Seguridad de productos biológicos y biotecnológicos

VII Encuentro Internacional de FarmacovigilanciaVII Encuentro Internacional de Farmacovigilancia

Gabriela Delgado M.Departamento de Farmacia

Grupo de Investigación en Inmunotoxicología

BIOLOGICOS:BIOLOGICOS: DERIVADOS-RELACIONADOS

HUMANOS

CO

MP

LICA

CIO

NE

S: A

GU

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NIC

AS

: INM

UN

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GIC

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AS

1. HEMATIES

2. PLAQUETAS

3. PLASMA Y DERIVADOS

1.Plasma fresco congelado2. Crioprecipitado3. Albúmina humana4. Inmunoglobulinas5. Factores de coagulación

ANIMALES

MICROORGANISMOS

CO

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NIC

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INM

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OLO

GIC

AS1. Antitoxina

2. Gamaglobulina3. Suero hiperinmune4. Alergenos

4. SISTEMAS CELULARES1. Células madre2. Células dendríticas

PLANTAS

1. Alergenos

2. Vacunas

Alergenos

1. Toxoides2. Vivas atenuadas3. Inactivas4. Sintéticas

BIOTECNOLÓGICOSBIOTECNOLÓGICOS

ADN RECOMBINANTE

1. CITOQUINAS

2. ENZIMAS

1. Interferones2. Interleuquinas

1. Altaplase2. Dornasa alfa3. Imiglucerasa

ADN RECOMBINANTE

HIBRIDOMAS

TERAPIA GENICA

3. HORMONAS1. Insulina2. Eritropoyetina alfa3. Hormona de crecimiento

4. FACTORES DE COAGULACIÓN

Anticuerpos monoclonales

No Inmunogenicidad

Inmunogenicidad irrelevante

Efectos sobre la dupla Eficacia/Seguridad

Reducción de la eficacia terapéutica

Reacciones adversas leves a moderadas

Reacciones adversas graves-letales

“FARMACOLOGIA” DE LAS PROTEINASTERAPEUTICAS

Eficacia/Seguridad

Macromoléculas: ADME

Degradación: Proteasas

Inestabilidad: Cambios estructuralesEficacia/Seguridad Inestabilidad: Cambios estructurales

Similitud proteínas endógenas

Complejidad tridimensional

INMUNOGENICIDAD

Proteínas cumplen con las condiciones para ser un b uen antígeno

Más masa: Mayor probabilidad de epítopes

Cambios post traduccionales: Glicosilación/Pegilación

Excipientes-Estabilidad

Agregados. Cambios enzimáticos

Contaminantes

Producción controlada: Indetectables modificaciones a este nivel, son relevantes en la inmunogenicidad del producto

Reconocimiento del complejo péptido-HLA por el TCR de los Linfocitos T

Receptor TCR

Residuo del péptido en contacto con el TCR

Residuo polimórfico

CMH

PéptidoResiduo polimórficodel TCR

Residuo de anclaje delpéptido

Bolsillo del CMH

Parám

etros críticos para la evaluación de un

Biosim

ilarANALISIS BASICO

1. Verificación del contenido y proceso de manufact ura2. Estudio de la actividad biológica3. Integridad fisico-química4. Estudios de estabilidad5. Análisis de integridad

BIOEQUIVALENCIA

EFICACIA Y SEGURIDAD1. Pureza

Parám

etros críticos para la evaluación de un

Biosim

ilar

EFICACIA Y SEGURIDAD

INMUNOGENICIDADPROCESO DE PRODUCCION

FARMACOVIGILANCIA

2. Estructura molecular3. Condiciones de almacenamiento4. Formulación5. Excipientes6. Productos diméricos y de oxidación1. Edad2. Haplotipo HLA3. Cantidad y calidad de proteína endógena4. Vía de administración

FACTORESEnfermedad de baseBackground genéticoStatus inmunológicoTerapia inmunomoduladoraEsquema de dosificación

Proceso de manufacturaFormulaciónFormulaciónCaracterísticas de estabilidad.

