Ejemplo formato artculo

Determinacin cuantitativa de protenas solubles por el mtodo de biuret ngela Ruiz, Anglica Quiroz & Carlos Maje

Estudiantes Del V semestre de Ingeniera De Alimentos

Docente: Yudi Silva

Universidad De La Amazonia Avd. Circunvalar, Barrio Porvenir

Florencia -Caquet

Bioqumica

Abril 2015-------------------------------------------------------------------------------------------------------------Resumen: Para el estudio de la estructura de una protena, de la actividad de una enzima o el contenido protenico de un alimento, es necesario conocer cuantitativamente la concentracin de las protenas por tal razn en esta prctica se utiliz el mtodo de Biuret con el objetivo de conocer la concentracin de protena contenida en la clara de huevo, donde se realizo una curva estndar, al despejar la ecuacin la curva se obtuvo 130,14mg/ ml de albumina y en porcentaje se obtuvo 13%. Palabras claves: cuantificacin de protenas, Biuret, curva patrn, espectrofotometra. IntroduccinEstimar la concentracin de protena es necesario no solo en los laboratorios de investigacin, sino tambin en la industria alimenticia, farmacutica, y biotecnolgica en general. Existen muchos mtodos para la determinacin de protenas. Primitivamente, la cantidad de protenas se evaluaba midiendo la cantidad total de nitrgeno proteico, y teniendo en cuenta que este elemento representa aproximadamente el 16% del peso de una protena. Este era un mtodo largo y laborioso y con poca sensibilidad. La aparicin de mtodos calorimtricos ha permitido solventar estos dos inconvenientes. (Arellano & Duhalt, s.f)Entre los mtodos que se basan en la formacin de complejos colorimtricos entre las protenas y reactivos especficos se encuentran: el mtodo de Biuret, el mtodo de Lowry y el mtodo de Bradford. Tomado de: MANUAL PRCTICAS DE LABORATORIO DE BIOQUMICA

Los tres mtodos tienen como principio alguna reaccin qumica de los grupos alquilo o arilo de los diferentes aminocidos. El mtodo de Biuret es la tcnica ms simple para la determinacin de protenas solubles, las sustancias que contienen dos o ms enlaces peptdicos forman un complejo purpura-violeta con sales de cobre (II) alcalinas (figura 1). Es posible que el color se forme por la formacin de un ion coordinado, tetracuprico, con dos grupos amida adyacentes. El desarrollo del color es diferente para cada protena y su intensidad se puede determinar espectroscpicamente a 540nm. La cuantificacin de la protena se lleva acabo con una curva patrn, el principio establecido por la ley de Lambert Beer. Existen pocas interferencias en esta determinacin; entre ellas, la presencia del ion amonio altera el desarrollo del color; algunos pigmentos absorben a la misma longitud de onda, algunos lpidos y carbohidratos son capaces de formar complejos con el ion coordinado. (Bolaos, Giselle, & Herrera, 2003)

El espectrofotmetro que se va a manejar en la prctica es del tipo convencional de haz simple. Un esquema del mismo se presenta a continuacin:

Figura 2: Esquema de un espectrofotmetro convencional de haz simpleEl objetivos a realizar en esta prctica es determinar el porcentaje de albumina obtenida en la clara de huevo por el mtodo de biuret. Materiales y mtodos Los materiales utilizados en esta prctica fueron: 8 tubos de ensayo, una gradilla, un beaker, un agitador el espectrofotmetro, dos pipetas.

Reactivos: solucin de albumina de huevo, reactivo de Biuret, NaCl.La prueba consisti en: primero, en preparar la muestra con solucin de albumina de huevo, luego se rotularon 9 tubos de ensayo y se procedi de la siguiente manera: Un tubo se rotulo como blanco, y el resto se rotularon con nmeros de 1 al 8; al tubo rotulado como blanco se le agrego 2.0 ml de agua y 4.0 ml del reactiv de biuret, al tubo 1 se la agrego, 0.2 ml de patrn de albumina, 1,8 ml de agua y 4.0 del reactiv de biuret, al tubo 2 se le agrego 0.4 ml de patrn de albumina, 1.6 ml de agua y 4.0 del reactiv de biuret, al tubo 3 se le agrego 0.6 ml de patrn de albumina, 1,4 ml de agua y 4.0 del reactiv de biuret, al tubo 4 se le agrego 0.8 ml de patrn de albumina, 1,2 ml de agua y 4.0 del reactiv de biuret, al tubo 5 se le agrego 1.0 ml de patrn de albumina, 0,5 ml de muestra, 1,5 ml de agua y 4.0 del reactiv de biuret, al tubo 6 se le agrego 0.5 ml de muestra, 1.5 ml de agua y 4.0 del reactiv de biuret, al tubo 7 se le agrego 1.0 ml de muestra, 1.0 ml de agua y 4.0 ml del reactiv de biuret y al tubo 8 se le agrego 0.3 ml de muestra, 1,7 ml de agua y 4.0 del reactiv de biuret.Despus de tener todos los tubos con la solucin se colocaron en reposo por 30 minutos en una parte oscura. Al trmino del tiempo se realiz la cuantificacin de la solucin por medio de un espectrofotmetro a 540 nm de los tubos, entre cada medicin se lavaban las celdas; al tener todas las mediciones se dispuso a realizar la curva de calibracin.Resultados y Clculos Figura 3: tubos de ensayo despus de agregarle patrn de albumina, muestra, agua y reactivo de Biuret.

