estados Unidos, demuestra la ausencia de cepas

virulentas de V. parahaemolyticus en moluscos bivalvos (ostras), en el cual se realizó el

seguimiento por un periodo de 10 meses. Otras investigaciones, y contrariamente a lo esperado,

como la de Berutti et al.12, evidencian un aumento en el aislamiento de cepas de V.

parahaemolyticus virulento, provenientes de aislamientos ambientales, durante el transcurso de

3 años (2006- 2009), así mismo, Hara-Kudo et al 13, detectó un mayor aislamiento de V.



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parahaemolyticus virulento en pescados y moluscos, durante los meses más fríos del año, en

Japón (septiembre- enero). Por lo que indicaría que la presencia de V. parahaemolyticus

virulento, en las pescados y moluscos bivalvos, durante los meses de agosto a octubre, sería

factible.

El aislamiento de V. parahaemolyticus en pescados y moluscos bivalvos, ha sido confirmada

por diversos autores; como la investigación de Onarinde et al., el cual, tras la evaluación de

mejillones, logró aislar V. parahaemolyticus en el 100% (39/39)14.Asimismo, Tran et al.15, al

investigar pescados y mariscos comprados de puestos de venta, obtuvieron un porcentaje de

aislamiento de 87.3% (288/330). Otros trabajos, han confirmado el aislamiento de este

microorganismo en diversos pescados como: Rastrelliger brachysoma “Caballa Rechoncha” 8,

Gadus morhua “Bacalao”, Scomber scombrus “Caballa” y Trachurus murphyi “Jurel” 13; y

moluscos bivalvos como: Anadara tuberculosa “Concha negra”, Arca cebra “Almeja coral” y

de especies de la familia Mytilidae “Mejillones” 6,16,17; por lo que, los resultados observados en

estos estudios, indicarían que V. parahaemolyticus podría estar presente en especies marinas

comercializadas en Perú, como Argopecten purpuratus “Concha de abanico”, Aulacomya atra

“Choro”,Scomber scombrus “Caballa”, Sciaena deliciosa “Lorna” y Trachurus murphyi

“Jurel”.

Factores ambientales, relacionados con la abundancia de V. parahaemolyticus, como la

temperatura y salinidad, ha sido investigados desde diversas perspectivas. Estudios como

Gavilán y Martínez18, indican que la asociación de temperatura y salinidad influye con la

presencia de V. parahaemolyticus en los pescados y moluscos bivalvos de manera significativa.

En contraste,Onarinde et al14, el cual, al realizar el recuento de V. parahaemolyticus durante

todo un año, no encontró una correlación significativa entre el número de V. parahaemolyticus

encontrado, con la temperatura y salinidad; asimismo, Takemura et al. sugiere que factores



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como el plancton, carbono orgánico total, entre otros19, afectarían el nivel de la población de V.

parahaemolyticusen el ambiente marino, el cual considera a la temperatura y salinidad como no

significativa19. Por lo que la presencia de V. parahaemolyticus, en pescados y moluscos

bivalvos, está relacionada a múltiples factores 20 y no solo en función a la temperatura y

salinidad.

Como consecuencia de los cambios climáticos, producto del calentamiento global, se generan

desplazamientos de aguas tropicales, en donde la frecuencia de V. parahaemolyticus es alta, a

zonas donde no lo es, causando alteraciones en los ecosistemas marinos y produciendo la

proliferación de este género bacteriano6. Asimismo, GavilánRG et al, detallan que este

mecanismo, conlleva la llegada de clones pandémicos de áreas geográficas, en donde su

frecuencia es alta18. En la costa peruana, durante los meses de septiembre a marzo, se produce

un incremento en las floraciones algales, lo cual incrementan la supervivencia y diseminación

de V. parahaemolyticus en el medio20,21, generando la presencia de casos de gastroenteritis

emergentes producidos por esta especie22.

La patogenicidad de V. parahaemolyticus está relacionado con la presencia y expresión del gen

tdh (Hemolisina Directa Termoestable), el cual es fundamental en la determinación de cepas

patógenas23. Está comprobado que las cepas que desarrollan el fenómeno de Kanagawa,

expresan dicho gen24, por lo que producirían enfermedad en el ser humano. Asimismo, la

producción de ureasa, la cual está vinculada con el gen trh (Hemolisina Relacionada con TDH)

25, representa, además, otra prueba de patogenicidad26. Asimismo, se sabe que existe evidencia

de otros factores de virulencia, como los sistemas de secreción tipo III, T3SS1 y T3SS2, que

también podrían ser responsables de la citotoxicidad y la enterotoxicidad, respectivamente, de

V. parahaemolyticus 27.



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La infección por V. parahaemolyticus conlleva a cuadros de gastroenteritis en el huésped, con

calambres abdominales, náuseas, dolor de cabeza y fiebre28; así como cuadros entéricos severos

en inmunocomprometidos, personas ancianas y niños22. En el Perú, se ha reportado este tipo de

casos, producidos por esta especie, en las ciudades de Cajamarca, Chiclayo, Piura y Lima29, el

cual presenta un patrón estacional característico, en el aumento del número de casos, durante

los climas más cálidos del año30.