** Resumen de la inmunogenicidad en ensayos clínicos

Dependiendo del potencial inmunogénico conocido y de la complejidad de la enfermedad, datos relacionados con el grado de inmunogenicidad deberán ser proporcionados antes de la aprobación. Análisis de inmunogenicidad sistémica, pueden ser incluidos en el plan de manejo de riesgo

Factor paciente-enfermedad:

-Factores genéticos que modulan la RI: Polimorfismo alélico MHC,afinidad estabilidad MHC-proteína, genes que codifican para la respuestaT helper. Puede presentarse aún si la secuencia es humana.-Factores relacionados con un defecto en los genes: Si la terapia se usapara sustituir una proteína, se puede presentar tolerancia inmunológica.-Edad: Si el uso de la proteína es indicado en niños, los ensayos deimunogenicidad deben realizarse en este grupo de edad-Relacionados con la enfermedad: La inmunogenicidad debe ser-Relacionados con la enfermedad: La inmunogenicidad debe serestudiada de forma separada y particular para cada enfermedad, comoparte de los estudios clínicos.-Tratamientos concomitantes: La RI se ve reducida cuando se administraninmunosupresores concomitantemente, por ende se debe evaluar enausencia de la otra terapia.-Duración, vía de administración, modalidad terapéutica. Endovenososmenos inmunogénicos que los subcutáneos o intramusculares. Los tto acorto plazo y administrados continuamente son menos inmunogénicosque los de larga duración ó los administrados de forma intermitente.Exposición a otros productos similares o relacionados. Genera Abs conreactividad cruzada ó memoria celular.

Factor paciente-enfermedad:

-Factores de riesgo de inmunogenicidad relacionados con elproducto. Origen y naturaleza del principio activo (Homologíaestructural, modificaciones post-translacionales), modificación dela proteína nativa (pegilación), impurezas y contaminantes yformulación.-Estructura proteica: La RI puede generarse por cambios en lasecuencia, estructura, degradación/modificación física, química,enzimática (deamidación, oxidación, sulfatación en el proceso deproducción o en el almacenamiento.-Formulación: Debe garantizar la conformación nativa de laproteína terapéutica.-Agregación y formación de aductos: Pueden dar lugar a nuevosepítopes.-Impurezas y contaminantes: Pueden actuar como adyuvantes

NECESIDAD DE UNA DENOMINACIONCOLOMCOLOMBIABIANANA UNIFICADA PARA ESTOSPRODUCTOS :

EMA: BIOSIMILARFDA: FOLLOW ONCANADA: ENTRADA SUBSECUENTEWHO: PRODUCTO BIOTERAPEUTICO SIMILAR

-DISTINTA DE LA DE LOS GENERICOS

-ESTUDIOS DE COMPARABILIDAD, CALIDAD,EFICACIA Y SEGURIDAD

-ESTUDIOS CLINICOS DE EQUIVALENCIA O NO-ESTUDIOS CLINICOS DE EQUIVALENCIA O NOINFERIORIDAD

-LA INMUNOGENICIDAD DEBE SERINVESTIGADA Y VALORADA

ESTOS PRODUCTOS NO SONGENÉRICOS, NO SE GARANTIZA CONSÓLO CARACTERIZACIÓN FÍSICOSÓLO CARACTERIZACIÓN FÍSICOQUÍMICA, QUE EL SIMILAR SEAINTERCAMBIABLE

LOS ESTUDIOS CLÍNICOS DE NOINFERIORIDAD SE BASAN ENMETODOLOGÍAS ESTADÍSTICAS QUEBUSCAN ESTABLECER LABUSCAN ESTABLECER LABIOSIMILARIDAD DEL EFECTO DELPRODUCTO.

