UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MACHALAFACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Y DE LA

SALUD

CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA

LABORATORIO DE TOXICOLOGÍA

Profesor: Bioq. Farm. Carlos García MSc.Alumno: Román Mayra, Machuca Geanina, Barros Katherine.Curso: Quinto Paralelo: B Grupo N° 5Fecha de Elaboración de la Práctica: Martes 24 de Junio del 2014 Fecha de Presentación de la Práctica: Martes 01 de Julio del 2014

PRÁCTICA N° 5

Título de la Práctica: INTOXICACIÓN POR CLOROFORMO.

Animal de Experimentación: Cobayo

Vía de Administración: Vía Parenteral.

OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA

1. Observar la reacción que presenta el cobayo ante una Intoxicación.

2. Distinguir la sintomatología de la intoxicación por cloroformo con relación a otras sustancias toxicas.

3. Determinar el tiempo en que actúa el toxico en el organismo del cobayo para causarle la muerte

4. Conocer mediante diversas pruebas de identificación la presencia de cloroformo en el cobayo

MATERIALES SUSTANCIAS Bata de laboratorio Equipo de destilación Mechero Guantes de látex Gorro Campana Zapatones Espátula Mascarilla Pipetas Erlenmeyer Tubos de ensayo

“Todo es veneno, nada es veneno, todo depende de la dosis” Página 1

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Acido tartárico Alcohol de 95ª Nitrato de plata Potasa alcohólica percloruro de hierro beta naftol solución alcohólica concentrada de

potasa timol resorsinol Piridina cristal de yodo clorhidrato de piperacina reactivo de Benedict

EQUIPOS

Balanza analítica

Vasos de precipitación Jeringuilla de 10cc Instrumentos de disección

PROCEDIMIENTO

Para la realización de ésta práctica se efectúan los siguientes pasos:

1) Primeramente BIOSEGURIDAD: Es decir colocarse la mascarilla, bata de laboratorio, gorro, zapatones y los guantes de látex

2) A continuación se deben tener todos los materiales listos en la mesa de trabajo 3) Con la jeringuilla tomamos 10 ml de cloroformo e inyectamos al cobayo (vía

parenteral) 4) Colocamos el cobayo en la campana 5) Observar la sintomatología del toxico en el animal de experimentación.6) Esperamos el tiempo de defunción.7) Una vez muerto el cobayo se procede a amarrarlo en la tabla de disección. 8) Tomamos el bisturí # 11 y lo colocamos en el soporte de bisturí y procedemos a

rasurar al cobayo.9) Con mucho cuidado cortar la piel, ejerciendo presión sobre las costillas y con una

jeringa aspirar la sangre. 10) Retirar los órganos sin excepción de uno y los colocamos en un vaso de

precipitación. 11) Luego procedemos a trocear muy fino los órganos con unas tijeras.12) Transvasamos a un balón y colocamos las perlas de vidrio, agregar además una

pequeña cantidad de ácido tartárico y unos 3ml de agua destilada.13) Preparar 20 ml de NaOH al 20%, colocarlo en un erlenmeyer. 14) Armar el equipo de destilación y poner las vísceras a destilar durante 30 minutos y

con la ayuda de lámparas de alcohol calentar con movimientos circulares. 15) Finalmente en el destilado se realizan las reacciones de identificación:

Reacción con alcohol y nitrato de plata. Reacción de dunas Reacción de Lustgarten Reacción de fujiwara Reacción de roseboom Reacción de Benedict

Reacciones:

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Piridina cristal de yodo clorhidrato de piperacina reactivo de Benedict

EQUIPOS

Balanza analítica

1.-En el fondo de un tubo de ensayo se mezclan unas cuantas gotas de cloroformo con otras tantas de alcohol de 95ª que contiene un poco de nitrato de plata, se inflama la mezcla y se observa que esta arde con un llama bordeada de verde y que el ácido clorhídrico formado reacciona con el nitrato de plata disuelto originando un precipitado de cloruro de plata.Reacción de dunas.- al adicionar unas gotas de destilado que contiene cloroformo a unos mililitros de potasa alcohólica (proporción 1:10), se originan formiatos y cloruro de potasio.

