DEPARTAMENTO DE REPRODUCCIÓN ANIMAL

Director: de la Fuente Martínez, Julio Dirección: Carretera de la Coruña, km 5,9

28040 Madrid Teléfono: 91 347 40 23 FAX: 91 347 40 14 Correo electrónico: secra@inia.es

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PERSONAL DEPARTAMENTO REPRODUCCIÓN ANIMAL Personal en plantilla Personal contratado Fuente Martínez, Julio de la Director ( Inv. A2) Palasz, Andrej Ramón y Cajal López Sebastián, Antonio Investigador A1 Ventura Moreira, Pedro Nuno Ramón y Cajal Saiz Cidoncha, Fernando Investigador A3 Ramírez de la Paz, Miguel Angel Juan de la Cierva Borque Ibarra, Mª Concepción Investigador A4 Ortín Trujillano, Fco. Javier Titulado Superior Cocero Oviedo, Mª Jesús Investigador A2 Fernández González, Raúl Titulado Superior García Casado, Pedro Investigador A4 Segovia Hijarrubia, Ignacio Titulado Superior Gómez Brunet, Mª Amelia Investigador A2 Beltrán Breña, Paula Tec.Sup.Act. Tec. Prof Gutiérrez Adán, Alfonso Investigador A2 Marigorta del Val, Pilar Tec.Sup.Act. Tec. Prof Pintado Sanjuanbenito, Mª Belén Investigador A3 Martín Lluch, Mercedes Tec.Sup.Act. Tec. Prof Sánchez Sánchez, Raúl Investigador A4 Calero Prieto, Antonia Auxiliar Act. Téc. Prof Santiago Moreno, Julián Investigador Pacheco Martín, Eugenia Auxiliar Act. Téc. Prof Gonzalez de Bulnes, Antonio Investigador González Gómez, Matilde Auxiliar Act. Téc. Prof Rizos, Dimitrios Investigador Pérez Garnelo, Sonia Salomé Técnico Sup. Especialista Cristobal Arranz, Eugenio Técnico Sup. Act. Tec. Prof Becarios Benito Benito, Claudio Oficial Act. Téc. y Prof. Gómez Fidalgo, Ernesto Tecnólogo Díaz Yubero, Concepción Colaborador I+D+I Madrid Bury, Ninoska Predoctoral Manzanares Otero, Mª Carolina Colaborador I+D+I Pérez Crespo, Miriam Predoctoral Cruz Vigo, Mª Paloma Colaborador I+D+I Pericuesta Camacho, Eva Predoctoral Gomez Fidalgo, Ernesto Colaborador I+D+I Toledano Díaz, Adolfo Predoctoral González López, Virginia Auxiliar Act. Téc. y Prof Veiga López, Almudena Predoctoral González Navalón, Juan Carlos Ayudante Act. Tec. Prof Bermejo Alvarez, Pablo Predoctoral Pereira Lagos, Juan Andrés Ayudante Gest. Serv. Com. Pérez Solana, Mª Luz FINNOVA Martín Sánchez, Anselma Ayudante Gest. Serv. Com. Clemente, María Predoctoral Fernández Zapata, Enriqueta Ayudante Gest. Serv. Com Alvarez, Pablo Predoctoral

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OBJETIVOS GENERALES DEL DEPARTAMENTO

1. Entender los mecanismos moleculares que controlan el desarrollo embrionario preimplantacional, su diferenciación a células madre, y su manipulación mediante trasgénesis.

2. Establecimiento de los procedimientos más adecuados para la conservación de células, gametos y embriones en todas las especies para conservar la Biodiversidad existente en la actualidad a nivel nacional.

3. Evaluar e informar de los nuevos procedimientos en Biotecnologías Reproductivas, que puedan ser aplicados por los distintos Bancos de Germoplasma localizados en las CCAAs.

4. Colaborar y asesorar en los Programas de Conservación Internacionales, Nacionales y Regionales.

5. Actuar como Centro de Referencia de Conservación ex situ de los Recursos Zoogenéticos Nacionales.

6. Satisfacer la demanda del sector porcino, tanto en los sistemas de explotación del cerdo blanco, como la aportación de mejoras a los sistemas de producción implantados en el cerdo Ibérico. Por otro lado, desarrollar la determinación del grado de fragmentación del ADN del espermatozoide del verraco.

7. Conservación y uso sostenible de pequeños rumiantes silvestres. 8. Métodos alternativos a los métodos hormonales clásicos de control del ciclo

reproductivo. 9. Optimizar la producción in vitro de embriones bovinos. 10. Utilización de medios de cultivo sintéticos sin adición de componentes de origen

animal. 11. Producción de diluyentes de congelación sin aporte de proteínas animales, que

superen la viabilidad pos descongelación actual de los embriones PIV. 12. Control de la reproducción en porcino. 13. Estudio del bienestar porcino.

GRUPOS DE INVESTIGACIÓN • Embriología molecular • Conservación de recursos zoogenéticos • Control de la reproducción porcina • Fisiología y tecnologías de la reproducción en pequeños rumiantes • Reproducción asistida bovina • Reproducción en porcino

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EMBRIOLOGIA MOLECULAR

COMPONENTES Gutiérrez Adán, Alfonso Investigador A2 Pintado Sanjuanbenito, Belen Investigador A3 Dimitrios Rizos Investigador Ramírez de Paz, Miguel Angel Juan de la Cierva Fernandez González, Raúl Titulado Superior Pérez Crespo, Mirian Becario predoctoral INIA Pericuesta Camacho, Eva Becario predoctoral FPI Bermejo Alvarez, Pablo Becario predoctoral FPU Correo electrónico: agutierrez@inia.es

PRINCIPALES LINEAS I+D+I Entender los mecanismos moleculares que controlan el desarrollo embrionario preimplantacional, su diferenciación a células troncales, y su manipulación mediante transgénesis.

• Desarrollo embrionario: o Análisis de la reprogramación genética y epigenética en embriones

de mamífero en estadios anteriores a la implantación. o Mejora de la calidad de los embriones bovinos producidos in vitro y

manipulación no intrusiva de la proporción de sexos. o Alteraciones genéticas y epigenéticas producidas por las condiciones

de cultivo in vitro y por las técnicas de manipulación embrionaria (superovulación, congelación, ICSI, TN).

• Células troncales embrionarias, adultas, diferenciación y transgénesis: o Análisis de los mecanismos genéticos y epigenéticos de formación y

diferenciación de células troncales embrionarias, germinales y adultas.

o Desarrollo de nuevas técnicas para la separación y activación de células troncales de tejidos adultos

o Desarrollo de nuevas técnicas de transgénesis: Transgénesis mediada por ICSI y espermatozoides

PROYECTOS Código: AGL2003-05783 Título: Determinación de alteraciones genéticas y epigenéticas causadas por biotecnologías reproductivas (PIV Y TN) y utilización como marcadores de competencia embrionaria. Entidad financiadora: Plan Nacional I+D+I Duración: 2003-2006 Investigador responsable: Gutiérrez Adán, Alfonso Código: AGL2006-04799/GAN Título: Efecto a largo plazo en la salud y bienestar animal de las alteraciones geneticas y Epigeneticas producidas por las biotecnologías reproductivas. Coordinador Alfonso Gutiérrez Adán Entidad financiadora: Plan Nacional I+D+I Duración: 2006-2009 Investigador responsable: Gutiérrez Adán, Alfonso

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Código: HG005-0031 Título: Programa de acciones integradas hispano-griegas. Relatioship among certain physical properties of cervial mucus during esturs exhibithe after superovulation, the activity of certain enzymes in uterine luminal fluid and the expression of certain genes in in vitro produced bovine embryos. Entidad financiadora: Plan Nacional I+D+I Duración: 2005-2007 Investigador responsable: Gutiérrez Adán, Alfonso y Tsiligianni Teodora