A NIVEL DEL PRODUCTO, ESTE DEBE TENERUN REGISTRO, ADJUNTAR UN CERTIFICADODE BUENAS PRACTICAS DE MANUFACTURA(PRÁCTICAS DE FABRICACIÓN Y CONTROLESASÍ SEAN DE LA CASA MATRIZ).DECLARACIÓN DE ORIGEN DEL PRODUCTODECLARACIÓN DE ORIGEN DEL PRODUCTOTERMINADO ASI COMO DEL INSUMOFARMACÉUTICO ACTIVO, EL PROTOCOLO DEANÁLISIS OFICIAL (PROVEEDOR TOMA UNAMUESTRA Y SE ANALZA CON LOS PATRONESFARMACOTÉCNICOS).

LAS PROPIEDADES FÍSICO QUÍMICASPUEDEN SER DETERMINADAS PORMEDIO DE LAS MEDICIONES DEL PESOMOLECULAR, DEL PATRÓN DEMOLECULAR, DEL PATRÓN DEISOFORMAS (GLICOFORMAS), DELCOEFICIENTE DE EXTINSIÓN (ESPECTROVISIBLE, UV), DEL PATRÓNELECTROFORÉTICO Y DE LAESTRUCTURA TRIDIMENSIONAL.

1.HPLC: CON DERIVATIZACIÓN DEAMINOÁCIDOS CON AGENTESFLUORESCENTES.

2. CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA

3. ESPECTROMETRÍA DE MASAS

4. ANÁLISIS DE LA SECUENCIA FINAL[ALTERNATIVAS COMO LA SECUENCIASEÑAL, ANÁLISIS PÉPTIDO-PÉPTIDO,PUENTES DISULFURO, ESTRUCTURA DECARBOHIDRATOS (DERIVADA DELCARBOHIDRATOS (DERIVADA DELANALISIS DE MASAS)].

5. RESONANCIA MAGNÉTICA,ESTRUCTURA DE ALTO ORDEN(MACROESTRUCTURA PROTEICA).

A NIVEL DE LA ACTIVIDAD BIOLÓGICA, SEDEBE ESTABLECER LA POTENCIA DELPRODUCTO, REPRESENTADA ENUNIDADES DE ACTIVIDAD (POR DOSISUNIDADES DE ACTIVIDAD (POR DOSISPOR MILIGRAMO DE PRODUCTO), SEDEBEN PLANEAR BIOENSAYOS PARAESTABLECER DOSIS.

SI NO HAY REGLAMENTACIÓN NO SEPUEDEN OTORGAR REGISTROS (SEDEBE SUSPENDER LA ENTREGA DEREGISTROS Y EVALUARSE LA SITUCIÓNREGISTROS Y EVALUARSE LA SITUCIÓNDE AQUELLOS QUE YA ESTÁNREGISTRADOS Y HAN SIDOINTRODUCIDOS EN EL MERCADO).

TODAS LAS SOLICITUDES DE REGISTRODEBEN ENTREGAR UN PLAN DE MANEJODE RIESGO EN UN PROGRAMA DEFARMACOVIGILANCIA ACTIVA.

INCLUIR INMUNOGENICIDAD, VALORANDOMAS ALLA DE LA PRODUCCIÓN DEANTICUERPOS

GRACIASGRACIAS

Universidad Nacional de ColombiaGrupo de Investigación en Inmunotoxicología (Código Colciencias COL0068495)

(lgdelgadom@unal.edu.co)Departamento de Farmacia

GRACIASGRACIAS

Reconocimiento del complejo péptido-HLA por el TCR de los Linfocitos T

Receptor TCR

Residuo del péptido en contacto con el TCR

Residuo polimórfico

CMH

PéptidoResiduo polimórficodel TCR

Residuo de anclaje delpéptido

Bolsillo del CMH

“FARMACOLOGIA” DE LAS PROTEINASTERAPEUTICAS

Eficacia/Seguridad

Macromoléculas: ADME

Degradación: Proteasas

Inestabilidad: Cambios estructuralesEficacia/Seguridad Inestabilidad: Cambios estructurales