CHCl3 + 4 KOH ClK + HCO2K + H 2 O

Se neutralizan la mezcla, y se separan en dos porciones a una porción se le agrega percloruro de hierro produciendo un color rojo en frio o un precipitado en caliente.A la otra porción se le agrega solución de nitrato de plata produciéndose un precipitado de cloruro de plata que se disuelve en amoniaco diluido.

2. Reacción de Lustgarten.- al calentar la muestra con unos miligramos de beta naftol y una solución alcohólica concentrada de potasa (preferentemente un trozo de potasa y algunas gotas de alcohol), se obtiene un franco color azul.Si se sustituye el B-naftol por timol el color es Amarillo as o menos oscuro; con resorsinol la coloración e roja – violáceo y con la piridina rojo.

3. Reacción de fujiwara.-En un tubo de ensayo, se vierte 2ml de lejía de sosa 1:2 con una capa de 2mm de piridina y luego la muestra que contiene el cloroformo; se agitan, podemos por unos instantes en baño de María y se deja en reposo; se convierte en una materia coloreada que varía del rosa al rojo vivo, soluble en piridina .Esta reacción sensible para unos pocos microgramos de cloroformo y es aplicable en la orina de algún sujeto que haya absorbido de 15-20 g de agua clorofórmica.

4. Reacción de roseboom.- se disuelve un pequeño cristal de yodo en la solución muestra y se agregan unos pocos miligramos de clorhidrato de piperacina ; si el cloroformo está presente en la muestra, la coloración violeta inicial cambia a amarilla rojiza al disolverse el alcaloide.

5. Reacción de Benedict.- si la solución muestra contiene cloroformo, reduce el reactivo de Benedict, y de acuerdo a la concentración del toxico puede producirse una gama de colores que van desde el verde, amarillo, naranja o rojo ladrillo.

GRÁFICOS

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REACCIONES DE RECONOCIMIENTO

Muestra inicialó destilado

Reacción con alcohol y nitrato de plata:

Reacción Positivo no característico precipitado (+) ; llama bordeada verde (-)

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ADMINISTRACION DEL TOXICO OBSERVAMOS SINTOMAS DECESO

EN LA TABLA DE DISECCION SE RASURA Y SE PROCEDE A ABRIR EL COBYAO PARA EXTRAER SUS OORGANOS

VISCERAS EN EL BALON SE MIDE EL NaOH 20%

Reacción de Dunas

Reacción Positivo característico FeCl3 (+) ; AgNO3 (+)

Reacción de Lustgarten

Positivo no característico (b naftol)

Reacción Positivo característico (timol)

Positivo característico (resorcina)

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Reacción de Roseboom

Reacción Positivo no característico Coloración violeta amarilla rojiza

Reacción de benedict

Reacción negativo gama de colores (verde, amarillo, naranja, o rojo ladrillo)

OBSERVACIONES

En la realización de ésta práctica al haber administrado el cloroformo por vía peritoneal al sujeto de experimentación inmediatamente pudimos analizar y percibir la diversa sintomatología en el cobayo, entre ellos: perdida de actividad motora, estado de sueño profundo, hinchazón abdominal, e hipoxia.

Cabe recalcar que a través de las pruebas en medios biológicos, observamos la coloración de las reacciones lo cual corroboro para determinar la presencia del toxico (cloroformo) en el animal de experimentación.

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CONCLUSIONES

En la realización de esta práctica se aprendió a reconocer los síntomas provocados luego de administración de un tóxico (cloroformo) al organismo de un animal de experimentación (cobayo).

Es importante mencionar que al realizar las reacciones de reconocimiento de este toxico entre ellas: la reacción con alcohol y nitrato de plata, reacción de dunas, reacción de Lustgarten, , reacción de Roseboom, reacción de Benedict. La mayoría dieron resultados positivos característicos lo que nos indica que si hubo presencia de cloroformo en la muestra.