CONVENIOS Código y título: CC06-009. Transgénesis mediada por espermatozoides (SMGT) en la especie porcina: estudio de distintos factores que afectan a la eficiencia de la técnica. Entidad financiadora: Comunidad de Murcia Duración: 2005-2007 Investigador responsable: Joaquin Gadea (Murcia) y Alfonso Gutiérrez Adán (Madrid) Principales resultados Desarrollo embrionario: hemos determinado las alteración de la expresión genética que se produce durante todos los estadios preimplantacionales en embriones bovinos de alta o baja calidad; hemos determinado las diferencias que se observan entre las especies bovino y ovino en relación a los requerimientos de cultivo in vitro de sus embriones preimplantacionales y su relación con la expresión genética temprana; hemos descubierto en embriones bovinos un gen homologo a PED de ratón, que pudiera controlar en estadios de dos células la calidad embrionaria; hemos determinado como la calidad de la descondensación del DNA espermático y del mRNA del ovocito puede ser esencial para su posterior compendia; hemos analizado el efecto del estrés térmico en blastocistos de ratón y hemos analizado por primera vez el efecto a largo plazo de un inadecuado sistema de cultivo in vitro en la alteración de la expresión epigenética, alteraciones en el desarrollo, el comportamiento, etc de animales adultos. Los resultados han sido publicados en PNAS. Hemos analizado como algunos componentes del medio de cultivo pueden mejorar la calidad de los embriones y permitir su manipulación in vitro de una forma mas segura que los medios actuales. Hemos puesto a punto la transferencia nuclear en ratón y hemos analizado el efecto del cultivo in vitro en el desarrollo de embriones producidos por transferencia nuclear. Hemos puesto a punto la técnica de inyección intracitoplasmática de espermatozoides para producir transgenesis con construcciones muy grandes (550 Kb). Células troncales: Optimización en el sistema de generación de nuevas líneas de células troncales murinas mediante el cultivo in vitro de embriones en medio condicionado para linage germinal. Estudio sobre la presencia de células pluripotentes en un cultivo diferenciado de células troncales y su reprogramación genética o epigenética hacia células troncales. Desarrollo de técnicas para la extracción de células troncales de la línea germinal, células troncales espermatogénicas y células troncales adultas. Análisis de los elementos del promotor de la transcriptasa reversa de la telomerasa murina (mTert) que regulan la actividad telomerasa gracias a la transformación de Células troncales y el estudio de su diferenciación. Herramienta de localización de células troncales adultas. Desarrollo de células troncales transformadas bajo el control del promotor del gen Nanog.

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PUBLICACIONES Artículos en revistas SCI E Pericuesta, MA Ramirez, A Villa-Diaz, A Relano-Gines, JM Torres, M Nieto, B Pintado and A Gutierrez-Adan (2006) The proximal promoter region of mTert is sufficient to regulate telomerase activity in ES cells and transgenic animals. Reproductive Biology and Endocrinology 4(5):1-12. P.N. Moreira, R. Fernández-Gonzalez, M. A. Ramirez, M. Pérez-Crespo, D. Rizos, B. Pintado and A. Gutiérrez-Adán (2006) Differential effects of culture and nuclear transfer on relative transcript levels of genes with key roles during pre-implantation. Zygote 14(1):81-87. PA Pérez-Mancera, I González-Herrero, K Maclean, AM. Turner, M-Y Yip, M Sánchez-Martín, JL García, C Robledo, T Flores, A Gutiérrez-Adán, B Pintado, and I Sánchez-García. (2006) SLUG (SNAI2) overexpression in embryonic development. Cytogenetics and Genome Research. 114(1) 24-29. A.T. Palasz, H. Rodriguez-Martinez, P. Beltran-Breña, S. Perez-Garnelo, M. F, Martinez, A Gutierrez-Adan, and J. De la Fuente (2006) Effect of Hyaluronan, BSA and Serum on Bovine Embryo In Vitro Development, Ultrastructure and Gene Expression Patterns. Molecular Reproduction and Development 73(12):1503 - 1511. A. Gutiérrez-Adán, M Perez-Crespo, R Fernandez-Gonzalo, MA Ramirez, P Moreira, B Pintado, P Lonergan and, D Rizos (2006) Developmental consequences of sexual dimorphism during preimplantation embryonic development. Reproduction Domestic Animals 41:1-9. Perez-Crespo M, Pericuesta E, Rey R, Gutierrez-Adan A (2006) Scrotal Heat Stress in Mice Affects Viability and DNA Integrity of Sperm, and Sex Ratio of the Offspring. Reprod Domest Anim, 41 Suppl 2:104. MA Ramírez, R Fernández-González, E Pericuesta, P Moreira, B Pintado and A Gutiérrez-Adán (2006) Transcriptional and post-transcriptional regulation of retrotransposons IAP and MuERV-L affect pluripotency of mice ES cells. Reproductive Biology and Endocrinology 4:55-63. Moreira PN, Pozueta J, Giraldo P, Gutierrez-Adan A, Montoliu L (2006) Generation of Yeast Artificial Chromosome Transgenic Mice by Intracytoplasmid Sperm Injection. Methods in Molecular Biology 349:151-161. Libros y capítulos de libros A. Gutiérrez-Adán (2006). Efecto de la producción in vitro de embriones en al alteración de la proporción de sexos y el síndrome del ternero gigante. Paginas: 199-209. XXVIII Curso Internacional de Reproducción Animal. Compendio de

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Conferencias. Impreso en el Dpto. de Publicaciones de la E.U.I.T. Agrícola. Ciudad Universitaria 28040 Madrid I.S.B.N.:84-87316-45-X. Depósito Legal: M-44027-2005. A. Gutiérrez-Adán (2006). Sistemas de producción de animales transgénicos. Paginas: 445-457. XXVIII Curso Internacional de Reproducción Animal. Compendio de Conferencias. Impreso en el Dpto. de Publicaciones de la E.U.I.T. Agrícola. Ciudad Universitaria 28040 Madrid I.S.B.N.:84-87316-45-X. Depósito Legal: M-44027-2005. A. Gutiérrez-Adán (2006). Aplicaciones de animales transgénicos en producción. Paginas: 457-467. XXVIII Curso Internacional de Reproducción Animal. Compendio de Conferencias. Impreso en el Dpto. de Publicaciones de la E.U.I.T. Agrícola. Ciudad Universitaria 28040 Madrid I.S.B.N.:84-87316-45-X. Depósito Legal: M-44027-2005. Moreira PN, Pozueta J, Giraldo P, Gutiérrez-Adán A, Montoliu L (2006). Generation of Yeast Artificial Chromosome Transgenic Mice by Intracytoplasmic Sperm Injection. YAC protocols. Series Methods in Molecular Biology. Edited by Alasdair Mackenzie. Humana Press, Totowa, New Jersey, 349 pp 151-161 Moreira PN (2006). ICSI: Aplicaciones y Problemática Actual. XIX Curso Internacional de Reproducción Animal. Editores Julio de la Fuente Martínez y Fernando Sáiz Cidoncha. Departamento de Publicaciones de la E.U.I.T. Agrícola, Ciudad Universitaria, Madrid-España, ISBN: 84-87316-38-7, pp 159-164 Nº Ponencias, comunicaciones y póster presentados/as y publicados en las actas: 23

PATENTES Título: Supplementation for embryo and/or cell manipulationInventores: Palasz A, De La Fuente J, Moreira PN, Gutiérrez-Adán A Titular: Instituto nacional de Investigaciones Agrarias (ES) Información de publicación: ES2259566 - 2006-10-01 Título: Novel method of generating non-human transgenic animals, and transgenic animals thus obtainedInventores: Moreira PN, Gutiérrez-Adán A, Montoliu L. Titular: Consejo Superior de Investigaciones Científicas (ES) y Instituto Nacional de Investigaciones Agrarias (ES) Información de publicación: ES2245591 - 2006-01-01

OTRAS ACTIVIDADES

Cursos Alfonso Gutiérrez Adán. Profesor del curso de doctorado: Reconocimiento entre gametos, fecundación y desarrollo embrionario. Universidad de Murcia. Febrero 2006. Departamentos de Biología Celular y Fisiología; Programa Biología de la reproducción en los mamíferos. Programa de doctorado de excelencia de la Universidad de Murcia.

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Alfonso Gutiérrez Adán. Profesor del curso de doctorado: Animales transgénicos de interés en ganadería. Universidad de Murcia. Mayo 2006. Departamentos de Biología Celular y Fisiología; Programa Biología de la reproducción en los mamíferos. Programa de doctorado de excelencia de la Universidad de Murcia. Alfonso Gutiérrez Adán. Profesor del curso de doctorado: Transgénicos en animales superiores. Curso: Tecnologías Reproductivas. Real Academia Nacional de Medicina, Madrid, Mayo 2006. Curso 2005-2006. Alfonso Gutiérrez Adán. Profesor de los Cursos de Verano del Escorial. Curso “Modelos experimentales para la investigación en biomedicina”. Cursos de verano de la UCM, El Escorial, Madrid, 10-14 Julio 2006. Moreira, P. Profesor invitado en el XIX Curso Internacional de Reproducción Animal (2006). Seminario sobre ICSI: Aplicaciones y Problemática Actual. Organización de congresos Organizador y chairperson de la session IV del 22st Scientific Meeting of European Embryo Transfer Association. Zug (Suiza) September 2006. Chairperson del Symposium 5, Spermatology and wildlife conservation, del 10th Internaional Symposium on Spermatology, Escorial, Madrid 17-22 Septiembre, 2006 Organización de los seminarios ordinarios y extraordinarios del Departamento de Reproducción Animal y Conservación de Recursos Zoogenéticos Comités internacionales External examiner for the PhD D. Corcoran, University of Dublin, Ireland, Enero 2006. Miembro del Comité de Selección y Evaluación de la Competición de Estudiantes en el Scientifics Meeting of the AETE. 2006. Miembro del equipo Editorial de revistas científicas

