,Discrepancia ABO
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Transcript of ,Discrepancia ABO
Pruebas Imunohematológicas
Fenotipificación ABO
Fenotipificación RhD
Test de Antiglobulina Directo (Coombs Directo)
Test de Antiglobulina Indireto (Coombs Indirecto)
Los métodos se basan en el principio de la
hemaglutinación
• Que debe Indicar si hubo o no unión del Anticuerpo con el antígeno
Gel TestPrueba en Tubo Microplaca
Principio de los Test Inmunohematológicos
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Principio de los Test Inmunohematológicos
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• La reacción de aglutinación es um
fenomemo complejo que involucra
muchas variábles.
• Aglutinación específica y
inespecífica.
• En ImH usamos la reacción de
aglutinación como una herramienta
que nos indica se hube o no la
union Ag-AC. (Agl específica).
• Ac conocidos Ag
Ag conocidos Ac
Reación de Aglutinación
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Aglutinación
• La aglutinación ocurri
cuando la fuerza de
repulsión entre los
hematíes es superado.
• Esto ocurre por alteración
de la membrana de los
hematies, o del medio en
lo cual ellos están en
suspensión.
Cuidado !
Ni siempre la presencia de aglutinación significa presencia de la reacción Ag-Ac
Ni siempre, la ausencia de aglutinación garantiza que no hubo la reacción Ag-Ac
La fenotipificación ABO corresponde a la pesquisa de los
antígenos A/B en los hematíes y de los anticuerpos naturales anti-
A, Anti-B del plasma.
Prueba Directa: se utilizan reactivos Anti-A y Anti-B comerciales
para la pesquisa de los antígenos
Prueba Inversa: se utilizan hematíes A1 y B para la pesquisa de
los anticuerpos naturales ABO (isoaglutininas)
Tab A
Fenotipificación ABO
Prova direta
Prova reversa
Prueba inversaPrueba directa
Prueba inversa
Discrepancias en la Fenotipificación ABO
Que es discrepancia ABO???
La discrepancia ocurre cuando el resultado de la Prueba Directa
no “concuerda”con el resultado de la Prueba inversa
Resultados discrepantes deben ser investigados para la liberación
de un resultado correcto
Qué hacer???
Identificar el problema:
En la mayoría de los casos, la discrepancia está relacionada a
problemas técnicos u otros:
• errores digitación
• problemas con Reactivos o Equipamientos
• errores durante el procedimiento
En otros casos, existe una discrepancia verdadera, relacionada con
la muestra (hematíes o plasma/suero)
Discrepancia em la Fenotipificación ABO
Errores Clericais:• tubos mal/no identificados
• muestra identificada incorrectamente (cambio de muestra)
• error de transcripción de resultado
• error de digitación
Problemas con Reactivos o Equipamientos:• reactivos vencidos
• reactivos contaminados
• equipamiento descalibrados
Errores de Procedimiento:• reactivos no adicionados
• no observar las orientaciones do fabricante
• suspensión de hematíes en concentración inadecuada
• lectura de los resultados (resuspensión inadecuada)
Discrepancias – Errores Técnicos
Problemas em la Prueba Directa (Hematíes):
• antígenos ABO con reatividad débil o ausente
• reatividad extra
Problemas em la Prueba inversa (Plasma):
• anticuerpos ABO con reatividad débil o ausente
• reatividad extra
Discrepancias ABO - Verdaderas
Prueba Direta - reatividad débil o ausente
Anti-A Anti-B Hematíe A1 Hematíe B
0 (2+) 0 0 4+
Discrepancias ABO
Subgrupos ABO:
presentan menos sitios antigénicos por hematíe – reatividad más débil o ausencia
de reatividad con los reactivos Anti-A/-B.
~ 80% de los indivíduos A/AB son A1; 19% A2, 1% otros subgrupos (A3, Ax, Am ,Aint, Ael
Ay,etc.)
Patologías (ex: leucemia)
RN (antígenos inmaduros)
Otros (reación con doble-población):
Transfusiones recientes (doble población)
Transplantes (quimeras)
Prueba Directa - reactividad débil o ausente
Cómo Resolver???
Subgrupos ABO:
• aumentar tiempo de incubación y disminuir temperatura de
incubación
• utilizar Anti-A1, Anti-H
• técnicas de fijación/elución
Verificar datos clínicos (RN, patología) - RN (repetir pruebas
posteriormente)
Discrepancias ABO
Ejemplo: Prueba Directa - reactividad débil o ausente
Histórico de tipificación Grupo O. Paciente saludable, sin histórico clínico.
