Control de calidad en Hemostasia. FASE PRE-ANALÍTICA Limpieza del material SOLUCION DE HIPOCLORITO...

Control de calidad en Hemostasia

Control de calidad en HemostasiaFASE PRE-ANALÍTICA

Limpieza del material SOLUCION DE HIPOCLORITO DE SODIO

1% V/V uso general

2.5% V/V lavado de material de vidrio

10% V/V sangre derramada MEZCLA SULFOCRÓMICA


Obtención de la muestra. INDICACIONES PARA EL PACIENTE

Ayuno

Estrés

Reposo

DrogasFICHA DE ANTECEDENTES DEL PACIENTE


SELECCIÓN DEL ANTICOAGULANTECitrato Trisódico - 0.109 o 0.129 M (3.2% o 3.8%) Comité

Americano para Estándares de Laboratorio Clínico (NCCLS)

- 0.10 o 0.12 M Comité Europeo para Estándares de Laboratorio Clínico ( ECCLS)

- 3.2% Sociedad Internacional de Hemostasia y Trombosis (ISHT)


Citrato ácido de Sodio: (pH 5.8) Mezcla (1:1) de Citrato de sodio 0.11M y Ac. Cítrico 0.11M.

- Evita la Activación de plasminógeno en presencia de altos niveles de t-PA, útil también en ensayos inmunológicos y funcionales de t-PA y PAI

EDTA

- Para estudios por métodos de biología molecular


EXTRACCIÓN DE SANGRE

• No se aconseja utilizar sangre capilar.

• La sangre venosa debe ser obtenida por punción

rápida y precisa, evitando la formación de espuma,

el éxtasis venoso y la contaminación con

tromboplastina tisular (torniquete menos de un

minuto)


• La sangre arterial debe ser obtenida por punción

directa no traumática.

• Evitar la extracción por catéter, de ser

indispensable, realizar la extracción con doble

jeringa y descartar los primeros 5 a 10ml de

sangre.

Control de calidad en Hemostasia• No se aconseja la extracción con tubos de vacío,

aunque estos tubos pueden utilizarse para colocar la sangre una vez abiertos.

• Relación ac / sgre (1+9)

• La relación Anticoagulante / Sangre varía cuando el

Hto. se encuentra fuera del rango de 25 – 50%. Para

calcular el citrato a utilizar se usa la siguiente

fórmula:

Sangre entera en ml = 9 x citrato de Na en ml x 0,55

1 – Hto en (v/v)


• Descartar los tubos que no mantengan adecuada relación ac/ sgre y aquellos que muestren hemólisis visible.

• Centrifugar las muestras y separar los plasmas con pipetas de plástico lo mas rápido posible.


Procesamiento de la muestra

a. Plasma citratado rico en plaquetas (PRP)

Centrifugar 5 min. a 900 rpm, separar el plasma y

mantener a temperatura ambiente hasta 2 hs

Función plaquetaria y TPR


b. Plasma citratado pobre en plaquetas (ppp)

Centrifugar 10 min. a 3000 rpm, plasma

relativamente pobre en plaquetas ( <10.000/ mm3).

Utilizar dentro de las 4 horas para estudios

prequirúrgicos y control de anticoagulación en

pacientes sin antecedentes de sangrado o

trombosis.

Control de calidad en Hemostasiac. Plasma citratado libre de plaquetas

Doble centrifugación de 15 min. a 4500 rpm (<5.000

pq/mm3) permite realizar todos los estudios, se puede

fraccionar y congelar junto a un testigo normal.

Es el procedimiento ideal para preparar muestras que

deben ser derivadas a otros laboratorios para su

estudio.


d. Plasma citratado libre de plaquetas

Pasar PPP por un filtro Milipore de 0.22 um de poro, para muestras que deban guardarse a -70°C junto con un testigo normal.

Presenta el inconveniente que suele activar las muestras.


e. Preparación de pool de plasmas normales

Se extrae sangre a 10 sujetos normales con básico

de coagulación normal y se prepara PPP, se

fracciona y se conserva a -80°C hasta 6 meses o

solo 1 mes si se guarda a -20°C.


f. Preparación de plasma adsorbido

Es plasma desprovisto de los factores vitamina

K dependiente (II ,VII, IX y X). Se obtiene a

partir de sangre anticoagulada con oxalato de

sodio 0.1M en relación 1+9.