Similitud proteínas endógenas

Complejidad tridimensional

INMUNOGENICIDAD

Proteínas cumplen con las condiciones para ser un b uen antígeno

Más masa: Mayor probabilidad de epítopes

Cambios post traduccionales: Glicosilación/Pegilación

Excipientes-Estabilidad

Agregados. Cambios enzimáticos

Contaminantes

Producción controlada: Indetectables modificaciones a este nivel, son relevantes en la inmunogenicidad del producto

Factores adicionales

ENFERMEDAD

PACIENTES

PROTOCOLO

Efectos sobre Eficacia

Farmacodinámica: Ab se unen a la zona activa del producto. NEUTRALIZANTES

Farmacocinética: Ab NO se unen a la zona activa del producto. AFECTA SU CINETICA

Efectos sobre Seguridad

INSULINA

Preparaciones derivadas de insulina animal

Insulina humana recombinante

Análogos de la insulina

Preparaciones

Insulina inhalada

Mecanismos inmunológicos

Diferencias en la secuencia e impurezas

Formulación y agregados

Vía de administraciónVía de administración

Efecto dosis-respuesta

Factores relacionados con el paciente

Caracterización de los anticuerpos anti insulina

Cuantificación por ELISA

Subclases de inmunoglobulinas

Afinidad de anticuerpos: Radioligand binding

Es la parte de la

toxicología que estudia el efecto de los

xenobióticos sobre el sistema inmune

Es la parte de la

toxicología que estudia el efecto de los

xenobióticos sobre el sistema inmunexenobióticos sobre el sistema inmunexenobióticos sobre el sistema inmune

Dean, 1970

1977. Jeff Vos. El primero en reportar una lista dexenobióticos con capacidad de alterar la reactividadinmune en animales de laboratorio.

1987. Mike Luster y Jack Dean. Establecen laimportancia de la IMT como una sub-disciplina de laimportancia de la IMT como una sub-disciplina de latoxicología.

1995. Se incorpora de forma mandatoria el estudiode la IMT para el diseño, desarrollo y producción dexenobióticos.

De Jong, 2007

Dosis

NOAEL: “No observed adverse effect level”

LOAEL: “Lowest observed adverse effect level”

De Jong, 2007ADVERSO

Evolution of Immunotoxicology. (A) An excerpt from a report published bythe Environmental Defense Fund in 1997 entitled, ''Toxic Ignorance'' [1], whichdepicted the level of ''basic'' health testing of chemicals in the United States. (B) Asummary of the types of immunotoxicological tests conducted by thepharmaceutical industry in 1998 [3].

Holsapple, 2007

Descripción de fenómenos asociados con Descripción de fenómenos asociados con InmunotoxicidadInmunotoxicidad

Inmunosupresión: Una reducción en la función del sistema inmune,expresada por ejemplo en una susceptibilidad a agentes infe cciosos o a laaparición de neoplasias.

Inmunoestimulación : Un incremento en la actividad del sistema inmune que

De Jong, 2007

Inmunoestimulación : Un incremento en la actividad del sistema inmune quepuede resultar en un incremento en la respuesta

Hipersensibilidad: Un incremento en la respuesta inmune específica a unxenobiótico que generalmente involucra un daño a los tejido s

Autoinmunidad: Respuesta a auto-antígenos por una reactividadincrementada, por inmunoestimulación o por reacción frent e a antígenospropios alterados luego de la interacción de xenobióticos c on componentestisulares

RIESGO DE INDUCIR INMUNOTOXICIDAD

Exposición: Cantidad de sustancia química y tiempode interacción con el individuo y/o con el ambiente.

Primero , el efecto tóxico puede ser reversible y, en algunos casos no consideradobiológicamente adverso.biológicamente adverso.Segundo , con apropiada protección, todos las sustancias químicas pueden sermanejadas de forma segura.Tercero , la caracterización del riesgo incluye la identificación del impacto final enun marco incierto.Cuarto , el riesgo aceptable es la probabilidad de la generación de enfermedadque sería tolerada por un individuo ó un grupo de personas.

