UNIVERSIDAD JUÁREZ DEL ESTADO DE DURANGO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS

LABORATORIO DE BIOLOGÍA DE PROTISTAS Y HONGOS

“Colección de Hongos Microscopicos”

Catedrático M. C. Juan Miguel Borja Jiménez

Amanda Dennise De León Dueñes.

INTRODUCCIÓN

Existen varias técnicas utilizadas para la identificación de organismos microscópicos como hongos filamentosos y las levaduras, que incluyen pruebas morfológicas, bioquímicas, fisiológicas, y moleculares. De estas pruebas las más utilizadas son las morfológicas y fisiológicas.

Principales métodos de identificación de hongos filamentososLa identificación de los hongos filamentosos se basa en el examen macroscópico de la colonia y en sus características microscópicas. Semejanzas macroscópicas como la forma de la colonia, el color de la superficie y reverso, la textura, la velocidad de crecimiento y la producción de pigmentos son muy útiles para la identificación. En general, la morfología microscópica de los hongos es estable y presenta pocas variaciones.

Los criterios de identificación microscópicos son fundamentalmente morfológicos basados en la presencia de estructuras de reproducción sexual, estructuras de reproducción asexual y características especiales de las hifas.

La identificación definitiva se basa en la forma característica, método de producción y ordenamiento de las esporas, siendo también importante conocer el tamaño y la disposición de las hifas.Aunque la identificación de las especies por el tamaño, la forma y el color de las esporas escapa a la capacidad de la mayoría de los laboratorios. Las esporas, aunque únicas y muy particulares, son tan diminutas que es imposible identificarlas con los niveles de aumento disponibles en la mayoría de los laboratorios. La preparación del material para la observación microscópica puede realizarse en fresco, con cinta de celofán adhesiva o mediante cultivo sobre portaobjetos.En ocasiones, la identificación se complementa con pruebas bioquímicas además aunque todavía limitada a determinados laboratorios especializados, pero en continuo desarrollo, está la identificación molecular de los aislamientos fúngicos, basada en los mapas de restricción de fragmentos del operón ribosomal, digeridos con un panel de enzimas de restricción, que permite la elaboración de árboles filogenéticos.

OBJETIVO

Establecer los procedimientos de laboratorio para realizar el aislamiento e identificación de los principales hongos microscópicos.

OBTENCION DE LOS ORGANISMOS

Primer organismo.

La muestra fue obtenida de una planta seca de laurel (Laurus nobilis), cultivado en agar harina de maíz e incubado a 36 °C durante 5 días.

Figura A. Podemos observar el organismo original sobre la planta seca.

Segundo organismo

La muestra fue obtenida de una semilla de especie desconocida, primero fue plantada en agar caldo de verduras y posteriormente para su purificación fue resembrado en agar papa dextrosa, con una incubación de 5 días a 36 °C.

Tercer organismo

La muestra fue obtenida de una tortilla en descomposición, primero en agar harina de maíz, después fue purificada en agar papa dextrosa con una incubación de 4 días a 36 °C.

Figura b. Podemos observar el organismo original sobre la tortilla en descomposición.

RESULTADOS

Identificación del primer organismo:

Del libro Fungi and food spoilage; Key to miscellaneous genera.

1 Las colonias en CYA o MEA superior a 60 mm de diámetro en 7 días (figura 1)...12

12 (1) Los conidios transmitidos desde la superficie de las hifas (figura 2)………...….17

17 (12) Colonias y / o conidios de color oscuro (figura 3) …………………………..…..22

22 (17) Los conidios con frecuencia con un largo superior a 15 mm (figura 3) ….….25

25 (22) Los conidios son alargados (figura 3)..…………………….……………….…...…..26

26 (25) Conidios más grandes con septos tanto transversal como longitudinal o irregularmente septadas (figura 3)………………..………………………………………….30

30 (26) Conidios claviformes (en forma de bastón) (figura 3) ……………..ALTERNARIA

IMÁGENES

Figura 1. A) Podemos observar que la colonia rebasa los 6 cm de diámetro. B) Se observan características como color; verde obscuro, textura; aterciopelada, tamaño etc.

Figura 2 a 10x. Se puede observar la ausencia de micelo y los conidios unidos a las hifas.Conidio

Hifa

A) B)

Figura 3 a 10x. A) Se observa la coloración obscura de las estructuras así como su tamaño. B) Se observa la forma alargada de los conidios así como los septos transversales y longitudinales.

Figura 4. 100x. Se observan las cadenas formadas por los conidios. Así como los septos de las hifas.

