ESTERILIZACIÓN Y DESINFECCIÓN

2015

UN POCO DE HISTORIA

Mucho antes de que se conociera la existencia de mi croorganismos , seutilizaban métodos para su destrucción (agentes físi cos y químicos).

La Ley de Moisés obligaba a los hebreos a quemar la ropa de quienes morían de lepra.

Los egipcios incineraban materiales infecciosos. Utilizaban sustancias químicas para embalsamar los cuerpos.

* Aristóteles (384-322 aC)Recomendó a Alejandro Magno hervir el agua que le daba a beber a

sus soldados.

* Avicena (980-1037)Indicaba que el agua podía potabilizarse por evaporación y destilación o

por ebullición.

* Robert Hooke (1635-1703)

Describió, entre otras cosas, los cuerpos fructificantes de los hongos.

* Antoni van Leeuwenhoek (1632-1723)

Empleó microscopios muy simples de construcción propia para examinar el contenido microbiano de sustancias naturales y describe por primera vez los microorganismos.

Fuente: Brock Biología de los Microorganismos. 12ª ed.

• Cohn (1828-1898)

Ideó métodos simples para evitar la contaminación de medios de cultivo estériles.

Descubrió bacterias formadoras de endosporas (resistentes a la temperatura).

•Spallanzani (1729-1799)

y Pasteur (1822-1895)

En experimentos para refutar la teoría de la generación espontánea se establecen los principios de la esterilización

Fuente: Brock Biología de los Microorganismos 12ª ed.

* Robert Lister (1867)

Establece los principios antisépticos de la cirugía

* Instrumentos esterilizados por calor

* Vendajes esterilizados con fenol

Desde entonces el control del crecimiento de los microorganismos se ha tomado un tema central en:

* Prevención de enfermedades e infecciones

* Conservación de alimentos

ESTERILIZACIÓN

► ES EL USO DE AGENTES FÍSICOS O QUÍMICOS CON EL FIN DE DESTRUIR O O QUÍMICOS CON EL FIN DE DESTRUIR O ELIMINAR LA TOTALIDAD DE LOS MICROORGANISMOS VIABLES PRESENTES EN UN MATERIAL, PRODUCIENDO UNA CONDICIÓN DE ESTERILIDAD.

Por qué es importante el proceso de esterilización?

• Equipos y materiales quirúrgicos de uso medico con e propósito de reducir el riesgo de infecciones en pacientes.

• Pipetas, tubos, pacas de Petri, pinzas etc. que van a ser utilizados en el laboratorio de Microbiología con fines de investigación o diagnostico.diagnostico.

• Preparación de medios de cultivo para cultivo y aislamiento de microorganismos a partir de diferentes tipos de muestras o para control de medio ambiente, equipos, personal, medicamentos o cosméticos.

• Descontaminación del material utilizado

DESINFECCIÓN

► ES EL USO DE AGENTES QUÍMICOSPARA ELIMINAR LA INFECTIVIDAD POTENCIAL DEUN MATERIAL (NO IMPLICA LA ELIMINACIÓN DEUN MATERIAL (NO IMPLICA LA ELIMINACIÓN DETODAS LAS FORMAS MICROBIANAS). DESTRUYELAS FORMAS VEGETATIVAS Y NO ELIMINA LASENDOSPORAS BACTERIANAS.

Términos relacionados con el control microbiano:

-Estéril : ausencia absoluta de toda formas de vida microbiana.

-Asepsia : conjunto de medidas destinadas a impedir toda

contaminación microbiana.

-Agente bactericida : agente que mata las bacterias.

-Agente bacteriostático : agente que inhibe el crecimiento microbiano.

-Agente fungicida : agente que mata los hongos.

-Agente fungistático : agente que inhibe el crecimiento fúngico.

-Agente virucida : agente que detiene la replicación y la actividad

vírica.

- Agente virustático : agente que inhibe la replicación vírica.

