DIAGNSTICO MICROBIOLGICO DE LAS ENFERMEDADES INFECCIOSAS

DIAGNSTICO ENFERMEDAD INFECCIOSA SNTOMAS Y SIGNOS PRESENCIA DEL AGENTE PRODUCTOR HUELLA QUE DEJA EN EL SISTEMA INMUNE

Diagnostico clnico + Diagnostico microbiolgico Diagnostico etiolgico

ClnicoNO PIDAS NADA QUE SI ES POSITIVO, NO SEPAS QUE HACER

Valoracin paciente Solicitud Seleccin y Toma muestras Actitud y decisin despus del resultado. Conocimiento de la eficacia de la prueba

Clnico Solicitud de investigacin microbiolgicaInformacin suficiente

FILIACIN Y DATOS ADMINISTRATIVOS Nombre, apellidos, fecha de nacimiento, etc. CDIGO DE BARRAS DATOS CLNICOS: diagnstico de presuncin, estado inmunitario del paciente y otros. DATOS DE LA MUESTRA: origen de la muestra, localizacin o tcnica especial. URGENTE PETICIN DE LA ANALTICA DESEADA: tipos de determinaciones deseadas: tinciones, cultivos, etc.

DIAGNSTICO MICROBIOLGICO Seleccin Muestra Toma muestra Orina: Urocultivo Tracto respiratorio superior Tracto respiratorio inferior LCR Sangre: Hemocultivo Heces: Coprocultivo Transporte Conservacin

MANTENER MEDIDAS HIGINICAS DE LIMPIEZA MXIMA ASEPSIA BIOSEGURIDAD

NORMAS GENERALES PARA LA TOMA DE MUESTRAS La muestra debe ser representativa del cuadro clnico, obtenida correctamente, y en la cantidad suficiente. Debe obtenerse de ser posible antes de la instauracin del tratamiento antimicrobiano. En determinados procesos infecciosos (p. ej. Septicemia, fiebre tifoidea (sangre y heces) el momento de la obtencin puede ser importante. Debe transportarse rpida y adecuadamente al laboratorio. Debe rotularse correctamente y venir acompaada de una orientacin o juicio clnico que permita realizar las tcnicas adecuadas al microorganismo sospechado.

Toma de muestra Orina: urocultivo Infeccin urinaria una de las mas frecuente humano: Microorganismos uropatgenos Orina para UROCULTIVO, lo que mas llega lab. Solo 20-25% son positivos Bacterias orina: Varios sndromes clnicos: significado clnico, tratamiento y pronostico diferentes dependiendo del husped.

Muestras: Orina

48 h colonizado

Mtodos para la obtencin y clasificacin de la muestra de orina para urocultivo

Muestras: Orina Solicitud de urocultivo - nombre, edad y sexo del paciente - si es mujer, indicar embarazo. - existencia de patologa de la va urinaria - mtodo empleado en la toma de muestra - diagnstico clnico - uso previo de antibiticos - hora de obtencin de la muestra Transporte de la muestra - 2 horas, si no Refrigerar (24h)

Muestras: Orina

Piuria: presencia de leucocitos 10 leucocitos/l Detecta menos 10 leuco. 95% S Nitritos (todos mo) S. 80% y E. 95%

Sedimento urinario Tiras reactivas Leucocitos y nitritos Tincin Gram

Siembra cuantitativa

Depende muestra conteo

95% S. Muestra sin centrifugar

Recuento de colonias (UFC/ml) 0 Cualquier recuento

Condicin clnica o mtodo de recoleccin

Sedimento urinario Idenpendiente resultado

Microorg.mo.

Conducta recomendaciones Uro negativo

Puncin supracubica Cateterizacion transitoria Segunda miccin en paciente esp. (emba, diab, urolo) Orina catter permanente Segunda miccin Segunda miccin

Independiente del resultado Independiente resultado Independiente resultado patolgico patolgico patolgico

Cualquier mo < 2 especies uropatgenas < 2 especies uropatgenas < 2 especies uropatgenas < 2 especies uropatgenas 2 uropatgenos + otra bacteria con recuento 10 veces menos < 2 especies uropatgenas >3 microorganismos, sin predominio de alguno