El PPP oxalatado se mezcla con Sulfato de Ba (50

mg por ml de plasma). Se incuba 15 min a 37°C,

mezclando por inversión periódicamente, se

centrifuga y se recoge el sobrenadante. Se controla

haciendo un TP que deberá ser mayor a 60 seg.


g. Preparación de suero envejecido

Aporta los factores VII, IX, X y un 50% de XI y

XII. Se obtiene dejando coagular la sangre en tubo

seco por espacio de 4 hs. Se centrifuga 15 min a

3000 rpm. Se puede mantener a 4°C por 24 horas

o fraccionar y congelar.


h. Preparación de plasma envejecido

Deficitario en factor V y VIII, se extrae sangre con

Oxalato de sodio 0.1 M en proporción ac/srge

1+9, se obtiene PPP y se lo incuba a 37°C.

Cuando el TP es mayor a 60 segundos se lo

fracciona y congela.


Conservación de las muestras- Hasta 2 hs 18-25°C- Mas de 2 horas 4°C- Mas de 1 día fraccionar plasma y guardar

congelado a -20°C o menos, junto a testigos normales.

- Muestras para evaluar función plaquetaria se procesan dentro de las 4 hs. de la extracción.


Transporte de las muestras

Cualquiera sea la distancia se remitirán las muestras congeladas, con hielo seco, y en un recipiente adecuado para su conservación, acompañadas de controles normales procesados de igual forma.


Estabilidad de la muestra

Para usar plasma o reactivos congelados,

descongelarlos rápidamente a 37ºC, dejar a

temperatura ambiente 30 minutos y utilizarlos

antes de 2 horas. No deben usarse muestras

congeladas y descongeladas más de una vez.


Variaciones con el tiempo/temperatura de:

Inmediatamente luego de la centrifugación

Plasma luego de 8 hs a:

20°C 37°C

Tiempo de Quik % 100 94 72APTT (seg) 36 41 48FACTOR V % 100 95 60FACTOR VII % 100 100 95FACTOR VIII % 100 70 55FACTOR IX % 100 95 85


Elección de Reactivos

- Sensibilidad: variación, en segundos, de las pruebas, con pequeñas variaciones en la actividad de los factores o la presencia de inhibidores.

- Evaluar la necesidad de mayor sensibilidad teniendo en cuenta el tipo de muestras que se procesa.


FASE ANALÍTICAPrograma de administración de la calidad

• 1. Mantenimiento de los coagulómetros y/o baños

termostatizados (deben estar especificados los

intervalos de tiempo en el que se realiza).

• 2. Calibración de pipetas.


Programa de administración de la calidad

• 3. Realizar diariamente el procesamiento de

materiales de control interno.

• 4. Participar en un programa de control externo.

• 5. Evaluar la veracidad del dato.


Control de Calidad Interno (CCI)

Evalúa la precisión de la metodología utilizada. Es decir la concordancia entre medidas repetidas de una muestra.

Se utilizan materiales de control y se observa si los resultados obtenidos están dentro de los limites de variación esperados para esas muestras.

Control de calidad en HemostasiaPuntos a tener en cuenta ara realizar un CCI:

-Planificar el CCI en base al requerimiento de lo que se va a evaluar

Lab. 24 hs controlar cada 6 hs (TP, KPTT, TT, FI)

Gran cantidad de muestras en batch

-manual------------------ controlar c/50 muestras

-coagulómetros---------controlar c/100 muestras


-Seleccionar el material de control adecuado

Pool de plasma citratado de 20 donantes normales conservado a -80°C y descongelado a 37°C Pool de plasma citratado conservado a -20°C para 1 semana


Procesar 10 veces, para calcular la media (x)

y el desvío estándar (DS o S2)

Estos serán los valores de referencia ideales para los controles

.


Plasma control liofilizado comercial:

Reconstituir con agua destilada (pH 6.8-7.2) usar luego de los 30 min. Traen los rangos de aceptabilidad para cada determinación.