ESTERILIZACIÓN:Probabilidad de sobrevida de muy bajo orden; 10-6

SAL: sterility assurence level (probabilidad de sobrevida)

SAL 10-6SAL 10-6

Probabilidad de una unidad no-estéril

es igual a 1 en 106 unidades procesadas

CINÉTICA DE MUERTE

Nt = No e- Kt Ln Nt/No= - K t No/Nt= e- Kt

45678

log

Nº so

brev

ivie

ntes

EFECTO DEL NÚMERO DE MICROORGANISMOS O LA CARGA INICIAL

CARGA DE POBLACIÓN ALTA

0123

0 20 40 60 80

Tiempo (min)

log

Nº so

brev

ivie

ntes

POBLACIÓN ALTA

CARGA DE POBLACIÓN BAJA

Esto se cumple para el tratamiento con calor como para el tratamiento químico.

CURVAS DE SOBREVIVENCIANt/No = e- Kt ln No sobrevivientes = - K t

BA: curva logarítmica normal B: esporas

A

C

D

B: esporasC: microorganismos altamente sensibles bifásica, por calor y radiaciónD: en tratamientos químicos

FACTORES QUE AUMENTAN LA EFICIENCIA DE LOS PROCESOS DE ESTERILIZACIÓN

■ Presencia de humedad y oxígeno■ Presencia de sustancias químicas bactericidas

FACTORES QUE DISMINUYEN LA EFICIENCIA DE LOS FACTORES QUE DISMINUYEN LA EFICIENCIA DE LOS PROCESOS DE ESTERILIZACIÓN

■ Presencia de microorganismos esporulados■ Presencia de aceites, ácidos grasos, grasas, y prot eínas■ Altas concentraciones de azúcares

CONDICIONES PREVIAS QUE DEBE CUMPLIR EL MATERIAL PARA UNA EFICAZ ESTERILIZACIÓN

♦ LAVADO

♦ ENJUAGADO♦ ENJUAGADO

♦ SECADO

♦ ENVOLTURA

LAVADO

Se realiza con agua y detergente

- Reduce la tensión superficial del agua colaborando en la solubilización de albúmina, emulsión de grasa y suspensión de partículas.suspensión de partículas.

- El empleo de detergentes enzimáticos es de mayor eficiencia.

Para qué realizamos el lavado?

- Para asegurar la eliminación de partículas extrañas

- Eliminar materia orgánica que protege a los microorganismos

ENJUAGADO -SECADO-ENVOLTURA

# Cómo se realiza el enjuague?Se debe enjuagar muy bien y con suficiente cantidad

de agua corriente potable y agua destilada.

# Para qué secamos?Para evitar la contaminación posterior y deterioro del material.

# Para qué envolvemos?Para evitar la recontaminación microbiana en el momento de la salida de la cámara de esterilización, durante el transporte y almacenamiento hasta el momento de su utilización.

ENVOLTORIO

■ Permeable al agente esterilizante

■ Resistente a la penetración de microorganismosmicroorganismos

■ Libre de pérdida de fibras y partículas. No tóxico

■ Resistente a mojaduras y pinchaduras o roturas

MÉTODOS DE ESTERILIZACIÓN

MÉTODOS FÍSICOS MÉTODOS QUÍMICOSMÉTODOS FÍSICOS MÉTODOS QUÍMICOS

Calor secoCalor seco Óxido de etilenoÓxido de etilenoLlama directaLlama directa FormaldehídoFormaldehídoAire caliente (estufa)Aire caliente (estufa)Incineración Incineración GlutaraldehídoGlutaraldehído

Gas plasmaGas plasma

Calor húmedoCalor húmedoA vapor fluente (A vapor fluente (tyndalizacióntyndalización) ) A vapor fluente (A vapor fluente (tyndalizacióntyndalización) ) A presión (autoclave)A presión (autoclave)

RadiacionesRadiacionesUltravioletasUltravioletasIonizantesIonizantes

FiltraciónFiltraciónFiltros de profundidadFiltros de profundidadFiltros de membranaFiltros de membranaFiltros de Filtros de nucleaciónnucleación ((NucleoporeNucleopore))

ESTERILIZACIÓN POR CALOR

MECANISMO DE ACCIÓNMECANISMO DE ACCIÓNMECANISMO DE ACCIÓN

DESNATURALIZACIÓN DE PROTEÍNAS, DESNATURALIZACIÓN DE PROTEÍNAS, DISOLUCIÓN DE LÍPIDOS Y DAÑO DE DISOLUCIÓN DE LÍPIDOS Y DAÑO DE DISOLUCIÓN DE LÍPIDOS Y DAÑO DE DISOLUCIÓN DE LÍPIDOS Y DAÑO DE