RECOMENDACIONES

Asegurarse que el equipo esté correctamente sellado, ya que de esta forma logramos impedir el escape de los vapores en el proceso de la destilación, evitando así una intoxicación.

Utilizar el equipo de protección adecuado: bata de laboratorio, gorro, zapatones, guantes, mascarilla.

Aplicar todas las normas de bioseguridad en el laboratorio. Utilizar pipetas específicas para cada reactivo. Preparar correctamente las sustancias a la concentración requerida Acatar las sugerencias y guías expuestas por el ayudante, para de esta manera obtener

muy buenos resultados en la realización de la práctica.

GLOSARIO

CLOROFORMO

Triclorometano. También llamado cloroformo o tricloruro de metilo, es un compuesto químico de fórmula química CHCl3. Puede obtenerse por cloración como derivado del metano o del alcohol etílico o, más habitualmente en la industria farmacéutica, utilizando hierro y ácido sobre tetracloruro de carbono. A temperatura ambiente, es un líquido volátil, no inflamable, incoloro, de olor dulzón.

BETA NAFTOL

2-Naftol, o β-naftol, es un sólido cristalino incoloro de fórmula C10H7OH, es un isómero de 1-naftol, que difieren según la ubicación el hidroxilo de naftaleno. Los naftoles son los homólogos del naftaleno de fenol, con el grupo hidroxilo más reactivo que en los fenoles. Ambos isómeros son solubles en alcohol, éter y cloroformo. Se pueden utilizar en la producción de tinta s en la síntesis orgánica. Por ejemplo, 2-naftol se hace reaccionar para formar 1,1'-Binaftaleno-2,2'-diol. Es uno de los derivados de la naftalina más importantes, se parecen a los fenoles en sus propiedades químicas y tiene distintas aplicaciones en la industria química.

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TIMOL

El timol (2-isopropil-5-metilfenol) es una sustancia cristalina incolora con un olor característico que está presente en la naturaleza en los aceites esenciales del tomillo o del orégano, que se encuentra a la vez el cimeno y el timeno.El timol se caracteriza por su poder desinfectante y fungicida. Por su sabor agradable está presente en la formulación de diversos enjuagues bucales, pastas de dientes etc. Una disolución de 5 % timol en etanol se utiliza para la desinfección dermal y contra infecciones con hongos.

REACCION BENEDICT

La reacción benedict o prueba de benedict identifica azucares reductores como lactosa, glucosa, maltosa. Se utiliza el reactivo de benedict el mismo que consta de sulfato cúprico, citrato e sodio, carbonato anhidro de sodio.

PIRIDINA

Piridina. Es un líquido incoloro de olor característico desagradable. Pertenece a la familia de los compuestos aromáticos heterocíclicos, y está estructuralmente relacionada al benceno, siendo la única diferencia entre ellos el reemplazo de un grupo CH del anillo bencénico por un átomo de nitrógeno

CUESTIONARIO .¿CUÁLES SON LAS PROPIEDADES FÍSICO-QUÍMICAS DEL CLOROFORMO?

El cloroformo es un líquido incoloro, volátil y no inflamable con un característico olordulzón.Factor de conversión(20 o C, 101 kPa): 4,97 mg/m3 = 1ppmPeso molecular: 119,38Fórmula molecular: CHCl3Solubilidad: ligeramente soluble en agua, miscible con alcohol, éter, benceno, sulfuro de carbono y tetracloruro de carbono.Punto de fusión: –63 oCPunto de ebullición: 62 oCPresión de vapor: 21 kPa a 20 oCDensidad: 4,1 veces la del aireLímite de explosividad: –Umbral de olor: 20 ppm (100 mg/m3)

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¿CUALES SON LOS USOS MAS COMUNES DEL CLOROFORMO?

Fue utilizado como un anestésico temprano en cirugía y odontología y por esta razón

las personas que trabajan con el material deben evitar la inhalación de sus vapores.

Hoy en día el cloroformo tiene un importante número de usos tales como:

En química se utiliza en la separación orgánica.

En la fabricación de plásticos que se utiliza en el proceso de unión.

Se utiliza en síntesis orgánica.

