Determinación de precisión de la eritrosedimentación y ... · ... velocidad de sedimentación...

REDVET. Revista electrónica de Veterinaria 1695-7504 2010 Volumen 11 Número 03

Determinación de precisión de la eritrosedimentación y su relación con otros parámetros hematológicos y bioquímicos en bóvidos http://www.veterinaria.org/revistas/redvet/n030310/031005.pdf

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REDVET Rev. electrón. vet. http://www.veterinaria.org/revistas/redvet -http://revista.veterinaria.org Vol. 11, Nº 03, Marzo/2010– http://www.veterinaria.org/revistas/redvet/n030310.html

Determinación de precisión de la eritrosedimentación y su relación con otros parámetros hematológicos y bioquímicos en bóvidos Determining the precision of the erythrosedimentation and its relation with other hematologic and biochemical parameters in bovines

Yépez González, Juan Carlos: Universidad de Los Andes, Facultad de Farmacia y Bioanálisis, Cátedra Hematología, Mérida - Venezuela (Nick: juan yépez) | Chacón López, Roselyn: Universidad de Los Andes, Facultad de Farmacia y Bioanálisis | Spagano Rizza, Giovanna: Universidad de Los Andes, Facultad de Farmacia y Bioanálisis | Rafael, Paiva: Bufalería Santa Elena, El Vigía Estado Mérida, Venezuela | Pérez Depablos, Carlos Luis: Estación Experimental La Judibana de la Universidad de los Andes | Rivas, Clemente: Colegio de Médicos Veterinario del Estado Mérida, Venezuela. Dirección Postal: Cátedra Hematología, Facultad de Farmacia y Bioanálisis, Escuela Bioanálisis, Cátedra Hematología, Universidad de los Andes, Mérida Venezuela, Sector Campo de Oro. Código Postal: 5101. Mérida. Dirección Correo electrónico: [email protected]

Resumen

La eritrosedimentación es indispensable para el buen estudio hematológico, es inespecífica pero muy importante ya que, se puede acelerar aún cuando otros parámetros hematológicos y/o bioquímicos no se hayan alterado. El objetivo de este trabajo fue determinar la precisión de la eritrosedimentación y su comportamiento frente a otros parámetros hematológicos y bioquímicos en muestras de búfalos y ganado Carora, localizado en el Estado Mérida, Venezuela. La eritrosedimentación se realizó de forma manual utilizando los métodos y procedimientos sugeridos para humanos (Wintrobe y Westergreen). La hemoglobina, el hematocrito y la cuenta de leucocitos se determinó con la metodología electrónica IDEXX Vet AutoreadeTM, la concentración del fibrinógeno se determinó a través de un Coagulómetro BIO-BAS. La concentración de triglicéridos y colesterol



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se determinó en un Spectronis Génesys 20. Los datos se procesaron por el programa estadístico Statistical Package for the Social Sciences versión 10. Resultando, el método de Wintrobe para los búfalos una Prueba F. (p<0,05) como el coeficiente de variación < 5%, y el método de Westergreen para el ganado Carora en la segunda hora una Prueba F. (p<0,05) como el coeficiente de variación < 5%. Se concluye que la eritrosedimentación presentó precisión por método de Wintrobe en Búfalos, mientras que, el método de Westergreen la presentó a la segunda hora en el ganado Carora. Por lo que recomendamos que cada localidad determine los valores de la eritrosedimentación dependiendo al método y al bóvido ya que las variaciones hematológicas y bioquímicas particulares de cada especie influyen sobre la precisión del método.

Palabras clave: Eritrosedimentación, velocidad de sedimentación globular, búfalos, bovinos, ganado Carora, precisión.

Abstract

The erythrosedimentation is essential for a good hematologic study. The erythrosedimentation is not specific but important because it can be accelerated meanwhile other hematologic and/or biochemical parameters are not altered.

The purpose of this work was to determine the precision of the erythrosedimentation and its behavior in front of other hematologic and/or biochemical parameters in samples of buffaloes and Carora cattle localized in the state of Mérida-Venezuela. The erythrosedimentation was manually performed by using the methods and procedures suggested for human beings (Wintrobe and Westergreen).