ÁCIDOS NUCLEICOSÁCIDOS NUCLEICOSNO APTO PARA SUSTANCIAS Ó MATERIALES NO APTO PARA SUSTANCIAS Ó MATERIALES

TERMOSENSIBLESTERMOSENSIBLESRAPIDO Y PENETRANTERAPIDO Y PENETRANTE

7070°°C : hongos, virus y C : hongos, virus y celcel vegetativas de las bacteriasvegetativas de las bacterias121121°°C: C: endosporasendosporas bacterianas bacterianas

ESTERILIZACIÓN POR CALOR SECO: acción oxidante en presencia del aire

• Llama directa

Material a esterilizar:

-Ansas

-Tijeras

-Portaobjetos

-Pinzas

-Material muy resistente al calor

- Incineración: desechos infecciosos (870-980°C)

CALOR SECO

◊ ESTUFAS DE ESTERILIZACIÓN (U HORNOS)

160º C------------- 11/2 h180º C------------- 1 h

CALOR SECO en ESTUFAS

Qué material podría esterilizarse por calor seco??- Materiales resistentes al calor-Sustancias no miscibles en agua (soluciones oleosas, aceites, vaselina líquida) en recipientes cerrados.-Polvos (talco)-Material de vidrio resistente y metal

No se pueden esterilizar: Medios de cultivo sólidos o líquidos (se deshidratan)

Material de goma (guantes, sondas)Textiles.

ESTERILIZACIÓN POR CALOR HÚMEDO A PRESIÓN

◊ AUTOCLAVE

121º C, durante15 a 20 min, a 1 atm de presión internaFundamento:Fundamento:Fundamento: a mayor presión interna del autoclave mayor

temperatura de ebullición del agua. Mecanismo de acción: desnaturalización de proteínas, Mecanismo de acción: desnaturalización de proteínas,

disolución de lípidosdisolución de lípidosdisolución de lípidosdisolución de lípidos

Autoclave tipo Chamberland

AUTOCLAVE

Tipo Chamberland

AUTOCLAVES

Olla a presiónDiferentes tipos:

CICLO TÍPICO DE UN AUTOCLAVE

Objeto

Autoclave

La temperatura de un objeto bastante voluminoso se eleva más lentamente que la temperatura del autoclave

Autoclave

Qué material podría esterilizarse en autoclave?

- Material de vidrio o metálico- Agua destilada, solución fisiológica (NaCl 0,9 %)- Medios de cultivo que no lleven incorporados hidratos de

carbonocarbono- Material de plástico autoclavable (tips, tubos Eppendorf,

equipos de filtración)

TYNDALIZACIÓN

Se puede realizar:* A vapor fluente (olla a presión o autoclave c/ es pita

abierta)* A Baño María a ebullición

PROCESO DE ESTERILIZACIÓN POR CALOR HÚMEDO EN TRES PROCESO DE ESTERILIZACIÓN POR CALOR HÚMEDO EN TRES ETAPAS

1er. Proceso 20 min a 100º C

24 h a temperatura ambiente Ó A 37°C

2do. Proceso 20 min a 100º C24 h a temperatura ambiente Ó A 37°C

3er.Proceso 20 min a 100º C24 h a temperatura ambiente Ó A 37°C

TYNDALIZACIÓNDurante los períodos de incubación las esporas

germinarán pasando a formas vegetativas

Para que las esporas germinen necesitan:

► Un shock térmico

► Un medio de cultivo rico en nutrientes

► Una temperatura y tiempo adecuado

TYNDALIZACIÓNSe pueden tyndalizar :Leche, gelatinaHidratos de carbonoMedios que no resisten 121º C

Medios ricos en nutrientes y que permitan la germinación de esporas

No se pueden tyndalizar :Agua destilada

Solución fisiológicaSoluciones de buffers o electrolitos

Medios pobres en nutrientes

VENTAJAS DEL CALOR HÚMEDO RESPECTO AL CALOR SECO

Menor tiempo de esterilización

Menor temperatura

El calor húmedo es más penetrante que el calor seco

Se pueden esterilizar medios de cultivo

Se pueden esterilizar otros líquidos como agua destilada (AD) y solución fisiológica (SF)

PASTEURIZACIÓN

CUÁL ES EL OBJETIVO?