Holsapple, 2007

Holsapple, 2007

Principios de la evaluación del riesgo en Inmunotox icología:1. Como interpretar la importancia de menor o moderar efectos inmunotóxicos en modelos animales en relación con evaluación del riesgo en humanos?2. Como integrar mejor la consideración de exposición con evaluación del riesgo en inmunotoxicología?3. Como diseñar estudios en humanos para evaluar el impacto sobre el sistema inmunológico dado que es la especie del mayor interés al contexto de evaluación de riesgo?

Perspectivas y limitaciones de la inmunotoxicología in vitro

Corsini, 2005

Métodos in vitro que también se emplean eninmunotoxicología in vitro:

1. Los materiales que necesitan biotransformación requeriríansistemas de cultivo especiales con características fisicoquímias(p. ej. la solubilidad) particulares considerando interferencias delmaterial con el sistema in vitro. Ej: suero, los efectos de vehículousado en la solubilización del compuesto sobre células, y lasustancia química que actúa sobre las células.2. Sistemas in vitro no consideran las interacciones decomponentes diferentes celulares, siendo difícil de reproducir laintegridad del sistema inmunológico in vitro.3. Sistemas in vitro no pueden representar interacciones neuro-de-la-endocrina con el sistema inmunológico.

Corsini, 2005

Muchos avances tienen que ser alcanzados antes de quepruebas in vitro puedan sustituir el uso de animales eninmunotoxicología.

Se espera que los esfuerzos y recursos dedicados el desarrollode alternativas in vitro en inmunotoxicología permitan reducir eluso de modelos animales.

Corsini, 2005

AUTOINMUNIDAD

Dos tipos diferentes de reacciones autoinmunes han sidodescritas: Las “inducidas " o las “de novo " luego de laexposición a medicamentos.

Reacciones autoinmunes pueden ser reveladas o aceleradas porel tratamiento farmacológico produciendo inmunoestimulación oinmunosupresión selectiva en pacientes con unaPREDISPOSICIÓN GENÉTICA ó con una ENFERMEDADAUTOINMUNE INACTIVA.

Ravel, 2005

1. Interrupción de tolerancia central: Causa la liberación de numerososlinfocitos autoreactivos a periferia. La inhibición de cél ulas T anergia víala interrupción de tolerancia central parece ser la respons able.

2. Interrupción de tolerancia periférica:

2.1. Cambios de estructura de la cromatina : La expresión antigénica de2.1. Cambios de estructura de la cromatina : La expresión antigénica demembrana y receptores citoquinas sobre células inmunes pue de serafectada por productos farmacéuticos. Esto puede causar ca mbios de lainducción de anergia y la salida de células autoreactivas qu e conducen arespuestas inmunes hacia antígenos no inmunogénicos. La me tilación deADN, acetilación de histonas y la estructura de cromatina en tre otros,puede ser alterada por productos farmacéuticos humanos.

Ravel, 2005

SI: Mercado

LUPUS Post-tratamiento Reversión demanifestaciones

SI: Mercado

NO: Sale del Mercado

Antígenos Alterados por Fármacos (AAF)

AUTO-ANTICUERPOS-LUPUS

Antígenos Alterados por Fármacos (AAF)

Interacción -Independiente de la estructura-Similares efectos adversos in vivo(propiedades reactivas)

Procainamida

Hepatocito(MMH)

Procainamida-Hidroxilamina In vitro

ProcainamidaHidralazinaIsoniazida Hepatocito

In vivo

Hepatocito

Metabolismo oxidativo

Neutrófilo

Mieloperoxidasa

Procainamida-Hidroxilamina

-Citotóxico (µM)-Interferencia en el ciclo REDOX:Muerte celular-Disminución de E-Ruptura de DNA.-Muerte prematura___catabolismo decromatina en la apoptosis__Formasanormales de cromatina(INMUNOGENICAS: PERDIDA DETOLERANCIA )

2.2 Cambios en la estructura del antígeno ó la hipótesis delhapteno: Como el sistema inmunológico normalmente reconocemoléculas más grandes a 1 kDa, la mayor parte de xenobióticosno son espontáneamente inmunogénicos. Al combinarse conmacromoléculas endógenas, como proteínas, ellos puedengenerar haptenos. El complejo de hapteno-macromolécula espresentado en el contexto de moléculas del complejo mayor de

Ravel, 2005

presentado en el contexto de moléculas del complejo mayor dehistocompatibilidad (MHC) como un antígeno no propio, que esentonces reconocido por células de T con la subsecuenteinducción de una respuesta inmune y el potencial de causar undaño autoinmune o reacciones de hipersensibilidad.