The hemoglobin, the hematocrit and the number of leucocytes were determined by the use of the IDEXX Vetautoread™ Hematology Analyzer. The fibrinogen concentration was determined by the use of a Bio-Bas coagulometer. The concentration of triglycerides and cholesterol was obtained in a Spectronic Genesys 20. The data obtained were processed by the statistical program Statistical Package for the Social Sciences version 10. Resulting the Wintrobe method in the buffaloes, an F test (p<0, 05) as the coefficient of variation <5%; and the Westergreen method for the Carora cattle in the second hour of erythrosedimentation, an F test (p<0, 05) as the coefficient of variation <5%. It can be concluded that, the erythrosedimentation presented precision by/in the Wintrobe method in buffaloes; meanwhile the Westergreen method presented the precision in the second hour in the Carora cattle. So that, we recommend that every locality



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determine the values of the erythrosedimentation depending/based on the method and the bovine because the particular hematologic and biochemical variations of each specie have influence on the precision of the method.

Key Words: Erythrosedimentation, erythrocyte sedimentation rate, buffalo, bovine, Carora cattle, precision.

INTRODUCCIÓN

El estudio hematológico constituye una herramienta rutinaria para la orientación del diagnóstico clínico de diversas patologías. La velocidad de eritrosedimentación (VES) es una prueba esencial e imprescindible en la biometría hemática (González 2004; Shovman et al 2005; Vives y Aguilar 2006).

En medicina veterinaria y humana la VES se puede alterar ante la presencia de procesos inflamatorios crónicos y “ocultos”, es decir, antes de que se presenten los síntomas y bajo la aparente normalidad de parámetros hematológicos tales como: el recuento diferencial, cuenta de leucocitos, hemoglobina (Hb), hematocrito (Hto) y analítos bioquímicos de rutina como la proteína C reactiva. (Castellote 2008). Además, estas pruebas son eficientemente importantes para el seguimiento del tratamiento y evolución de procesos mórbidos (Zargham et al 1997).

El método de referencia para la determinación de la VES es el de Westergreen. Por otra parte el método de Wintrobe es de ejecución más práctica y presenta buen grado de precisión por lo que se le ha utilizado en Venezuela y en los Estados Unidos (Koepke 2002; Lemus y Villaseñor 2009; Piedras et al 2003).

Los valores hematológicos varían dependiendo a la localización geográfica, alimentación, edad, sexo, altitud, condición fisiológica. Diversos estudios, han descrito la VES en diversas patologías e inclusive su utilidad para el seguimiento de tratamiento. (Aidorevich et al 1990; Beechler et al 2009; Ciaramella et al 2005; Ferrer et al 2000; Hernández et al 2005; Ramírez et al 1999; Roldán et al 2005; Shinde et al 2009). No obstante, no han estudiado la precisión de la VES en los métodos Wintrobe y Westergreen en estos bóvidos.

Es por ello que cada región debe establecer sus propios valores de referencia, para lo cual se debe seleccionar el método que proporcione confiabilidad de los resultados, entre estas características, está la precisión del método (Happe et al 2002).



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En el Vigía estado Mérida, Venezuela se han introducido especies de: búfalos (bubalus bubalis), caracterizados por ser multipropósito y el ganado Carora, lechero. Ambas especies de altísima productividad para la región y el país. Por lo tanto el objetivo de este trabajo fue determinar la precisión de la VES y su comportamiento frente a otros parámetros hematológicos y bioquímicos en muestras de estos bóvidos.

MATERIALES Y MÉTODOS

Población a estudiar

Se seleccionaron al azar, a través de muestreo aleatorio simple, 60 ejemplares de bóvidos clínicamente sanos: 30 búfalinos de la raza Murrah (15 hembras no preñadas sin partos y 15 machos) en la hacienda Santa Elena en el Km 41 carretera Nacional vía Santa Bárbara del Zulia de una población de 80 semovientes, los cuales son alimentados bajo pastoreo y 30 de ganado vacuno de la raza Carora (15 hembras no preñadas sin partos y 15 machos) de la Estación experimental La Judibana perteneciente a la Universidad de los Andes Mérida, Venezuela de una población de 215 semovientes, alimentados bajo pastoreo y alimento concentrado con edades comprendidas entre 2 y 5 años con pesos entre 200 – 300 Kg para los machos y de 250 – 350 Kg para las hembras. Ambos grupos localizados en la misma región geográfica, El Vigía Estado Mérida, Venezuela con una altitud de 130 msnm y una temperatura promedio de 32oC. Este trabajo se realizó aplicando los principios éticos internacionales que rigen la investigación biomédica con animales (CIOMS 1985).