Hifas Septadas

Cadenas de conidios

Septos Transversales

Septos longitudinales

ALTERNARIA

Posición taxonómica

Reino: Fungi

Phylum: Ascomycota

Clase: Euascomycetes

Orden: Pleosporales

Familia: Pleosporaceae

Características generales

El género Alternaria incluye alrededor de 50 especies de hongos ampliamente distribuidas. Se trata de hongos, generalmente saprófitos o parásitos sobre muchos tipos de plantas hortícolas y sobre gran diversidad de sustratos (papel, cueros, tapicerías, etc.). Algunas especies pueden descomponer azúcares, pectina y lignina, así como contaminar alimentos. Diversas especies de este género han sido citadas como productoras de lesiones cutáneas, pero el mayor interés desde el aspecto patogénico de estos hongos, radica en su poder como alergógeno y productor de asma, debido a su presencia casi constante en el aire tanto en los interiores de edificios como en los exteriores, así como en el polvo doméstico, donde además es favorecedor del crecimiento de los ácaros.Las especies más comunes son Alternaria tenuissima y Alternaria Alternata. Las especies de Alternaria son capaces de producir una variedad de compuestos diferentes, algunos de los cuales son tóxicos para los mamíferos y aves (micotoxinas) y otros para las plantas (fitotoxinas) como la tentoxina un tetrapéptido cíclico.

Distribución y ecología

Género de hongos distribuido por todo el mundo, principalmente en las regiones templadas de la tierra, crece en gran diversidad de medios y sustratos. La temperatura óptima de crecimiento es 25-26º C, con un máximo de 31-32º C y un mínimo de 6-6,5º C. aunque algunas especies adaptadas al frío pueden vivir hasta los 0º C.

Aspectos morfológicos y de identificación

1. Aspecto de la colonia 

- Diámetro: 60 mm en una semana. (figura 1)- Topografía: Lisa. (figura 1)- Textura: Desde pulverulenta como el fieltro o algodonosa. (figura 1)- Color: Al principio blanca, luego gris y finalmente verde oscuro o negra. (figura 1)- Reverso: Crema, luego de gris a negro.

2. Aspecto microscópico:

- Características predominantes: Son características la formación de cadenas acrópetas de conidios. (figura 4)

- Características de las conidios: Los conidios, muy característicos por su tabicación longitudinal, transversal u oblicua, son del tipo dictiospóreo y presentan forma ovoide u obalavada, con superficie lisa o rugosa y de coloración marrón claro a obscuro La mayoría tienen un pico terminal en el extremo distal. Se visualizan cadenas largas, con tabiques transversales, longitudinales y oblicuos. (figura 3)

3. Diagnóstico diferencial: Curvularia spp., Ulocladium spp. Son bastante parecidos. Sin embargo, podemos diferenciarlas de Alternaria porque las cadenas de más de 3 esporas son raras y los conidios no terminan en pico.

Identificación del segundo organismo:

Del libro Fungi and food spoilage; General key to food spoilage fungi.

Claves

1 Crecimiento en uno o más medios de comunicación estándar……………………2

2 (1) Crecimiento filamentoso, superior a 10 mm de diámetro en medios estándar (figura 1)…………..………………………………………………………………………………..3

3 (2) Crecimiento en CYA y / o MEA más rápido que en G25N………………………..4

4 (3) Las hifas tabicadas con frecuencia y conspicuamente…………………………..5

5 (4)Esporas maduras presentes en 7 días…………………………………………………..9

9 (5) esporas (conidios) de menos de 10 mm de largo, sostenido en las cadenas de los esporangios y bien definidas………………………………………………………………10

10 (9) Fiálides unidos en más o menos hinchazones esféricas en el estípite………..11

11 (10) Los conidios diversamente coloreadas, fiálides producidos simultáneamente en vesículas grandes…………………………………..……Aspergillus

IMÁGENES

Figura 1. Se observan las características morfológicas del organismos, tales como color; verde grisáceo, tamaño de las colonias; mediano, y textura; polvorienta.

Figura 2. Se observa un trozo de la hifa, septada.

Figura 3. A) podemos observar la estructura completa. 10x B)Se observa parte de la estructura de reproducción. 100x

ASPERGILLUS

Hifa septada

Hifa

VesículaFiálides

Conidióforo

Conidios

Métulas

Posición taxonómica

Reino: FungiFilo: AscomycotaClase: EurotiomycetesOrden: EurotialesFamilia: Trichocomaceae

Características generales

El género Aspergillus comprende alrededor de 180 especies, son hongos filamentosos, hialinos y ubicuos. Se reproducen asexualmente por conidias que se originan de grupos de fiálides localizadas en un ensanchamiento terminal del conidióforo.Son hongos saprófitos capaces de colonizar y degradar numerosos substratos como papel, cuero, pinturas o alimentos, a los que además pueden contaminar con micotoxinas; pues algunas de sus especies son los productores más importantes de estas substancias. Los hongos de este género, tienen gran potencial biótico y son degradadores activos del material orgánico y en consecuencia muy útiles en la ecología del planeta. Sin embargo, causan enfermedades en el humano y animales.

Distribución y ecología

Aspergillus es un hongo de distribución universal, están presentes en el suelo, aire, agua, alimentos, plantas y materia orgánica en descomposición. En las casas se los encuentra en el polvo y los alimentos. Su desarrollo se ve favorecido por la humedad y las temperaturas elevadas (termófilos).