2.3 Cambios en la regulación de la respuesta inmune: Célulasde T CD4+CD25 + juegan un papel regulador de respuestasinmunes, incluyendo respuestas autoinmunes. Su papel enenfermedades autoinmunes inducidas por xenobióticos ha sidodemostrada en varios modelos animales. Mientras queprocainamida y el cloruro mercúrico (HgCl2) inducen la

Ravel, 2005

procainamida y el cloruro mercúrico (HgCl2) inducen laproducción de autoanticuerpos antinucleares (ANA) en ratones, latransferencia de T CD4+CD25 + las células de ratones noexpuestos inhiben la reacción.

2.4 Papel del sistema neuroendocrino: Enfermedadesautoinmunes son más frecuentes en mujeres que hombres.Hormonas sexuales están implicadas en la inducción deautoinmunidad vía mecanismos como la interacción con proto-oncogenes, liberación de citoquinas, apoptosis, y moléculas deadherencia, que sugieren que xenobióticos afectan el equilibrio

Ravel, 2005

del sistema endocrino que contribuye con la generación deenfermedades autoinmunes. Se ha demostrado que losestrógenos favorecen la sensibilidad de ratones a miasteniagravis inducida experimentalmente.

2.5 Imitación molecular: Debido a semejanzas en la secuenciade microorganismos y antígenos humanos, se supone queepitopes microbianos podrían activar células de T autoreactivasespecíficas de antígenos aún con baja afinidad. Han propuestoeste mecanismo para explicar la correlación entre agentes

Ravel, 2005

este mecanismo para explicar la correlación entre agentesinfecciosos y autoinmunidad, en el marco del riesgo teórico paraenfermedades autoinmunes asociadas con procesos devacunación.

2.6 Respuesta inmune no específica : Este mecanismo tambiénllamado efecto “Bystander" tiene relación con la inmunogenicidadde los adyuvantes induciendo lesiones de tejido, estimulación dela producción local de citoquinas proinflamatorias y factores conuna actividad inmunomoduladora. La liberación de TNF-a, IL-1b yIL-6 como resultado del stress oxidativo y la producción de óxido

Ravel, 2005

IL-6 como resultado del stress oxidativo y la producción de óxidonítrico puede estimular la respuesta inmune específica contraautoantígenos vía moléculas y señales de co-estimulación comoCD40L sobre membranas de células T y CD40 sobre célulaspresentadoras de antígenos.

2.7 Liberación de antígenos encriptados: El oro (Au3 +) y lassales usadas como agentes antireumáticos pueden unirsecovalentemente con proteínas endógenas. Antígenossecuestrados o secretos que no han inducido tolerancia pueden

Ravel, 2005

secuestrados o secretos que no han inducido tolerancia puedenser liberados y presentados a células de T autoreactivas.

2.8 Respuesta inmune dirigida contra el fármaco: En estecaso, la respuesta inmune no es dirigida contra autoantígenos; esgenerada contra el medicamento mismo, o sus metabolitoscuando se unen a antígenos propios. La D-penicilamina se unecovalentemente a glóbulos rojos y la respuesta de anticuerpodirigida contra el metabolito induce la lisis del glóbulo rojo y laposterior anemia hemolítica autoinmune. Este mismo mecanismo

Ravel, 2005

posterior anemia hemolítica autoinmune. Este mismo mecanismopuede estar implicado en las trombocitopenias autoinmunes poradministración de quininas o sulfonamidas.