Recolección y procesamiento de las Muestras

Las muestras se obtuvieron en el mes de junio de 2009, la sangre se extrajo de la vena safena de la pata de los búfalos y en la vena coccígea en el ganado Carora, (la extracción se realizó en lugares anatómicos distintos, ya que la experiencia de los médicos veterinarios de este estudio han observado de que en estas venas se ocasiona el menor trauma posible durante la venopunción en cada especie) fueron recolectadas en tubos vacutainer (Becton Dickinson and Company, USA) 3 mL con EDTA para determinación de la Hb, Hto, concentración de hemoglobina corpuscular media (CHCM), cuenta de leucocitos y la VES por Wintrobe. Para el método de Westergreen se utilizó citrato de sodio 3,8% en proporción 0,2 mL de anticoagulante y 0,8mL de sangre. Las muestras rotuladas para la VES fueron trasladadas inmediatamente en una cava de anime refrigerada (2-8 oC), hasta el laboratorio de Docencia de la Cátedra de Hematología de la Facultad de Farmacia y Bioanálisis de la Universidad de los Andes, donde se efectuaron los análisis. La VES se proceso por triplicado en soportes



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especiales de Wintrobe y Westergreen.

El estudio hematológico de Hb, Hto, CHCM y cuenta de leucocitos se realizó electrónicamente, en un equipo QBC VetAutoread analizador de muestras sanguíneas en el Vigía Estado Mérida. Para el control de calidad y verificación de los resultados se utilizó un control 4C Plus Cell.

El número de eritrocito se obtuvo por el método visual directo sugerido para humanos, para su control de calidad se hizo en dos Hematímetros de Neubauer mejorado contándose cuatros cámaras, con diferencias menor a 15 células entre cámara y cámara. Para calcular el volumen corpuscular medio (VCM) se utilizó la formula: VCM= (Hto/número de millones de rojos) x 10.

Para la determinación del fibrinógeno (Fb) se utilizaron tubos vacutainer de plástico (Becton Dickinson and Company, USA) con citrato de sodio 3,8%, con proporción 1 de anticoagulante citrato de sodio al 3,8 % y 9 de sangre (dilución 1:10), fueron trasladadas inmediatamente en cava de anime a una temperatura entre 2 y 8oC, con bolsas de hielo, a la Ciudad de Mérida para ser analizadas, en el laboratorio se congelaron a -20oC, para ser procesadas gradualmente.

El Fb se analizó por el método de Clauss, en el Coagulómetro BIO-BAS, a temperatura de 37± 0,1 oC y equipamiento de instrumentos apropiados para la realización de la prueba. Se incluyeron dos plasmas controles de concentración conocida del Fb, los cuales se trataron como muestra problema. Plasma control nivel 1 y plasma control nivel 2 con sistema certificado de control de calidad ISO 9001 ISO 13485.

La muestra para la determinación de las concentraciones de colesterol total y triglicéridos se obtuvo en tubos limpios y secos sin anticoagulantes, luego se procesó por métodos enzimático colorimétrico, utilizando los Kit Colesterol MR (Cromatest) y Triglicéridos MR (Cromatest) respectivamente, ambos se cuantificaron en un espectrofotómetro Genesys 20 (Spectronic Instruments, Inc.).

Sistema Estadístico

Los datos obtenidos se procesaron por el programa estadístico SPSS versión 10 (SPSS 2000). Para la determinación de la precisión de la VES de los métodos Wintrobe y Westergreen se empleó la prueba F, este ensayo estadístico permitió la comparación de la precisión de dos métodos y el coeficiente de variación de Pearson (CV), ya que, la investigación médica humana lo ha empleado rutinariamente para describir la precisión de un ensayo. Este método estadístico se ajustó a las exigencias de este trabajo.

El CV se calculó empleando la formula CV= (desviación estándar / promedio) x 100. El CV interensayo (CVI), se determinó calculando el



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CV de cada tripleta y luego promediándolos y el CV total (CVT), se determinó directamente dividiendo la desviación típica entre el promedio de todos los datos y luego multiplicándolos por 100. Considerándose, preciso un CV < 5% (Henry 2007).

Las cifras de Hb, Hto, CHCM,VCM, cuenta de leucocitos, concentración de Fb, triglicéridos y colesterol total se analizaron estadísticamente empleando el modelo t de Student para muestras pequeñas (menor a 30 datos), a través del contraste de hipótesis para la diferencia de medias, este permitió obtener la diferencia significativa entre los dos grupos (búfalos y ganado Carora). Adicionalmente, se corroboró aplicando la Prueba T (devuelve la probabilidad asociada con la prueba t de student) (Chacín 1992).