DESTRUIR MICROORGANISMOS PATÓGENOS ( Listeria monocytogenes,

algunas especies de Campylobacter, Salmonella y Escherichia coli O157:H7 )

Y REDUCIR LA MICROFLORA ALTERANTE PRESENTE, LO QUE PROLONGA

LA VIDA ÚTIL DEL PRODUCTO EN CONDICIONES DE REFRIG ERACIÓN.

Aplicaciones:- leche

- jugos de frutas

- bebidas (vinos, cervezas)

La pasteurización no es sinónimo de esterilización.

PASTEURIZACIÓN

► LHT (Low Temperature Holding)30 minutos a 63 - 66º C

► HTST (High Temperature Short Time)15 segundos a 72 - 73º C15 segundos a 72 - 73º C

- Altera el sabor en menor medida- Mata los MO resistentes al calor con mayor eficacia- Puede realizarse en un sistema continuo- Este método se utiliza en la industria de productos

lácteos

UHT (Ultra High Temperature)

• 140º C – 150º C durante pocos segundos

• Proceso continuo• Proceso continuo

• Necesita envasado aséptico

• Logra esterilidad comercial

ESTERILIZACIÓN POR FILTRACIÓN

■ LOS MICROORGANISMOS NO SE DESTRUYEN SINO QUE SON REMOVIDOS

■ SE APLICA PARA LA ESTERILIZACIÓN DE LÍQUIDOS Y GAS ES

� SE APLICA PARA LA ESTERILIZACIÓN DE LÍQUIDOS TERMOSENSIBLES: soluciones oftálmicas e intravenosa s, radiosótopos, vacunas, H de C, medios ricos para cu ltivo

celulares, soluciones de antibióticos y vitaminas

FILTROS DE PROFUNDIDAD

-En este tipo de filtros laretención de partículas seproduce por una combinaciónde absorción y efecto tamiz.

-Consisten de un materialfibroso o granular prensado,plegado, activado, o pegadodentro de los canales de flujo

FiltraciónFiltraciónFiltros de profundidadFiltros de profundidadFiltros de membranaFiltros de membranaFiltros de nucleación (Nucleopore)Filtros de nucleación (Nucleopore)

dentro de los canales de flujo(fibras de papel o vidrio deborosilicato).

-Dado que el material defiltración está dispuesto alazar en una lámina gruesa, losfiltros de profundidad no seobstruyen fácilmente, por loque se usan como prefiltrospara eliminar partículasgrandes de suspensioneslíquidas. Filtros HEPA

FILTROS DE NUCLEACIÓN (Nucleopore)

- Son películas muy delgadas depolicarbonato que son perforadaspor un tratamiento conjunto conradiación y sustancias químicas.

-Son filtros con orificios muyregulares que atraviesan la

FiltraciónFiltraciónFiltros de profundidadFiltros de profundidadFiltros de membranaFiltros de membranaFiltros de nucleación (Nucleopore)Filtros de nucleación (Nucleopore)

regulares que atraviesan lamembrana verticalmente, funcionancomo tamices, evitando el paso detoda partícula con un tamaño mayoral del poro.

-Menor cantidad de poros, lavelocidad de flujo es mas baja y seproduce atascamiento

-Se usan en microscopía electrónicade barrido para concentración yvisualización.

FiltraciónFiltraciónFiltros de profundidadFiltros de profundidadFiltros de membranaFiltros de membranaFiltros de nucleación (Nucleopore)Filtros de nucleación (Nucleopore)

EQUIPO DE FILTRACIÓN: filtros de membrana de acetato o nitrato de celulosa

LA FILTRACIÓN SE UTILIZA PARA ESTERILIZAR LÍQUIDOS TERMOLÁBILES

FILTRACIÓN

MECANISMOS DE ACCIÓN

FILTROS DE PROFUNDIDAD:

● Adsorción y efecto tamiz● Adsorción y efecto tamiz

Filtros de membrana:

● Efecto tamiz

- Usos actuales de filtros de profundidad: prefiltro s.- Usos de las membranas filtrantes : laboratorio de microbiología,

investigación e industria

VENTAJAS DE FILTROS DE MEMBRANA

* Filtran más rápido líquidos y gases

• Filtran únicamente por efecto tamiz

• No alteran las características organolépticas de la s suspensiones• No alteran las características organolépticas de la s suspensiones

• Filtran mediante la aplicación de una bomba de vací o

• Son esterilizados en autoclave

• Se desechan una vez utilizados

• Además de esterilizantes tienen otras utilidades en microbiología (recuentos ,

concentración y separación de microorganismos).