Tabla 2: Resultados Obtenidos Del Espectrofotmetro Y Clculos De La Concentracin De Albumina

TubosAbsorbancia[ Mg/Ml Albumina ]

10.1350.167

20.1630.330

30.2000.500

40.2380.667

50.2730.833

Tubo de la muestra a determinar la concentracin de albumina :

80.249130,14

Los tubos 6 y 7 se omitieron debido a que los resultados arrojados por el espectrofotmetro estn por fuera de los rangos de los tubos 1 al 5

Clculos para determinar la concentracin del tubo 8:

Convertir los mg a gramos

Regla de tres simple para saber cuntos gramos hay en 100 ml. 1 ml

X 100 ml

Ahora si determinamos del porcentaje peso/ volumen de la concentracin de albumina en el tubo 8

Discusin de los resultadosCuando se determin la absorbancia por medio del espectrofotmetro de los diferentes tubos del 1 al 5 (vase tabla 2) se observa que la absorbancia va aumentado de tubo en tubo, y esto es debido a que la intensidad del color de la reaccin es proporcional a la cantidad de protena en la muestra. Esto se observ claramente en la coloracin de las soluciones (vase figura 3), el tubo #1 fue el ms claro de todos y es el tubo que contiene tan slo 0.2ml de la solucin patrn de protena. En el tubo #2, 3, 4, y 5 el color va aumentando en tubo en tubo, de acuerdo al aumento de la concentracin de protena. Adems, la solucin problema (tubo 8) tiene tambin un color claro y present un valor de absorbancia de 0,249 que se encuentra entre los valores del tubo #4 y 5.Despejando de la ecuacin de la recta se obtuvo una concentracin de 130,14mg/ml de albumina contenida en el tubo 8, y en porcentaje peso/volumen se obtuvo 13%. Segn Gmez, 2013. la clara de huevo tiene 10,9 % de proteina. El resultado obtenido es casi silimar al establecido por Gomez.

ConclusinAplicando el mtodo Biuret se puede determinar la concentracin de protena en unas muestras problema, que resulta de despejar una ecuacin de los valores de absorbancia en una curva patrn originada a partir de concentracin de protena conocida.Cuestionario:1. Describa que es el espectrofotmetro y para qu sirve. Rta: Un espectrofotmetro es un instrumento para medir la transmitancia o absorbancia de una muestra, en funcin de la longitud de onda de la radiacin electromagntica.Sirve para calcular las concentraciones de las distintas sustancias en funcin de la absorcin del color.2. defina con sus propias palabras que es una curva patrn.

Rta: Son las medidas conocidas en orden ascendente que sirven de gua para ajustar una solucin problema.3. cules son las ventajas y desventajas, de emplear los reactivos de biuret para cuantificar protenas explique. Rta: Dentro de las ventajas del reactivo de Biuret es que es bastante especfico para protenas, muestra pocas interferencias y es barato. Y la desventaja es que es poco sensible.4. mencione cual es la razn de que el mtodo de biuret la absorbancia de una protena se lea a una longitud de 540nm.

Rta: El color violeta caracterstico se presenta a esa longitud la cual se da por la coordinacin de un tomo de cobre con cuatro tomos de nitrgeno. El complejo se basa en la desprotonacin de los grupos amida para formar el enlace con el cobre (II) o por el establecimiento de un enlace coordinado entre el metal y los pares de electrones libres de los tomos de oxgeno y de nitrgeno del pptido..5. Explique si una curva patrn puede ser empleada para cuantificar sustancias diferentes a las protenas y cules seran las diferencias con estas. 6. cul es la finalidad de utilizar un tubo como blanco? Mencione si siempre se utiliza agua como blanco.

Rta: Tomar la medida de la cual parte la curva patrn, no siempre se utiliza agua como blanco, sino una mezcla concentrada de la sustancia con la cual se est trabajando.Bibliografa Arellano, H. G., & Duhalt, R. V. (s.f). cuantificacion de proteinas. Recuperado el 19 de 04 de 2015, de http://www.smbb.com.mx/revista/Revista_1998_2/bitacora.pdf.Bolaos, N., G. L., & Herrera, C. H. (2003). Qumica de Alimentos: Manual de laboratorio. Recuperado el 19 de 04 de 2015, de https://books.google.com.co/books?id=8VpJ8foyDiIC&pg=PA36&lpg=PA36&dq=curva+de+calibraci%C3%B3n+para+la+determinaci%C3%B3n+cuantitativa+de+las+prote%C3%ADnas&source=bl&ots=q1sOlQfj1f&sig=lqVb8LgOiSKr0VnCK2NTZ3uQqOw&hl=es&sa=X&ei=5UcwVYrgMoKFsAWQ-4CACw&ved.

CALLE, H. D., SNCHEZ, S. C., & LAITN, J. C. (s.f). MANUAL PRCTICAS DE LABORATORIO DE BIOQUMICA. Recuperado el 19 de 04 de 2015, de http://tux.uis.edu.co/quimica/sites/default/files/paginas/archivos/V00Man10Bioqca_MFOQ-BQ.01_08072013.pdf.

Gmez, D. (2013). HUEVOS: GENERALIDADES. Recuperado el 29 de 04 de 2015, de https://deymerg.files.wordpress.com/2013/10/huevos_generalidades.pdf.

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