• BioMed Central Biotechnology (Regula member from 2004-2007) • Reproductive Biology and Endocrinology (Regular member from 2003-

2007) • Editor de Europeenne De Transferí Embryonnarire Newsletter (2003-2007)

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MODIFICACIÓN GENÉTICA ANIMAL

COMPONENTES Calero Prieto, Antonia Ayudante de investigación Gutiérrez Adán, Alfonso Investigador A2 Hourcade Bueno, Juan de Dios Becario predoctoral INIA Pérez Solana, Mª Luz Ayudante de investigación Pintado Sanjuanbenito, Mª Belén Investigador A3 Segovia Hijarrubia, Ignacio Titulado superior Correo electrónico: pintado@inia.es

PRINCIPALES LÍNEAS DE I+D+I

• Modificación genética animal • Criopreservación de gametos y embriones en ratón

PROYECTOS Código y título: AGL2004-00332. Desarrollo de metodologías de criopreservación de espermatozoides y embriones para la gestión de líneas murinas transgénicas en los animalarios. Entidad financiadora: Plan Nacional I+D+I Duración: 2004-2007 Investigador responsable: Pintado Sanjuanbenito, Mª Belén Código y título: AT06-001. Adaptación del servicio de experimentación animal para animales no inoculados y de estado sanitario controlado al Real Decreto 1201/2005. Entidad financiadora: INIA Duración: 2006-2008 Investigador responsable: Pintado Sanjuanbenito, Mª Belén Código y título: CT2002-01309 QLK3. European Project to study BSE strain in sheep Entidad financiadora: Unión Europea Duración: 2003-2007 Investigador responsable: Torres Trillo, Juan María

PARTICIPACIÓN EN PROYECTOS LIDERADOS POR OTRAS INSTITUCIONES Código y título: COST B-24. Laboratory Animal Welfare Entidad financiadora: COST Duración: 2004-2007 Investigador responsable: Timo Nevalainen Principales resultados La colaboración en los proyectos que implican la producción de transgénicos se ha plasmado en la generación de 8 líneas transgénicas que en este momento están siendo caracterizadas en cuanto a su susceptibilidad frente a EES. La elevada eficiencia del laboratorio de transgénicos, que le hace ser un claro referente a nivel nacional ha

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permitido establecer colaboraciones científicas con el Instituto de Neurociencia de Alicante y la Universidad de Medicina de Murcia. Se continúa la colaboración científica con el Instituto del Cancer en Salamanca y el Centro Nacional de Biotecnología. Respecto al proyecto AGL04-332, la criopreservación de espermatozoides de ratón representa un desafío técnico que está lejos de ser resuelto. La criosensibilidad afecta especialmente además a la estirpe C57Bl6, que se está imponiendo como fondo genetico estandar para los animales transgenicos. Plantemos la posibilidad de que la mayor sensibilidad a la criopreservacion y a los agentes crioprotectores de esta estirpe pudiera ser consecuencia de una mayor incidencia de fragmentación espermática. Por esa razon se puso a punto la técnica de TUNEL (Terminal deoxynucleotidyl Transferase-mediated dUTP Nick End Labeling) para aplicarla a espermatozoides de ratón. Nuestros resultados indicaron que no existen diferencias significativas en el grado de fragmentación espermática en muestras de semen fresco en distintas cepas, aunque en el caso de C57 se puso en evidencia una mayor sensibilidad que podria explicar en parte la escasa viabilidad de los espermatozoides congelados-descongelados en esta cepa. De forma paralela se han realizado estudios del efecto de trasporte de embriones de raton a diferentes temperaturas con el fin de definir un sistema que garantice la máxima viabilidad sin tener que recurrir a la utilización de tanques de nitrógeno seco, requisito indispensable para el transporte de embriones congelados. Se ha podido demostrar que tanto la utilización de medios equilibrados como de medio tamponizado con hepes permite alcanzar indices de mas del 50% de desarrollo in Vitro independientemente de la temperatura a la que se realice el trasporte, lo que supone una alternativa asequible a los animalarios que quieran intercambiar cepas de raton sin necesidad de recurrir a medios costosos de trasporte o al envio de animales vivos. Como actividad derivada de la AT 06-001, se ha asesorado y gestionado la solicitud de la homologación de todo el personal del departamento que trabaja con animales de experimentación, requisito estipulado en la nueva legislación.

PUBLICACIONES

Artículos en revistas SCI Gutierrez-Adan, A, M Perez-Crespo, R Fernandez-Gonzalez, M Ramirez, P Moreira, B Pintado, P Lonergan, and D Rizos, Developmental Consequences of Sexual Dimorphism During Pre-implantation Embryonic Development. Reprod Domest Anim, 2006. 41 Suppl 2: p. 54-62. Moreira, PN, R Fernandez-Gonzalez, MA Ramirez, M Perez-Crespo, D Rizos, B Pintado, and A Gutierrez-Adan, Differential effects of culture and nuclear transfer on relative transcript levels of genes with key roles during preimplantation. Zygote, 2006. 14(1): p. 81-7. Perez-Caro, M, N Gutierrez-Cianca, I Gonzalez-Herrero, I Lopez-Hernandez, T Flores, A Orfao, M Sanchez-Martin, A Gutierrez-Adan, B Pintado, and I Sanchez-Garcia, Sustained leukaemic phenotype after inactivation of BCR-ABLp190 in mice. Oncogene, 2007. 26(12): p. 1702-13.

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Perez-Mancera, PA, I Gonzalez-Herrero, K Maclean, AM Turner, MY Yip, M Sanchez-Martin, JL Garcia, C Robledo, T Flores, A Gutierrez-Adan, B Pintado, and I Sanchez-Garcia, SLUG (SNAI2) overexpression in embryonic development. Cytogenet Genome Res, 2006. 114(1): p. 24-9. Pericuesta, E, MA Ramirez, A Villa-Diaz, A Relano-Gines, JM Torres, M Nieto, B Pintado, and A Gutierrez-Adan, The proximal promoter region of mTert is sufficient to regulate telomerase activity in ES cells and transgenic animals. Reprod Biol Endocrinol, 2006. 4: p. 5. Ramirez, MA, E Pericuesta, R Fernandez-Gonzalez, P Moreira, B Pintado, and A Gutierrez-Adan, Transcriptional and post-transcriptional regulation of retrotransposons IAP and MuERV-L affect pluripotency of mice ES cells. Reprod Biol Endocrinol, 2006. 4: p. 55. Nº Ponencias, comunicaciones y póster presentados/as y publicados en las actas: 4

OTRAS ACTIVIDADES

Cursos Curso de verano Modelos experimentales para la investigación en Biomedicina San Lorenzo de el Escorial 10 al 14 de julio de 2006. Curso de Consolidación auxiliar oficial de investigación y laboratorio. Animalario del CSIC junio de 2006 XXIX Curso Internacional de Reproducción Animal Noviembre de 2006 Curso de la Fundación BBVA “Biodiversidad y Conservación en el siglo XXI” Valencia 5 de junio 2006 Conferencia “Animales transgénicos” Curso Genética y gestión de colonias. Animales de experimentación 18 al 21 de septiembre de 2006.

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CONSERVACION DE RECURSOS GENÉTICOS

COMPONENTES Beltrán Breña, Paula Técnico Sup. Act. Tec. Prof Borque Ibarra, Concepción Investigadora A4 Fuente Martínez, Julio de la Investigador A2 Marigorta del Val, Pilar Técnico Sup. Act. Tec. Prof Palasz, Andre Ramón y Cajal Pérez Garnelo, Sonia S. Técnico Superior Especialista Ventura de Oliveira Moreira, Pedro Nuno Ramón y Cajal Correo electrónico: jfuente@inia.es

PRINCIPALES LÍNEAS DE I+D+I • Biotecnología de la reproducción • Conservación de Recursos Zoogenéticos • Bioquímica. Calidad seminal. Parámetros seminales y su estacionalidad. • Endocrinología (sangre y heces). Determinación de hormonas reproductivas

y sus metabolitos. Estudio del estado reproductivo de hembras en condiciones naturales y después de estimulación ovárica.

• Bienestar animal: Determinación de parámetros bioquímicos relacionados con el bienestar animal.

• Adaptación de las técnicas a especies animales y a los fluidos biológicos a analizar ya que, originalmente, están diseñadas para suero sanguíneo humano.

