ENZIMAS MITOCONDRIALES

Laura QuinteroCamila ArévaloClaudia Castro Margarita SuarezKaroll Ávila

ENZIMA CITOCROMO OXIDASA

Pertenece a la clase Óxido-reductasa.

Última enzima de la cadena de transporte de electrones, recibiendoun electrón de cada uno de las cuatro moléculas de citocromo c;después, los transfiere a una molécula de oxígeno, reduciéndola ados moléculas de agua. Acoplada A este proceso, se produce unatranslocación de protones a través de la membrana, lo cual generaun gradiente electroquímico que la enzima ATP sintasa emplea parasintetizar adenosín trifosfato (ATP).

La reacción catalizada por la enzima puede resumirse como sigue (eltérmino: 4 H+FUERA Hace referencia a protones expulsados al espaciointermembrana mitocondrial).

4 Fe2+-citocromo C+ 8H+in+ O2 4 Fe3+-citocromo C+ 2 H2O + 4 H+

DESHIDROGENASA LACTICA

La deshidrogenasa láctica (DHL) es una enzima (proteína capaz de"acelerar" una reacción química) que se encuentra en casi todos lostejidos del cuerpo. La DHL está principalmente involucrada enla producción de energía en las células, lo que explica su ampliadistribución

En primer lugar entra el NADH seguido por el piruvato y tras el pasocatalítico se libera secuencialmente lactato y NAD+.

ésta reacción puede producirse en dirección contraria en función dela relación de concentraciones de sustratos y productos. Esto semanifiesta con claridad en el Ciclo de Cori: mientras que en elmúsculo esquelético, especialmente durante el ejercicio físicointenso, la reacción se produce en la dirección descrita, en el hígadoy el músculo cardiaco (metabolismo oxidativo), el lactato procedentedel músculo esquelético se re oxida a piruvato para su utilización porla gluconeogénesis y por el ciclo de Krebs.

REACTIVOS USADOS

Buffer de fosfatos, succinato de sodio, cianuro de potasio, azul de metileno y malonato de sodio.

BUFFER DE FOSFATOS

Se emplea como vehículo neutro para células, ya que no modifica elperfil de expresión y funcionamiento celular normal. El uso de estasolución es muy común para lavar células a través de centrifugación.El PBS puede emplearse como diluyente para métodos de desecaciónde biomoléculas, ya que las moléculas de agua presentes en el PBS seadhieren alrededor de la biomolécula y permiten inmovilizarla a unasuperficie sólida. Esta monocapa de agua evita que la biomolécula seadesnaturalizada (o sufra modificaciones conformacionales) en elproceso de desecación.

SUCCINATO DE SODIOEn forma de anión succinato, interviene en el ciclo deKrebs, reduciendo el coenzima FAD y permitiendo así la consecuciónde energía por fosforilación oxidativa tras la cesión de electrones aintermediarios de la cadena de transporte de electrones, según lareacción siguiente:

Succinato + FAD → fumarato + FADH2

CIANURO DE POTASIOInhibe irreversiblemente este complejo enzimático y se interrumpe el transporte de electrones produciéndose una cianosis celular.

AZUL DE METILENOEvidencia el proceso de las enzimas, que es coloreado cuando seencuentra oxidado e incoloro cuando se reduce, en la medida en quese re oxida la coenzima FAD.

MALONATO DE SODIOEl malonato es un inhibidor de la respiración celular, porque se uneal sitio activo de la succinato deshidrogenasa en el ciclo del ácidocítrico, pero no reacciona, compitiendo con el succinato. En lareacción de fosforilación oxidativa, el malonato es un inhibidor delcomplejo II que, nuevamente, contiene succinato deshidrogenasa.