Enfermedades autoinmunes y farmacéuticos humanos

1. Productos farmacéuticos convencionales humanos: Sólopocos productos farmacéuticos convencionales han sidoasociados con reacciones autoinmunes en humanos. Hasta elmomento, pocas reacciones autoinmunes inducidas pormomento, pocas reacciones autoinmunes inducidas pormedicamentos han sido reproducidas en animales cuyo modeloclínico y biológico es generalmente bastante diferente delhumano.

Ravel, 2005

Descotes, 2003

Descotes, 2003

Ensayos de inmunotoxicidad sugeridos de acuerdo al tipo de compuesto con potencial farmacológico

Vía de administración/reportes de la molécula

Pruebas para la evaluación de inmunotoxicidad

Tópica Potencial de sensibilización dérmica: Test de maximización en cobayos (GPMT) ó Ensayo de linfo-nódulos locales (LLNA)

Por inhalación Potencial de sensibilización respiratoria

Evidencia de inmuno-supresión (en ensayos clínicos ó no clínicos) Estudios celulares funcionales

Fármaco con actividad anti-HIV Estudios celulares funcionales

Fármaco a ser empleado en mujeres embarazadas (asociación con inmuno-supresión)

Estudios celulares funcionales y estudios a nivel de toxicología reproductiva

Si el fármaco ó sus metabolitos son acumulados en órganos ó tejidos

inmunesEstudios celulares funcionales

Dean, 2004

Medula Ósea Análisis de los diversos tipos celulares en medul a ósea y distribución celular (solamente cuando se indican cambios en la celularidad)

Timo Celularidad de corteza y medula. Proporción relati va de corteza y medula (medición morfométrica).

Bazo Proporción relativa de eritrocitos y leucocitos en la pulpa. Presencia de folículos secundarios activados. Zonas marginales

De Jong, 2007

Presencia de folículos secundarios activados. Zonas marginales alrededor de los folículos. Celularidad.

Nódulos linfoides Presencia de folículos primarios y secundarios acti vados. Tamaño de la paracorteza (Area de células T). Venul as endoteliales. Presencia de las células plasmáticas.

Sangre Recuento y diferenciación de leucocitos periféricos .

Órganos linfoides (Presencia de procesos) Inflamación (PMN), Necrosis/apoptosis, Fibrosis, He morragias,

Lipidosis, Granuloma.

Ensayos no funcionales: Peso de órganos, histopatología, niveles séricos deinmunoglobulinas (IgM, IgG, IgE, IgA), Análisis de leucoci tos (Recuento total ydiferenciación), evaluación de médula ósea (celularidad y diferenciación), Célulasesplénicas (Número total y análisis por citometría de flujo ), lavado broncoalveolar(diferenciación celular), células de la cavidad peritonea l (diferenciación celular).

De Jong, 2007

Ensayos funcionales: Actividad de macrófagos, actividad celular de células NK en bazo óperitoneo, respuesta humoral (Acs) antígeno-específica ( Ags dependientes de respuestacelular T como TT y Ovalbúmina, Respuesta a mitógenos de espl enocitos (Células T:ConA, PHA; Células B: LPS), cultivo mixto de linfocitos para actividad citotóxica, análisisde la respuesta de hipersensibilidad retardada frente a ant ígenos intracelulares comoListeria monocytogenes ó BCG, modelos de resistencia del hospedero (Bacteriano:Listeria monocytogenes , Streptococcus pneumoniae , Viral: Citomegalovirus de rata, virusde Influenza, Parasitaro : Trichinella spiralis , Plasmodium , Tumoral : Melanoma B16,

De Jong, 2007

de Influenza, Parasitaro : Trichinella spiralis , Plasmodium , Tumoral : Melanoma B16,Carcinoma PYB6.

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Universidad Nacional de ColombiaGrupo de Investigación en Inmunotoxicología (Código Colciencias COL0068495)

(lgdelgadom@unal.edu.co)Departamento de Farmacia

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