PROYECTOS Código y título: RZP2004-0004-00-00. Mantenimiento, caracterización, informatización y control del banco de germoplasma del Departamento de Reproducción Animal y Conservación de Recursos Zoogenéticos del INIA. Entidad financiadora: INIA Duración: 2005-2008 Investigador responsable: Pérez Garnelo, Sonia Código y título: RZ2004-00031-C02-00. Establecimiento de un banco de conservación de especies domésticas en peligro de extinción. Entidad financiadora: INIA Duración: 2005-2007 Investigador responsable: de la Fuente Martínez, Julio Código y título: AT06-002. Cultivo de ovocitos bovinos madurados y fecundados in vitro: estudio del papel de la hialurona en el desarrollo tremprano. Entidad financiadora: INIA Duración: 2006-2008 Investigador responsable: Palasz, Andrzej Tomasz

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CONVENIOS Código y título: CC05-003. Desarrollo de un programa tecnológico de mejora de la producción láctea en la explotación ovina “Cerromonte” Entidad financiadora: Zoo Aquarium de Madrid. Duración: 2003-2006 Investigador responsable: de la Fuente Martínez, Julio Código y título: CC03-066. Repercusión de las normas de bienestar animal sobre la producción porcina, estudio de niveles de cortisol, parámetros reproductivos y costes de producción. Entidad financiadora: CDTI – Nutrivall Duración: 2004-2006 Investigador responsable: Sánchez Sánchez, Raúl

CONTRATOS Código y título: CON03-013. Realización de trabajos de conservación y reproducción asistida en animales no domésticos en peligro. Entidad financiadora: Granja Cerromonte, S.L. Duración: 2005-2008 Investigador responsable: de la Fuente Martínez, Julio Principales resultados: Adaptar técnicas de ELISA, diseñadas originalmente para especie humana, a animales domésticos y salvajes. Determinar los niveles de hormonas, implicadas tanto en el ciclo sexual como en el estrés, en animales domésticos y salvajes por las técnicas de ELISA adaptadas para ellos y para fluidos biológicos distintos de plasma sanguíneo (orina y heces). Llevar a cabo el estudio del estado reproductivo de hembras, domésticas y salvajes, en condiciones naturales y después de estimulación ovárica mediante el análisis de hormonas sexuales en heces. Los datos obtenidos son concluyentes en lo que respecta a la adaptación de las técnicas pues han sido sustentados por hechos reales tales como ovulación, gestación, parto, aborto, etc.

PUBLICACIONES

Artículos en revistas SCI S.S. Pérez-Garnelo, M. Oter, C. Borque, C. Talavera, M. Delclaux, E. Martínez Nevado, A.T. Palasz, J. de la Fuente. 2006. Post-thaw viability of European Bison (Bison bonasus) semen frozen with extenders containing either egg yolk or plant origin lipids examined using a heterologous fertilization assay. Journal of Zoo and Wildlife Medicine, Vol. 37, No. 2, pp. 116-125. Libros y capítulos de libros Pérez Garnelo, SS. (2006) Establecimiento de Bancos de Recursos Zoogenéticos para la conservación de especies amenazadas. En: De la Fuente J y Sáiz Cidoncha F (Ed.).

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INIA-AECI. Compendio de Conferencias del XXIX Curso Internacional de Reproducción Animal. EUIT Agrícola Madrid. 337-348. ISBN: 84-87316-50-6 Pérez Garnelo, SS. (2006) Estudio de los parámetros seminales y conservación del esperma en animales salvajes. En: De la Fuente J y Sáiz Cidoncha F (Ed.). INIA-AECI. Compendio de Conferencias del XXIX Curso Internacional de Reproducción Animal. EUIT Agrícola Madrid. 411-424. ISBN: 84-87316-50-6 Borque Ibarra C. 2006. Marcadores bioquímicos en el eyaculado. En: INIA-AECI Compendio de conferencias del XXIX Curso Internacional de Reproducción Animal. pp. 365-386. Editado por la EUIT Agrícola. Madrid. ISBN: 84-87316-50-6. Borque Ibarra C. 2006. Determinación del ciclo sexual en heces. En: INIA-AECI Compendio de conferencias del XXIX Curso Internacional de Reproducción Animal. pp. 387-409. Editado por la EUIT Agrícola. Madrid. ISBN: 84-87316-50-6. Nº Ponencias, comunicaciones y póster presentados/as y publicados en las actas: 5

OTRAS ACTIVIDADES

Cursos XXIX Curso Internacional de Reproducción Animal. Madrid. Noviembre 2006. Conferencias Gripe aviar: antecedentes, presente y futuro. Evaluación del riesgo humano. ATENEO DE MADRID. Sección de Ciencias de la Salud. Madrid. España. Junio 2006. Informes Agencia Española de Medicamentos y Productos Sanitarios. Dirección General. Ministerio de Sanidad y Consumo. Informe sobre gripe aviar. Madrid 2006. Agencia Española de Medicamentos y Productos Sanitarios. Subdirección General de Medicamentos de Uso Veterinario. Ministerio de Sanidad y Consumo. Informe sobre enfermedades de las abejas y su tratamiento. Madrid 2006.

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PRODUCCIÓN EMBRIONARIA IN VITRO Y CALIDAD EMBRIONARIA

COMPONENTES Rizos Athanasios, Dimitiros Investigador Beltrán Breña, Paula Tec. Sup. Act. Tec. Prof. Clemente, María Predoctoral Alvarez, Pablo Predoctoral Correo electrónico: drizos@inia.es

PRINCIPALES LÍNEAS DE I+D+I • Producción in vivo e in vitro de embriones de rumiantes (Bovinos y Ovinos) • Calidad embrionaria • Criopreservación de embriones • Expresión génica de embriones

PROYECTOS Código y título: AT06-003. Control Genómico de Desarrollo Embrionario Bovino Entidad financiadora: INIA Duración: 2006-2008 Investigador responsable: Rizos Athanasios, Dimitiros Código y título: AGL2006-05616 Control Genómico de Desarrollo Embrionario Entidad financiadora: Plan Nacional I+D+I Duración: 2006-2008 Investigador responsable: Rizos Athanasios, Dimitiros Código: HG005-0031 Título: Programa de acciones integradas hispano-griegas. Relatioship among certain physical properties of cervial mucus during esturs exhibithe after superovulation, the activity of certain enzymes in uterine luminal fluid and the expression of certain genes in in vitro produced bovine embryos. Entidad financiadora: Plan Nacional I+D+I Duración: 2005-2007 Investigador responsable: Gutiérrez Adán, Alfonso y Tsiligianni Teodora

PARTICIPACIÓN EN PROYECTOS LIDERADOS POR OTRAS INSTITUCIONES Código y título: Genómica de la reproducción en mamíferos Entidad financiadora: Science Foundation Ireland Duración: 2002-2006 Investigador responsable: Dr. P. Lonergan, Dr. A. Evans Principales Resultados Definir las condiciones de cultivo necesarias para producir embriones bovinos in vitro utilizando oviductos de ratona, aislados en cultivo lo cual les proporciona una calidad óptima en el intento de emular las condiciones in vivo, y así obtener un sistema asequible para los laboratorios de producción in vitro de embriones bovinos que no

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puedan recurrir a la utilización de ovejas como receptoras intermedias. En segundo lugar, identificar los genes implicados en la adquisición de una buena calidad embrionaria. Desarrollo de embrión: No se encontró diferencia en la tasa de división (76,5 ± 1,5% en SOF contra 76,8 ± 2,5% en KSOM) ni en el rendimiento general de blastocistos en Día 8 (18,8 ± 2,7 % en SOF contra 22,2 ± 2,8 % en KSOM) entre embriones cultivados en SOF y KSOM. El cultivo en el oviducto aislado de ratón (IMO) no afectó a la proporción de blastocistos comparando con sus respectivos grupos control (SOF: 17,7 ± 3,2 contra 18,8 ± 2,7 %; KSOM: 20,7 ± 2,6 contra 22,2 ± 2,8 %). Enumeración del numero de células: Utilizando un método para hacer el recuento de las células de la masa celular interna (ICM) y las células del trofectodermo (TE), se cuantificaron las células apotóticas con el procedimiento de TUNEL. No había diferencia en el número total de células (de 83,52 ± 5,30 a 101,63 ± 6,32), las células de TE (de 56,74 ± 3,90 a 67,36 ±4.65) o las células apoptóticas (de 5,40 ± 1,67 a 9,74 ± 1,67) entre grupos. La adición del IMO al SOF no afectó a ninguno de los parámetros estudiados; sin embargo, la adición del IMO al KSOM tuvo como resultado un aumento significativo del número de células de ICM (28,96 ± 1,98 contra 34,26 ± 2,36). Expresión génica: El cultivo de zigotos en el IMO en SOF tuvo como resultado un aumento (P<0.05) en la expresión de mRNA del oct-4 y una reducción en la expresión de Glut-1, Na/K, Cx43 y survivin comparados con los blastocistos del grupo control con SOF (Figura 1A). Sin embargo, en los blastocistos cultivados en el IMO en KSOM la expresión resulto aumentada para Glut-1, Cx43, oct-4 y survivin y reducida en Na/K comparados con los blastocistos del grupo control con KSOM.