Los serotipos de V. parahaemolyticus que poseen y expresan el gen tdh y trh, desarrollan el

fenómeno de Kanagawa, mediante la beta-hemolisis en agar Wagatsuma y producen la ureasa,

respectivamente; son virulentos para el ser humano. La presencia y posible diseminación de V.

parahaemolyticus en la costa peruana, incrementa el riesgo de brotes de gastroenteritis, por la

presencia de cepas virulentas en pescados y moluscos bivalvos de elevado consumo popular,

por lo que es bastante probable que pueda ocurrir brotes de gastroenteritis producidas por V.

parahaemolyticus, al estar presente la forma virulenta de este, en pescados y moluscos bivalvos

que se venden en los diversos mercados mayoristas del país.El Mercado de Productos

Hidrobiológicos, es el principal punto de venta de pescados y moluscos bivalvos en la ciudad

de Trujillo, tanto de minoristas, como de mayoristas; asimismo, hay que mencionar que V.

parahaemolyticus es de importancia en salud pública en otros países, como EE. UU, México y

Chile; y que en Perú no existe vigilancia para las gastroenteritis producidas por este

microorganismo, por lo que el objetivo de la investigación fue la de determinar la frecuencia,

en pescados y moluscos bivalvos, que se expenden en el Mercado Mayorista de Productos

Hidrobiológicos, V. parahaemolyticus virulento.



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II. MATERIAL Y MÉTODOS

2.1 Material biológico

- La población de estudio estuvo conformada por los moluscos bivalvos Argopecten

purpuratus “Concha de abanico”, Aulacomya atra “Choro” y los pescados Scomber

scombrus “Caballa”, Sciaena deliciosa “Lorna” y Trachurus murphyi “Jurel” que se

expenden en el Mercado Mayorista de Productos Hidrobiológicos (Anexo 1-2) durante

los meses de agosto a octubre del 2018. Se procesó 205 muestras, 41 por especie, en

las que se investigó la presencia de V. parahaemolyticus virulento. Los muestreos se

realizaron con una frecuencia de 3 veces por semana, los días martes, jueves y sábado.

Obteniéndose de 1 o 2 muestras por muestreo, según la disponibilidad y estado de

frescura de estas.

- V. parahaemolyticus NCTC 13209

2.2. Obtención y transporte de la muestra

Cada muestra, consistente a 15 especímenes, en moluscos bivalvos y de 2 especímenes,

en pescados; se obtuvo a partir de puestos de expendio del Mercado Mayorista de

Productos Hidrobiológicos, las cuales se colocaron individualmente en bolsas de

polietileno con cierre hermético31, en una caja de poliuretano con “Gel Pack Tippic”, y

se transportaron al laboratorio de Microbiología de Alimentos de la Universidad

Nacional de Trujillo, en la que se procesó en forma inmediata.



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Se seleccionaron 15 moluscos bivalvos, con las valvas cerradas (Anexo 3) y 2

pescados refrigerados, con branquias de color rojo o rosa (Anexo 4), con mucus

transparente y pupilas ligeramente convexas (Anexo 5), como criterios de inclusión.

Asimismo, como criterios de exclusión, no se adquirió aquellos moluscos bivalvos con

las valvas abiertas y, pescados congelados, con branquias de color amarillento, mucus

de aspecto lechoso y ojos hundidos.

2.3. Aislamiento e identificación fenotípica de V. parahaemolyticus

A.Aislamiento de V. parahaemolyticus

Se obtuvo 25 g, consistente en piel y branquias, en pescados y 25 g del contenido

interno, en moluscos; los que se colocaron en 225 ml agua de peptona alcalina

bufferada (APA, pH 8,5) (Merck: Darmstadt Alemania) estéril al 3% de NaCl

(Spectrum), se incubó a 37 °C durante 10 a 12 horas. Posteriormente, se obtuvo

una asada de la superficie de la solución, se sembró por estría en agar Tiosulfato-

Citrato-Bilis Sacarosa (TCBS) (TM MEDIA) y se incubó a 37 °C durante 18 h.

Pasado el tiempo de incubación, se aislaron colonias redondas de 2 a 3 mm de

diámetro y con centro verde azulado, características a V. parahaemolyticus(Anexo

6) las que se transfirieron a Agar de Tripticasa Soja (HIMEDIA) con 1% de NaCl.

Se incubó a 37 °C por 24 horas.



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B. Identificación fenotípica

A cada uno de los cultivos obtenidos se les realizó la prueba de la catalasa

(MAVIAR), oxidasa (SIGMA-ALDRICH), fermentación de hidratos de carbono,

descarboxilación de la lisina, detección de indol, movilidad, detección de acetil

metil carbinol, evaluación del crecimiento a 0, 1, 3, 6, 8 y 10% de NaCl y la

prueba de la β- galactosidasa32.

Prueba de la catalasa

Se inoculó una asada del cultivo en estudio en una lámina portaobjetos, se

añadió 1 o 2gotas del reactivo de catalasa, realizando una suspensión.

Lectura:

Positivo a catalasa: Producción de burbujas producto de la liberación de

oxígeno. (Anexo 7).

Prueba de oxidasa

Se colocó una asada del cultivo en estudio en el disco del reactivo de oxidasa.

Observar el cambio de color de forma inmediata.

Lectura:

Positivo a oxidasa:cambio de color a fucsia oscuro. (Anexo 8)



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Fermentación de hidratos de carbono

Se tomó una asada del cultivo en estudio en agar Hierro-Triple Azúcar

(HIMEDIA) con 1% de NaCl, luego se sembró por picadura y estrió la

superficie del agar. Se incubó a 37 ºC por 18 a 24 horas.

Lectura:

K/A - -: Superficie alcalino/ profundidad ácido, sin producción de gas ni ácido

sulfhídrico. (Anexo 9)

Descarboxilación de la lisina

Se inoculó una asada del cultivo en estudio en agar Lisina Hiero

(MICROMASTER) con 1% de NaCl, luego se sembró por picadura y estrió la

superficie del agar. Se incubó a 37 ºC por 18 a 24 horas.

