El laboratorio en el estudio del paciente hemato oncológico
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El laboratorio en el estudio del paciente hemato-oncológico
Daniel Lagos
Tecnología Médica
Universidad de Chile
L e u c e m i a s
Linfática Sd. MieloproliferativosMieloides
Agudas Crónicas
M0-M7 Blastos Seg
Agudas Crónicas
L1-L3
LCC Tricoleucemias
Policitemia vera
Trombocitemia escencial
Mielofribrosis ideopática
crónica
F L U J O G R A M A D I A G N Ó S T I C O
Paciente
SíntomaFiebre
Médico general
Hemograma
Consulta especialista
Sospecha diagnóstica a través de características o manifestaciones clínicas
Exámenes de Laboratorio confirmación diagnóstica:
- Estudio de citomorfología- Estudio de inmunofenotipo- Estudio citogenético- Estudio de biología molecular
Diagnóstico de enfermedad hemato-oncológica
Tratamiento:- Quimioterapia- Radioterapia- Medicamentos- Trasplante de Médula osea
Seguimiento:- Citometría de flujo- FISH- PCR
L A B O R AT O R I O
Diagnóstico de enfermedades hematológicas
Mejor Caracterización
Inmunofenotipo(citometría de flujo)
Biología molecular(PCR)
Confirmatorios
Técnicas citogenéticas:- FISH- Cariograma
Morfológicas:- Mielograma- Hemograma- Tec. Citoquímicas
*El diagnóstico de las enfermedades hemato-
oncológicas sigue basándose en gran
medida en la clínica del paciente, la morfología y el análisis citoquímico de
las células.
E S T U D I O S C I T O M O R F O L Ó G I C O S
MIELOGRAMAEstudia cuantitativa y cualitativamente la composición medular de la médula ósea.
Imagen 1: Hiperplasia Mieloide de Médula ósea. Muestra de aspirado medular en la cual se observa una relación mieloide eritroide mayor a 1:3, que sugiere una pérdida de precursores eritrocíticos o una expansión de elementos mieloides.
CITOQUÍMICAEstudia la composición química de las células pudiendo detectar y precisar la localización de algunos principios inmediatos, enzimas y sustancias inorgánicas.
- Carbohidratos: reacción de ácido peryódico de Shiff o reacción de PAS.
- Ez. Oxidantes: Reacción de las peroxidasas.
- Ez. Hidrolíticas: fosfatasa alcalina, ácida, muramidasa, esterasas específicas.
- Componentes Inorgánicos: hierro azul de prusia o de Perls.
Enfermedad Perfil carácteristico
Leucemia aguda mieloblástica Peroxidasa +
Leucemia aguda linfoblástica Peroxidasa –Fosfatasa ácida + (estirpe T)
Leucemia mieloide crónica Fosfatasa alcalina granulocítica muy disminuida o indetectable.
Policitemia vera Fosfatasa alcalina granulocítica muy aumentada
Leucemia linfática crónica B Fosfatasa ácida y glucoronidasa muy disminuida
Leucemia linfática crónica T Fosfatasa ácida y glucoronidasa muy aumentada
TÉCNICAS CITOQUÍMICAS
E S T U D I O S C I T O G E N É T I C O S
Detección de alteraciones cromosomales ya sean numéricas o estructurales.
Leucemia Mieloide Crónica t(9;22)(q34;q11)
Imagen 2: Cromosoma Philadelphia marcador citogenético de la LMC, presente en un 95% de los casos. Determina la formación del gen de fusión BCR-ABL.
Leucemia Promielocítica Aguda t(15;17)
Imagen 3: traslocación entre los cromosomas 15 y 17, cuyo producto es el gen de fusión PML-RARa.
C I T O M E T R Í A D E F L U J O
La citometría de flujo a ayudado en el diagnóstico y clasificación de las enfermedades hemato-oncológicas en distintos tipos de acuerdo al linaje y estado madurativo de sus células, mediante el uso de marcadores y características de éstas.
Estudio Básico:- Linfoide B- Linfoide T- Mieloide- No específicos
CD19, citCD22, citCD79a, CD10citCD3, CD2, CD7, sCD3Anti-MPO, CD13, CD33, CD65, CD117TdT, CD34, HLA-DR, CD9, CD38
Estudio Ampliado:- Sí línea B- Sí línea T- Sí mieloide
Clgu, slg, kappa, lambda, CD20CD1a, sCD3, CD4, CD5, CD8, TcRα/β, TcRγ/δCD14, CD15, CD41, CD42, CD61, CD64, CD36, glicoforina A.
Panel de caracterización de Leucemias Agudas
Imagen 4. Diferenciación de poblaciones celulares mediante citometría de flujo. Medición de Side Scatter (complejidad) y Forward Scatter (tamaño).
Información que entrega la citometría de flujo, tamaño y complejidad.
B I O L O G Í A M O L E C U L A R
Usada en el diagnóstico, establecimiento de pronósticos y la monitorización de tratamiento en las enfermedades hemato-oncológicas.
Seguimiento por qPCR de paciente con LMCr en remisión.
Imagen 5. Disminución del número de copias, expresado en porcentaje , del gen de fusión BCR-ABL característico de la Leucemia Mieloide Crónica, en el tiempo de tratamiento en meses.
Detección de la mutación de mal pronóstico FLT3-ITD
Imagen 6. Detección de la mutación FLT3-ITD, que da un mal pronostico asociado a leucemias, por PCR convencional. La banda P3 muestra una banda adicional de mas de 365 pb.
>365 pb365 pbNormal