SOLUCIÓN???
Fijación/ Elución: eluado reactivo
con hematíe A
Ex: A débil (probable subgrupo Ael)
Directa: “O” Inversa: “A”
Discrepancias ABO
Prueba Directa - recatividad extra
Reactivos/muestras (contaminación)
Rouleaux (test en tubo)
Muestra de cordón (gelatina de wharton)
Presencia de auto-anticuerpos fríos e IgG alto título
Poliaglutinación (ex: antígeno T)
Fenómeno B adquirido
Anti-A Anti-B Hematíe A1 Hematíe B
4+ 1+ 0 4+
Discrepancias ABO
Prueba Directa - reactividad extra
Cómo Resolver???
Realizar TAD (auto-anticuerpos fríos/calientes)
• lavar hematíes con solución salina calentada 37ºC/ID-Diluent 2
• utilizar técnicas de disociación de auto-anticuerpos
Hematíes de cordón (lavar hematíes)
Fenómeno B Adquirido y Poliaglutinación (Ex: antígeno T)
• utilizar reactivos monoclonales (menos proteico, no reacciona con antígeno
T, no reacciona con B adquirido)
Discrepancias ABO
Exemplo: Prueba Directa - reactividad extra
Ex: presencia de auto-anticuerpos fríos
fijados a los hematíes
Conducta inicial:
lavar hematíes con ID-Diluent 2 calentado o
salina calentada y repetir fenotipificación
Discrepancias ABO
Prueba Inversa - reatividad débil o ausente
Bajo título de anticuerpos (niños e ancianos)
Ausencia de anticuerpos (hipo o agamaglobulinemia, medicamentos)
Cómo resolver ???
Verificar datos clínicos (RN/ niños, ancianos, patología,
medicamentos)
Aumentar tiempo de incubación y disminuir temperatura de
incubación
Anti-A Anti-B Hematíe A1 Hematíe B
4+ 0 0 0
Discrepancias ABO
Ejemplo: Prueba Inversa - reactividad débil o ausente
Ex: anticuerpos anti-B en bajo título
4 oC
Directa: “A” Inversa: “O”
Discrepancias ABO
Prueba Inversa - reatividad extra
Auto-anticuerpos fríos libres en el plasma
Aloanticuerpos (reactivos a TA: anti-M,-N,-Le,-P1)
Patologías (uso de expansores plasmáticos, fibrinógeno elevado,
hipergamaglobulinemia)
Anti-A Anti-B Hematíe A1 Hematíe B
4+ 0 1+ 4+
Discrepancias ABO
Cómo resolver???
Autocontrol positivo: repetir PI a 37ºC (auto-anticuerpos fríos)
Autocontrol negativo: realizar la pesquisa e identificación de anticuerpos
irregulares (repetir PI a 37ºC)
• investigar subgrupos (presencia de anti-A1 natural )
Exemplo: Prueba Inversa - reactividad extra
Ex:auto-anticuerpos fríos
Repetir PI a 37oCRepetir PI con suero auto-adsorvido
Discrepancias ABO
El antígeno D es el más importante antígeno de grupo sanguíneo
después de los antígenos A y B.
El antígeno RhD pertenece al sistema Rh:
• sistema complejo que posee 49 antígenos
• principales antígenos: D; C/c; E/e
El antígeno RhD posee alta inmunogenicidad y está envuelto en la
EHRN y RHT.
La fenotipificación RhD corresponde a pesquisa del antígeno RhD
en los hematíes
Fenotipificación RhD
Fenotipaificación RhD
RhD negativo
RhD positivo:
RhD normal - 10.000 a 25.000
sitios/hematíes (resultados positivos
fuerte)
RhD débil - 66 a 5.000 sitios/hemácia
(en Tubo: detectado a través del test
de AGH. En Gel: detectado
directamente, reacciones < 3+)
RhD parcial - 500 a 25.000
sitios/hematíes (puede presentar
resultado positivo fuerte o positivo
débil).
RhD Normal RhD débil RhD parcial RhD parcial
Causas de Discrepancias RhD:
Polimorfismo del antígeno (D débil/D parcial)
Disponibilidad de diferentes reactivos para fenotipificación
(diferentes clones)
Presencia de auto-anticuerpos fijados in vivo (alo/EHRN) - TAD
positivo
Poliaglutinación (contaminación gelatina de wharton,
exposición de criptoantígenos)
Patologías
Contaminación de reactivos/muestras
Errores Técnicos : clerical/procedimientos
Discrepancias RhD
Cómo resolver???
