UNIVERSIDAD AUTNOMA BENITO

JUREZ DE OAXACA

FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS

Laboratorio de Microbiologa general

REPORTE DE PRCTICA #5

siembra en medio liquido

EQUIPO N 4

NOMBRE DE LOS INTEGRANTES:

Hernndez Prez Pilar

Herrera Blas Bertha

Ruiz Blas Sarai

Ruiz Prez ngel

Oaxaca de Jurez, a 11 de mayo del 2015

INTRODUCCION. La supervivencia y crecimiento continuo de microorganismos depende de un

suministro adecuado de nutrientes y un ambiente favorable al crecimiento. Como

nutrientes, la mayora de los microorganismos necesita de sustancias solubles de

bajo peso molecular que se derivan frecuentemente de la degradacin enzimtica

de nutrientes complejos. Una solucin conteniendo estos nutrientes es un medio de

cultivo. Bsicamente, los medios de cultivo son lquidos, solidos o semislidos. Un

medio liquido carece de un agente solidificante y se denomina caldo de cultivo.

OBJETIVOS.

Identificar y describir correctamente las caractersticas de un medio liquido

Aplicar la tcnica adecuada para preparar el rea de trabajo y evitar

contaminaciones

Manipular adecuadamente los cultivos puros

FUNDAMENTO. Los microorganismos deben ser transferidos de un recipiente a otro, o de un cultivo

stock a diversos medios para mantenimiento y estudio. Una transferencia de dicho

tipo se llama subcultivo, y debe llevarse a cabo en condiciones estriles para evitar

contaminacin. Para realizar las transferencias se utilizan agujas o asas

bacteriolgicas, hechas de metal inerte como platino, e insertadas en un manubrio

de metal. Son muy duraderas y esterilizables incinerndolas en la porcin azul (la

ms caliente) de la llama de un mechero.

Para despus ser depositadas en el medio de cultivo liquido o tambin llamado

caldo nutritivo el cual contiene los nutrientes necesarios para la reproduccin de los

microorganismos y ser sometidos a condiciones favorables para su crecimiento y

posteriormente hacer la valoracin de estas.

MARCO TEORICO

Crecimiento bacteriano

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe

reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y

presin de oxgenos adecuados, as como un grado correcto de acidez o alcalinidad.

Colonia: es un aglomerado de clulas que se originan por la multiplicacin de una

nica clula y representa el crecimiento de una nica especie de microorganismo

(cultivo puro).

Medio de cultivo

Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento

necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante.

Clasificaciones de medios de cultivo

Una de ellas es segn su consistencia (lquido, slido y semislido).

Liquido: Un medio liquido carece de un agente solidificante y se denomina caldo

de cultivo.

Semislido: Un medio liquido carece de un agente solidificante y se denomina

caldo de cultivo.

Solido: El medio slido tiene la ventaja que sobre su superficie endurecida crecen

microorganismos que pueden ser aislados en colonias discretas usando tcnicas

especializadas.

En sta prctica nicamente nos enfocamos al medio de cultivo lquido.

stos medios se denominan caldos y contienen los nutrientes en solucin acuosa.

Un cultivo lquido puede ser transferido a travs de distintos dispositivos, el inoculo

se deposita dentro del caldo o medio lquido presentado un desarrollo microbiano

particular que se manifieste en la superficie o a travs de todo el lquido.

Utilizacin de medios de cultivo liquido

a) Cultivar los microorganismos y obtener grandes cantidades de los mismos o bien

la produccin de metabolitos especficos.

b) Estimular y promover la seleccin de algn o algunos microorganismos e impedir

que otros se multipliquen.

c) Identificar al microorganismo estudiado mediante pruebas bioqumicas.

Caldo nutritivo, caractersticas y composicin.

Medio de cultivo utilizado para propsitos generales, para el desarrollo de

microorganismos con escasos requerimientos nutricionales.

Su uso est descripto en muchos procedimientos para el anlisis de alimentos,

aguas y otros materiales de importancia sanitaria. Es un medio no selectivo, de

color mbar claro que contiene pluripeptona y extracto de carne que constituyen la

fuente de carbono y nitrgeno necesarios para el adecuado desarrollo bacteriano.

Siembra: La siembra de ste medio se realiza por inoculacin directa a la muestra

o del microorganismo en estudio.

Caractersticas a evaluar en un medio de cultivo lquido.

La morfologa de la colonia puede variar significativamente segn el medio en que

crezcan las bacterias. Para los medios lquidos se deben observar las siguientes

caractersticas macroscpicas:

1. Cantidad de desarrollo: escaso moderado o abundante

2.- Distribucin del desarrollo en el caldo: uniformemente distribuido (turbidez),

desarrollo confinado (nata o pelusa), peliculado, anillado o desarrollo que se

acumula como sedimento.

