ABSORCIÓN DE GLUCOSA EN EL

INTESTINO DELGADO DE RATA.

Coloque el saco intestinal en la cámara de órganos aislados para hacer los

experimentos con las diferentes soluciones:

Efecto de la ausencia de oxígeno en la absorción intestinal de glucosa.Colocar un saco intestinal que contenga en su interior solución salina de Tyrode a 37C

dentro de una cámara que contenga solución salina de Tyrode-glucosa a 37 C, la preparación se mantiene sin adaptar el sistema de aeración pero manteniendo la temperatura constante.

Hacer determinaciones de glucosa de la solución interior y de la exterior del saco y proseguir con las determinaciones en la misma forma y en los tiempos descritos anteriormente.

De esta manera la superficie mucosa del intestino queda por fuera y los cabos de hilo del extremo atado quedan por dentro del saco invertido. Sostener con unas pinzas el saco intestinal e introducir por su extremo abierto el tubo de vidrio d la cámara de órganos aislados hasta que sobrepase unos 5 mm, se amarra cuidadosamente este extremo a la varilla

Se sacrifica la rata por medio de administración de pentobarbital seguida de trasección de la médula espinal. Abrir el abdomen mediante una incisión en la línea media abdominal. Ya localizado el intestino delgado se extrae luego de cortar sus uniones píloro-duodenal e íleo-cecal y colocarlo en una caja de Petri que contenga solución de Tyrode fría y aeración

Toma de muestra.Tome una muestra, tiempo cero, tanto

de la solución exterior como de la interior del saco intestinal, utilice una cánula conectada a una jeringa o una pipeta Pasteur. Utilizando las tiras reactivas determine la concentración de glucosa en las muestras; deje pasar 15 minutos y mida nuevamente la concentración de glucosa, sólo de una muestra del interior del saco. Hacer determinaciones cada 15 minutos hasta completar 5; en el tiempo de la última determinación mida nuevamente la concentración de glucosa en el exterior del saco. Es importante verificar que las condiciones de aeración y temperatura se mantengan constantes durante todo el experimento.

Experimento control.Colocar el saco intestinal dentro de la cámara y llenarlo con solución salina de Tyrode que

se encuentre a 37C utilizando una cánula acoplada a una jeringa o una pipeta Pasteur, después de verificar que el saco no presenta fugas éste se sumerge en una solución de Tyrode-glucosa, también a 37C. Se debe tener cuidado que tanto la solución interior como la exterior no sobrepasen el borde superior del saco atado a la varilla, inmediatamente acoplar el sistema de aeración que consiste en

una bomba de aire para pecera; la preparación debe estar en baño de maría para mantener constante la temperatura

Cortar tramos de intestino con 2 a 3 cm de longitud, insertar una cánula en la luz del segmento intestinal y, por medio de una jeringa que contenga solución salina de Tyrode, lavar los segmentos intestinales. Es importante examinar que el tejido no presente perforaciones ya que puede haber escape de la solución durante el experimento.

Efecto del 2-4 dinitrofenol en la absorción intestinal de glucosa.Colocar un saco intestinal en una cámara de órganos aislados en la manera descrita

anteriormente, llenar el saco intestinal con una solución de Tyrode a 37C, en este caso el saco se colocará en una solución de Tyrode-glucosa con 2-4 dinitrofenol (solución exterior). Se mide la concentración de glucosa en el tiempo cero dentro y fuera del saco intestinal y, al igual que en los experimentos anteriores, se realizan 5 determinaciones cada 15 minutos.

Siga los pasos que se mencionan para llevar a cabo la inversión de los segmentos intestinales. Se anuda

con un hilo uno de los extremos del segmento de manera que quede ocluido completamente; con

ayuda de una varilla de vidrio se impulsa el extremo ocluido hacia el extremo abierto, deslizándolo por la

varilla

Determinación de glucosa por medio de tiras reactivas.Obtener una gota de la solución problema, ya sea la del interior del saco intestinal o de la

solución exterior, por medio de una cánula limpia conectada a una jeringa. Colocar la gota de la solución problema en la zona reactiva de la tira y se deja reaccionar durante el tiempo establecido por el fabricante de la tira (el tiempo necesario para la reacción está indicado en el recipiente de las tiras y puede variar), el cambio de color se efectuará de acuerdo con la concentración de glucosa presente en la muestra y éste deberá ser comparado con la escala cromática proporcionada en el recipiente de las tiras, la lectura debe efectuarse bajo buenas condiciones de luz.

Los resultados que aparecen después de 3 minutos o sólo en los bordes de la zona de prueba no tienen significado confiable. Este método es semicuantitativo y está basado en la reacción enzimática de la glucosaoxidasa-peroxidasa específica para glucosa, la que se manifiesta con

una reacción colorida en la tira reactiva.