Clostridium perfringens

Introducción • Cuando se lanza un producto alimentario al mercado se deben tener en

cuenta varios parámetros que le otorgan calidad al producto, uno de ellos es la inocuidad.

• Los alimentos son la fuente principal de exposición a agentes patógenos, tanto químicos como biológicos (virus, parásitos y bacterias), a los cuales nadie es inmune.

• Clostridium perfringens es una especie bacteriana perteneciente a la familia Bacillaceae. Está integrada por gérmenes de forma bacilar. Aparecen aislados o en cadenas cortas. Esporulados. Son capsulados, inmóviles, aerobios estrictos y gran positivos. Reducen nitratos a nitritos. Producen SH2. Fermentan la lactosa. Elaboran toxinas A, B, C, D y E.

Objetivo General:

• Determinar la presencia de Clostridium perfringens en muestras de alimentos.

Revisión Bibliográfica • El género Clostridium pertenece a la Familia Bacillaceae comprende a

bacilos Gram positivos, esporulados, anaeróbicos estrictos, reductores de sulfitos a sulfuros.

• Están ampliamente distribuidos en la naturaleza, principalmente en el suelo, aguas, tracto intestinal de humanos y de varios animales.

• Las más importante en la microbiología de alimentos son Clostridium perfringens y Clostridium botulinum, ya que son productoras de varias toxinas, siendo causante de brotes de enfermedades transmitidas por alimentos (ETA).

• Clostridium perfringens es la especia que con más frecuencia se aísla en las muestras clínicas, excluyendo en heces.

• En los alimentos se encuentra por contaminación ambiental, y solo cuando alcanza cifras altas anormales, puede ser causa de enfermedad.

Enfermedad: • La enfermedad provocada por esta bacteria es relativamente benigna,

manifestándose con dolor abdominal agudo y diarrea profusa.

• El periodo de incubación es, por lo general, de 6 a 24 horas, con una media de 12 horas.

Materiales y Medios de Cultivo

Materiales

Bisturí

Espátulas

Gradillas

Jarra de anaerobiosis o bolsas de anaerobiosis

Matraz Erlenmeyer

Pipetas graduadas

Pinza metálica

Placas Petri

Tubos de ensayo

Reactivos y Medios de Cultivo

Ácido Sulfanilico

α naftol

Agar Nitrato-Movilidad

Agar Sulfito-Polimixina-Sulfadiacina (SPS)

Agua peptonada 0,1%

Caldo Tioglicolato

Gaspack (Anaerocult A y Anaerocult P)

Indicador de Anaerobiosis (Anaerotest)

Medio Lactosa-Gelatina

Equipos

Balanza

Baño de agua a 45º ± 1ºC

Contador de colonias

Estufa de incubación a 35º ± 1ºC

Refrigerador

Vortex

Diagrama de Flujo 1) Recuento de Clostridium perfringens

Preparar diluciones decimales de la

muestra en agua peptonada 0,1%

Agregar por duplicado 1 ml de

cada dilución en las placas rotuladas

Adicionar 15 ml de Agar SPS, el que se encuentra en baño

de agua a 45°C

Homogeneizar cada placa rótandolas

(sin mojar bordes)

Después de solidificar, agregar una segunda capa de 6 ml de Agar SPS para favorecer la anaerobiosis.

Deje solidificar

Colocar las placas en la Jarra o Bolsas de

anaerobiosis, sin invertir, y agregar el Gaspack e

Indicador de Anaerobiosis. Cerrar la Jarra

Incubar a 35°C por 24 hr

Contabilizar entre 20 y 200 colonias de tonalidad negra

Registrar la cantidad y la

dilución respectiva

2) Pruebas Confirmativas

Si hay colonias aisladas, tomar con un asa parte del cultivo e inocularlo en un tubo con Caldo

Tioglicolato

Incubar a 35°C por 24 hr

Anareobiosis

Para obtener colonias aisladas, sembrar por

agotamiento en la superficie (en el mismo

medio seleccionado)

Aplicar una segunda capa de Agar cubriendo toda

la superficie

Incubar a 35°C por 24 hr en anaerobiosis

Inocular mediante picadura 5 a 10 colonias

en Agar Nitrato-Movilidad y en el Medio Lactosa-

Gelatina

Incubar a 35°C por 48 hr

3) Interpretación

Reducción de Nitratos a Nitritos

Presencia de color rojo, al añadir 0,5 ml

de Ac. Sulfanílico y 0,2 ml de α

naftol

Si no hay ningún

cambio de color

+ -

Movilidad

Desarrollo difuso alejado de la línea de inoculación

Solo se presenta

crecimiento en la línea

de inoculación

- +

+

Fermentación de Lactosa Hidrólisis de Gelatina

Se reconoce por el cambio

de color de rojo a

amarillo

El medio permanece

liquido, después de colocar por 1 hora los tubos al refrigerador

El medio no permanece

liquido, después de

colocar por 1 hora los tubos al refrigerador

No hay ningún

cambio de color

- - +

Bibliografía

• Herranz, Carmen. (2008). VI Workshop sobre Métodos Rápidos y Automatización en Microbiología Alimentaria. Madrid (España).

• Leotta Gerardo A. (2009). Métodos rápidos: una herramienta útil y práctica para el análisis microbiológico de los alimentos. Buenos Aires (Argentina).

• Calderón V. Pascual M. (2000). Microbiología Alimentaria. Metodología Analítica para Alimentos y Bebidas. 2ª Edición. Pág. 105.

• Silva, Del Carmen, (2006). Técnico Especialista en Laboratorio del Servicio Gallego de Salud. 1ª Edición. Pág. 127.

• Pascual Anderson. Mª Del Rosario, (2005). Enfermedades de Origen Alimentario. Su prevención. España. Pág. 63.