3.- Olor: ptrido, a frutas o aromtico o imperceptible

4.- Sedimento: Compacto, grumoso, granular o viscoso.

MATERIALES.

o Asas de platino

o Agua destilada

o Mechero

o Medio de cultivo (agar y

caldo nutritivo)

o Cepas microbiolgica

o Matraz Erlenmeyer

o Tubos de Ensaye

o Frasco de alcohol

MATERIAL DE APOYO

o Refrigerador

o Incubadora

o Esterilizador

o Balanzas granataria

METODOLOGIA.

Parte 1

PREPARACION DE MEDIOS

(Realizado por el equipo N1)

Se prepararon 25 tubos de ensaye con 4 ml de caldo nutritivo c/u.

Clculos

8 gr ___________________ 1000ml

0.8 gr_________________ 100 ml

1. Leer el instructivo del medio de cultivo (caldo nutritivo )

2. Pesar la cantidad adecuada (balanza calibrada )

3. Suspender el medio

4. Agregar medio de agua al matraz, moverlo y posteriormente agregar el otro

medio de agua destilada.

5. Calentar y/o hervir (mover suavemente hasta que la solucin se torne de un

color amarillo transparente).

6. Depositar 4 mil de caldo nutritivo en cada uno de los tubos y tapar con su

tapn.

7. Esterilizar la solucin a 121Cpor 15 minutos

8. Dejar enfriar

(Se guardaron los tubos para la siguiente sesin)

Parte 2

Siembra en medio liquido

1. Esterilizamos la zona a trabajar con benzal y encendimos los mecheros

de bunsen

2. Seleccionamos la colonia del cultivo bacteriano a utilizar

3. Tomamos el cultivo cerca de los mecheros

4. Tomamos el asa y esterilizamos con la flama

5. Enfriamos el asa en un borde del medio de cultivo y tomamos una asada de

la colonia seleccionada

6. Introducimos la asa en el tubo de caldo nutritivo sin tocar pared, agitamos y

retiramos el asa.

7. Flameamos el tapn, la boca del tubo y tapamos.

8. Posteriormente depositamos en la gradilla

9. Volvimos a flamear el asa de arillo para eliminar cualquier residuo de bacteria

adherida a ella.

10. Repetimos el procedimiento en los tres tubos de ensaye restantes.

METODOLOGIA GRAFICA.

Se pes o.8 gr de

caldo nutritivo Se verti en un matraz con el agua

destilada y se calent con el

mechero de bunsen

Se colocaron 4 ml en

cada tubo de ensaye.

Se esterilizo durante

15 minutos a 125c

Se seleccionamos la colonia

para la siembra, Tomamos el asa y

esterilizamos con la flama

del mechero.

Enfriamos el asa y

tomamos una muestra de

la colonia de bacterias

Introducimos dentro del

caldo nutritivo y agitamos.

Flameamos la boca del tubo, el

tapn y se tapan. Repitiendo

este procedimiento para los 3

tubos faltantes.

REPORTE DE RESULTADOS

Pilar Bertha Sara Angel

CRECIMIENTO

Superficie

Sedimento Se disgrega Se disgrega Se disgrega Se disgrega

Homogneo

COLOR ______ ________ ________ ________

OLOR No tiene No tiene No tiene No tiene

CANTIDAD DE

DESARROLLO

Abundante Abundante Moderado Escaso

ANEXOS

Cultivo en medio liquido

Habitualmente se realiza en tubos o en matraces. El crecimiento se puede

manifestar por enturbiamiento, por formacin de velo o pelcula, o por sedimento

Sedimento

CONCLUSIONES

El perfeccionamiento de la tcnica de siembra, los cuidados que se debe de tener

durante la siembra en medio lquido, es indispensables para obtener un cultivo

exitoso y as evitar su contaminacin y asegurar el crecimiento de la bacteria. Con

base a los resultados obtenidos y en la observacin de ellos se pudo observar las

caractersticas de siembra as como determinar de qu tipo de bacterias se trataba

segn en el lugar de crecimiento, es decir si son anaerobias estrictas, anaerobias

facultativas are tolerantes o microarofilas , en este caso resultaron ser anaerobias

estrictas ya que crecieron en el fondo del tubo de ensaye. (En los 4 tubos)

BIBLIOGRAFIA

BACTERIOLOGIA GENERAL: principios y prcticas de laboratorio. M:

Hernandez. Evelyn Rodrguez Cavallini . Editorial universidad de costa

rica. 2005.

Introduccion a la microbiologa. Tortora. Novena Edicion. Editorial

Panamericana, pp. 192-197.

Manual de prcticas de microbiologa bsica y microbiologa de

alimentos: programa de nutricin /Evangelina Olivas. Ciudad Jurez,

Chih. Universidad autnoma de ciudad Jurez. Departamento de ciencia