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PRACTICA No. 4

IDENTIFICACION DE CARBOHIDRATOS , PROTENAS Y LIPI DOS POR REACCIONES QUIMICAS, DE COLOR , Y MICROSCOPIA DE L UZ

I. INTRODUCCION. Los compuestos qumicos del protoplasma se clasifican en dos grandes grupos: substancias inorgnicas y substancias orgnicas, las primeras se caracterizan por la ausencia de uniones carbono-carbono en su estructura qumica; pudindose mencionar entre este grupo: agua, gases y sales disueltas, las segundas se caracterizan por presentar uniones carbono-carbono y carbono-hidrgeno y tomos de oxgeno en su estructura qumica, adems de estos elementos, pueden existir tomos de nitrgeno, fsforo, azufre y algunos metales. Las principales substancias orgnicas responsables de las caractersticas estructurales y funcionales del protoplasma son: carbohidratos, lpidos, protenas y cidos nucleicos, dichas substancias pueden ser identificadas por una gran variedad de pruebas qumicas y fsicas. En esta prctica se efectuarn algunas de estas pruebas qumicas para identificar carbohidratos y lpidos, en forma cualitativa. II. OBJETIVOS. Al finalizar la prctica cada estudiante ser capaz de: 1. Identificar carbohidratos, protenas y lpidos a travs de reacciones qumicas y

microscopa de luz. 2. Utilizar correctamente el microscopio ptico compuesto. III. EQUIPO Y MATERIALES NECESARIOS. Microscopio compuesto Porta y cubre-objetos 13 tubos de ensayo, resistentes al calor (pyrex o quimax) 2 pipetas 2 goteros Gradilla para tubos de ensayo Cuchilla de afeitar nueva* Orina * 5 cm Jugo* 5 cm Leche* 5 cm Solucin de lugol

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Solucin de Sudn III IV Solucin de Benedict Solucin de Glucosa al 1% Solucin de Sacarosa al 1 % Solucin de Almidn al 1% Una papa pequea* 1 Huevo* (Solucin de clara al 5% y solucin de yema al 5%) Gelatina sin sabor* (Solucin de gelatina al 5%) Solucin de CuSO4 al 1% Solucin de NaOH concentrado Un trozo pequeo de grasa animal (el gordo de la carne)* Aceite de cocina* Agua destilada Pinza Bao Mara Cinta adhesiva* El material marcado con asterisco (*) lo aportan lo s estudiantes por grupo . IV. PROCEDIMIENTO. IDENTIFICACION DE CARBOHIDRATOS : El almidn se identifica con lugol (solucin de I2/KI) dando un azul o morado intenso y los azcares reductores se identifican con la solucin de Benedict, los cuales despus de calentarse en bao mara durante 3 minutos, dan un precipitado color rojo ladrillo. OBSERVACION MACROSCOPICA. 1. Numere 10 tubos de ensayo de 1 al 10 2. A los tubos 1 y 2 agregue 1 ml de almidn. 3. A los tubos 3 y 4 agregue 1 ml de sacarosa 4. A los tubos 5 y 6 agregue 1 ml de jugo 5. A los tubos 7y 8 agregue 1 ml de leche 6. A los tubos 9 y10 agregue 1 ml de orina 7. A los tubos 1,3,5,7 y 9 agrgueles una gota de solucin de lugol, observe y anote

resultados en el cuadro 8. A los tubos 2,4,6,8 y 10 agregue aproximadamente 10 gotas de solucin de Benedict,

y colquelos en bao mara por 3 minutos ebullicin, observe y anote resultados en la tabla correspondiente, en el cuadro que se adjunta.

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TUBO PRUEBA DE BENEDICT

PRUEBA DE LUGOL

Color Inicial Color Final Color Inicial Color Final

1. Almidn 2. Almidn 3. Sacarosa 4. Sacarosa 5. Jugo 6. Jugo 7. Leche 8. Leche 9. Orina 10. Orina Compare los resultados obtenidos en los tubos 2,4,6,8 y 10 con el siguiente cuadro y explquelo

COLOR RESULTADO

Azul Negativo Azul verdoso Ligeros vestigios de glucosa Verde Aproximadamente 0.5% Pardo verdoso Aproximadamente 1.0% Amarillo Aproximadamente 1.5% Rojo ladrillo Mayor del 2.0%

