Clasificación OMS de Inmunodeficiencias Primarias

INMUNODEFICIENCIAS INMUNODEFICIENCIAS PRIMARIASPRIMARIAS

Marcelo Castillo Navarrete, TM MsC (c)Marcelo Castillo Navarrete, TM MsC (c)Facultad de MedicinaFacultad de Medicina

Dpto. Especialidades MédicasDpto. Especialidades Médicas

Carrera Tecnología MédicaCarrera Tecnología Médica

26 de Mayo de 200526 de Mayo de 2005

Clasificación OMS de Inmunodeficiencias Clasificación OMS de Inmunodeficiencias Primarias Primarias

• Inmunodeficiencias CombinadasInmunodeficiencias Combinadas• Inmunodeficiencias predominantemente Inmunodeficiencias predominantemente

de Anticuerposde Anticuerpos• Inmunodeficiencias asociadas a otros Inmunodeficiencias asociadas a otros

defectosdefectos• Deficiencias de ComplementoDeficiencias de Complemento• Deficiencias de función fagocíticaDeficiencias de función fagocítica• Otras Inmunodeficiencias primariasOtras Inmunodeficiencias primarias

Aspectos Genéticos de las Aspectos Genéticos de las Inmunodeficiencias PrimariasInmunodeficiencias Primarias

• La mayoría son de carácter recesivo.La mayoría son de carácter recesivo.– Ligados al cromosoma XLigados al cromosoma X– Ligados a cromosomas autosómicos.Ligados a cromosomas autosómicos.

• Se puede detectar portadores de la Se puede detectar portadores de la enfermedadenfermedad

• Se puede realizar el diagnóstico prenatal Se puede realizar el diagnóstico prenatal por biología molecular (DNA chips)por biología molecular (DNA chips)

Defectos predominantemente de anticuerpos Defectos predominantemente de anticuerpos

Defectos predominantemente de Defectos predominantemente de anticuerpos anticuerpos

• Fueron las primeras en conocerseFueron las primeras en conocerse• Reducción o ausencia de uno o más isotipos o Reducción o ausencia de uno o más isotipos o

subclases de inmunoglobulinasubclases de inmunoglobulina• Bloqueo en la maduración de los linfocitos BBloqueo en la maduración de los linfocitos B• Respuesta defectuosa de los Linfocitos B a las Respuesta defectuosa de los Linfocitos B a las

señales de los linfocitos T.señales de los linfocitos T.• Clínicamente se presentan como enfermedades Clínicamente se presentan como enfermedades

piógenas recurrentes.piógenas recurrentes.

AgaAgammmaglobulinemia ligada al Sexomaglobulinemia ligada al Sexo(Aspectos Clínicos) (Aspectos Clínicos)

• Representa el prototipo del déficit puro Representa el prototipo del déficit puro de células B.de células B.

• Se hereda ligado al cromosoma XSe hereda ligado al cromosoma X

• Los niños no presentan síntoma los Los niños no presentan síntoma los primeros 9 a 12 meses de vidaprimeros 9 a 12 meses de vida– Por IgG transplacentaria de la madrePor IgG transplacentaria de la madre– Leche MaternaLeche Materna

AgaAgammmaglobulinemia ligada al Sexomaglobulinemia ligada al Sexo (Aspectos Clínicos) (Aspectos Clínicos)

• Sufren de infecciones piógenasSufren de infecciones piógenas– Otitis mediaOtitis media– SinusitisSinusitis– ConjuntivitisConjuntivitis– NeumoníaNeumonía– PiodermitisPiodermitis

• Patógenos más frecuentesPatógenos más frecuentes– Haemophilus influenzaeHaemophilus influenzae– Streptococcus pneumoniaeStreptococcus pneumoniae– Staphylococcus aureusStaphylococcus aureus– Streptococcus pyogenesStreptococcus pyogenes

Controlados Controlados porpor

AntibióticosAntibióticos

Producen destrucciónProducen destrucciónanatómicaanatómica

AgaAgammmaglobulinemia ligada al Sexomaglobulinemia ligada al Sexo (Aspectos Clínicos) (Aspectos Clínicos)

• Viremia persistenteViremia persistente

• Adquirir poliomielitis paralítica (Vacuna Adquirir poliomielitis paralítica (Vacuna con agente vivo)con agente vivo)

• Afectados por Enterovirus y Afectados por Enterovirus y Giardia Giardia lamblialamblia

• Artritis (35 %) debido a micoplasmaArtritis (35 %) debido a micoplasma

AgaAgammmaglobulinemia ligada al Sexomaglobulinemia ligada al Sexo (Aspectos de Laboratorio) (Aspectos de Laboratorio)

• Cuantificación de Inmunoglobulinas < Cuantificación de Inmunoglobulinas < 100 mg/dl100 mg/dl

• IgA secretora no detectableIgA secretora no detectable

• Células B AusentesCélulas B Ausentes

• Relación A/G aumentadaRelación A/G aumentada

• Inmunidad celular Normal.Inmunidad celular Normal.