Aspectos morfológicos y de identificación

El color es la principal característica macroscópica para la identificación de los grupos de aspergillus. Poseen distintos tonos de verde, pardo, amarillo, blanco, gris y negro. Las cabezas conidiales presentan bajo el microscopio cuatro formas básicas: globosa, radiada, columnar o claviforme y a simple vista las más grandes suelen parecer diminutas alfileres sobre el substrato. En los aspergillus, los conidios constituyen cadenas que se originan en la célula conidiógena o fiálide. En algunos aspergilos hay células adyacentes a las fiálides denominadas métulas o células de soporte.

Identificación del tercer organismo:

Del libro Fungi and food spoilage; Key to miscellaneous genera.

1 Algunos o todos las células reproductivas, transmitidas dentro esporangios………………………………………………………………………………………….3

3 (1) Columenas derivados de esporangios, presente……………………………..…….. 4

4 (3) Columelas colapsando para crear formas de embudo o paraguas, paredes de esporangiosporas lisas o estriado…………………………………………………………. 6

6 (4) Columelas colapso hacia fuera para formar una forma de paraguas esporangiosporas de paredes estriadas………………………………………….. Rhizopus

IMÁGENES

Figura 1. Se observan los rizoides y el esporangio en forma de paraguas. 40x

Rizoides

Esporangio

Figura 2. Se observa los rizoides, hifas, esporangio, esporangioforo. 40x

RHIZOPUS

Posición taxonómicaReino: FungiDivisión: ZygomycotaClase: ZygomycetesOrden: MucoralesFamilia: Mucoraceae

Características generales

Rhizopus spp. es un hongo filamentoso cosmopolita de suelo, frutas y verduras en descomposición, excrementos de animales, y pan viejo. Las especies de Rhizupus son contaminantes comunes, pero son causales de infecciones oportunistas en los humanos. Algunas especies son patógenos de las plantas. Las especies más frecuentes son Rhizopus oryzae, R. rizopodimorfis, R. stolonifer, R. microsporas y R. nigricans.

Distribución y ecología

Rhizopus stolonifer es uno de los mucorales más frecuentes y tiene una distribución amplia en todo el planeta. Su temperatura de crecimiento va desde los 10 hasta los 33 °C, con una temperatura óptima de 25 °C. Se encuentra con frecuencia en suelos con arena, en el compost, en el polvo de las casas, en la

Rizoides

Esporangioforo

Hifa

Esporangio

pulpa de la madera, estiércol, panales de abejas, nidos y plumas de aves y en diferentes frutos y semillas. Las esporas de estos hongos no son abundantes en el aire libre, aunque su frecuencia aumenta en lugares donde hay humedad y se acumula vegetación muerta.

Aspectos morfológicos y de identificación

Características macroscópicas: colonia de crecimiento rápido, algodonosas laxas, que cubre completamente la caja de Petri y logra empujar la tapa hacia arriba. Inicia de __color blanco y se torna gris con puntos negros que corresponden a las esporangias.

Características microscópicas: Hifas gruesas y aseptadas, abundantes rizoides prominentes de color café, de los que salen los esporangióforos __largos, no ramificados, de color café, cada uno con una esporangia café de 100 a 200 µm de diámetro, con esporangiosporas de 6 __a 8 µm, espiculadas. Dependiendo de la especie puede poseer estolones o puentes de comunicación entre los rizoides. Esporangio ovoide, con apófisis no prominente al final del esporangióforo. Cuando la esporangio se rompe, la columnela colapsa y adquiere una forma similar a un __sombrero chino o una sombrilla.

CONCLUCIÓN

Concluimos que es importante observar las estructuras microscópicas y microscópicas , así como la adecuada utilización de las claves a la hora de la identificación de organismos, como también es importante tener en cuentasque los hongos filamentosos son organismos que pueden estar presentes en cualquier ambiente, y que son muchas las especies que encontramos comúnmente y que nos pueden causar algún daño a la salud por lo que es vital tener los cuidados adecuados para evitar su aparición y posterior reproducción.

BIBLIOGRAFÍA

http://www.insht.es/InshtWeb/Contenidos/Documentacion/FichasTecnicas/NTP/Ficheros/401a500/ntp_488.pdfhttp://www.sitios.scjn.gob.mx/sinaj/sites/default/files/manuales_guias/GuiaIdentificacionHongos.pdfhttp://www.gefor.4t.com/hongos/alternaria.htmlhttp://alcoi.san.gva.es/alercoy/fichas/Alternaria/Esporas%20de%20hongos-alternaria.pdf

http://www.uco.es/aerobiologia/hongos/altern.htmhttp://www.facmed.unam.mx/deptos/microbiologia/micologia/aspergilosis.htmlhttp://www.unsa.edu.ar/matbib/hongos/04htextoaspergilos.pdfhttp://www.fmed.uba.ar/depto/microbiologia/gtp010.pdf