Identif y susceptibilidad idem idem

1000 > 10.000 > 10.000 > 10.000 > 100.000

idem idem Iden lo que solo europatogenos

> 100.000 > 100.000

Segunda miccin No invasivo

Sin antecedentes de sedimentos -

Identif y susceptibilidad Polimicrobismo. Solicite nueva muestra

Microorganismos ms frecuentemente en urocultivosEspecies uropatgena comunes: (Crecen en 24 horas) Especies Especies no que pueden uropatgena (Flora) ser uropatgena (Requieren incubacin prolongada)Gardenella vaginalllis, Hemophylus influ y parainflu Corynebacteriu m urealiticum Lactobacillus, Difteoides, Streptos viridans, Micrococcus, Staphylos, coag nega no saprophyticus ni epidermidis Actinomices, Bacillus

Especies uropatgena poco comunes (No crecen en medios de rutina)Nieisseria gonorreae, Chlamydea trachomatis, Ureoplasma urealiticum, Mycobacterium tuberculosis

Especies uropatgena relacionadas a catteres vesicales de corta duracinEcoli, providencia, klebsiella, Proteus, pseudom aerug, Staphylos coag negativos (epid), Enterococcus Candidas

Especies uropatgena relacionadas catteres vesicales de larga duracinProvidencia, Morganella, Proteus, Ecoli, Pseudomonas, Klebsiella, Staphylos co neg, Enteroscoccus, Candidas

E.coli, Kleb, Proteus, Pseudo, aerugi, Enterococcus, Enterobacter, Staphylos, Strepoto agalactie, Candida (Contaminante)

Toma muestra Tracto respiratorio superior Muy frecuentes: Faringoamigdalitis aguda, la otitis media aguda y la sinusitis aguda. Faringoamigdalitis aguda: mayora viral Bacteriana: Streptococcus pyogenes Tratar: Prevencin de enfermedad reumtica, de complicaciones supurativas, reduccin transmisin Muestra Cultivo (90-95% S) y Ag en colonia. Muestra: Sensibilidad ATB: para Penicilina no, pero macrolidos hay reportado en Chile hasta 12 % R Servicios urgencias: Mtodo rpido Ag (Carbohdrato pared) en torulas. E 95%, pero la S 80%. Resultado Neg indica cultivo

Tracto respiratorio superior Otitis media aguda S. pneumoniae, H. influenzae tipo b y H. influenzae no tipificable, y M. catarrhalis Otros: S. pyogenes, S. aureus y Virus (VRS, influenza enterovirus y rhinovirus) Diagnstico de la OMA es generalmente clnico La timpanocentesis (especialista) Otitis media con efusin lquido en el odo medio sin signos de inflamacin La patogenia de esta entidad es multifactorial: S. pneumoniae H. influenzae M. catarrhalis y S. aureus Tratamiento emprico Otitis externa La flora externa del canal auditivo externo es similar a la piel predominio de S. epidermidis, S. aureus, Corynebacterium sp y anaerobios como Propionibacterium acnes patgenos ms frecuentemente: P. aeruginosa, S. aureus y Streptococcus Cultivo

Tracto respiratorio superior Sinusitis aguda Ms frecuentes: S. pneumoniae, H. influenzae y, M. catarrhalis Es necesario hacer diagnstico bacteriolgico en una sinusitis aguda? mayora de los casos no (emprico) indicaciones de tomar una muestra para cultivo son: paciente sptico o inmunocomprometido, infeccin nosocomial generalmente en pacientes intubados, si hay mala respuesta a la antibioterapia en presencia de complicaciones como meningitis, absceso cerebral, celulitis periorbitaria y osteomielitis

Tracto respiratorio inferior ESPUTOLa obtencin en ayunas y el preenjuague de la boca con agua sin antisptico

Tracto respiratorio inferior ESPUTOQue se hace con la muestra Tincin de Gram. Baciloscopia cido alcohol resistente (Zieln Nielsen) Se recomienda recoger esputo seriado durante tres das consecutivos y refrigerar. Se siembra en varios medios de cultivo segn el germen Se observa cada 24 horas y solo si al cabo de seis semanas no ha crecido nada se considera que es negativo. Puede ser negativo y vimos microscopio : Recordar hay Mo sensibles, fastidiosos y otros de crecimiento lento Antibiograma Con el estudio parasitolgico del esputo podemos encontrar fases larvarias de scaris, estrongyloides, amebas, huevos de gusanos criptosporidium.