Se utiliza como un precursor en la fabricación de teflón (antiadherente).

En la Primera Guerra Mundial el cloroformo fue usado como arma química.

¿DESCRIBA EL PROCESO DE METABOLIZACION DEL CLOROFORMO?

El cloroformo es metabolizado por vías oxidativas y reductoras. En condiciones normales, el metabolismo oxidativo es la vía principal, y el metabolismo reductivo no juega un papel significativo. El cloroformo también se conjuga con ácido glucurónico (conjugación mercaptúrica).6

El metabolismo del cloroformo es más rápido en ratones que en ratas, mientras que en los tejidos humanos (hígado y riñón), porque tienen un déficit en la actividad del isoenzima CYP2E1, que es la responsable del metabolismo del cloroformo

¿INDIQUE EL TRATATMIENTO PARA CLOROFORMO?

En vista de que el cloroformo sufre conjugación mercaptúrica en su paso por el organismo, algunos autores proponen a la N-acetilcisteína como un posible tratamiento de las intoxicaciones con cloroformo. La N-acetilcisteína, por su capacidad de inhibir la formación de radicales libres generados por el cloroformo y sus metabolitos, ha presentado efectividad en algunos casos en el tratamiento de intoxicaciones por cloroformo, incluso combinado con otros antioxidantes naturales, como la vitamina E.

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BIBLIOGRAFÍA Y WEBGRAFÍA

Julian, I. (2003). Quimica. En I. Julian, Diccionario de Quimica. Madrid: Editorial Complutense.

Torres, L. M. (2002). Metanol. En L. M. Torres, Cuidados Criticos y Emergencias. Madrid: Aran Ediciones.

Cloroformo.2014 EcuRed de: http://www.ecured.cu/index.php/Triclorometano

Piridina.2014 EcuRed De: http://www.ecured.cu/index.php/Piridina

2- naftol. Wikipedia de: http://es.wikipedia.org/wiki/2-naftol

Timol. Wikipediahttp://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003040.htm

Perez Jorge Benedictde: http://www.slideshare.net/JorgePerez24/biologia-reacciones-quimicas

AUTORIA

BQF. Carlos García

Machala 24 de Junio del 2013

FIRMA

______________ ______________ _________________

Mayra Román Katherine Barros Geanina Machuca

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ANEXOS:

ANEXO 1:

ANEXO 2:

INTOXICACION POR CLOROFORMO

Generalidades

El cloroformo es el triclorometano (CHCl3). Inicialmente se empleó como agente anestésico, pero poco después se abandonó este uso por s gran toxicidad hepática y renal.es un líquido incoloro y no inflamable, de olor y sabor dulzón, extremadamente volátil y muy liposoluble.

Fuentes de exposición

Está disponible como disolvente en laboratorios y en la industria química.se ha prohibido su uso como sustancia aromática en pastas de dientes y otros productos como resultado de su efecto carcinogénico en animales después de exposiciones crónicas. La intoxicación aguda y crónica puede ocurrir por exposición a sus vapores.

Toxicocinetica y mecanismo de acción

El cloroformo es un anestésico potente y origina una profunda depresión del SNC. Entra en el organismo por vía respiratoria, digestivo dérmico. En humanos puede producir la muerte con la ingestión oral de tan solo 10ml .exposiciones prolongadas o repetidas a los vapores pueden producir hepatotoxicidad, severa que se característica por necrosis centrolobular. Asimismo se ha descrito degeneración grasa del hígado, el riñón el corazón. El mecanismo de lesión parece ser la oxidación a nivel hepático del cloroformo a fosgeno a través del sistema microsomal. También se forma fosgeno cuando los vapores de cloroformo se exponen al calor de una llama. El fosgeno inhalado se convierte en ácido hidroclorhidrico y

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dióxido de carbono cuando reacciona con el agua en el alveolo; y el ácido produce edema pulmonar.

