Ehrlichiosis y Anaplasmosis

canina

Roberto Mujica, M.V. Esp.

Enero, 2011

“… bla, bla, bla, bla, bla,

llueve sobre mojado…”

Fito Páez y Joaquín Sabina

Cantautores y filósofos

Son enfermedades febriles,

infecciosas, no contagiosas,

inmunosupresoras, anemizantes y

con tendencias hemorrágicas,

causadas por microorganismos

de la familia Anaplasmataceae:

Ehrlichia sp. y Anaplasma sp.

Taxonomía molecular

Reino: Bacteria

Phylum: Proteobacteria

Clase: Alphaproteobacteria

Orden: Rickettsiales

Familia: Anaplasmataceae

Género: Ehrlichia, Anaplasma, Neoricketsia, Wolbachia

Tamaño del ADN: 1315030 bp

Número de genes: 984 conocidos

Ulrich LE, Zhulin IB, 2010

ARBOL FILOGENETICO

FAMILIA Anaplasmataceae

(Laboratory of Molecular, Cellular and Environmental Rickettsiology, OSU. 2010)

Familia Anaplasmataceae:

Ehrlichia sp., Anaplasma sp.

Son pequeñas bacterias en forma de cocos, pleomórficas, gram (-), intracelulares obligadas

Se replican dentro de vacuolas rodeadas de membrana, vacuola parasitófora, dentro del citoplasma de un tipo especifico de células hospedadoras, granulocitos, mononucleares y/o plaquetas, formando racimos llamados Mórulas

Son transmitidas por vectores, garrapatas o tremátodos, donde se replican y pasan a animales y humanos

Lab. Of Molecular, Cellular and Environmental Rickettsioly, O.S.U. 2010

Infección en caninos

Mononucleares: E. canis, E. chaffeensis, N. risticii y N. helminthoeca

Granulocitos: E. ewingii y A. phagocytophilum. Tambien E. canis(Arraga C.M., 2006)

Plaquetas: A. platys. También se sospecha de E. canis

Sangre de perros en Sudáfrica: nuevo genotipo de Ehrlichia estrechamente relacionado a E. ruminantum, por PCR, pero las mórulas no han sido vistas

(Harvey J. W., 2005)

Son frecuentes las coinfecciones con estas especies de bacterias, y con Babesia canis, Mycoplasma haemocanis (Hemobartonella), Hepatozoon canis y con bacterias, parásitos, hongos o virus oportunistas (criptococosis, criptosporidiosis, Distemper canino)

Ojo con Bartonella vinsonii ssp. Berkhoffii , parece una ehrlichiosis complicada con problemas cardíacos

RECORDAR QUE LA EHRLICHIOSIS

ES UN SINDROME DE INMUNODEFICIENCIA

Infección en humanos en

Venezuela

E. canis por PCR en humanos asintomáticos (Pérez M., Rikihisa Y., Wen H., 1996)

E. canis, comparación molecular y antigénica de muestras provenientes de garrapatas, perros y un humano asintomático

(Unver, A., M. Perez, N..Orellana, H. Huang, and Y. Rikihisa. 2001)

E. canis por PCR en 6/20 (30%) humanos sintomáticos a HME. La secuencia del gen 16S rRNA determinó que es la misma cepa: E. canis Ehrlichia Humana Venezolana

(Perez M., Bodor M., Zhang C., Xionq Q., Rikihisa Y. 2006)

Un microorganismo parecido a A. platys en plaquetas de humanos con síntomas (por ME, en Maracaibo)

(Arraga C.M., Palmar M., Parra O., Salas P.1999)

Trabajos publicados por

Lic. Miriam Pérez, M.Sc.,

Profesora jubilada del DCV-UCLAE. canis por PCR en humanos asintomáticos

(Pérez M., Rikihisa Y., Wen H., 1996)Primer reporte de Ehrlichia canis en humanos, en Suramérica. El ADN de la cepa

aislada fue secuenciada, se determinó estrecha relación con E. canis var. Oklahoma. Se sugiere que es una nueva cepa capaz de producir afección asintómatica en humanos. Se registra como Ehrlichia Humana Venezolana HVE