PUBLICACIONES

Articulos en revistas SCI Gutierrez-Adan A, Perez-Crespo M, Fernandez-Gonzalez R, Pamirez M, Moreira P, Pintado B, Lonergan P, Rizos D. (2006). Developmental consequences of sexual dimorphism during pre-implantation embryonic development. Reproduction in Domestic Animals 41 (2):54-62, (R). P.N. Moreira, R. Fernández-Gonzalez, M. A. Ramirez, M. Pérez-Crespo, D. Rizos, B. Pintado and A. Gutiérrez-Adán. (2006). Differential effects of culture and nuclear transfer on relative transcript levels of genes with key roles during pre-implantation. Zygote 14:81-87, (A). Corcoran D, Fair T, Park S, Rizos D, Patel OV, Smith GW, Coussens PM, Ireland JJ, Boland MP, Evans ACO, Lonergan P. (2006). Suppressed expression of genes involved in transcription and translation in in vitro compared with in vivo cultured bovine embryos. Reproduction 131(4): 651-660, (A). Libros y capítulos de libros Rizos D. Punción ovárica transvaginal por ecografía (OPU). Paginas: 197-203. XXIV Curso Internacional de Reproducción Animal. Compendio de Conferencias. Impreso en el Dpto. de Publicaciones de la E.U.I.T. Agrícola. Ciudad Universitaria 28040 Madrid I.S.B.N.:84-87316-50-6. Deposito Legal: M-43439-2006.

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Rizos D. Producción in Vitro de embriones bovinos provenientes de vacas y de novillas. Paginas: 259-267. XXIV Curso Internacional de Reproducción Animal. Compendio de Conferencias. Impreso en el Dpto. de Publicaciones de la E.U.I.T. Agrícola. Ciudad Universitaria 28040 Madrid I.S.B.N.:84-87316-50-6. Deposito Legal: M-43439-2006. Nº Ponencias, comunicaciones y póster presentados/as y publicados en las actas: 4

OTRAS ACTIVIDADES Cursos Profesor invitado: XXIX Curso Internacional de Reproducción Animal, Departamento de Producción Animal, Area de Reproducción Animal. I.N.I.A. Nov 2006 Profesor invitado en el Curso de Master organizado por la Facultad de Veterinaria, Universidad de Murcia. Mayo 2006. Profesor invitado en el Curso de Master organizado por la Facultad de Veterinaria, Universidad Autónoma de Barcelona. Jun 2006 y Sept 2006. Revisor de las Revistas Científicas

• Theriogenology • Animal Reproduction Science • Reproduction Fertility and Development

Miembro de las sociedades científicas

• International Embryo Transfer Society (IETS) • European Embryo Transfer Association (AETE) • Society for the Study of Fertility (SSF) • Society for the Study of Reproduction (SSR) • Hellenic Society of Animal Production (EZE)

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CONTROL DE LA REPRODUCCIÓN PORCINA

COMPONENTES García Casado, Pedro Investigador A4 Saiz Cidoncha, Fernándo Investigador A3 Marigorta del Val, Pilar Tec. Sup. Act. Tec. Prof. Correo electrónico: gcasado@inia.es

PRINCIPALES LÍNEAS DE I+D+I

• Congelación de semen de verraco • Nuevas técnicas de diagnóstico del grado de fraccionamiento del ADN

espermático • Transferencia embrionaria en ganado porcino

CONVENIOS Código y título: CC06-028-C2-02. Convenio para apoyo a la conservación de las estirpes de cerdo ibérico en el centro de investigaciones agropecuarias Dehesón del encinar. Entidad financiadora: J. C. de Castilla – La Mancha Duración: 2006-2007 Investigador responsable: García casado, Pedro Principales resultados En el Laboratorio del Control de la Reproducción Porcina se ha puesto a punto la técnica para la determinación del grado de fraccionamiento del ADN en el espermatozoide del verraco en colaboración con el Departamento de Genética de la Facultad de Biológicas de la Universidad Autónoma de Madrid, dirigido por el catedrático Jaime Gosálvez. Se ha llevado a cabo la congelación de un total de 4803 pajuelas de semen, correspondientes a un total de 40 eyaculados de verracos de las razas Duroc, Landrace, Large White y Pietrain, conformando el Banco de semen congelado, contratado por Semen Cardona. Los trabajos correspondientes al Convenio de colaboración con la Junta de Comunidades de Castilla – La Mancha, han dado lugar a la creación del Banco de Semen del Dehesón del Encinar, con material genético correspondiente a las líneas genéticas Torbiscal y Guadyerbas. Estas líneas, que se mantienen bajo la dirección de los doctores Luis Silió, Jaime Rodrigañez y Mª del Carmen Rodriguez Valdobinos.

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PUBLICACIONES

Libros y capítulos de libro García-Casado, P.; Pérez-Llano, B.; Gosálvez, J. (2006). Estudio del nivel de fragmentación del ADN en semen de verraco. Capitulo 8 del libro: Manual de Técnicas de Reproducción Asistida en Porcino. Editado por la Universitat de Girona

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FISIOLOGIA Y TECNOLOGÍAS DE LA REPRODUCCIÓN EN PEQUEÑOS RUMIANTES

COMPONENTES Cocero Oviedo, Maria Jesús Investigador A2 Gómez Brunet, Amelia Investigador A2 González de Bulnes López, Antonio Investigador López Sebastián, Antonio Investigador A1 Santiago Moreno, Julián Investigador Toledano Díaz, Adolfo Becario predoctoral Correo electrónico: alopezs@inia.es

PRINCIPALES LÍNEAS DE I+D+I

• Factores medioambientales en la expresión de caracteres reproductivos y caracteres sexuales secundarios en rumiantes silvestres.

• Métodos alternativos para la sincronización de celos y ovulaciones y uso de la inseminación artificial sistemática

• Tecnologías de obtención y conservación de células espermáticas en rumiantes silvestres.

• Efectos reproductivos de sustancias xenobióticas • Estimulación ovárica, producción y conservación de embriones • Conservación de recursos zoogenéticos

PROYECTOS Código y título: RTA04-00001. Adaptación y aplicación de las técnicas de superovulación para la producción y conservación de embriones de las razas Rubia del Molar y Negra de Colmenar. Entidad financiadora: INIA Duración: 2004-2006 Investigador responsable: González de Bulnes López, Antonio Código y título: AGL2004-03439. Tecnologías reproductivas y control endocrino del desarrollo del trofeo para la conservación y gestión de la cabra montés (Capra pyrenaica hispanica) como recurso cinegético renovable. Entidad financiadora: Plan Nacional I+D+I Duración: 2004-2007 Investigador responsable: Santiago Moreno, Julián

CONVENIOS Código y título: CC04-010. Adaptación y aplicación de las técnicas de superovulación para la producción y conservación de embriones de las razas Rubia del Molar y Negra de Colmenar. Entidad financiadora: Comunidad de Madrid Duración: 2005-2008 Investigador responsable: González de Bulnes López, Antonio

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Código y título: CC05-012. Convenio para la creación de un Banco de Recursos Zoogenéticos de Cabra Montés. Entidad financiadora: Junta de Andalucía Duración: 2005-2007 Investigador responsable: González de Bulnes López, Antonio

PARTICIPACIÓN EN PROYECTOS LIDERADOS POR OTRAS INSTITUCIONES Título: Efecto de la expresión génica materna sobre la supervivencia embrionaria peri-implantacional en ovejas sometidas a distintos tratamientos de sincronización del celo.Entidad financiadora: CICYT Duración: 2005-2007 Investigador responsable: Flores Landeira, Juana M. Título del proyecto: Seminario virtual: Información sobre medicamentos veterinarios generada por la EMEA y la AEMPS. Entidad financiadora: UCM Duración: 2006 Investigador responsable: Encinas Cerezo, Teresa Título del proyecto: CO3-234. Investigación para la puesta a punto del esquema de selección de la raza caprina Malagueña: desarrollo de las técnicas de Inseminación Artificial (IA) y de la valoración genética de sementales Entidad financiadora: Junta de Andalucía Duración: 2004-2006 Investigador responsable: Micheo Puig, Juan Manuel Principales resultados: Se han abordado diferentes estudios encaminados a determinar la aplicabilidad, en ambas razas, de los protocolos de superovulación y obtención de embriones establecidos; el tercer y último objetivo del proyecto. El análisis de los resultados obtenidos en esta fase muestra que los rendimientos de los protocolos superovulatorios se encuentran afectados, en primer lugar, por un alto número de animales que no responden adecuadamente al tratamiento. Un segundo factor limitante viene determinado por el alto número de animales en que se observa respuesta ovulatoria a los tratamientos, pero la viabilidad de los embriones obtenidos es baja. Ambos condicionantes han sido descritos por otros grupos de investigación utilizando diferentes razas rústicas y suponen una dificultad añadida en los programas de conservación de recursos zoogenéticos. En marzo de 2006 se realiza un experimento, dentro de las actividades científicas de este proyecto, para valorar la viabilidad, en términos de animales nacidos vivos, de los embriones tras los procesos de congelación/descongelación a que deben ser sometidos en caso de creación y uso de un reservorio genético de ambas razas. Para ello, se llevó a cabo la selección de un grupo de hembras en las que se llevó a cabo la transferencia de embriones que habían sido recuperados de hembras elegidas como donantes e inseminadas mediante laparoscopia. El correcto desarrollo de la gestación se fue monitorizando mediante ecografía y después de cinco meses de gestación tuvo lugar el nacimiento de tres corderos, un macho y dos hembras. En la actualidad se están procesando datos referentes al seguimiento diario de la dinámica folicular y luteal, en 88 ovejas con ciclos estrales inducidos, bien mediante análogos de la prostaglandina, bien mediante progestágenos.