Cuadro clínico

La severidad de los síntomas por exposición aguda, vía respiratoria, digestivo, dérmica, está en relación directa con la dosis absorbida. El cloroformo, cuando se inhala, produce todos los niveles de anestesia, teniendo un margen de seguridad muy estrecho, debido a que causa fallo cardiaco y respiratorio de forma casi simultánea. No puede detectarse por el olfato hasta que su concentración excede de 400 ppm. Una exposición durante 10 minutos a concentraciones de 1000 ppm produce síntomas generales como nauseas, vómitos, vértigo cefaleas .exposiciones a una concentración de 1000 a 4000 ppm origina desorientación y concentraciones de 10000 a 20000 ppm dan lugar a pérdida de conciencia, pudiendo originar la muerte.

Dependiendo de la dosis absorbida va a producir alteraciones más o menos importantes de la función hepática, renal y cardiaca.

El cloroformo, por su acusado poder como disolvente de grasas, en contacto con la piel da lugar a dermatitis local, y en los ojos produce irritación corneal.

Reacciones en medio biológico

El material de la investigación se somete a destilación con arrastre de vapor en medio acido tartárico, y en el destilado se realiza las reacciones de identificación.

1.-En el fondo de un tubo de ensayo se mezclan unas cuantas gotas de cloroformo con otras tantas de alcohol de 95ª que contiene un poco de nitrato de plata, se inflama la mezcla y se observa que esta arde con un llama bordeada de verde y que el ácido clorhídrico formado reacciona con el nitrato de plata disuelto originando un precipitado de cloruro de plata.

Reacción de dunas.- al adicionar unas gotas de destilado que contiene cloroformo a unos mililitros de potasa alcohólica (proporción 1:10), se originan formiatos y cloruro de potasio.

CHCl3 + 4 KOH ClK + HCO2K + H 2 OSe neutralizan la mezcla, y se separan en dos porciones a una porción se le agrega percloruro de hierro produciendo un color rojo en frio o un precipitado en caliente.

A la otra porción se le agrega solución de nitrato de plata produciéndose un precipitado de cloruro de plata que se disuelve en amoniaco diluido.

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Reacción de Lustgarten.- al calentar la muestra con unos miligramos de beta naftol y una solución alcohólica concentrada de potasa (preferentemente un trozo de potasa y algunas gotas de alcohol), se obtiene un franco color azul.

Si se sustituye el B-naftol por timol el color es Amarillo as o menos oscuro; con resorsinol la coloración e roja – violáceo y con la piridina rojo.

Reacción de fujiwara.-En un tubo de ensayo, se vierte 2ml de lejía de sosa 1:2 con una capa de 2mm de piridina y luego la muestra que contiene el cloroformo; se agitan, podemos por unos instantes en baño de María y se deja en reposo; se convierte en una materia coloreada que varía del rosa al rojo vivo, soluble en piridina .Esta reacción sensible para unos pocos microgramos de cloroformo y es aplicable en la orina de algún sujeto que haya absorbido de 15-20 g de agua clorofórmica.

Reacción de roseboom.- se disuelve un pequeño cristal de yodo en la solución muestra y se agregan unos pocos miligramos de clorhidrato de piperacina ; si el cloroformo está presente en la muestra, la coloración violeta inicial cambia a amarilla rojiza al disolverse el alcaloide.

Reacción de Benedict.- si la solución muestra contiene cloroformo, reduce el reactivo de Benedict, y de acuerdo a la concentración del toxico puede producirse una gama de colores que van desde el verde, amarillo, naranja o rojo ladrillo.

Efectos Potenciales de Salud

Inhalación: Actúa como anestésico relativamente potente. Irrita el tracto respiratorio y produce efectos en el sistema nervioso central, incluyendo dolor de cabeza, somnolencia, mareos. La exposición a altas concentraciones puede resultar en inconsciencia e inclusive muerte. Puede causar daño hepático y desórdenes sanguíneos. La exposición prolongada puede llevar a la muerte debida una frecuencia cardíaca irregular y desórdenes renales y hepáticos.

Ingestión: Causa quemaduras severas de boca y garganta, dolor pectoral y vómitos. Grandes cantidades pueden causar síntomas similares a los de la inhalación.