E. canis, comparación molecular y antigénica de muestras provenientes de garrapatas, perros y un humano asintomático

(Unver, A., M. Perez, N..Orellana, H. Huang, and Y. Rikihisa. 2001)Caracterizaron por secuenciación del gen 16S rRNA (1408 pares de bases) la cepa

aislada de caninos y garrapatas, llamándola Ehrlichia Canina Venezolana. La compararon con la HVE aislada en 1996 y fue idéntica (100% similar) y con la Ehrlichia canis var. Oklahoma evidenciando su estrecha relación (99,9% similar)

Infección humana con Ehrlichia canis acompañados por signos clínicos en Venezuela

(Perez M., Bodor M., Zhang C., Xionq Q., Rikihisa Y. 2006)E. canis por PCR en 6/20 (30%) humanos sintomáticos a HME. La secuencia del gen

16S rRNA determinó que es la misma cepa: E. canis Ehrlichia Humana Venezolana

Ehrlichiosis en felinos

Reporte de un gato con poliartritis y aplasia medular, positivo a E. canis por PCR. Anteriormente habían reportado gatos + por serología y observación de mórulas en el frotis.

(Breitschwerdt, E. et al. 2002)

Reporte de un gato con infección por A. phagocytophilum en Finlandia. Síntomas: fiebre, depresión, anorexia, pérdida de peso, secreción ocular y nasal. Diagnóstico por PCR

(Heikkika H. et al. 2010)

Reporte de un caso de un gato con A. platys en Brasil. Síntomas: anuria, disuria, estreñimiento, TBCpenia leve. Diagnóstico por PCR.

(Lima F. et al. 2010)

Actualmente, una caso por frotis en Laboratorio Clínico DCV-UCLA (sangre congelada para hacer PCR. Chavier H., Cortez A., Rodríguez V.)

TRANSMISION:

Rhipicephalus sanguineus

E. canis, E.ewingii(?),A.platys (?)

Ampliamente difundida a nivel mundial

Transmisión transestadial

Período infectante: 155 dias

NO hospedador intermediario

– Transfusiones de sangre pueden transmitirla

Tambien es vector de:

– Babesia canis, Hepatozoon canis, Bartonella vinsonii

Ciclo de vida

Incidencia en una

zona endémica en Venezuela

33% de perros del CEC + a E. canis por PCR

100% de garrapatas R. sanguineus + a E. canis

por PCR(Unver A., Pérez M., Orellana N., Huang H., Rikihisa Y., 2001)

31% de perros del CEC + a E. canis por PCR(Huang H, Unver A., Pérez M., Orellana N., Rikihisa Y., 2005)

16% de perros del CEC + a A. platys por PCR

Todos asintomáticos

100% garrapatas R. sanguineus - a A. platys por PCR

Incidencia en otras partes del mundo:– 33% de perros en una perrera en Carolina del Norte , E.E.U.U.,

+ a A. platys por PCR

– 32% de perros en una perrera Okinawa, Japón, + a A. platys por PCR

– 5% de los perros asintomáticos y 35% de los TBCpénicos + a A. platys por IFA en Florida, E.E.U.U.

– 50% + a A. platys por IFA en Louisiana, E.E.U.U.

(Huang H, Unver A., Pérez M., Orellana N., Rikihisa Y., 2005)

Incidencia en una zona endémica

en Venezuela:

Patogenia

Período de incubación: 7 a 21 días posterior a la picadura de una garrapata infectada

Fase aguda: Síndrome Febril

Ehrlichia canis se replican en células fagócíticas mononucleares en bazo, hígado, nódulos linfáticos para después diseminarse.

Afectan endotelio vascular: vasculitis

Fase subclínica: con o sin tratamiento

Fase crónica(Harrus S., et al, 1999; Rikihisa Y., 1999).

Fase Aguda:

Fiebre DepresiónAnorexiaLinfoadenomegaliaSecreción ocular o nasalPérdida de peso leveTiempos de coagulaciónVasculitis

Anemia no regenerativa leve a moderada

Leucopenia / neutropenia

Trombocitopenia

Hiperglobulinemia

Hipoalbuminemia

(Harrus S., et al, 1999;

Rikihisa Y., 1999;

Harvey J. W., 2005).

