Efecto modulador en la supervivencia de la proteína PEDF (Pigment Epithelial-Derived Factor) en células tumorales mamarias irradiadas.

José Luís Sánchez Sánchez, Sebastià Sabater, Carmen Belen Alvarez-Simón, Carmen Gil-Gas, Paola Castro-García, Paloma Honrubia, Carmen Ramírez-Castillejo

IntroducciónPEDF es un péptido natural multifuncional, actuando como factor neurotrópico que induce la diferenciación, posee actividad antiangiogénica y en la apoptosis. La fosforilación de la proteína PEDF en tres residuos de serina (Ser 24, Ser114 and Ser227) se han relacionado con sus funciones.Hemos estudiado, en cultivos in vitro de células tumorales mamarias, el efecto de la irradiación asociada o no a la exposición continuada a un mutante de PEDF en el que cada residuo de serina fue reemplazado por alanina (PEDF-AAA) simulando una proteína completamente defosforilada. El objetivo es describir la relación entre la actividad de este factor de autorenovación y la resistencia a la irradiación.

RESULTADOSMTT: las células tratadas con el mutante PEDF-AAA proliferaron más rápidamente que las control (fig 1), pero en tratamientos crónicos se observa la misma población residual que el control (fig 2). RT-PCR: p21: a 1DIV la irradiación aumenta su expresión, las células tratadas con AAA tienen una expresión basal mayor que no aumenta al irradiar (fig 3).

MATERIAL Y MÉTODOSSe sometieron células mamarias a una combinación de: irradiación (0 , 2, 4, 6 Gy), y PEDF (PEDF-AAA vs control).Se irradiaron 1 dia después del sembrado. En tratamientos crónicos PEDF-AAA se añadió al medio de cultivo cada 3 días (20 ng/ml) previo a la irradiación.En tratamientos agudos : PEDF-AAA se añadió una sola vez en el momento del clultivo a distintas dosis (0, 2, 4, 8 y 16 uL)Se sembraron 1000 cel/well para ensayos de supervivencia con MTT que se leyó a las 5 DIV post-irradición. Se obtuvo RNA a 1DIV (150000 cel/well) y a 5 DIV post-irradición (25000-50000 cel/well).

* S. Oncologia. Complejo Hospitalario Universitario. Albacete* S. Oncologia. Complejo Hospitalario Universitario. Albacete† † S. Radioterapia. Complejo Hospitalario Universitario. AlbaceteS. Radioterapia. Complejo Hospitalario Universitario. Albacete‡ ‡ Laboratorio de biología celular y molecular de la célula madre. Centro Regional de Investigaciones Biomédicas. Universidad Castilla-Laboratorio de biología celular y molecular de la célula madre. Centro Regional de Investigaciones Biomédicas. Universidad Castilla-La Mancha. AlbaceteLa Mancha. Albacete

CONCLUSIONES:•El factor PEDF-AAA produce un aumento de la proliferación que se observa tanto en tratamientos agudos como crónicos.•La acción de PEDF-AAA puede ser mediada por proteínas de ciclo celular tales como p21, relacionada con la autorrenovación de la célula madre tumoral. •El tratamiento con PEDF-AAA produce un aumento de la expresión de la proteína p21, de forma similar al observado tras irradiar las células. Este aumento de expresión puede estar condicionando la distinta respuesta de división observada en estas células, sin que haya un efecto aditivo al tratamiento con la radiación.•La administración de PEDF-AAA no consigue disminuir la población residual respecto al control, por ello nuestro siguiente paso será probar otras modificaciones de la proteína como su extremo carboxilo terminal.

Fig 2

Fig 3

6 Gy

AAA 18ciclos

AAA 2ul AAA 4ul AAA 8ul AAA16ul AGU

DO

CON

TRO

LFig 1

CON

TRO

L

Control 0 Gy Control 6 Gy

CRO

NIC

O

AAA 0 Gy AAA 6 Gy