Control de calidad en microbiología
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Capacitación del PersonalCapacitación del Personal
ENTRENAMIENTOENTRENAMIENTOFORMACIÓNFORMACIÓN
“Proceso continuo y sistemático destinado a la formación, entrenamiento, actualización o perfeccionamiento específico del personal”
Incorporación de conocimientos
Generales y específicos. Formación académica del
personal
Enseñar las habilidades.
Carácter eminentemente
práctico
Requisitos en la Formación del PersonalRequisitos en la Formación del Personal
Se debe realizar un estudio de las necesidadesde capacitación y entrenamiento
Planificación
La formación permanente de su personal
La formación a ser adquirida deberá orientarse agarantizar la competencia en las técnicas y métodos realizados por el personal involucrado enel ensayo.
El laboratorio debe asegurar …
Capacitación del Personal en el Capacitación del Personal en el Laboratorio de MicrobiologíaLaboratorio de Microbiología
Todo el personal técnico debe recibir un adecuado entrenamiento que incluyen:
Técnicas básicas de microbiología para la manipulación de cultivos y muestras enCondiciones de esterilidad
Adecuado Criterio para el manejo Potencialmente Infeccioso
Conocimiento de normas de bioseguridad
RegistrosRegistros
El laboratorio debe elaborar, conservar
y actualizar registros:
De la autorización del personal
Curriculum vitae
Capacitación en la realización de la tarea
asignada.
Relativos a la competencia del personal.
Documentación de los ProcedimientosDocumentación de los Procedimientos
Registro de los cultivos en existencia Potencia y sensibilidad de los discos Registro de la comprobación de los medios Controles de tinción Controles positivos y negativos Los autoclaves deben comprobarse por registros de temperatura o termógrafos “Se hace lo que se escribe
y se escribe lo que se hace”
¤ Almacenamiento y Conservación¤ Preparación ¤ Control de esterilidad y funcionamiento
Medios de CultivosMedios de Cultivos
Medios de CultivosMedios de Cultivos(Almacenamiento y Conservación)(Almacenamiento y Conservación)
LOS MEDIOS DESHIDRATADOS NO PUEDEN ALMACENARSE DURANTE MUCHO TIEMPOPUEDE OCURRIR OXIDACION Y DESHIDRATACIÓN
SISTEMA DE INVENTARIO EFECTIVO
LOS ESTANTES DEL ALMACEN NO DEBEN SER LOCALIZADOS CERCA DEL AUTOCLAVES
LISTA DE INVENTARIONOMBRE DEL FABRICANTENUMERO DE CONTROLFECHA DE RECEPCIÓNFECHA EN QUE SE ABRIO LA BOTELLA
Medios de Cultivos (Preparación)Medios de Cultivos (Preparación)
Todos los medios deben inspeccionarse visualmente Las muestras procedentes de cada preparación
deben ensayarse para verificar su funcionamiento
Medios de CultivosMedios de Cultivos(Control de Esterilidad y Funcionamiento)(Control de Esterilidad y Funcionamiento)
METODOS PARA COMPROBAR LA CALIDAD DE MEDIOS EN TUBOS
METODOS PARA COMPROBAR LA CALIDAD DE MEDIOS EN PLACAS
Los tubos y placas deben refrigerarse.
METODOS PARA COMPROBAR LA CALIDAD
DE MEDIOS EN PLACAS
Se seleccionan placas
Se inoculan con los cultivos almacenados
Se deben emplear menos de 2 microorganismos
Positivo Negativo
Tamaño e inoculo deben normalizarse
Caldos nutritivos Asa calibrada
Se anotan los resultados del Análisis
Se dispone del medio si funcionan adecuadamente
Importancia del Espécimen en Importancia del Espécimen en Microbiología Microbiología
Los especímenes clínicos deben recogerse cuidadosamente para minimizar la contaminación de la flora microbiana normal del lugar donde se toma la muestra. Y una vez recogido debe ser enviado al laboratorio lo más rápido posible(1 a 2 horas).
Espécimen aceptable muestras conEspécimen aceptable muestras con
para el diagnostico predominancia de para el diagnostico predominancia de
Bacteriológico células inflamatorias. Bacteriológico células inflamatorias.
se comprueba la se comprueba la
aceptabilidad por losaceptabilidad por los
resultados cuantitativos resultados cuantitativos
Importancia del Espécimen en Importancia del Espécimen en Microbiología Microbiología
Control de calidad de equipos Control de calidad de equipos
Todo equipo debe ser evaluado por un programa de control de calidad en base a las instrucciones del proveedor y las regulaciones internas del laboratorio.
Incubadoras• Controlar diariamente la temperatura.• Observar el termorregulador.
• Colocar las muestras, platos y tubos en una posición segura.