Incluir un control normal y otro patológico en el rango de interés clínico.


-Evaluar los resultados del control de calidad

Los resultados se evalúan contra el valor ideal previamente establecido (x) y en general se aceptan como validos aquellos que caigan dentro de +/- 2 DS


Carta de Control de Calidad


Reglas de Westgard

Son un conjunto de reglas que definen la aceptación o rechazo de una corrida, basándose en el comportamiento de los controles con respecto a la media, tomando como limites unidades de SD.

Algunas detectan errores sistemáticos y otras errores aleatorios.


Coeficiente de Variación (CV)

Es una medida de la variabilidad de los resultados, se expresa como porcentaje y se calcula teniendo en cuenta X y SD:

CV= SD/X . 100


Los coeficientes de variación (CV) entre dos controles realizados en días sucesivos deben ser:

-Para las pruebas globales < 5% usando automatización y < 10% para técnicas manuales.

-Para dosaje de factores por método coagulable < 10% y para técnicas amidolíticas <5%.


Control de Calidad Externo

Evalúa la habilidad de un laboratorio para obtener un resultado correcto, es decir, evalúa la sensibilidad de la metodología utilizada.

Permite compararlo con el desempeño de los pares.


Programas de Evaluación Externa de la Calidad para Hemostasia

Internacionales:

a- United Kindom National External Assesment Schemes (www.ukneqas.org.uk)

b- College of American Pathologist (www.cap.org)


Nacionales:

a- Subprograma Hemostasia del Programa de Evaluación Externa de la Calidad de la Federación Bioquímica de la Provincia de Buenos Aires (www.faba.org.ar)


Controles Privados Accesibles en Argentina:

a- Unity Quality Control Program de Bio Rad (www/bio-rad.com)

b- Programas de usuarios de la Firma Diagnostica Stago (www.roche.com.ar)


Generalidades del CCE:

Se envía el mismo material control a los distintos laboratorios participantes con grado de complejidad variable respecto al número de análisis y la frecuencia de envío.


Evaluación del desempeño del laboratorio:

Se calculan X , SD y CV de cada determinación agrupando a los participantes en diferentes grupos según los reactivos y el sistema de detección utilizado. El programa puede tomar como valor real la media del grupo o un valor de referencia establecido por un laboratorio de referencia.


Grupo III

GrupoII

Grupo I

Material control


El laboratorio puede comparar sus resultados con la media a través del índice de desvío estándar SDI

SDI= D-X/SDD: valor informadoX: media del grupo de pares o valor verdaderoSD: desvío estándar del grupo de pares


SDI < 0.5 ------- Desempeño excelente

0.5< SDI < 1 ------- Desempeño satisfactorio

1< SDI < 2 ------- Desempeño aceptable

SDI > 2 ------- Mal desempeño, chequear sistemas


Diagrama de Youden

Control de calidad en HemostasiaDiagrama de Youden


Si el valor obtenido es inaceptable se debe intentar clasificar el problema entre los siguientes tipos:

-Error de tipeo al informar los datos

-Problema metodológico (incorrecta calibración, reactivos mal reconstituidos, resultado cercano al limite de detección del método, problemas no detectados por el CCI)


- Problema con los materiales de control (no respetar el tiempo de reconstitución, no utilizar el agua apropiada, diluciones erróneas)

- Problema de cálculo de los resultados- No hay explicación para el problema (20% de los

casos)

En caso de identificar el problema ejecutar acciones correctivas.


Para evaluar el desempeño de un laboratorio como inaceptable deben ser inaceptables los resultados obtenidos en tres evaluaciones consecutivas.


FASE POST-ANALÍTICA

Una vez obtenido el resultado es responsabilidad del personal profesional del laboratorio validar clínicamente los resultados.

Datos de Laboratorio

Datos Clínicos Antecedentes

Familiares

Validación clínica De los

Resultados

SiDiagnostico de

Patología

Hereditaria

No

InformarSe sugiere

una Nueva Muestra para Confirmar

RepetirCon Nueva

Muestra


MUCHAS GRACIAS!

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