Muestras: Lquido CefaloraquideoIdentificacin de infecciones del sistema nervioso.

El envo debe ser rpido y se deber sembrar y teir inmediatamente. Si esto no fuera posible hay que conservar la muestra hasta su procesamiento en estufa a 3537 C. Nunca a temperatura ambiente ni refrigerada. Debemos evitar la perdida de viabilidad de los microorganismos sensibles a bajas temperaturas.

Muestras: Lquido CefaloraquideoQue se hace con la muestra: Gram Ziehl Nielsen: micobacterias Tinta China: Hongos Siembra en varios medios cultivo segn sospechas por 24 h o mas Puede ser negativo el cultivo: mo exigentes, mo que se demoran en crecer (hasta 15 das) Antibiograma.

Muestra: Heces Coprocultivo

remitidas lo antes posible al laboratorio: 1-2 horas siguientes a la recogida y si esto no es posible guardar en nevera. tres muestras correspondientes a das distintos o al menos de tres deposiciones diferentes.

Muestra Sangre: Hemocultivo Si se sospecha de una infeccin sistmica.

Muestras. Muestras de obtencin directa de localizaciones estriles estriles. Alta rentabilidad. Muestras obtenidas de localizaciones con flora microbiana. Baja rentabilidad. virolgico. Muestras para el diagnstico virolgico Alta rentabilidad por ausencia de flora viral.

Muestra Descontaminacin de la muestra

Cultivo en medios selectivos

Cultivo semicuantitativo o cuantitativo

Muestras Transporte Rpido y adecuado Ej: Orina, esputo: pueden crecer otros mo Ej: Neisseria, torunda (farngeo, uretral) Ej: Aislamiento virus. Aadir antif y antibact. al medio de transporte Ej: Refrigeracin: Orina, mantiene el # inicial mo, pero en otras muestras (Hemocultivo) puede inhibir o matar agente causal

Muestra Toma mal realizada, mal conservada o mal transportada Falla en recuperacin agentes patgenos Disminuye calidad atencin, aumenta gastos hospitalarios, pacientes..Criterios de rechazo de solicitudes y/o muestras

Criterios de rechazo de solicitudes y/o muestras Recipientes inadecuados: no estriles, sin cerrar o con el contenido derramado. Muestras sin medio de transporte adecuado Muestras de baja calidad o inadecuadas a la determinacin solicitada Muestras incorrectamente identificadas Muestras derramadas, o rotas,...

Bibliografa toma muestra http://www.seimc.org SEIMC_ Procedimientos Microbiolgicos. Tracto Respiratorio superior Tracto respiratorio inferior Hemocultivos Piel y tejidos blandos Digestivo (Heces)

DIAGNOSTICO EI

Ac sricos

VISUALIZACIN DEL MICROORGANISMOMicroscopa1. Campo claro Examen en fresco (Bacterias, Hongos) Tinciones: Tincin de Gram Tincin de Ziehl-Neelsen Campo oscuro (treponemas) Contraste de fase (hongos, parsitos) Fluorescencia

2. 3. 4. 5.

M. ptica

Electrnica

Transmisin Barrido Inmuno electrnico

Tincin de Gram: aplicaciones LCR y otros fluidos estriles Esputo (no micobacterias) Exudado uretral Exudado vaginal Exudados inflamatorios Orina

INFORMACIN QUE APORTA UNA TINCIN DE GRAM Permite evaluar la calidad de la muestra. Presencia de: Clulas inflamatorias muestra adecuada Clulas epiteliales posible contaminacin Permite visualizar la morfologa, su disposicin y localizacin intra o extracelular de las bacterias Permite diferencias bacterias Gram + y Gram Permite detectar la presencia de flora contaminante Permite cuantificar el nmero de bacterias

Tincin de Ziehl-Neelsen

Para micobacterias Ceras en pared, se necesita calor para introducir colorante (fuscina), resisten la decoloracin con acido-alcohol.

Microscopia campo oscuro Para observar movilidad bacteriana y clulas finas como espiroquetas.