• Limpieza mensual y llevar un record de mantenimiento preventivo.
Control de calidad de equipos Control de calidad de equipos
AutoclavesProcedimiento por corrida diario, semanal, mensual• Examine record de temperatura y precisión.• Utilice indicadores de esterilización.• Chequeo del nivel del agua.• Limpieza interior y exterior.• Limpieza de la pantalla de temperatura.
Control de calidad de equipos Control de calidad de equipos
Cámaras de seguridadCámaras de seguridad• Apague la lámpara ultravioleta antes de empezar a
trabajar.• Observe que no se obstruye el flujo de aire.• Compruebe los sistemas de alarma de funcionamiento.• Desinfecte la cabina antes y después de utilizar.
Control de calidad de equipos Control de calidad de equipos
Incinerador• Temperatura optima de esterilización (815°c)• Bastan 5 seg para lograr la destrucción de bacterias,
hongos y mico bacterias.
• Inspeccione la cerámica del incinerador por rajaduras.
• Aleje el incinerador de elementos que puedan incendiarse por el calor generado.
Control de calidad de equipos Control de calidad de equipos
Generadores de ambiente- sistema Gas Pak• Mantenga los generadores de gas a T.A y sobre
sellado• Mantenga indicadores de anaerobiosis a temperatura
de (2-8°C)
• El tiempo de generación de la atmosfera dentro de la jarra es de 30 min.
• Una evidencia sugestiva de ambiente anaerobio, es el cambio de color de rojo vino del agar sangre.
Control de calidad de equipos Control de calidad de equipos
Refrigeradoras• Control diario de la temperatura entre 4-8°C.
• Utilice refrigeradores que no hacen escarcha.
• No coloque medios de cultivos aun ligeramente calientes dentro de la refrigeradora.
• Evite abrir con frecuencia la puerta de la refrigeradora.
• No guarde alimentos en refrigeradoras para especímenes clínicos.
Control de calidad de equipos Control de calidad de equipos
Microscopios• Limpieza del aceite de objetivos, condensador, etc.• Apagar la fuente de luz.
• Colocar cobertor contra polvo.
• Limpieza de ocular, diafragma con liquido de limpieza de lentes.
• Limpieza y ajuste del sistema óptico. • Limpieza y lubricación del sistema mecánico.
Control de calidad de equipos Control de calidad de equipos
Control de calidad de reactivosControl de calidad de reactivos
Los reactivos son fundamentales para la caracterización de microorganismos
Colorantes
Discos impregnados
Antisueros
Colorantes
El control de calidad cada lote preparado.
semanal para mantener
la seguridad
Control de calidad de reactivosControl de calidad de reactivos
Discos impregnados
Pruebas de para microorganismos de Sensibilidad rápido crecimiento.
(NCCLS M2-A6) evalúa multiresistencia, escogencia y valoración de un antibiótico.
Control de calidad de reactivosControl de calidad de reactivos
PTZ CAZ
MER
IMP
CXT
AMC
COL
Antisueros son considerados exámenes bacteriológicos y no test
serológicos.
• Para uso exclusivo de cepas in vitro.
• Conservar los reactivos en refrigeración.• Colocar la fecha en que se abre el kits. • Nunca pipetear con la boca muestras o reactivos.• Dejar los reactivos a T.A antes de utilizarlos.
Control de calidad de reactivosControl de calidad de reactivos
Mantenimiento de medios de cultivos Mantenimiento de medios de cultivos almacenadosalmacenados
Las cepas deben almacenarse de forma adecuada para preservar sus características morfológicas y fisiológicas conocidas.
Para el almacenamiento a largo plazo se debe:
almacenar en un medio estabilizador apropiado, como caldo de soya tripticasa con 10 – 15% de glicerol o sangre de cordero desfibrinada.
Almacenarlas liofilizadas (congelación seca).
Obtenga caldos de cultivos liofilizados comercial
Para trabajar una o mas veces al mes:
Subcultive el caldo de cultivo permanente (congelado o liofilizado) a medios sólidos en placa.
Subcultive 4 – 5 colonias aisladas de medios en placa a un tubo con agar inclinado e incube durante la noche para preparar caldo de cultivo listo para trabajar.
Mantenimiento de medios de Mantenimiento de medios de cultivos almacenadoscultivos almacenados
Almacenar las cepas no fastidiosas en tubos picos de flauta con agar tripticasa de soya inclinado.
Dos días antes de las pruebas de CC:
Subcultive el crecimiento del agar inclinado a medios en placa e incube durante la noche.
Seleccione 4 – 5 colonias aisladas de la placa para la prueba de CC y pruebe con el mismo método utilizado para los aislamientos de pacientes.