SubclínicoMeses o años

Crónico

Trombocitopenia y

leucopenia severas

Hipoplasia o Aplasia

medular

Hemorragias

Signos de SNC

Signos oculares

Síndrome de

inmunodeficiencia:

Infecciones secundarias

Muerte por

complicaciones

DiagnósticoEjemplares con signos clínicos de la enfermedad y contacto con garrapatas, 7 a 21 días antes

Una combinación de signos clínicos, anormalidades hematológicas, y hallazgos de laboratorio

(Mark Neer T., 2002).

Anormalidades hematológicas mas comunes– anemia no regenerativa (82%)

– trombocitopenia (82%)

– leucopenia (32%)

– pancitopenia (18%) producida por hipoplasia de células precursoras en la médula ósea, ocurre en fase crónica grave y con mayor frecuencia en perros de la raza Pastor Alemán

(Mark Neer T., 2002).

Diagnóstico

– Visualización de la mórula de la E. canis dentro de las células afectadas

– Pruebas serológicas: detección de anticuerpos séricos específicos

Inmunofluorescencia indirecta IFI

Elisa: Snap 4X ® (Laboratorios IDEXX, Maine, U.S.A)(Harrus S., et al, 1998; Ewing S. A., 2001,

Mark Neer T., 2002).

– Técnicas de biología molecularReacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) para la amplificación del ADN de la E. canis

Secuenciación del ADN obtenido por PCR

PCR en tiempo real (RT – PCR)

Western Inmuno blott(Couto G., 2002; Harvey J. W, 2005; Arraga C. M., 2006)

Visualización de la mórula dentro

de las células afectadasFrotis sanguíneo

Frotis de capa blanca

Frotis por aposición de Pulmón, Hígado, Bazo, Médula ósea

Limitantes:– método poco sensible, depende de la existencia de

leucocitos infectados en la muestra de examinada, nivel de parasitemia, fase de la enfermedad

– habilidad técnica para identificar al microorganismo (Harrus S., et al, 1998; Ewing S. A., 2001,

Bulla C., et al, 2004).

Inmunofluorescencia Indirecta

Pruebas Serológicas

E. canis IFA/Western Blot

Test de ELISA: Snap 4X de IDEXX

Limitantes de pruebas serológicas

La seroconversión al antígeno apropiado es retrospectivo

Puede haber reacción cruzada dentro de individuos del mismo género (E. canis con E. chaffeensis y E. ewingii)

En áreas endémicas da positivos a trombocitopénicos por otras causas (síndrome paraneoplásico, TBCpenia inmunomediada)

(Harrus S., et al, 1998; Ewing S. A., 2001,

Mark Neer T., 2002).

Ténicas de biología molecularVentajas:

– Alta sensibilidad y especificidad

– Posibilidad de detectar variaciones mínimas en

la secuencia de bases del ADN (variaciones

entre cepas)

Desventajas:

– Altos costos y técnicas delicadas

Reacción en cadena de polimerasa (PCR)

– Mecanismo de replicación “in vitro” de ADN,

dirigido por la enzima ADN-polimerasa

– Mimetización de la Replicación del ADN

Extracción de ADN

Amplificación del gen 16s rRNA de E. canis

Electroforesis en gel de agarosa

RT PCR

PCR en tiempo real (RT PCR):

– Proceso de amplificación y detección se producen de

manera simultanea en un mismo tubo vial cerrado

– Por fluorescencia se puede medir durante la

amplificación la cantidad de DNA sintetizado por PCR.

Tratamiento Curativo:Tetraciclinas: Recuperación rápida, 24 horas– Doxiciclina: 10 mgs/kg/día V.O. SID o dividida en dos

tomas/dia x 14 dias (consenso internacional)

– Oxitetraciclina: 22 mgs/kg V.O., V.I.V. (L.A.?) TID c/ 8 horas por 14 a 21 días

(Mark Neer T., 2002; Couto G., et al, 2002).

Dipropionato de Imidocarb:– 5 mgs/kg IM , dos dosis, intervalo de 14 días entre ambas

– Recuperación lenta de anormalidades de laboratorio

– Efectos colaterales indeseados: Parasimpáticomiméticos

Otros:– Rifampicina

– Cloramfenicol

– Enrofloxacina(Mark Neer T., 2002; Couto G., et al, 2002;

Harvey J.W.; Arrraga C.M., 2006).