Lectura:

K/K - - : Superficie alcalino/ profundidad alcalino, sin producción de gas ni

ácido sulfhídrico (Anexo 9).

Detección de indol y motilidad

Se inoculó una asada del cultivo en estudio enagar Sulfuro Indol Movilidad

(TM MEDIA) con 1% de NaCl y se incubó a 37 ºC por 18 a 24 horas.

Posteriormente se transfirió 2 ml de la suspensión de caldo a un segundo tubo.

Se agregó 5 gotas del reactivo de Erlich por la pared del tubo.



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Lectura:

Positivo a indol: Desarrollo de un color rojo en la interfase del reactivo y el

caldo, segundos después de agregar el reactivo (Anexo 10).

Positivo a motilidad: Crecimiento difuso desde la línea de inoculación hacia

las paredes del tubo (Anexo 11).

Detección de acetil metil carbinol y acidez

Se inoculó una asada del cultivo en estudio encaldo RM/VP (HIMEDIA) con

1 % de NaCl y se incubó a 37 ºC por un mínimo de 48 horas. Posteriormente

se transfirió 2.5 ml de la suspensión a otro tubo. Se agregó 0.6 ml del reactivo

de α-naftol. Posteriormente se agregó 0.2 ml de KOH al 40%. Se agitó el tubo

y se dejó reposar de 10 a 15 minutos. En otro tubo, 2,5ml del caldo de cultivo,

se le agregó 5 gotas de una solución de rojo de Metilo al 0,02%. Observar el

color de forma inmediata.

Lectura:

Negativo a acetil metil carbinol: Ausencia de color dentro de los 15 minutos

(Anexo 12).

Positivo a RM: Coloración rojiza en el medio (Anexo 12).



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Prueba de Crecimiento en NaCl

Se inoculó una asada del cultivo en estudio en tubos con APA al 0, 1, 3, 6, 8 y

10% de NaCl. Se Incubó a 37 ºC por 18 a 24 horas.

Lectura:

Positivo al crecimiento en NaCl: Turbidez en APA al 1, 3, 6 y 8% de NaCl

(Anexo 13).

Prueba de la β- Galactosidasa

Se hizo una suspensión del cultivo en solución salina estéril y se añadió un

disco o-nitrofenil-D-galactopiranósido (ONPG) (BD BBL). Se Incubó a 37 ºC

por 24 horas.

Lectura:

Positivo a β- Galactosidasa: Formación de un color amarillo en la solución

(Anexo 14).

Prueba de beta- hemólisis

Cada cultivo en TSA, se sembró por puntura en agar Wagatsuma (HIMEDIA),

más sangre humana desfibrinada al 2%. Se incubó a 37 °C durante 18-20

horas. Igualmente se sembró la cepa control de V. parahaemolyticus NCTC

13209 en agar Wagatsuma, más sangre humana desfibrinada al 2% e incubó a

las mismas condiciones.



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Lectura:

Positivo a Kanagawa: Presencia de un halo transparente alrededor de la

colonia con un diametro ≥ 5 mm (Anexo 15).

Hidrólisis de la urea33

A partir del cultivo en TSA se sembró por superficie en agar urea

Christensen’s (HIMEDIA) con 1% de NaCl e incubó a 37 °C por 24 a 48

horas.

Lectura:

Positivo a hidrólisis de la urea: Medio de cultivo de color rosado- rojizo

(Anexo 16).

2.4. Expresión de resultados

El número de ejemplares, de los cuales se aisló V. parahaemolyticus, se expresó en

porcentaje.



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III. RESULTADOS

En la Figura 1, se muestra el porcentaje de pescados y moluscos bivalvos con V.

parahaemolyticus virulento, observándose el mayor porcentaje en A. atra (100%)e idéntico

porcentaje (80%), en S. scombrus, S. deliciosa y A. purpuratus. Asimismo, T. murphyi,

presentó ausencia del microorganismo.



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Figura 1. Porcentaje de muestras con V. parahaemolyticus virulento, en especies de

pescados (S. scombrus, T. murphyi y S. deliciosa) y moluscos bivalvos (A. atra y

A. purpuratus).

0%

10%

20%

30%

40%

50%

60%

70%

80%

90%

100%

S. scombrus T. murphyi S. deliciosa A. atra A. purpuratus

80%

0%

80%

100%

80%




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IV. DISCUSIÓN

V. parahaemolyticus es un bacilo halófilo que se encuentra de manera natural en ambientes

costeros en todo el mundo. Este microorganismo se presenta tanto de forma avirulenta

como virulenta, siendo esta última causante de cuadros de gastroenteritis en el hombre,

esto, debido a la expresión de factores de virulencia, los cuales le permiten desarrollar la

enfermedad. Es por ello, que se determinó el porcentaje de pescados y moluscos bivalvos

con V. parahaemolyticus virulento, provenientes de puestos de expendio en el Mercado

Mayorista de Productos Hidrobiológicos.

Estudios de aislamiento de V. parahaemolyticus en pescados y moluscos bivalvos, indican

una elevada presencia de V. parahaemolyticus en estas.; trabajos como el de Onarinde et

al., el cual, tras la evaluación de mejillones durante todo un año, en inglaterra, logró aislar

V. parahaemolyticus en el 100% (39/39)14 de las muestras investigadas, con lo que

evidencia la presencia del microorganismo durante todo el año en el ambiente marino, y por

lo tanto en las especies que habitan en estas. Asimismo, Tran et al.15, al investigar pescados

y mariscos comprados de puestos de venta, en Vietnam, obtuvieron un porcentaje de

aislamiento de 87.3% (288/330), lo que concuerda con lo obtenido por Onarinde et al.