FILTRACIÓN DE AIRE

FILTRO HEPA (High Efficiency Particulate Aire)

Laminas de borosilicato que atrapan partículas y

FILTROS ULPA: retienen partículas de entre 0,1 y 0,2 micras. Eficiencia de 99.99%

atrapan partículas y agentes infecciosos de más de 0,3 micras con una efectividad del 99,97%.

Efecto Tamiz.

CABINAS DE BIOSEGURIDAD (CSB)

■ FILTROS HEPA■ LUZ UV

Cabina de flujo laminar

Gabinete de clase II

Radiaciones: ESPECTRO DE ENERGÍA RADIANTE

UV entre 220 y 300nm.

Fuente: Introducción a la Microbiología. Tortora y Col. 2007.

RADIACIONES IONIZANTES

CARACTERÍSTICAS

-Alta energía, baja longitud de onda

-Gran poder de penetración

-Ionizan átomos y moléculas

RADIACIONES NO IONIZANTES

Ej. UV

CARACTERÍSTICAS

-Baja energía, sin poder

ionizante

-Sin poder penetrante-Ionizan átomos y moléculas

-No requieren altas temperaturas

FUENTES MÁS HABITUALES

-Rayos gamma

-Rayos catódicos (electrones acelerados)

- Rayos X

-Sin poder penetrante

-Máxima eficiencia biocida a

260 nm

RADIACIONESMECANISMOS DE ACCIÓN

Ionización de los contenidos Produce lesiones del DNAcelulares, formación de radicales letales o modificaciones

Radiaciones ionizantes Radiaciones ultravioletas

celulares, formación de radicales letales o modificacioneslibres, y moléculas excitadas y esto químicas como unioneslleva a la desorganización de cruzadas entre bases queenzimas y del DNA. interfieren en la replicación

(dímeros de pirimidinas T-T)

RADIACIONES IONIZANTES

RADIACIONES UV

RADIACIONES UV

Afectan a las moléculas de DNA formando dímeros de Timina. Son escasamente penetrantes y se utilizan para esterilizar superficies y el aire en salas y cabinas y el agua que no la absorbe.

CREACCIÓN Y REPARACIÓN DE UN DÍMERO DE TIMINA PRODU CIDO POR LA LUZ UV

LUZ UV

APLICACIONES DE LAS RADIACIONES

RADIACIONES IONIZANTES - Son acumulativas- Material medico quirúrgico: guantes de goma, implantes (válvulas

cardiacas), injertos óseos y de tejidos, catéteres, suturas, jeringas, agujas y bisturies.

- antibióticos, vacunas, hormonas - Las radiaciones gamma se usan en la Industria alimentaría

RADIACIONES UV- desinfección de superficies en CBS: disminución de la contaminación de

cultivos y de operarios.- desinfección de aire (quirófanos, sala de quemados, de inmunodeprimidos,

de animales de experimentación)- desinfección de agua- No penetra superficies sólidas, opacas, vidrios, plásticos, líquidos turbios y

materiales empaquetados

CONTROLES DE ESTERILIZACIÓN Y ESTERILIDAD

CONTROL DE ESTERILIZACIÓN : SE REALIZA PARA COMPROBAR

SI SE CUMPLIERON LAS CONDICIONES DEL PROCEDIMIENTO

EMPLEADO.

CONTROL DE ESTERILIDAD : SE REALIZA SOBRE LAS MUESTRAS

O ALÍCUOTAS DEL MATERIAL ESTERILIZADO CON EL OBJETO DE

COMPROBAR LA AUSENCIA TOTAL DE MICROORGANISMOS.

CONTROLES DE ESTERILIZACIÓN

CONTROLES DE ESTERILIZACIÓN□ BIOLÓGICO□ FÍSICO□ QUÍMICO

CONTROL DE ESTERILIDAD□ BIOLÓGICO

A) Control biológico: esporas bacterianas en algún soporte (papel), es el mas confiable.