Contacto con la Piel: Causa irritación cutánea causando enrojecimiento y dolor. Elimina los aceites naturales. Puede ser absorbido a través de la piel.

Contacto con los Ojos: Los vapores causan dolor e irritación ocular. Las salpicaduras pueden causar severa irritación y posible daño ocular.

Exposición Crónica: La exposición prolongada o repetida a los vapores puede causar daño al sistema nervioso central, corazón, hígado y riñones. El contacto con el líquido elimina las grasas y puede causar irritación crónica de la piel con grietas y

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resequedad y la correspondiente dermatitis. Se sospecha que el cloroformo es un carcinógeno en humanos.

Estabilidad y reactividad

Estabilidad: Establo bajo condiciones ordinarias del uso y del almacenaje. el pH disminuye en la exposición prolongada a la luz y al aire debido a la formación de HCl.

Productos peligrosos de la descomposición: Monóxido de carbono del producto de mayo, bióxido de carbono, cloruro de hidrógeno y fosgeno cuando está calentado a la descomposición.

Polimerización peligrosa: No ocurrirá.

Manejo

Guarde en un envase resistente a la luz, cerrado herméticamente y almacene en un área fresca, seca y bien ventilada. Proteja contra los daños físicos. Aísle de las substancias incompatibles. Use equipo de protección especial para realizar el mantenimiento o donde las exposiciones puedan exceder los niveles de exposición establecidos. Lávese las manos, la cara, los antebrazos y el cuello al salir de las áreas restringidas. Dese un baño de regadera, deseche la ropa exterior, cámbiese la ropa vistiendo ropa limpia al terminar el día.

Evite la contaminación cruzada de las ropas de calle. Lávese las manos antes de comer y no coma, ni beba, ni fume en el trabajo. Los envases de este material pueden ser peligrosos cuando están vacíos ya que retienen residuos del producto (vapores, líquido); observe todas las advertencias y precauciones que se alistan para el producto. Umbral de olor del cloroformo: 250 mg/m3. El umbral de olor sólo sirve como advertencia de la exposición; si no siente el olor, no significa que usted no está siendo expuesto.

Desechos:

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En pequeñas cantidades puede dejarse evaporar en una campana extractora. En caso de grandes cantidades, debe mezclarse con combustible, como queroseno, e incinerarse en equipo especializado para evitar la generación de fosgeno.

ALMACENAMIENTO:

Los recipientes que contienen este producto deben ser almacenados en lugares alejados de la luz directa del sol, ya que se descompone lentamente a productos como el fosgeno.

INFORMACIÓN TOXICOLÓGICA

DATO TOXICOLÓGICOS:

Chloroform: LD50 oral en ratas: 908 mg/kg; LD50 piel de conejos: > 20 gm/kg; LC50 inhalación en ratas: 47702 mg/m3/4H; irritación data: piel de conejos 10 mg/24H abierta leve; Ojo de conejos: 20 mg/24H moderada; Ha sido investigado como tumorígeno, mutagénico y causante de efectos reproductivos.

Se han observado defectos al nacimiento en ratas y ratones expuestos a la inhalación de cloroformo a concentraciones en el aire mayores de 100 ppm. La ingestión de cloroformo por animales de laboratorio gestantes, ha causado feto toxicidad pero no defectos al nacimiento y sólo a niveles que causan severos efectos en la madre

INFORMACIÓN ECOLÓGICA

Esta sustancia puede ser peligrosa para el ambiente; debería prestarse atención especial al agua.

Ecotoxicidad Algas (Chlamydomonas reinhardii) EC50 = 13,3 mg/l (72 horas) Crustáceos (Artemia salina) EC50 = 68 mg/l (10 horas) Peces (Brachydanio rerio) LC50 = 100 mg/l (48 horas)

Movilidad Coeficiente de reparto octanol/agua como log Pow: 1,97

BIBLIOGRAFÍA:

http://www.quimica.unam.mx/IMG/pdf/7cloroformo.pdf http://www.dorwil.com.ar/msds/Cloroformo.pdf https://www.murciasalud.es/recursos/ficheros/137913-CLOROFORMO.pdf

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