En el Mercado Mayorista de Productos Hidrobiológicos, se detectó un 8.3% (17/205)

(Anexo 17) de aislamiento de este microorganismo, donde a pesar de ser bajo, en

comparación con otros trabajos 14, 15, su presencia en S. scombrus, S. deliciosa, A. atra y A.

purpuratus, durante los meses de muestreo, está confirmada (Anexo 18 y 19). Pese a ello,

la ausencia del V. parahaemolyticus en T. murphy, indicaría que la naturaleza de este pez,

pelágico oceánico34, influyó en la presencia del microorganismo, debido al desplazamiento



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de este pez a la región oceánica del mar peruano. De acuerdo a lo hayado, anteriores

estudios , como el de GavilánRG 18, indican que tanto la salinidad, como la temperatura,

pueden modular la abundancia y distribución de V. parahaemolyticus en el ambiente

costero. Dado que el muestreo se realizó en los meses de agosto a octubre, los cuales según

reportes del IMARPE, la temperatura del mar era ligeramente fría, oscilando en 16 ± 5 °C

35-37; el microorganismo pudo haber estado presente en zonas profundas o en sedimentos

marinos. por lo que T. murphy no habría tenido contacto con el microbio.

La asociación de temperatura y salinidad, según GavilánRG et al18, influye con la presencia

de V. parahaemolyticus en los pescados y moluscos bivalvos. Debido a las variaciones de

estos parámetros en los meses de muestreo en la costa peruana, según reportes del

IMARPE, como la leve variación de temperatura registrada (16.5 ± 5°C), o gradientes de

salinidad formados (Anexo 20), afectaría la presencia del microbio en las especies en

estudio. Pese a ello, Onarinde et al14, al realizar el recuento de V. parahaemolyticus durante

todo un año, difiere con GavilánRG 18 et al, ya que no encontró una correlación

significativa entre el número de V. parahaemolyticus encontrado, con la temperatura y

salinidad; asimismo, Takemura et al. sugiere que factores como el plancton, carbono

orgánico total, entre otros19, afectarían el nivel de la población de V. parahaemolyticus en

el ambiente marino, el cual considera a la evaluación de la temperatura y salinidad, como

no significativa, en la determinación de la abundancia del microorganismo 19. Esto, indica

que el porcentaje de V. parahaemolyticus, hallado en este estudio, estuvo en función a

diversos factores ambientales, nutricionales y biológicos y no solo en relación a la

temperatura y salinidad, propuesta por GavilánRG et al 18.



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La figura 1 muestra una frecuencia de 100 % de V. parahaemolyticus virulento en A. atra,

así como un 80 % en S. scombrus, S. deliciosa y A. purpuratus. De estas, cabe resaltar que

las especies de pescados y moluscos estudiadas, muestran al menos un factor de virulencia,

ya sea la β- hemolisis en agar Wagatsuma o la hidrólisis de la úrea (Anexo 21). La causa

del porcentaje de V. parahaemolyticus virulento encontrado, estaría relacionado con la

llegada de clones pandémicos, como el serotipo O3K6, de áreas geográficas en donde su

frecuencia es alta, al ambiente costero peruano18. Existe, sin embargo, otras explicaciones

posibles, como la de Izutsu et al, el cual proporcionan soporte concluyente de la ocurrencia

de múltiples eventos génicos, como la mutación o la inserción de genes en la región VPC-

12, el cual alberga al gen tdh, en el genoma de V. parahaemolyticus38, que pudiesen brindar

virulencia a cepas que no lo eran.

La capacidad de desarrollar el fenómeno de Kanagawa, relacionado con la presencia y

expresión del gen tdh (Hemolisina Directa Termoestable) 23 y la producción de ureasa,

vinculada con el gen trh (Hemolisina Relacionada con TDH) 25, son considerados factores

importantes en la determinación de cepas virulentas en V. parahaemolyticus27. De acuerdo

a Wang et al., tanto TDH, como TRH, juegan un rol clave en la infección por este

microorganismo28, por lo que posiblemente al poseer la bacteria ambos factores de

virulencia, su capacidad de producir enfermedad aumentaría.Esto, indicaría que A. atra

poseería mayor riesgo sanitario, por presentar cultivos de elevada virulencia (Anexo 22).

En contraste, se sabe que existe evidencia de otros factores de virulencia, no conocidos aun,

que también podrían ser responsables de la citotoxicidad y la enterotoxicidad de V.

parahaemolyticus 27.



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Estudios previos, de aislamientos ambientales de V. parahaemolyticus, han señalado un

porcentaje bajo de cepas virulentas, en relación a la cantidad total encontrada, resultando en

valores de 16.28, 21.09, 28.510, hasta 40% 13, lo que no concuerda con este estudio, ya que

se ha hallado un porcentaje de 63% de cultivos de V. parahaemolyticus ( Anexo 17), con

presencia de al menos un factor de virulencia importante en la discriminación de

patogenicidad en esta especie, como la β- hemolisis en agar Wagatsuma o hidrolisis de la

urea; además, se obtuvo un 100% de cultivos virulentos en A. atra, difiriendo con los

resultados obtenidos por Chen et al.11, donde muestran la ausencia de cepas virulentas de V.

parahaemolyticus en moluscos bivalvos (ostras). Lo obtenido en el Mercado Mayorista de

Productos Hidrobiológicos, sin embargo, es consistente con otros resultados conseguidos

en Estados Unidos, como el de Berutti et al.12, el cual evidencia un aumento en el

aislamiento de cepas de V. parahaemolyticus productoras de hemolisinas y ureasa, en el

transcurso de 3 años (2006- 2009); así mismo, otro estudio realizado por Hara- Kudo et

al.,13 en el mismo país, detectó un mayor aislamiento de V. parahaemolyticus virulento en

los meses más fríos del año (septiembre- enero), coincidiendo con los hallazgos de este

estudio (Anexo 19).