Microorganismos esporulados: - Bacillus stearothermophilus: esterilizadores de vapor- Bacillus subtilis vr. niger: esterilización por óxido de etileno- Bacillus subtilis vr. niger o Clostridium tetani: esterilización por calor seco- Bacilluis pumilus o Streptococcus faccium: esterilización por radiaciones - ionizantes

CONTROLES DE ESTERILIZACIÓN

Para esterilización con gas

B) Control físico: método directo y sin demora que registra la temperatura y el tiempo en que se mantuvo la misma. Termógrafos

C) Control químico: Sustancias químicas en tubo que funden a temperatura de esterilización. Están mezcladas con un colorante y al fundir indican si se alcanzó la temp eratura óptima de esterilización. Desventajas: no dan infor mación sobre la relación temperatura/tiempo como tampoco m iden la penetración del vapor. la penetración del vapor. Para tratamientos a 121º C anhídrido succínico (PF: 120º C) o ácido benzoico (PF: 121º C) y para tratamientos a 115º C es apropiado el azufre (PF: 115º C).

Método mas confiable: control biológico

• mediante un cambio cromático progresivo integran todas las variables críticas del proceso.

- para calor seco (cambian de color del amarillo al marrón: ciclo correcto)

- para vapor (cambian de color amarillo al azul: ciclo correcto).

Integradores de esterilización

- para vapor (cambian de color amarillo al azul: ciclo correcto).

Para esterilización con calor seco

CONTOLES DE ESTERILIDAD

- Medios de cultivo se toman los de la zona central y se incuban a 37°C, 24h.

- Sustancia termolábil se toma una alícuota - Sustancia termolábil se toma una alícuota se coloca en medio d cultivo adecuado se incuban a 37°C, 24h.

MÉTODOS QUÍMICOS

ÓXIDO DE ETILENOMecanismo de acción :

- por alquilación, modifica la estructura molecular d e las proteínas y ácidos nucleicos de los microorganismos a través de reacciones irreversibles que alteran los proceso s de reproducción y metabólicos de las células.reproducción y metabólicos de las células.

Aplicaciones:- material que no puede ser esterilizado por vapor o calor

seco: aparatos termolábiles y ópticos, fibras artif iciales, accesorios de respiradores, hilos de sutura, etc.

ÓXIDO DE ETILENO

VENTAJAS DESVENTAJAS- Bactericida, esporicida y virucida - Explosivo e inflamable- Coeficiente de difusión muy favorable - Tendencia a polimezarse- Requiere humedades relativas > 50% - Puede ser incompatible con

algunos plásticos- Puede usarse para material - Es muy tóxico para el operador

termosensible o muy delicado - Acción lenta (3-4 h)(cuero, libros, etc)

Esterilizador con óxido de etileno

Los hospitales tienen cámaras de óxido de etileno para esterilizar el material hospitalario.

Formaldehído :

• puede resultar tan efectivo como el óxido de etileno • bajo poder penetrante• tiende a polimerizarse a una forma inactiva a bajas temperaturas• es afectado por materia orgánica como suero, esputo, pus.• Los artículos esterilizados mediante formaldehído deben estar

perfectamente limpios, en envases abiertos. • la humedad relativa debe ser mantenida entre el 80 y 90%, la temperatura

por encima de 60º C, y la concentración al mayor nivel posible.• El tiempo de exposición debería ser lo más prolongado posible y no menor

de 4 h.• Mecanismo de acción: alquilación

Glutaraldehído :• soluciones alcalinas resultan esporicidas (esterilización de superficies). • se necesitan concentraciones del 2% en solución acuosa a pH 7,5 y 8,5

(0,3% de bicarbonato de sodio) pero reduce la estabilidad de la solución, porque puede ocurrir una polimerización inactiva.

• Se pueden esterilizar por este método todo tipo de i nstrumental que no pueda esterilizarse por calor (inoxidables, lentes, sintéticos flexibles, etc.) efectuando inmersiones en cubas apropiadas.

• El material que va a ser esterilizado o desinfectado por este método debe lavarse previamente con abundante agua para reducir la presencia de lavarse previamente con abundante agua para reducir la presencia de sustancias orgánicas comunes (sangre, suero, pus, etc.).