Pruebas de sensibilidad antimicrobianaPruebas de sensibilidad antimicrobiana
NCCLS: El Instituto para la normatización de Laboratorios Clínicos anteriormente conocido como El Comité Nacional para la Normatización de Laboratorios Clínicos
(NCCLS) es una organización sin fines de lucro, con miembros representando a varias disciplinas. Es una organización educativa que enseña a través de foros el desarrollo, promoción y uso de normas nacionales e internacionales relacionadas con las pruebas de susceptibilidad, su uso apropiado y la interpretación de los resultados.
ATCC: también conocida como American Type Culture Collection.Suministra cepas certificadas como: S.aureus, E. coli y Pseudomonas sp
PruebasPruebas de sensibilidad antimicrobianade sensibilidad antimicrobianaPruebas de sensibilidad antimicrobianaPruebas de sensibilidad antimicrobiana
• Prueba de difusión en disco: El método del disco esta bien normalizado y es capaz de producir resultados fiables.
• El proceso que se recomienda corrientemente es aplicable a las pruebas con la mayoría de patógenos comunes de crecimiento rápido, como: enterobacterias, S. aureus y Pseudomonas sp.
• los estudios aun no están adecuados para desarrollar patrones de zonas fiables para la interpretación de pruebas de disco con microorganismos que:
1. Son exigentes en sus requerimientos nutricionales.
2. Necesitan de una atmósfera anaeróbica o una concentración ce CO2 incrementada para crecer.
3. Crecen a una velocidad lenta en agar Mueller – Hinton.
4. Los que manifiestan una marcada variación en la velocidad de crecimiento cepa a cepa
Pruebas de sensibilidad antimicrobianaPruebas de sensibilidad antimicrobiana
• Para controlar la técnica de difusión en disco, los tres microorganismos control designados S. aureus , E.coli y P. aeruginosa deben emplearse cada día que se realice un ensayo.
•La precisión y exactitud de este proceso analítico puede determinarse por métodos estadísticos patrones ; es decir, que el 95% de las zonas deben estar dentro de 2SD por encima o por debajo de la media cada agente antimicrobiano.
•Se debe controlar la densidad del inóculo.
•Verificar que los discos no estén deteriorados.
•Controlar el pH de los medios.
•La desviación típica máxima es la diferencia entre el tamaño de la zona minima para cepas susceptibles y el tamaño de la zona máxima para cepas resistentes.
Pruebas de sensibilidad antimicrobianaPruebas de sensibilidad antimicrobiana
Fuentes de errores técnicos:
• preparación inadecuada del agar Muller – Hinton
•Introducción de un nuevo lote de agar sin probarlo.
•Almacenamiento inadecuado de los discos.
•Normalización inadecuada de la densidad de caldo de cultivo.
•Preparación inexacta o almacenamiento de patrones de referencia turbios.
•Fallo al exprimir el liquido sobrante de la torunda.
•Incubación a temperatura distinta de 35 ºc
•Lectura prematura de las placas
•Fallo al medir los bordes de la zona.
•Errores de transcripción
Empleo de laboratorio de referenciaEmpleo de laboratorio de referencia
Incluso los laboratorios clínicos más sofisticados, ocasionalmente encuentran un aislamiento microbiano que no pueden identificar. Deben establecer algunas disposiciones para que un laboratorio de referencia (tal como laboratorios del departamento de salud estatal o nacional o laboratorios clínicos en los centros médicos más importantes) examinen los cultivos problemáticos.
Pruebas de eficacias:Pruebas de eficacias:Externa e InternaExterna e Interna
Es recomendable que los laboratorios de microbiología puedan participar en programas de evaluación externa. Estos programas miden la capacidad del laboratorio para evaluar una muestra desconocido y llegar a un resultado seguro. Los mismos consisten en la identificación de muestras o microorganismos desconocidos y se debe informar del resultado de la identificación, pruebas utilizadas para el diagnóstico etiológico y sensible a los antibióticos. Estos programas de control de calidad externos pueden ser nacionales o internacionales.
El laboratorio, debe diseñar sistema de control interno para verificar que la calidad alcanzada es la especificada. Es importante, para todo tipo de laboratorio que el sistema de control proporcione al personal información clara y fácilmente comprensible para que sirva de base para la toma de decisiones. Se debe poner énfasis a la eliminación de errores en el manejo de muestras, solicitudes, exámenes e informes.
El control de calidad en el laboratorio tiene como objetivo , que el producto final del trabajo tenga un grado aceptable de seguridad, de conformidad con los limites establecidos. Debido a que la mayoría de los resultados en microbiología son producto de interpretaciones y evaluación de reacciones bioquímicas de seres vivos donde la capacidad y experiencia del evaluador tienen un gran valor