• Patrón electroforético alteradoPatrón electroforético alterado

AgaAgammmaglobulinemia ligada al Sexomaglobulinemia ligada al Sexo (Aspectos Moleculares) (Aspectos Moleculares)

• Brazo Largo del Brazo Largo del Cromosoma X (q21.3 – Cromosoma X (q21.3 – 22)22)

• Afecta al gen de la Afecta al gen de la tirosina quinasa (Btk) de tirosina quinasa (Btk) de células B (maduración células B (maduración de las células B)de las células B)

• Sería la señal para preB Sería la señal para preB reordene sus cadenas reordene sus cadenas livianas una vez que han livianas una vez que han aparcido las pesadas.aparcido las pesadas.

AgaAgammmaglobulinemia ligada al Sexomaglobulinemia ligada al Sexo (Aspectos Epidemiológico) (Aspectos Epidemiológico)

• Las mujeres portadoras son Las mujeres portadoras son inmunológicamente normalesinmunológicamente normales

• Las células B con el gen Btk mutado no Las células B con el gen Btk mutado no maduranmaduran

• Las células B con el gen activo maduranLas células B con el gen activo maduran

Síndrome Hiper IgMSíndrome Hiper IgM

• Se describió en 1961 en 2 varonesSe describió en 1961 en 2 varones

• Similar a la agammaglobulinemia Similar a la agammaglobulinemia ligada a Xligada a X

• 70% patrón hereditario recesivo ligado 70% patrón hereditario recesivo ligado a Xa X

• Se ha descrito en mujeres sin patrón Se ha descrito en mujeres sin patrón hereditario conocidohereditario conocido

Síndrome Hiper IgMSíndrome Hiper IgM(Aspectos Clínicos)(Aspectos Clínicos)

• Presentan infecciones piógenas recurrentes.Presentan infecciones piógenas recurrentes.• Infecciones oportunistas (Infecciones oportunistas (Pneumocistis carinii)Pneumocistis carinii)• Problemas autoinmune (neutropenia Problemas autoinmune (neutropenia

recurrente)recurrente)• Pacientes >20 añosPacientes >20 años

– Mayor riesgo de cancerMayor riesgo de cancer• Tracto gastrointestinalTracto gastrointestinal

• HígadoHígado

• Vesícula.Vesícula.

Síndrome Hiper IgMSíndrome Hiper IgM(Aspectos de Laboratorio)(Aspectos de Laboratorio)

• IgM Muy elevadaIgM Muy elevada

• IgG e IgA muy baja (< 150 mg/dl)IgG e IgA muy baja (< 150 mg/dl)

• Recuento de Linfocitos B NormalRecuento de Linfocitos B Normal

• Sólo se detecta IgM e IgD de MembranaSólo se detecta IgM e IgD de Membrana

• Recuento de Linfocitos T NormalRecuento de Linfocitos T Normal– No expresan ligando CD40 (Interacción con No expresan ligando CD40 (Interacción con

LB y cambio de clase)LB y cambio de clase)

Síndrome Hiper IgMSíndrome Hiper IgM(Aspectos de Moleculares y (Aspectos de Moleculares y

epidemiológicos)epidemiológicos)• Ligado al brazo largo del Ligado al brazo largo del

cromosoma X (q26)cromosoma X (q26)• En 1993 se descubrieron En 1993 se descubrieron

mutaciones para el mutaciones para el CD40LCD40L

• En 1997 la OMS la En 1997 la OMS la considera una considera una inmunodeficiencia inmunodeficiencia combinadacombinada

• Se puede realizar Se puede realizar diagnóstico prenataldiagnóstico prenatal

Inmunodeficiencia Común VariableInmunodeficiencia Común Variable

• Se usa para designar síndromes no bien Se usa para designar síndromes no bien definidos.definidos.

• Formación defectuosa de anticuerpos.Formación defectuosa de anticuerpos.