DETERMINACIN CUALITATIVA DE LA PRESENCIA DE PROTE NAS PROCEDIMIENTO: a. Enumere 3 tubos de ensayo. En el tubo No. 1 Coloque 3 ml de solucin de yema de huevo. En el tubo No. 2 3 ml de solucin de clara de huevo y en el tubo No. 3, 3 ml de solucin de gelatina. Agregue en cada tubo 1 ml de la solucin de sulfato de cobre + 2 ml de Hidrxido de sodio concentrado (Reactivo de Biuret) Agite los tubos hasta que se produzca una coloracin violeta o prpura, color que indica que la prueba es positiva. Observe, anote y explique los resultados. IDENTIFICACION DE LIPIDOS. Los lpidos son identificados usando el reactivo Sudn III IV, los cuales al mezclarse dan un color rojo brillante.

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Coloque en un tubo de ensayo 1 ml. de aceite de cocina y 1 ml. de agua destilada; agrguele unas gotas de Sudn; agtelo, observe inmediatamente y anote los resultados; deje reposar el tubo y al cabo de 5 minutos obsrvelo y anote los resultados OBSERVACION MICROSCOPICA. Grnulos de Almidn. 1. Por medio de la hoja de afeitar haga un corte muy fino del tubrculo de papa y

colquelo sobre un porta objetos, haga una preparacin utilizando lugol diluido como medio de montaje y obsrvela al microscopio usando el objetivo 40X para hacer el esquema de lo observado. Utilice la hoja de reporte correspondiente y responda el cuestionario que se le presenta.

2. Observacin de tejido adiposo. Usando una hoja de afeitar haga un corte delgado de la grasa animal. Mntela en el portaobjetos y agrguele una gota de Sudn IV cbrala con el cubreobjetos y presione suavemente, coloque la preparacin sobre la platina del microscopio enfoque y observe con el objetivo seco dbil (10X), y luego con el objetivo seco fuerte (40X); haga el esquema de lo observado y descrbalo.

V. DISCUSIN DE RESULTADOS 1. Qu reactivos emple para identificar?

a) almidones b) azucares reductores c) Protenas d) lpidos

2 Que macromolculas pudo identificar microscpicamente? 3. De acuerdo a la coloracin obtenida en la identificacin de protenas Cul de las

muestras estudiadas tiene mayor concentracin de protenas? Explique 4. Escriba la reaccin de: el lugol con los polisacridos, los monosacridos reductores

con Benedict y las protenas con Biuret. 5. Cuales son las caractersticas de los azucares no reductores.

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VI. PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS 1. Las plantas habitualmente almacenan reservas energticas en forma de polisacridos, mientras que en la mayora de los animales los lpidos son la forma principal de almacenamiento de energa. Por qu es ventajoso para los animales tener su reserva de energa almacenada como lpidos y no como polisacridos? 2. Cul es la principal propiedad que distingue a los diferentes aminocidos entre s? Qu papel desempean estas diferencias en la estructura y funcin de las protenas? 3. De qu manera las diferencias de estructuras de grasas neutras y fosfolpidos determinan sus funciones en las clulas VI. BIBLIOGRAFIA. Moreno A., Ricardo B., Schartzman. Principios de Biologa celular. Buenos Aires, Edit. EL ATENEO. 1978. Audesirk T. Audesirk T. Biologa. 4ta. Edic. Mxico, Prentice Hall. 1996. Gerald Karp. Biologa Celular. 3era. . Edic., Mxico, MACGRAWHILL. 1998. CURTIS, Helena. BARNES, N. Sur. Et. Al. Biologa. Mxico: 2000. 1490 p.

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HOJA DE REPORTE A) Preparacin__________________________________ ____________________________________________ Aumento empleado______ X ________= ___________ (Ocular) (Objetivo) TOTAL Descripcin___________________________________ _____________________________________________ _____________________________________________ B) Preparacin___________________________________ ____________________________________________ Aumento empleado______ X _________ = _______ (Ocular) (Objetivo) TOTAL Descripcin___________________________________ ____________________________________________ ____________________________________________

C) Preparacin__________________________________ ____________________________________________ Aumento empleado______ X _________ = _______ (Ocular) (Objetivo) TOTAL Descripcin___________________________________ _____________________________________________ __________________________________________