La muestra de este trabajo para la determinación de la precisión fue estadísticamente apropiada, no obstante no es recomendable para determinar los intervalos de referencia, ya que, para este fin se necesita un gran número de sujetos para tener suficiente potencia para asignar los límites superior e inferior de un rango de referencia. El Comité Nacional de Estandarización de Laboratorios Clínicos en humanos recomienda 120 sujetos en cada grupo (NCCLS 1995).

RESULTADOS



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Tabla 1. Valores promedios de los diversos parámetros hematológicos y bioquímicos y comparaciones estadísticas de sexo en búfalos y ganado Carora.

Bovino/Parámetro búfalo hembra

búfalo macho

Carora hembra

Carora macho

Hb (g/dL) 13,02 (*) 12,94 (*) 9,92 (+) 10,45(+)

Hto (%) 37,55(*) 37,52(*) 30,26(+) 32,99(+)

CHCM (%) 34,65 (*) 34,67 (*) 32,90 (+) 31,69(+)

VCM (fL) 45,3(*) 44,8(*) 43,1(+) 43,7(+)

Eritrocitos (x109 L) 8125,678 (*) 8275,398(*) 6398,366(+) 6298,725(+)

Leucocitos (x109 L) 10,751 (**) 13,549(**) 9,048(++) 13,087(++)

VES Wintrobe (mm/h) 49,26(*) 51,73 (*) 0,73(+) 0,8(+)

VES Westergreen (mm/h)

68,5 (*) 68,6(*) 3,06(+) 2,8(+)

VES Westergreen (mm/2h)

84,7(*) 80,2(*) 6,1(+) 6,7 (+)

Fb (g/L) 5,3 (*) 5,2(*) 5,2(+) 5,04(+)

Triglicéridos (mg/dL) 25,1(*) 28,4(*) 33,8(+) 34,7(+)

Colesterol total (mg/dL)

85,2(*) 87,5(*) 131,6(+) 134,8(+)



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Leyenda: entre búfalos (*) p>0,05 (**) p<0,05 Caroras (+) p>0,05 (++) (<0,05)

Tabla 2. Diferenciación estadística de parámetros hematológicos y bioquímicos entre machos y entre hembras de búfalos y ganado Carora.

Parámetro/ Especie Machos búfalo-Carora

(valor p)

Hembras búfalo-Carora

(valor p)

Hb (g/dL) <0,05 <0,05

Hto (%) <0,05 <0,05

CHCM (%) >0,05 >0,05

VCM (fL) >0,05 >0,05

Eritrocitos (x109L) <0,05 <0,05

Leucocitos (x109L) >0,05 >0,05

Fb (g/L) >0,05 >0,05

Triglicéridos <0,05 <0,05

Colesterol total <0,05 <0,05

Tabla 3. Diferenciación estadística de la precisión entre los CVT de los métodos Wintrobe y Westergreen en búfalo y ganado Carora.

búfalo hembra valor p

búfalo macho valor p

Carora hembra valor p

Carora macho valor p

Wintrobe-Westergreen/1

h

<0,05 <0,05 >0,05 >0,05

Wintrobe-Westergreen/2

h

<0,05 <0,05 >0,05 >0,05

Westergreen/1hWestergreen/

2h

>0,05 >0,05 <0,05 <0,05



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DISCUSIÓN

Un estudio hematológico realizado en búfalos en la Universidad de Agricultura Faisalabad en Pakistán (Khalid y Rahman 2010), se evaluó el efecto de la recombinante somatropina bovina inyectadas a búfalos, a los controles se les inyecto solución salina estéril y obtuvieron valores para la VES de 92,63 ± 4,07 mm/h, evidentemente por la hemodilución plasmática difieren al valor de la VES en búfalos reportado en este trabajo (tabla 1).

Un trabajo también realizado en esta Universidad de Pakistán (Akhtar et al 2007), se determinó la VES por el método Westergreen en búfalas parturientas, la lectura sólo se realizó a la primera hora, obtuvieron en los controles (sanos) un valor de 73,1± 29 mm/h, resultado que se asemeja al valor obtenido en este trabajo (tabla 1).

Un estudio realizado en España (González 2000) indicó que en los bóvidos por lo general no se determina la VES, por ser nula, tal como resulto en este trabajo en el ganado Carora hembra y macho por Wintrobe (tabla 1), no obstante un incremento de esta debería suponer un proceso inflamatorio (Vilke et al 2009).

El método Westergreen presentó VES más elevada en el ganado Carora hembra y macho respecto a Wintrobe (tabla 1). Los valores más altos de Westergreen se explican por la hemodilución plasmática de la muestra y a la preservación del Fb conferida por el citrato de sodio, entre otras características, estas lo determinan como el método de referencia (Amilachwarl et al 1990; Suzuki et al 2001).