• Deben utilizarse guantes de goma y antiparras durante su empleo porque es irritante de mucosas, piel y membranas.

• El material tratado debe enjuagarse muy bien con agua destilada estéril y secar con nitrógeno o se puede lograr un secado rápido con una mezcla de alcohol y agua (50%).

• Se debe trabajar en lugares que se pueden airear ya que el glutaraldehído es muy irritante y volátil.

• El mecanismo de acción es por alquilación.

GAS PLASMA

Es un método de esterilización a baja temperatura. El vapor de peróxido de hidrógeno o de ácido peracético es convertido

en plasma sometiéndolo a energía de frecuencia radial.

MECANISMO DE ACCIÓN

El plasma consiste en partículas altamente cargadas y radicales libres esterilizantes.

GAS PLASMA

VENTAJAS

► Productos finales no tóxicos(vapor de agua y oxígeno)

► Baja temperatura

USOS

► Se puede esterilizar material metálico y no

► Baja temperatura► Material esterilizado puede ser

usado inmediatamente debidamente empaquetados

► Se utiliza en hospitales

material metálico y no metálico e instrumental médico para microcirugíasensible al calor

► Se puede esterilizar material quirúrgico

No se pueden esterilizar productos de celulosa, alg odón, papel, agua, materiales orgánicos

ANTISÉPTICOS - DESINFECTANTES

Agentes desinfectantes (o germicidas) son agentes químicos capaces de matar los microorganismos patógenos de un material inanimado. Pueden presentar efectos tóxicos sobre tejidos vivos, por lo que se suelen usar sólo para materiales inertes.

Agentes antisépticos son sustancias químicas que matan o inhiben el crecimiento de los microorganismos y pueden aplicarse en tejidos vivos dada su escasa toxicidad para los tejidos.

CRITERIOS DE ELECCIÓN DE UN ANTISÉPTICO

• Amplio espectro de actividad• Bajo costo• Inocuo para tejidos vivos• No tóxico• Rapidez y eficacia en materia orgánica• Baja capacidad de generar resistencia• No irritante ni sensibilizante• No teñir tejidos• No poseer olor desagradable• Compatible químicamente con otras sustancias

CRITERIOS DE ELECCIÓN DE UN DESINFECTANTE

- Germicida de amplio espectro- Bajo costo- No corrosivo, no alterar tejidos- Baja toxicidad- Amplia acción- No generar resistencia- Soluble en agua- Sin olor desagradable- Alta estabilidad

ANTISÉPTICOS - DESINFECTANTES

FACTORES QUE AFECTAN LA POTENCIA DE UN DESINFECTA NTE:

- pH

- Temperatura- Temperatura

- Presencia de materiales orgánicos

- Concentración del agente y tiempo de actuación

EVALUACIÓN DE LA POTENCIA DE UN DESINFECTANTE

■ Prueba del coeficiente fenólico

■ Prueba de la utilidad de la dilución ■ Prueba de la utilidad de la dilución

■ Método de difusión con disco

MÉTODO DE DIFUSIÓN CON DISCO

Fuente: Introducción a la Microbiología. Tortora y Col. 2007.

ANTISÉPTICOS - DESINFECTANTES

CLASIFICACIÓN DE ACUERDO A SU MECANISMO DE ACCIÓN :

Agentes que dañan la membrana citoplasmática1) Detergentes: catiónicos, aniónicos y no iónicos2) Compuestos fenólicos; fenol, cresoles, bisfenol (triclosan)3) Alcoholes: etanol, isopropanol

Agentes desnaturalizantes de proteínasAgentes desnaturalizantes de proteínas1) Ácidos y bases fuerte2) Ácidos orgánicos no disociables

Agentes modificadores de grupos funcionales de prot eínas y ácidos nucleicos

1)Metales pesados: mercuriales, de plata, de cobre2)Agentes oxidantes: agua oxigenada, halógenos,

permanganato de potasio, acido peracético3)Colorantes: derivados de anilina, acridina4)Agentes alquilantes: formaldehído, glutaraldehído, óxido de

etileno

Fenoles:-lesionen las membranas ricas en lípidos-No se utilizan (irritante)

Agentes Químicos

AGENTES QUÍMICOS

B) Agentes desnaturalizantes de proteínas

Ácidos y bases fuertes. Son activamente bactericidas debido a sus grupos H+ y OH-Mycobacterium tuberculosis es resistente a la acción de bases fuertes.