Los resultados obtenidos en la presente tesis, sugiere que durante los meses de agosto a

octubre de 2018, cepas virulentas de V. parahaemolyticus pueden encontrarse en S.

scombrus, S. deliciosa, A. atra y A. purpuratus que se expenden en el Mercado Mayorista

de Productos Hidrobiológicos, aun así, estos resultados no pueden extrapolarse a la

situación que pudiese estar estos especímenes en el resto del año, ya que, la investigación

se llevó a cabo solamente durante los meses de agosto a octubre.



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Es importante destacar que el Mercado de Productos Hidrobiológicos, a partir el cual se

obtuvieron las muestras, es el principal punto de venta de pescados y moluscos en la ciudad

de Trujillo, tanto de minoristas, como de mayoristas. Estos últimos, revenden el producto

en otros mercados dentro de la ciudad, o son directamente llevados a restaurantes de

comida marina, como las cevicherías, o restaurantes de venta de pescado semicrudo, como

el sushi. Al ser este, de gran influencia en la ciudad de Trujillo, es bastante probable que

pueda ocurrir brotes de gastroenteritis producidas por V. parahaemolyticus, al estar

presente la forma virulenta de este en S. scombrus, S. deliciosa, A. atra y A. purpuratus, los

cuales serían utilizados en preparaciones culinarias, por la población Trujillana. Asimismo,

hay que mencionar que V. parahaemolyticus es de importancia en salud pública en otros

países, como EE. UU, México y Chile; y que en Perú no existe vigilancia para las

gastroenteritis producidas por este microorganismo.



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V. ENUNCIADO RESUMEN

- De las 205 muestras obtenidas en los meses de agosto a octubre de 2018, en el

Mercado Mayorista de Productos Hidrobiológicos, la mayor frecuencia de V.

parahaemolyticus virulento, se presentó en A. atra, además, se halló una frecuencia

idéntica en el aislamiento de V. parahaemolyticus virulento en S. scombrus, S.

deliciosa y A. purpuratus, con excepción de T. murphyi, donde hubo ausencia.



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VI. RECOMENDACIONES

Es necesario trabajar en la vigilancia de V. parahaemolyticus, realizándole seguimiento

durante todo el año, considerando en primer lugar, a los pescados y moluscos investigados

en este estudio, así como otras especies que compartiesen similar hábitat que estas, así

mismo, se debe de considerar el lugar de procedencia de las muestras analizadas,

complementando el estudio al analizar muestras de agua y sedimento marino de donde se

extrajo el espécimen. Tendrán que llevarse a cabo otros estudios que tomen en cuenta estas

variables, para poder mantener un control de este microorganismo y evitar posibles

epidemias.



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VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Nair GB, Ramamurthy T, Bhattacharya SK, Dutta B, Takeda Y, Sack DA. Global

dissemination of Vibrio parahaemolyticus serotype O3:K6 and its serovariants. Clin

Microbiol Rev. 2007; 20(1): 39–48.

2. Daniels NA, Ray B, Easton A, Marano N, Kahn E, McShan AL, et al. Emergence of a

new Vibrio parahaemolyticus serotype in raw oysters: A prevention quandary. JAMA.

2000; 284(12): 1541–1545.

3. Parthasarathy S, Das SC, Kumar A. Occurrence of pathogenic Vibrio parahaemolyticus

in crustacean shellfishes in coastal parts of Eastern India. Vet World. 2016; 9(3): 330–

336.

4. Quilici ML, Robert-Pillot A, Picart J, Fournier JM. Pandemic Vibrio parahaemolyticus

o3:K6 spread, France. Emerg Infect Dis. 2005; 11(7): 1148–1149.

5. Martinez-Urtaza J, Lozano-Leon A, DePaola A, Ishibashi M, Shimada K, Nishibuchi M,

et al. Characterization of pathogenic Vibrio parahaemolyticus isolates from clinical

sources in Spain and comparison with Asian and North American pandemic isolates. J

Clin Microbiol. 2004; 42(10): 4672–4678.

6. Velazquez-Roman J, León-Sicairos N, de Jesus Hernández-Díaz L, Canizalez-Roman A.

Pandemic Vibrio parahaemolyticus O3:K6 on the American continent. Front Cell Infect

Microbiol. 2014; 3(1): 1–14.

7. González-Escalona N, Cachicas V, Acevedo C, Rioseco ML, Vergara JA, Cabello F, et

al. Vibrio parahaemolyticus diarrhea, Chile, 1998 and 2004. Emerg Infect Dis. 2005;

11(1): 129–131.



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

22

8. Tan CW, Malcolm TTH, Kuan CH, Thung TY, Chang WS, Loo YY, et al. Prevalence

and antimicrobial susceptibility of Vibrio parahaemolyticus isolated from short

mackerels (Rastrelliger brachysoma) in Malaysia. Front Microbiol. 2017; 8(1): 1–9.