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Se ha elaborado el material didáctico y de consulta, publicado como Seminario Virtual en el “Campus Virtual” de la Universidad Complutense de Madrid. Los estudios relacionados con el control fotoperiódico y la regulación endocrina del crecimiento del cuerno en el muflón y en el macho montés han permitido establecer el papel preponderante del fotoperiodo en el control de las variaciones estacionales del crecimiento cornual de ambas especies, constatándose que la relación entre el crecimiento del cuerno y el incremento de las concentraciones plasmáticas de prolactina, durante la primavera, tienen una relación casual pero no causal. Igualmente, se ha puesto de manifiesto que el incremento de los niveles de secreción de testosterona no parece representar la principal señal endocrina responsable de la disminución del crecimiento del cuerno que acontece en el otoño, debiendo influir, en dicha ralentización, otros factores ambientales y endocrinos todavía no identificados. También en relación con el cuerno, hemos observado una estrecha relación entre la calidad morfométrica del mismo con las características cualitativas del esperma, lo que pone de manifiesto la importancia de la teoría de la competición espermática post-cópula en estas especies, cuyo comportamiento sexual está caracterizado por la poliginia. En el ámbito de las tecnologías reproductivas, se ha puesto a punto la metodología adecuada para la inseminación artificial de cabras monteses con células espermáticas epididimarias obtenidas postmortem. Esto ha llevado implícito estudios de criobiología básica y de adecuación de los diluyentes más apropiados para la criopreservación espermática. Concretamente, y mediante pruebas de inseminación heteróloga, se ha indicado que los diluyentes a base de tris, glucosa, ácido cítrico con bajas concentraciones de yema de huevo (6%) son los que mejores resultados de fertilidad aportan.

PUBLICACIONES Artículos en revistas SCI Ammoun, I.; Encinas T.; Veiga-Lopez, A.; Ros, J.M.; Contreras, I.; Gonzalez-Añover, P.; Cocero, M.J.; McNeilly, A.S.; Gonzalez-Bulnes, A. Effects of breed on kinetics of ovine FSH and ovarian response in superovulated sheep. Theriogenology 2006, 66: 896-905. Berlinguer, F., Gonzalez-Bulnes, A., Succu, S., Leoni, G., Veiga-Lopez, A., Mossa, F., Garcia-Garcia, R.M., Cocero, M.J., Naitana, S. GnRH antagonists enhance follicular growth in superovulated sheep but affect developmental competence of oocytes collected by ovum pick-up. Theriogenology. 2006, 65:1099-1109 Cueto, M.; Gibbons, A.; Alberio, R.; Taddeo, H.; Gonzalez-Bulnes, A. Timing of emergence of ovulatory follicles in polyovulatory goats. Animal Reproduction Science. 2006, 91: 275-284. Garcia R, Sanchez M, Letelier C, Garcia Palencia P, Sanchez B, Vilar M, Gonzalez-Bulnes A, Flores J. Changes in Fibroblast Growth Factor-2 in Ovine Follicle Development. Reproduction in Domestic Animals 2006, 41: 105.

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Garcia-Garcia, R.M., Dominguez, V., Gonzalez-Bulnes, A., Veiga-Lopez, A., Cocero, M.J. Effect of embryo developmental stage and culture conditions on number and quality of ovine in vitro produced blastocysts. Zygote. 2006, 14: 181-187 Garcia-Garcia, R.M., Gonzalez-Bulnes, A., Dominguez, V., Veiga-Lopez, A., Cocero, M.J. Survival of frozen-thawed sheep embryos cryopreserved at cleavage stages. Cryobiology 2006, 52: 108-113. Gonzalez Añover P, Gonzalez-Bulnes A, Veiga-Lopez A, Garcia-Garcia RM, McNeilly AS, Encinas T. Effects of growth hormone and gonadotrophin releasing hormone antagonists on ovarian follicle growth in sheep. Journal of Veterinary Pharmacology and Therapeutics 2006, 29: 373-377. Gonzalez-Bulnes, A., Souza, C.J.H., Scaramuzzi, R.J.; Campbell, B.K., Baird, D.T. Long-term suppression of reproductive function by a single dose of gonadotropin-releasing hormone antagonists in a sheep model. Fertility and Sterility 2006, 86: 1121-1128. Gonzalez-Bulnes, A.; Carrizosa, J.A.; Urrutia, B.; Lopez-Sebastian, A. Oestrous behaviour and development of preovulatory follicles in goats induced to ovulate using the male effect with and without progesterone priming. Reproduction, Fertility and Development, 2006, 18: 745–750. Veiga-Lopez, A., Dominguez, V., Cocero, M.J., McNeilly, A.S., Gonzalez-Bulnes, A. Stage of follicular wave at starting the FSH treatment modifies preovulatory events and subsequent embryo outputs in superovulated sheep. Reproductive Biology 2006, 6: 243-264. Veiga-Lopez, A., Gonzalez-Bulnes, A., Tresguerres, J.A.F., Dominguez, V., Ariznavarreta, C., Cocero, M.J. Causes, characteristics and consequences of anovulatory follicles in superovulated sheep. Domestic Animal Endocrinology 2006, 30: 76-87. Santiago-Moreno J, Toledano-Díaz A, Pulido-Pastor A, Gómez-Brunet A, López-Sebastián A. Birth of live Spanish ibex (Capra pyrenaica hispanica) derived by artificial insemination with epididymal spermatozoa retrieved after death. Theriogenology, 66(2):283-91, 2006 Santiago-Moreno J, A. Toledano-Díaz, A. Gómez-Brunet, A. López-Sebastián. Effect of constant-release implants of melatonin on horn growth in mouflon ram lambs. Folia Zoologica, 2006, 55(1): 15-18 Santiago-Moreno J, Toledano-Díaz A, Pulido-Pastor A, Dorado J, Gómez-Brunet A, López-Sebastián A. Effect of egg yolk concentration on cryopreserving Spanish ibex (Capra pyrenaica) epididymal spermatozoa. Theriogenology 66: 1219-1226, 2006 Santiago-Moreno J, A Gómez-Brunet, A Toledano-Díaz, R. Picazo, A. Gonzalez-Bulnes, and A López-Sebastián. Seasonal endocrine changes and breeding activity in Mediterranean wild ruminants. Reproduction in Domestic Animals 41 Suppl. 2: 72-81. 2006

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Gómez-Brunet A, J. Santiago-Moreno, V. Montoro, J. Garde, P. Pons , A. González-Bulnes, A. López-Sebastián. Reproductive performance and progesterone secretion in estrus-induced Manchega ewes treated with Human Chorionic Gonadotropin (hCG) at the time of artificial insemination. Small Ruminat Research (2006) Otros artículos Revista “Investigación, Innovación, Ciencia y Tecnología” (INIA), Nº 6, Primer semestre de 2006: Primera cabra montés nacida mediante inseminación artificial con esperma congelado obtenido post-mortem. P. 4. Nº Ponencias, comunicaciones y póster presentados/as y publicados en las actas: 20 Patentes Concesión del titulo de patente de invención, nº 200303053 “Método de inducción y sincronización de la ovulación para la inseminación artificial sistemática en ganado caprino”. Titular: INIA.