Verificar: procedimientos/ reactivos
• repetir pruebas
• verificar resultado del ctl de D
Realizar TAD (presencia auto-anticuerpos/ aloanticuerpos fijados
in vivo)
• ctl positivo: lavar hematíes
• repetir test con reactivos monoclonales
• utilizar técnicas de disociación de anticuerpos
Discrepancias RhD
Reacciones en GEL para RhD
Cómo resolver???
Pesquisa de D débil/parcial
• utilizar otros reactivos
• tipificación D parcial
• estudios moleculares
Tipificación D parcial
Discrepancias RhD
Ej: paciente con histórico de resultado RhD negativo y RhD positivo (Ddébil)
Discrepancias RhD
RhD débil RhD neg
RhD parcial categoria VI
Prueba simple y eficiente, utilizado para demostrar la presencia de
inmunoglobulinas y/o fracciones de complemento fijados a los
hematíes. Utilizado para:
Investigación de AHAI
Investigación de la hemólisis inducida por drogas
Investigación da Enfermedad Hemolítica Peri-Natal (EHRN)
Investigación de Reación Hemolítica Transfusional
Test de Antiglobulina Directo (TAD) o Coombs Directo
TAD Poliespecífico TAD Monoespecífico
IgG Subclase IgG Dilución
Test de Antiglobulina Directo
Causas de resultados falso positivos:
Suspensión de hematíes en concentración inadecuada (superior
a lo indicado)
Centrifugación por tiempo y velocidad sobre lo indicado (tubo)
Poliaglutinación (rouleaux, gelatina de Wharton)
Contaminación de reactivos/muestras
Muestra de sangre inapropiada
Test de Antiglobulina Directo (TAD)
Causas de resultados falso negativos:
Suspensión de hematíes inadecuada (inferior a lo indicado)
Centrifugación por tempo y velocidad inferiores a lo indicado
(tubo)
Lectura inadecuada de la reacción aglutinación (tubo)
Lavado inadecuada de los hematíes antes del test (tubo)
Reactivos inadecuados/contaminación (cambio de cuenta-gotas y
neutralización de la AGH) (tubo)
Importante: realizar control de Coombs: hematíes sensibilizados
por IgG (tubo)
Test de Antiglobulina Directo (TAD)
Test realizado para verificar la presencia de anticuerpos anti-
eritrocitarios en el suero/plasma.
Utiliza el suero de Coombs o suero antiglobulina humana (AGH)
Anticuerpos anti-eritrocitarios están implicados:
Enfermedad Hemolítica Peri-Natal* (EHRN)
Reacciones Transfusionales Hemolíticas
Test de Antiglobulina Indirecto o Coombs Indirecto
Consideraciones Importantes:
El Test de Antiglobulina Indirecto debe ser realizado utilizando
hematíes de fenotipo conocido que presentan los principales
antígenos de importancia clínica (Tabla 1)
Resultados negativos deben ser confirmados con hematíes control
de Coombs (tubo)
Resultados positivos:
• realizar autocontrol
• realizar identificación de anticuerpos irregulares (Tabla 2)
Anticuerpos no implicados en EHRN:
• clase IgM
• anticuerpos direccionados a antígenos inmaduros o ausentes en los
hematíes fetales/RN
Test de Antiglobulina Indirecto
Referencias Bibliográficas
• DANIEL, G. & BROMILOW, I. Essential Guide to Blood Groups.
Oxford: Blackwell Publishin, 2007. 99p
• RUDMANN, S. V. Serologic Problem-Solving. Bethesda: AABB
Press, 2005. 193p
Hematíes para Pesquisa de Anticuerpos Irregulares
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Hematíes para Identificación Anticuerpos Irregulares
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ANTI-A
+
ANTI-B
O
-AB
ANTI-AB
ANTI-BA
Anticuerpos
naturales en
el plasma
Antígenos
en los
hematíes
Grupo
ABO
N-acetil galactosamina Galactosamina se asemeja a
D-galactosa (antígeno B)
Acción de enzima
bacteriana remueve el
grupo acetil
Fenómeno B Adquirido
Individuo Grupo A B Adquirido
Gracias!