9. Depaola A, Nordstrom JL, Bowers JC, Wells JG, Cook DW. Seasonal Abundance of

Total and Pathogenic Vibrio parahaemolyticus in Alabama Oysters. Appl Environ

Microbiol. 2003; 69(3): 3–9.

10. Pereira CS, Possas Cde A, Viana CM, Rodrigues Ddos P. Características de Vibrio

parahaemolyticus isolados de mexilhões (Perna perna) comercializados em Niterói,

Rio de Janeiro. Rev Soc Bras Med Trop. 2007; 40(1): 56–59.

11. Chen AJ, Hasan NA, Haley BJ, Taviani E, Tarnowski M, Brohawn K, et al.

Characterization of pathogenic Vibrio parahaemolyticus from the Chesapeake Bay,

Maryland. Front Microbiol. 2017; 8: 2460

12.Berutti TR, Williams RE, Shen S, Taylor MM, Grimes DJ.Prevalence of urease in

Vibrio parahaemolyticus from the Mississippi Sound. Lett Appl Microbiol. 2014;

58(6): 624-628.

13. Hara-Kudo Y, Nishina T, Nakagawa H, Konuma H, Hasegawa J, Kumagai S. Improved

method for detection of Vibrio parahaemolyticus in seafood. Appl Environ Microbiol.

2001; 67(12): 5819.

14.Onarinde BA, Dixon RA.Prospects for Biocontrol of Vibrio parahaemolyticus

Contamination in Blue Mussels (Mytilus edulus)-A Year-Long Study.Front Microbiol.

2018; 9: 1043.



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

23

15. Tran THT, Yanagawa H, Nguyen KT, Hara-Kudo Y, Taniguchi T, Hayashidani H.

Prevalence of Vibrio parahaemolyticus in seafood and water environment in the

Mekong Delta, Vietnam. J Vet Med Sci. 2018; 80(11): 1737-1742.

16. Bauer A, Ostensvik O, Florvag M, Ormen O, Rorvik LM. Occurrence of Vibrio

parahaemolyticus, V. cholerae, and V. vulnificus in Norwegian Blue Mussels (Mytilus

edulis). Appl Env Microbiol. 2006; 72(4): 3058–3061.

17. Turner LM, Alsterberg C, Turner AD, Girisha SK, Rai A, Havenhand JN, et al.

Pathogenic marine microbes influence the effects of climate change on a commercially

important tropical bivalve. Sci Rep. 2016; 6(1): 1–10.

18. Gavilán RG, Martínez-Urtaza J. Factores ambientales vinculados con la aparición y

dispersión de las epidemias de Vibrio en América del sur. Rev Peru Med Exp Salud

Pública. 2011; 28(1): 109–115.

19.Takemura AF, Chien DM, Polz MF.Associations and dynamics of Vibrionaceae in the

environment, from the genus to the population level.Front Microbiol. 2014; 5: 3

20. Sison-Mangus MP, Jiang S, Kudela RM, Mehic S. Phytoplankton-associated bacterial

community composition and succession during toxic diatom bloom and non-bloom

events. Front Microbiol. 2016; 7: 1–12.

21. Wells ML, Trainer VL, Smayda TJ, Karlson BS, Trick CG, Kudela RM, et al. Harmful

Algal Blooms and Climate Change: Learning from the Past and Present to Forecast the

Future. Harmful Algae. 2015; 49: 68–93.

22. Hernández C, Ulloa J, Vergara JA, Espejo R, Cabello F. Infecciones por Vibrio

parahaemolyticus e intoxicaciones por algas: Problemas emergentes de salud pública

en Chile. Rev Med Chil. 2005; 133 (9): 1081-1088



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

24

23. DePaola A, Ulaszek J, Kaysner CA, Tenge BJ, Nordstrom JL, Wells J, et al.

Molecular, serological, and virulence characteristics of Vibrio parahaemolyticus

isolated from environmental, food, and clinical sources in North America and Asia.

Appl Environ Microbiol. 2003; 69(7): 3999–4005.

24. Alam M, Chowdhury WB, Bhuiyan NA, Islam A, Hasan NA, Nair GB, et al.

Serogroup, virulence, and genetic traits of Vibrio parahaemolyticus in the estuarine

ecosystem of Bangladesh. Appl Environ Microbiol. 2009; 75(19): 6268–6274.

25. Park KS, Iida T, Yamaichi Y, Oyagi T, Yamamoto K, Honda T. Genetic

characterization of DNA region containing the trh and ure genes of Vibrio

parahaemolyticus. Infect Immun. 2000; 68(10): 5742–5748.

26. Fabbro C, Cataletto B, Del Negro P. Detection of pathogenic Vibrio parahaemolyticus

through biochemical and molecular-based methodologies in coastal waters of the Gulf

of Trieste (North Adriatic Sea). FEMS Microbiol Lett. 2010; 307(2): 158–164.

27.Raghunath P.Roles of thermostable direct hemolysin (TDH) and TDH-related hemolysin

(TRH) in Vibrio parahaemolyticus.Front Microbiol. 2015; 5: 805

28. Wang R, Zhong Y, Gu X, Yuan J, Saeed AF, Wang S. The pathogenesis, detection, and

prevention of Vibrio parahaemolyticus. Front Microbiol. 2015; 6(1): 1–13.

29. Gonzalez-Escalona N, Gavilan RG, Toro M, Zamudio ML, Martinez-Urtaza J.

Outbreak of Vibrio parahaemolyticus sequence type 120, Peru, 2009. Emerg Infect

Dis. 2016; 22(7): 1235–1237.