OTRAS ACTIVIDADES

Cursos Curso teórico-práctico sobre Inseminación Artificial por Laparoscopía en Ganado caprino. Instituto Nacional de Investigaciones Agrarias-Lara. Barquisimeto (Venezuela). Marzo 2006. Curso de Postgrado de Sincronización de ciclos e inseminación artificial en pequeños rumiantes. Universidad católica de Córdoba (Argentina). Agosto 2006. Curso de Extensión para Productores en Sincronización de ciclos e inseminación artificial en pequeños rumiantes. Universidad católica de Córdoba (Argentina). Agosto 2006. XXVII Curso Internacional de Reproducción Animal. Curso Monográfico de Doctorado “Fisiología Reproductiva de Ungulados Cinegéticos” (20 horas lectivas; 2 créditos): Programa de Doctorado “Biología y Tecnología de los Recursos Cinegéticos” (Curso académico 2005-06: Mención de Calidad ANECA). Elaboración del documento “Guía de Habilidades Prácticas”, para el desarrollo de estancias de formación del plan de estudios de la Facultad de Veterinaria de la Universidad de Córdoba, dentro de la especialidad de Reproducción Animal. (Curso académico: 2006/07). Servicios Invitación como experto. Ecole Nationale de Médicine Vétérinarie y Office de l´Élevage et des Pâturages. (Túnez). Ecografía transrectal para el seguimiento de la actividad reproductiva en ovinos. Supervisor de Formación. Agencia Internacional de Energía Atómica.

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Supervisor de Estudios de Doctorado. Universidad Central de Venezuela. Asesor Externo. Colegio de Postgraduados de Texcoco (México). Asesor Externo. Doctorado en Ciencias Agropecuarias. Universidad Autónoma de Yucatán (México). Tutorías Tutor del Programa de Doctorado en Ciencias Veterinarias. Universidad Austral de Chile. Organización de congresos Organizador del curso teórico-práctico sobre Inseminación Artificial por Laparoscopía en Ganado caprino. Instituto Nacional de Investigaciones Agrarias-Lara. Barquisimeto (Venezuela).

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REPRODUCCIÓN PORCINO

COMPONENTES Gómez Fidalgo, Ernesto Colaborador de I+D+I González de Bulnes López, Antonio Investigador Saíz Cidoncha, Fernando Investigador Sánchez Sánchez, Raúl Investigador Correo electrónico: raulss@inia.es

PRINCIPALES LÍNEAS DE I+D+I • Crioconservación de espermatozoides, creación de banco de semen en la

raza porcina Ibérica • Patrones y mecanismos de control del desarrollo folicular y la ovulación. • Identificación de reproductores porcinos hipoprolíficos, portadores de

translocaciones reciprocas. • Características reproductivas relacionadas con bienestar animal en

explotaciones porcinas.

PROYECTOS Código y título: RZ2004-00035-C03-01. Establecimiento y control de un banco de semen crioconservado de verracos Ibéricos. Entidad Financiadora: INIA Duración: 2005-2007 Investigador responsable: Sánchez Sánchez, Raúl Código y título: RTA04-00001. Adaptación y aplicación de las técnicas de superovulación para la producción y conservación de embriones de las razas Rubia del Molar y Negra de Colmenar. Entidad financiadora: INIA Duración: 2004-2006 Investigador responsable: González de Bulnes López, Antonio

CONVENIOS Código y título: CC03-066. Repercusión de las normas de bienestar animal, sobre la producción porcina, estudio de niveles de cortisol, parámetros reproductivos y costes de producción. Entidad Financiadora: CDTI-SAT Vallehermoso Duración: 2004-2006 Investigador responsable: Sánchez Sánchez, Raúl Código y título: CC06-015. Creación y conservación de un banco de semen de ganado porcino de raza Ibérica: Valoración de la capacidad reproductiva y control sanitario por técnicas moleculares. Entidad Financiadora: ITA de Castilla y León Duración: 2006-2008 Investigador responsable: Sánchez Sánchez, Raúl

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Código y título: CC04-010. Adaptación y aplicación de las técnicas de superovulación para la producción y conservación de embriones de las razas Rubia del Molar y Negra de Colmenar. Entidad financiadora: Comunidad de Madrid Duración: 2005-2008 Investigador responsable: González de Bulnes López, Antonio

CONTRATOS Código y título: CON05-010. Improvement of fertility in swine: Control of semen quality and animal welfare in artificial insemination centers. Entidad Financiadora: CDTI - Nutrivall, S.L.U. Duración: 2005-2007 Investigador responsable: Sánchez Sánchez, Raúl

PARTICIPACIÓN EN PROYECTOS LIDERADOS POR OTRAS INSTITUCIONES Título: Efecto de la expresión génica materna sobre la supervivencia embrionaria peri-implantacional en ovejas sometidas a distintos tratamientos de sincronización del celo. Entidad financiadora: CICYT Duración: 2005-2007 Investigador responsable: Flores Landeira, Juana M. Título del proyecto: Seminario virtual: Información sobre medicamentos veterinarios generada por la EMEA y la AEMPS. Entidad financiadora: UCM Duración: 2006 Investigador responsable: Encinas Cerezo, Teresa Principales resultados: Se ha contactado con explotaciones de cerdo Ibérico, que poseen verracos de distintas estirpes para utilizarlos como donantes del banco de semen. Se han conseguido 545 pajuelas de 0,5 ml de volumen y una concentración de 1 x 109 espermatozoides por pajuela. Se ha conseguido congelar dosis seminales de las siguientes estirpes de raza Ibérica: Retinto, Alentejano, Negro Lampiño, Entrepelao y Torbiscal. Para cuantificar el estrés de los animales, se han medido los niveles en suero sanguíneo de cortisol, albúmina, proteínas totales, y proteínas de fase aguda (Pig Map, y haptoglobina). Así mismo se valoraron los resultados reproductivos según la fase productiva de los siguientes trabajos: Repercusión en fertilidad y prolificidad, del agrupamiento de cerdas en parques desde la cuarta semana postcubrición hasta 7 días preparto, frente a cerdas en gestación que están alojadas en jaula individual. Diferencias de salida a celo en cerdas nulíparas y multíparas alojadas en jaulas de 1,2 m2, respecto a las alojadas colectivamente en parques con una superficie por cerda de 2,25 m2. Estudio global de parámetros reproductivos (Intervalo destete-cubrición, intervalo destete-cubrición fértil, fertilidad, prolificidad, peso medio de los lechones al

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nacimiento, lechones destetados) y económicos obtenidos en dos explotaciones con características diferentes en bienestar animal. Se ha identificado 2 reproductores porcinos machos, portadores de la translocación recíproca 1q-; 11p+ que han inducido un descenso en el tamaño de camada de 3,55 lechones. PUBLICACIONES Artículos en revistas SCI Ammoun, I.; Encinas T.; Veiga-Lopez, A.; Ros, J.M.; Contreras, I.; Gonzalez-Añover, P.; Cocero, M.J.; McNeilly, A.S.; Gonzalez-Bulnes, A. Effects of breed on kinetics of ovine FSH and ovarian response in superovulated sheep. Theriogenology 2006, 66: 896-905. Berlinguer, F., Gonzalez-Bulnes, A., Succu, S., Leoni, G., Veiga-Lopez, A., Mossa, F., Garcia-Garcia, R.M., Cocero, M.J., Naitana, S. GnRH antagonists enhance follicular growth in superovulated sheep but affect developmental competence of oocytes collected by ovum pick-up. Theriogenology. 2006, 65:1099-1109 Cueto, M.; Gibbons, A.; Alberio, R.; Taddeo, H.; Gonzalez-Bulnes, A. Timing of emergence of ovulatory follicles in polyovulatory goats. Animal Reproduction Science. 2006, 91: 275-284. Garcia R, Sanchez M, Letelier C, Garcia Palencia P, Sanchez B, Vilar M, Gonzalez-Bulnes A, Flores J. Changes in Fibroblast Growth Factor-2 in Ovine Follicle Development. Reproduction in Domestic Animals 2006, 41: 105. Garcia-Garcia, R.M., Dominguez, V., Gonzalez-Bulnes, A., Veiga-Lopez, A., Cocero, M.J. Effect of embryo developmental stage and culture conditions on number and quality of ovine in vitro produced blastocysts. Zygote. 2006, 14: 181-187 Garcia-Garcia, R.M., Gonzalez-Bulnes, A., Dominguez, V., Veiga-Lopez, A., Cocero, M.J. Survival of frozen-thawed sheep embryos cryopreserved at cleavage stages. Cryobiology 2006, 52: 108-113. Gonzalez Añover P, Gonzalez-Bulnes A, Veiga-Lopez A, Garcia-Garcia RM, McNeilly AS, Encinas T. Effects of growth hormone and gonadotrophin releasing hormone antagonists on ovarian follicle growth in sheep. Journal of Veterinary Pharmacology and Therapeutics 2006, 29: 373-377. Gonzalez-Bulnes, A., Souza, C.J.H., Scaramuzzi, R.J.; Campbell, B.K., Baird, D.T. Long-term suppression of reproductive function by a single dose of gonadotropin-releasing hormone antagonists in a sheep model. Fertility and Sterility 2006, 86: 1121-1128. Gonzalez-Bulnes, A.; Carrizosa, J.A.; Urrutia, B.; Lopez-Sebastian, A. Oestrous behaviour and development of preovulatory follicles in goats induced to ovulate using the male