Ácidos orgánicos no disociables. Ácidos orgánicos no disociables. El ácido benzoico y el benzoato de sodio se usa como conservante de alimentos.Los ácidos cítrico y láctico se adicionan a alimentos para prolongar la vida útil.

C) Agentes modificantes de grupos funcionales de pr oteínas y ácidos nucleicos

Metales pesados . Las sales de Hg y Ag son los más efectivos (1 ppm). Compuestos mercuriales orgánicos (merthiolate) se usan como antisépticos no irritantesCompuestos de cobre sólo se aplican en agricultura para control de algas y hongos.

AGENTES QUÍMICOS

Agentes alquilantes. Son agentes esterilizantes activos sobre células vegetativas, esporas y ejercen su efecto letal por alquilación de proteínas y ácidos nucleicos. La alquilación se produce reemplazando hidrógenos libre de –NH2 y –OH en proteínas y ácidos nucleicos y de –COOH y –SH en proteínas por grupos alquilos.

-Formalina: se usa para preservar tejidos y en la preparación de vacunas.-Formalina: se usa para preservar tejidos y en la preparación de vacunas.

-Oxido de etileno: para esterilizar materiales termolábiles.

- Glutaraldehído: es menos tóxico y más potente que el formaldehído. Cada vez se emplea más como esterilizante de instrumental quirúrgico. Es recomendado para esterilizar equipamiento de terapia respiratoria.

Agentes oxidantes

AGENTES QUÍMICOS

Tintura de yodo: es una mezcla de I2 + IK en alcohol 70%, es un antiséptico de piel. Alcohol iodado: tintura de yodo al 10% en etanol de 96º C. Los iodóforos (combinación de yodo y una molécula orgánica, a partir de la cual el yodo se libera lentamente)son antisépticos. El cloro como gas o en combinación con otras sustancias químicas, se lo utiliza como desinfectante. El ácido hipocloroso y el hipoclorito de sodio se usa para desinfectar superficiesEl peróxido de hidrógeno es un antiséptico. No es un buen antiséptico para las heridas abiertas, porque el H2O2 es degrado la catalasa tisular.

Agente químico Mecanismo de acción Usos

Etanol (70%) Desnaturaliza proteínas y disuelve lípidos Antiséptico usado sobre piel

Isopropanol (50-70%) Desnaturaliza proteínas y disuelve lípidos Antiséptico usado sobre piel

Formaldehído Reacciona con NH2, COOH y SH Mata endosporas

Tintura de iodo Inactiva proteínas Antiséptico usado s/ piel

Cloro (Cl2) gas Forma ácido hipocloroso. Desinfectante de agua dePotente agente oxidante bebida. Desinfectante general

Nitrato de plata Precipita proteínas Antiséptico general

Clorhidrato de mercurio Inactiva proteínas por reacción Desinfectante y ocasionalmente con grupos SH usado como antiséptico de pielcon grupos SH usado como antiséptico de piel

Detergentes Altera la membrana celular Desinfectante

(ej amonio cuaternario)

Compuestos fenólicos Altera membrana celular Antiséptico a bajas concentraciomes.Desnaturaliza proteínas Desinfectante a altas concentraciones

(ej. hexaclorofeno)

Óxido de etileno Agente alquilante Esterilizante de materiales termolábiles

COMPARACIÓN DE LA EFICIENCIA DE DIVERSOS ANTISÉPTICOS

ORDEN DECRECIENTE DE LA RESISTENCIA DE LOS MICROORGANISMOS A LOS BIOCIDAS QUÍMICOS

MÁS RESISTENTES► PRIONES► ENDOSPORAS DE BACTERIAS► MICOBACTERIAS► QUISTES DE PROTOZOOS► FORMAS VEGETATIVAS DE PROTOZOOS► BACTERIAS GRAM NEGATIVAS► HONGOS Y ESPORAS DE HONGOS► VIRUS SIN ENVOLTURA► BACTERIAS GRAM POSITIVAS► VIRUS CON ENVOLTURA LIPÍDICA

MENOS RESISTENTES