30. Gavilan RG, Zamudio ML, Martinez-Urtaza J. Molecular Epidemiology and Genetic

Variation of Pathogenic Vibrio parahaemolyticus in Peru. PLoS Negl Trop Dis. 2013;

7(5): e2210



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

25

31. Dirección General de Salud Ambiental del Ministerio de Salud. Procedimiento para la

Recepción de Muestras de Alimentos y Bebidas de Consumo Humano en el

Laboratorio de Control Ambiental de la Dirección General de Salud Ambiental del

Ministerio de Salud. Directiva Sanitaria N° 032 - MINSA/DIGESA. [Internet]. 1. 1ra

ed. Lima: J.B. GRAFIC E.I.R.L; 2011 [citado 8 Nov 2018]. Disponible en:

http://www.digesa.minsa.

gob.pe/publicaciones/descargas/Procedimiento%20NTS%20RECEPCION%20DE%20

MUESTRAS.pdf

32. Costa RA, Araújo RL, Vieira RH. Hemolytic and urease activities in vibrios isolated

from fresh and frozen oysters. Rev Soc Bras Med Trop. 2013; 46(1): 103–115.

33. Britania [Internet]. Argentina: Laboratorios Britania S.A; 2015 [citado 8 Nov 2018].

Christensen Medio (Urea Agar Base). Disponible en: https://www.britanialab.com/

back/public/upload/productos/upl_5af086c156e97.pdf

34. IMARPE [Internet]. Lima: Laboratorio Costero de Huacho; 2000 [citado 12 Feb. 2019].

Principales especies pelágicas. Disponible en:

http://www.imarpe.gob.pe/huacho/Paginas/especies_pel_jurel.html

35. IMARPE [Internet]. Lima: Área Funcional de Sensoramiento Remoto; 2000

[actualizado 31 Ago. 2018; citado 12 Feb. 2019]. Monitoreo Satelital Diario de

Parámetros Oceanográficos del Mar Peruano. Disponible

en:http://www.imarpe.gob.pe/

argen/uprsig/promedios018/promediosgen18/general01_31ago18.png


[actualizado 30 Sept. 2018; citado 12 Feb. 2019]. Monitoreo Satelital Diario de

Parámetros Oceanográficos del Mar Peruano. Disponible en:



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https://www.britanialab/

http://www.imarpe.gob.pe/huacho/

26

http://www.imarpe.gob.pe/

argen/uprsig/promedios018/promediosgen18/general01_30set18.png


[actualizado 31 Oct. 2018; citado 12 Feb. 2019]. Monitoreo Satelital Diario de

Parámetros Oceanográficos del Mar Peruano. Disponible en:

http://www.imarpe.gob.pe/

argen/uprsig/promedios018/promediosgen18/general01_31oct18.png

38. Izutsu K, Kurokawa K, Tashiro K, Kuhara S, Hayashi T, Honda T, et al. Comparative

genomic analysis using microarray demonstrates a strong correlation between the

presence of the 80-kilobase pathogenicity island and pathogenicity in Kanagawa

phenomenon-positive Vibrio parahaemolyticus strains.Infect Immun. 2008; 76(3):

1016-1023.



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27

ANEXOS



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28

ANEXO 1

Fig. 1 T. murphyi (Jurel) en puesto de venta en el Mercado

Mayorista de Productos Hidrobiológicos.



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ANEXO 2

Fig. 2A. purpuratus(Concha de abanico) en puesto

deventaenelMercado Mayorista de Productos

Hidrobiológicos.



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ANEXO 3

Fig. 3 A. purpuratus(Concha de abanico), con las valvas

cerradas como criterio de inclusión



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31

ANEXO 4

Fig. 4 S. scombrus(Caballa) fresco,con branquias rojas,

como criterio de inclusión.



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ANEXO 5

Fig. 5S. scombrus(Caballa)con pupilas convexas, como

criterio de inclusión.



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ANEXO 6

Fig. 6Colonia verde azulada, sacarosa negativa de V. parahaemolyticus NCTC

13209 (Izquierda) y V. parahaemolyticus obtenido de una muestra deS.

scombrus (Derecha) en agar TCBS.



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34

ANEXO 7

Fig. 7 Reacción positiva a la prueba de catalasa

(formación de burbujas) de V. parahaemolyticus.



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35

ANEXO 8

Fig. 8 Reacción positiva a la prueba de oxidasa (coloración

fucsia) de V. parahaemolyticus.



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36

ANEXO 9

Fig. 9 Reacción positiva para V. parahaemolyticus

enagar LIA (izquierda): K/K - -; agar TSI

(derecha): K/A - -.



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37

ANEXO 10

Fig. 10 Reacción positiva de indol en agar SIM para V.

parahaemolyticus. Formación de anillo rojo.



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38

ANEXO 11

Fig. 11 Prueba de movilidad para V. parahaemolyticus en

agar SIM. Crecimiento difuso hacia las paredes

del tubo (izquierda): móvil (V.

parahaemolyticus:+);sin crecimiento difuso

(derecha): no móvil (-).

(+) (-)



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39

ANEXO 12

Fig. 12 V. parahaemolyticus en caldo RM-VP. RM (+):

color rojo (izquierda); VP (-) (derecha): sin cambio

de color.

(+) (-)



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40

ANEXO 13

Fig. 13 Crecimiento de V. parahaemolyticus a 37 °C, en Agua Peptonada

Alcalina al 1, 3, 6 y 8% de NaCl. No crecimiento al 0 y 10%.