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effect with and without progesterone priming.Reproduction, Fertility and Development, 2006, 18: 745–750. Santiago Moreno, J.; Gómez-Brunet, A.; Toledano-Díaz, A.; Picazo, R.A.; Gonzalez-Bulnes, A.; Lopez-Sebastián, A. Seasonal Endocrine Changes and Breeding Activity in Mediterranean Wild Ruminants. Reproduction in Domestic Animals 2006, 41: 72-81. Veiga-Lopez, A., Dominguez, V., Cocero, M.J., McNeilly, A.S., Gonzalez-Bulnes, A. Stage of follicular wave at starting the FSH treatment modifies preovulatory events and subsequent embryo outputs in superovulated sheep. Reproductive Biology 2006, 6: 243-264. Veiga-Lopez, A., Gonzalez-Bulnes, A., Tresguerres, J.A.F., Dominguez, V., Ariznavarreta, C., Cocero, M.J. Causes, characteristics and consequences of anovulatory follicles in superovulated sheep. Domestic Animal Endocrinology 2006, 30: 76-87. Otros artículos Sánchez, R. 2006. Conservación y mantenimiento de la raza ibérica: Creación de un banco de semen. Avances en tecnología porcina. Vol III/ Octubre 2006 Sánchez, R. (2006). Reducción del tamaño de camada en la cerda provocado por alteraciones en el cariotipo. 25 de octubre de 2006. 3tres3.com - Los expertos opinan. http://www.3tres3.com/opinion/ficha.php?id=1662 Sánchez, R. (2006). Estudio y control de la patología seminal en porcino. 13 de febrero de 2006. 3tres3.com - Los expertos opinan. http://www.3tres3.com/opinion/ficha.php?id=1451 Denaburski, J.; Sáiz Cidoncha, F.; Bak, T.; Matusevicius, P. (2006). Valor cárnico de novillas y de toros castrados retenidos en sujeción y en libertad antes del sacrificio. Producción Animal. 209.39-46. Libros y capítulos de libros Sánchez, R. (2006). Técnicas de inseminación artificial. Manual de Técnicas de Reproducción Asistida en Porcino Edit. Bonet, S.; Martínez, E.; Rodriguez, J. y Barrera, X. Universidad de Girona ISBN: 84-8458-241-8, pag.165-174. Sánchez, R. (2006). Técnicas de refrigeración de las dosis seminales. Manual de Técnicas de Reproducción Asistida en Porcino Edit. Bonet, S.; Martínez, E.; Rodriguez, J. y Barrera, X. Universidad de Girona ISBN: 84-8458-241-8, pag.175-183. Saíz-Cidoncha, F., de la Fuente, J. Editores del libro “Compendio de conferencias del XXIX Curso Internacional de Reproducción Animal: 5 capítulos. 43 apartados, 31 autores. 506 páginas. ISBN: 84-87316-50-6. Depósito legal M-43439-2006. Publicado por el Departamento de Publicaciones de la E.U.I.T.A. Saíz-Cidoncha, F. (2006). Aplicación del R.I.A. y del E.I.A. al control de la reproducción porcina. XXIX Curso Internacional de Reproducción Animal. ISBN: 84-87316-50-6.

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Depósito legal M-43439-2006. Publicado por el Departamento de Publicaciones de la E.U.I.T.A., pag. 99-106. Sánchez, R. (2006). Nuevas técnicas utilizadas en inseminación artificial. XXIX Curso Internacional de Reproducción Animal. ISBN: 84-87316-50-6. Depósito legal M-43439-2006. Publicado por el Departamento de Publicaciones de la E.U.I.T.A., pag. 145-149. Sánchez, R. (2006). Obtención de embriones porcinos in vitro. XXIX Curso Internacional de Reproducción Animal. ISBN: 84-87316-50-6. Depósito legal M-43439-2006. Publicado por el Departamento de Publicaciones de la E.U.I.T.A., pag. 157-161. Domenech, V. y Sánchez, R. (2006). Repercusión de reproductores con baja prolificidad, por alteraciones en su cariotipo. XXIX Curso Internacional de Reproducción Animal. ISBN: 84-87316-50-6. Depósito legal M-43439-2006. Publicado por el Departamento de Publicaciones de la E.U.I.T.A., pag. 135-144. González-Bulnes A. (2006). Patrones y mecanismos de control del desarrollo folicular y la ovulación en pequeños rumiantes. XXIX Curso Internacional de Reproducción Animal. ISBN: 84-87316-50-6. Depósito legal M-43439-2006. Publicado por el Departamento de Publicaciones de la E.U.I.T.A., pag. 1-13. González-Bulnes A. (2006). Factores endógenos y exógenos que afectan a la eficacia de protocolos de reproducción asistida. XXIX Curso Internacional de Reproducción Animal. ISBN: 84-87316-50-6. Depósito legal M-43439-2006. Publicado por el Departamento de Publicaciones de la E.U.I.T.A., pag. 53-71. Nº Ponencias, comunicaciones y póster presentados/as y publicados en las actas: 17

OTRAS ACTIVIDADES

Curso-Master impartidos XXIX Curso Internacional de Reproducción Animal. Noviembre 2006 Sánchez, R. Crioconservación de ovocitos y embriones. III Master Universitario “Biología y Tecnología de la Reproducción”. Universidad de Murcia. 13 de Marzo 2006 Sánchez, R. Manual de manipulación de embriones. III Master Universitario “Biología y Tecnología de la Reproducción”. Universidad de Murcia. 13 de Marzo 2006 Sánchez, R. Sesión práctica: Vitrificación de ovocitos y embriones. III Master Universitario “Biología y Tecnología de la Reproducción”. Universidad de Murcia. 14 de Marzo 2006 Sánchez, R. Variaciones cromosómicas estructurales. Citogenética en la especie porcina. Aplicaciones a la producción y reproducción animal. III Master Universitario “Biología y Tecnología de la Reproducción”. Universidad de Murcia. 17 de Mayo 2006.

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Sánchez, R. Sesión práctica: Observación microscópica de muestras de porcino con bandas G. Estudio de cariotipos en la especie porcina. III Master Universitario “Biología y Tecnología de la Reproducción”. Universidad de Murcia. 17 de Mayo 2006. Gómez Fidalgo, E. 2006. Estudio de bienestar animal en porcino y su repercusión sobre la producción.Diploma de Estudios Avanzados (DEA) en ciencias veterinarias. Facultad de Veterinaria. Universidad Complutense de Madrid. González-Bulnes A. Curso teórico-práctico sobre Inseminación Artificial por Laparoscopía en Ganado caprino. Instituto Nacional de Investigaciones Agrarias-Lara. Barquisimeto (Venezuela). Marzo 2006. González-Bulnes A. Curso de Postgrado de Sincronización de ciclos e inseminación artificial en pequeños rumiantes. Universidad católica de Córdoba (Argentina). Agosto 2006. González-Bulnes A. Curso de Extensión para Productores en Sincronización de ciclos e inseminación artificial en pequeños rumiantes. Universidad católica de Córdoba (Argentina). Agosto 2006. Servicios González-Bulnes A. Invitación como experto. Ecole Nationale de Médicine Vétérinarie y Office de l´Élevage et des Pâturages. (Túnez). Ecografía transrectal para el seguimiento de la actividad reproductiva en ovinos. González-Bulnes A. Supervisor de Formación. Agencia Internacional de Energía Atómica. González-Bulnes A. Supervisor de Estudios de Doctorado. Universidad Central de Venezuela. González-Bulnes A. Tutor. Programa de Doctorado en Ciencias Veterinarias. Universidad Austral de Chile. González-Bulnes A. Asesor Externo. Colegio de Postgraduados de Texcoco (México). González-Bulnes A. Asesor Externo. Doctorado en Ciencias Agropecuarias. Universidad Autónoma de Yucatán (México). Organización de congresos Saíz-Cidoncha, F. 2006. Coordinador del XXIX Curso Internacional de Reproducción Animal González-Bulnes A. Organizador del Curso teórico-práctico sobre Inseminación Artificial por Laparoscopía en Ganado caprino. Instituto Nacional de Investigaciones Agrarias-Lara. Barquisimeto (Venezuela).

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Títulos conseguidos Sánchez, R. Homologación de la formación para la categoría C de acuerdo con la Disposición transitoria tercera del Real Decreto 1201/2005, de 10 de octubre, sobre protección de los animales utilizado para experimentación y otros fines científicos. Sánchez, R. Homologación de la formación para la categoría D1 de acuerdo con la Disposición transitoria tercera del Real Decreto 1201/2005, de 10 de octubre, sobre protección de los animales utilizado para experimentación y otros fines científicos.

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