Microscopia contraste de faseAumenta contraste de imagen. Cel viva en contrate con liquido

Microscopia FluorescenciaPara ver sustancias que fluorecen naturalmente o han sido teidas Detecta Ag microbianos en muestras y tejidos

CULTIVOAislamiento, Identificacin, Susceptibilidad del patgeno

Cultivo en medios artificiales: Nutritivos para todo propsito Selectivos Diferenciales

Cultivos celulares: C. de rgano C. secundarios C. primarios Lnea celular

Inoculacin animal

CARACTERSTICAS UTILIZADAS PARA LA IDENTIFICACIN DE BACTERIAS Crecimiento en distintos medios de cultivo Caractersticas bioqumicas Produccin de toxinas Estructura antignica Estructura genmica

DIAGNOSTICO Enf Infecc

Cuando utilizo mtodos indirectos Agente infeccioso No crece en medios de cultivo Peligrosa la manipulacin Sensibilidad y espec de otros mtodos es baja Diagnostico directo es difcil Causa infecciones subclnicas difciles de diagnosticar

DIAGNOSTICO EI

Deteccin Directa por determinacin de acido nucleicos La PCR permite amplificar una secuencia especfica, es decir, aumentar el nmero de molculas de ese ADN. La hibridacin con sonda, se basa en la capacidad del ADN monocatenario de reconocer secuencias complementarias e hibridar, formando molcula hbrida de ADN de doble cadena

Ventajas de las tcnicas de amplificacinVentajas Sensibilidad extrema (detectan hasta 1-10 microorganismos) Alta especificidad (diseo de cebadores en funcin de secuencias especficas del microorganismo) Rapidez (mximo 24 horas) Deteccin de microorganismos viables y no viables Automticas Inconvenientes Posibles falsos positivos Acondicionamiento especial del laboratorio Alto nivel de entrenamiento del personal Elevado coste inicial

PARMETROS DE UNA TCNICA DIAGNSTICA Sensibilidad Especificidad Eficiencia Relevancia clnica Verdadero positivo Verdadero negativo Falso positivo Falso negativo

SENSIBILIDAD (S)Verdadero positivo (VP) S= (VP) + Falso negativo (FN) X 100

ESPECIFICIDAD (E)Verdadero negativo (VN) E= (VN) + Falso positivo (FP) X 100

EFICIENCIA

VP + VN X 100 Total

Casito Paciente 9 meses. Sntomas: Fiebre origen desconocido, cadera derecha deformada (se realiza puncin y aspiracin) Informe: Gram: Cocos gram posi en racimos Cultivo: Staphyloccoccus aureus sensible a penicilina, Cefa de tercera (Como lo se?) Tratamiento emprico: Macrlidos y se cambia a Ceftriaxona Sexto da radiografa: Osteomielitis-Drenaje Se sigue ceftriaxona IV A los 10 das: fiebre y no responde al tratamiento Que muestras tomaras, utilizaras otro mtodo de sensibilidad para ver que pasa?

Casito Osteomielitis: Requiere concentraciones bactericidas del antibitico en suero CIM/CBM, Curva de muerte Deben saber: CIM: Concentrac ATB 3-5 veces valor de la CIM CBM: para antib Bactericidas esta muy pegada a la CIM

Importante: Meningitis, Endocarditis y Osteomelitis. Se pide CBM

Casito No responda y se le da Cefotaxima (ya era S) mas amicacina. Hay que saber si son o no sinrgicos Pide: Curva de muerte: As se la dinmica de la accin bactericida de un antibitico.

Casito Supongamos que no responde al tratamiento por que la dosis no es la adecuada Que hago: Poder bactericida del suero:

Casito

PBS: utilidad Para evaluar la eficiencia de la teraputica antibitica en infecciones graves: Endocarditis Osteomielitis Artritis supurativa

Su aplicacin est limitada a patologas graves en inmunodeprimidos, en casos de trastornos en la absorcin, metabolismo y/o excrecin del antibitico y en control de tratamientos prolongados. Objetivo: Ajustar dosis

Eficacia de un antibitico Tiempo por encima CIM rea bajo la curva: (ABC) Efecto post antibitico Curva de muerte Poder bactericida del suero

Tipo de actividad Concentracin dependiente Tiempo dependiente

Droga Aminoglucsidos Fluoroquinolonas Beta lactmicos Macrlidos* Clindamicina Linezolid Azitromicina Tetraciclinas* Glicopptidos Quinupristina dalfopristina

Persistencia Prolongada

parmetro Cmax/CIM

Mnima

T>CIM

Tiempo dependiente

Prolongada

AUC/CIM

T en que C plasmticas estn por encima CIM entre dosis

GRACIAS