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41

ANEXO 14

Fig. 14 Reacción negativa a la prueba de β-galactosidasa

(izquierda) de V. parahaemolyticus; Reacción

positiva (derecha).

(-) (+)



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42

ANEXO 15

Fig. 15 Halos deβ- hemolisis de V. parahaemolyticus en

agar Wagatsuma.



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43

ANEXO 16

Fig. 16 Reacción positiva a la prueba de ureasa de

V. parahaemolyticus, en agar urea

Christensen.



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44

ANEXO 17

Tabla 3. Número y porcentaje de cultivos aislados de pescados y moluscos bivalvos, ureasa

y Kanagawa positivos.

Grupo

Biológico

Especie

Muestras

Ureasa

positivo

Kanagawa

positivo

Kanagawa y

ureasa

positivo

n % n % n % n %

Pescados S. scombrus 7/ 41 17.0 0 0 6 85.7 1 14.3

S. deliciosa 8/ 41 19.5 1 12.5 6 75.0 1 12.5

T. murphyi 0/ 41 0 0 0 0 0 0 0

Total 15/ 123 12.2 1 6.7 12 80 2 13.3

Moluscos

bivalvos

A. atra 6/ 41 14.6 0 0 0 0 6 100

A. purpuratus 6/ 41 14.6 0 0 5 83.3 1 16.7

Total 12/82 14.6 0 0 5 41.7 7 58.3

Total Acumulado 27/205 13.2 1 3.7 17 63 9 33.3



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ANEXO 18

Tabla 1. Características fenotípicas de V. parahaemolyticus. Resultado obtenidos a partir de cultivos aislados de muestras de S.

scombrus (CAB), S. deliciosa (LOR), A. atra (CH) y A. purpuratus (CH.AB).

Características fenotípicas

Identificación Colo

nia

verd

e

azul

ada

en

TCB

S

Fermen

tación

de

lactosa

y

sacaros

a

Ferme

ntació

n de

glucos

a sin

forma

ción

de gas

Desc

arbo

xilac

ión

de la

lisin

a

For

maci

ón

de

ácid

o

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Cata

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Produ

cción

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APA a

1, 3 , 6 y

8 % de

NaCl

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0 Y 10

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NaCl

B-

gal

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da

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CABM22108

+

-

+

+

-

+

+

+

+

-

+

-

-

CH.ABM20409 + - + + - + + + + - + - -

LORM10609 + - + + - + + + + - + - -

LORM20609 + - + + - + + + + - + - -

LORM10809 + - + + - + + + + - + - -

LORM20809 + - + + - + + + + - + - -

CABM10809 + - + + - + + + + - + - -

CHM11109 + - + + - + + + + - + - -

CHM21109 + - + + - + + + + - + - -

CABM1109 + - + + - + + + + - + - -

CABM21109 + - + + - + + + + - + - -

CH.ABM21109 + - + + - + + + + - + - -

CH.ABM31109 + - + + - + + + + - + - -

CABM21509 + - + + - + + + + - + - -

LORM32509 + - + + - + + + + - + - -

CH.ABM33009 + - + + - + + + + - + - -

CH.ABM11309 + - + + - + + + + - + - -



BIBLIO

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NCIAS B

IOLO

GICAS

46

0

1

2

3

4

5

6

7

S. deliciosa T. murphyi A. purpuratus A. atra S. scombrus

ANEXO 19

Fig. 19 Número de aislamiento de V. parahaemolyticus, según fecha de muestreo, a partir de S. scombrus, S. deliciosa, T. murphyi, A.

purpuratus y A. atra.



BIBLIO

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E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

47

ANEXO 20

Fig. 17 Salinidad (Unidades Prácticas de Salinidad- UPS) en la costa peruana, durante el periodo

agosto- octubre de 2018, según IMARPE. Las variaciones de la salinidad se representan de

acuerdo a las barras de colores a la derecha de cada gráfico, siendo equivalente a 35 UPS.



BIBLIO

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NCIAS B

IOLO

GICAS

48

ANEXO 21

Tabla 2. Producción de ureasa y diámetro de β- hemólisis (mm) de cultivos de

V.parahaemolyticus avirulentos y virulentos, aislados de muestras de S.

scombrus (CAB), S. deliciosa (LOR), A. atra (CH) y A. purpuratus (CH.AB).

Identificación Ureasa Diámetro de β- Hemolisis (mm)

Asignación

CABM22108 - 4.0 Avirulento

CH.ABM20409 - 9.5 Virulento

LORM10609 - 8.5 Virulento

LORM20609 - 0 Avirulento

LORM10809 - 8.0 Virulento

LORM20809 - 10 Virulento

CABM10809 - 7.0 Virulento

CHM11109 + 5.5 Virulento

CHM21109 + 8.5 Virulento




CH.ABM31109 + 9.0 Virulento

CABM21509 + 6.0 Virulento

LORM32509 + 8.5 Virulento


CH.ABM11310 - 0 Avirulento



BIBLIO

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NCIAS B

IOLO

GICAS

49

ANEXO 22

Fig 18. Porcentaje de aislamiento de V. parahaemolyticus Kanagawa y ureasa positivo, en

especies de pescados y moluscos bivalvos.

0%

10%

20%

30%

40%

50%

60%

70%

80%

90%

100%


80%

0%

80%

100%

80%

20%

0%

20%

100%

20%20%

0%

20%

100%

20%

Kanagawa Positivo Ureasa Positivo Kanagawa y Ureasa Positivo



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NCIAS B

IOLO

GICAS

50



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