Tratamiento Preventivo:

Control del vector

Oxitetraciclina: 6 – 10 mg/kg SID por 14 a 21 días (Mark Neer T., 2002; Couto G., et al, 2002).

Inducción de RI protectora:

– Inoculación de cepas subtratadas

– Reinoculación inmediatamente después de tratamiento completo

(Pérez M. y Mujica R., 1995; Harrus S., et al, 1997;

Harrus S., et al, 1998; Harrus S., et al, 1999)

Doxiciclina: 100 mgs./ ejemplar durante su permanencia en zonas endémicas de la enfermedad

(Davousta B., et al. 2005)

Tratamiento Preventivo:

Inmunoterapia:

– Pasiva: Administrar células u

otros componentes de la RI

– Activa: estimular al SI a

responder más eficientemente

al antígeno:

LPS´s + componentes de pared

celular bacteriana

Acemannan(Pérez M. y Mujica R., 1995; Harrus S., et al, 1997;

Harrus S., et al, 1998; Harrus S., et al, 1999;

Mujica R., et al , 2005)

Vacunas anti E. canis:

Vacuna atenuada contra la ehrlichiosis

– Registrada en 2010

– Autores: Simon Harrus, Gad Baneth

– Agente: Fennemore Craig

– Resultados: Atenuación de síntomas, falló para

reducir TBCpenia, permitió la eliminación

espontánea de la bacteria (negatividad por PCR , 4

meses post inoculación experimental)

Otra registrada en 2005 y patentada por

Wyeth®

– Mejores resultados en el reporte de la patente

– Se desconoce su situación actual

Consideraciones Generales sobre la Ehrlichiosis

canina y humana y sobre otras infecciones emergentesDiversas especies de mamíferos pueden ser atacadas por varias especies de la flia. Anaplasmateceae individualmente o en forma conjunta

Veterinarios están aportando información médica comparativa sobre Ehrlichiosis y Anaplasmosis y discuten sus riesgos zoonóticos

Esfuerzos de las farmacéuticas para desarrollar nuevos garrapaticidas para el control del vector

Desarrollo de nuevas técnicas diagnósticas

Bartonelosis canina y humana: Enfermedades infecciosas emergentes

Enfermedad del “arañazo” felino (Cat Scratch disease): Bartonelosis felina

Dr. Edward Breitschwert

LAVC, Lima, Perú, Octubre 2009

Implicaciones Zoonóticas de la Ehrlichiosis

Ehrlichia canis, E. chaffeensis y E. ewingii han sido aisladas de pacientes humanos induciendo síntomas clínicos

Anaplasma phagocytophilium ha sido aislada de humanos (transmitida por Ixodes)

El rol del perro como reservorio no esta claro. Se cree que es menor. Los principales reservorios pueden ser venados, roedores y otros pequeños mamíferos.

E. chaffeensis ha sido detectada en perros por PCR, en una perrera en el sureste de Virginia, E.E.U.U.

Dr. Edward Breitschwert

LAVC, Lima, Perú, Octubre 2009

Preguntas?

Gracias….

Bibliografia

The MiST2 database: a comprehensive genomics resource on microbial signal transduction. Ulrich LE, Zhulin IB. Nucleic Acids Res. 2010

Validation of chemoprevention of canine monocytic ehrlichiosis with doxycycline B. Davousta, A. Keundjianb, V Rousc, Laurent Maurizid, D. Parzya.Vet. Microbiolgy. 2005.

Molecular evidence supporting Ehrlichia canis-like infection in cats. Breitschwerdt, E. Et al. J. Vet. Intern. Med. Nov. 2002

Anaplasma phagocytophilum infection in a domestic cat in Finland: Case report . Heikkilä H., Bondarenko A., Mihalkov A., Pfister K., Spillmann T. Acta Vet Scand. 2010.

Detección molecular de Anaplasma platys en un gato infectado de forma natural en Brasil. Lima, F, Soares, PT., Ramos, C., Araújo, F. ; Ramos F.; Souza, IF II ; Faustino, M., Alves, L. Braz. J. Microbiol. 2010