Los valores de Hb, Hto y número de eritrocitos presentaron diferencias estadística significativas entre machos y entre hembras de búfalos y Caroras, p < 0,05 (tabla 2), siendo más elevados en búfalos que el ganado Carora (tabla 1). La policitemia es un factor que retrasa la VES mientras que la anemia la acelera (Brigden1999), según este principio era de esperar que los resultados de la VES fuera más acelerada en el ganado Carora, no obstante resultó contrario (gráfica 1 y 2), es decir, más acelerada en los búfalos (tabla 1), se pudiera pensar que los búfalos tenían un proceso inflamatorio o infeccioso (Turkar y Uppal 2007), esto se descartó ya que las cuentas leucocitarias y la concentración del Fb no presentaron diferencias estadísticamente significativas p>0,05 entre búfalos y ganado Carora (tabla 2).

Por otra parte el VCM, no presentó diferencias estadísticas entre búfalos y ganado Carora por lo que se descartó la influencia del tamaño del eritrocito sobre la VES en estas especies (tabla 1y 2). Este fenómeno de aceleración de la VES en búfalos se pudiera explicar por la observación macroscópica del plasma entre estos bóvidos, el plasma del ganado Carora era lipémico mientras que el de los búfalos, estaba



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macroscópicamente libre de lípidos, en medicina humana los lípidos constituyen un factor retardante de la VES (Brigden 1999), este hallazgo puede explicar su poca utilización en los bóvidos, ya que por su alta concentración lipémica, Wintrobe tiende a ser nula (González 2000).

Esta observación macroscópica se corroboró ya que la concentración de triglicéridos y colesterol total fueron más altos y estadísticamente significativos p<0,05 en el ganado Carora respecto a los búfalos (tabla1y 2). No obstante, los búfalos poseen un número mayor de microorganismos en el rumen respecto a los bovinos (López et al 2005), estos pudieran incrementar los factores que aceleran la VES.

La VES en búfalos presentó precisión óptima p < 0,05 (tabla 3) por el método de Wintrobe, con CVI y CVT menor al 5% (gráfica 1), a pesar que el método de referencia en humanos y en búfalos es el de Westergreen, el cual en humanos ha presentado precisión menor al 3% (Happe et al 2002; Wiwanitkit 2001). Westergreen emplea dos lecturas: La primera (mm/1h) y la segunda (mm/2h), no obstante en los búfalos por lo general sólo utilizan la primera lectura (Akhtar et al 2007; Khalid y Rahman 2010; Thomas et al; 1993).

La VES en el ganado Carora presentó mejor precisión por el método de Westergreen en la segunda hora, p<0,05 (tabla 3), con CVI y CVT menor al 5% (gráfica 2). En seres humanos para corregir los defectos de precisión, Westergreen aplica el índice de Katz (ICSH 1993), no obstante no recomendamos aplicar esta ecuación en este ganado ya que la imprecisión de esta primera hora de Westergreen resultó exageradamente alta, por lo que sólo tendría valor clínico la segunda hora.

EN CONCLUSIÓN la VES presentó precisión en Búfalos por el método de Wintrobe mientras que el ganado Carora la presentó por el método de Westergreen a la segunda hora, pudiéndose constituir en un buen marcador biológico de la respuesta inflamatoria de patologías infecciosas y no infecciosas.

La interpretación correcta de la VES requiere el análisis de los factores que influyen sobre la misma, su comportamiento es influenciado desde la concentración de Hb, número de eritrocitos, VCM, concentración de lípidos plasmáticos, procesos inflamatorios, entre otros.

RECOMENDACIONES

Una vez obtenida la precisión de estos métodos recomendamos, determinar los valores de referencia en cada especie de bóvido, amplificando la muestra para su utilización diagnóstica de diversos procesos mórbidos. Si la VES resultase acelerada permitiría orientar la marcha diagnóstica, primero se estudiaría la alteración de



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parámetros hematológicos para investigar la causa y de esta forma reducir los costos y detectar a tiempo cualquier anomalía oculta,

La VES se pudiera utilizar en el ganado Carora para el seguimiento del nivel de sus lípidos plasmáticos, para lo cual se requieren estudios adicionales.

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REDVET: 2010, Vol. 11 Nº 03

Recibido: 01.12.09 – Ref. prov. DIC0901B – Revisado: 22.12.09 - Aceptado: 24.02.10

Ref. def. 031005_REDVET - Publicado: 01.03.2010

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