• Sin otros defectos humoralesSin otros defectos humorales

• Patrón hereditario variadoPatrón hereditario variado

Inmunodeficiencia Común VariableInmunodeficiencia Común Variable(Aspectos Clínicos)(Aspectos Clínicos)

• Infeccions piógenas sinopulmonares recurrentes.Infeccions piógenas sinopulmonares recurrentes.• Altamente susceptibles aAltamente susceptibles a

– Giardia lambliaGiardia lamblia– Herpes simplexHerpes simplex– Herpes zosterHerpes zoster

• Infecciones por patógenos inusualesInfecciones por patógenos inusuales– Pneumocistis cariniiPneumocistis carinii– MicobacteriasMicobacterias– HongosHongos– EnterovirusEnterovirus

Inmunodeficiencia Común VariableInmunodeficiencia Común Variable(Aspectos Clínicos)(Aspectos Clínicos)

• Cárcinoma gástrico 50 veces más frecuente.Cárcinoma gástrico 50 veces más frecuente.• Linfomas 300 veces más frecuente en mujeres que en hombres.Linfomas 300 veces más frecuente en mujeres que en hombres.• Linfoadenopatía y esplenomegaliaLinfoadenopatía y esplenomegalia• Hiperplasia nodular linfoide (tracto gastrointestinal)Hiperplasia nodular linfoide (tracto gastrointestinal)• Mala absorción (enf. Celiaca)Mala absorción (enf. Celiaca)• Desordenes autoinmunesDesordenes autoinmunes

– Anemia perniciosaAnemia perniciosa– Anemia hemolíticaAnemia hemolítica– Neutropenia.Neutropenia.

• Familiares presentan mayor incidenciaFamiliares presentan mayor incidencia– Déficit de IgADéficit de IgA– Enfermedades autoinmunesEnfermedades autoinmunes– Condiciones malignasCondiciones malignas

Inmunodeficiencia Común VariableInmunodeficiencia Común Variable(Aspectos de Laboratorio)(Aspectos de Laboratorio)

• Concentración de IgG disminuidaConcentración de IgG disminuida• IgA e IgM generalmente disminuidaIgA e IgM generalmente disminuida• Recuento de L. B puede estar reducidoRecuento de L. B puede estar reducido• 60% de los pacientes respuesta 60% de los pacientes respuesta

linfoproliferativa disminuida (activar linfoproliferativa disminuida (activar TCR)TCR)

• Se piensa en un defecto de transducción Se piensa en un defecto de transducción de señales.de señales.

Deficiencia de Isotipos de Deficiencia de Isotipos de InmunoglobulinasInmunoglobulinas

• Déficit de IgA la más frecuenteDéficit de IgA la más frecuente– 1:700 en caucásicos1:700 en caucásicos– 1:18.500 japoneses1:18.500 japoneses– Parón hereditario variable (asociado a haplotipos de Parón hereditario variable (asociado a haplotipos de

HLA)HLA)– Pacientes normales o con infecciones Pacientes normales o con infecciones

sinopulmonaressinopulmonares– IgA ausente o muy disminuída; IgG e IgM NormalIgA ausente o muy disminuída; IgG e IgM Normal– Se supone defecto en la diferecnciación de células B.Se supone defecto en la diferecnciación de células B.– Células T Normales.Células T Normales.

Deficiencia Selectiva de Subclases de Deficiencia Selectiva de Subclases de InmunoglobulinasInmunoglobulinas

• IgG Total normal,IgG Total normal,

• Alguna subclase de IgG disminuidaAlguna subclase de IgG disminuida

• Puede asociarse a niveles bajos de IgAPuede asociarse a niveles bajos de IgA

• Déficit de IgG3 más común en adultoDéficit de IgG3 más común en adulto

• Déficit de IgG2 en niños.Déficit de IgG2 en niños.

Defectos Primarios de Células TDefectos Primarios de Células T

• Infecciones porInfecciones por– HongosHongos– VirusVirus– Bacterias intracelularesBacterias intracelulares– ProtozoosProtozoos

• Diagnóstico porDiagnóstico por– Disminución de linfocitos T periféricosDisminución de linfocitos T periféricos– Respuesta proinflamatoria anormal Respuesta proinflamatoria anormal

(fitohematoaglutinina)(fitohematoaglutinina)– Hipersensibilidad cutánea retardada (PPD, Cándida) Hipersensibilidad cutánea retardada (PPD, Cándida)

negativasnegativas

Síndrome de DiGeorgeSíndrome de DiGeorge

• Desarrollo embriogénico defectuoso del 3° y 4° arcos Desarrollo embriogénico defectuoso del 3° y 4° arcos faríngeosfaríngeos– Timo y paratiroides (6 – 8 semana)Timo y paratiroides (6 – 8 semana)– Arco aórtico y porciones de labios y orejas (12 semana)Arco aórtico y porciones de labios y orejas (12 semana)

• Delecciones en el Cromosoma 22q11 (CATCH-22)Delecciones en el Cromosoma 22q11 (CATCH-22)– CardiacasCardiacas– Facie anormal (dismórfica con micrognatia)Facie anormal (dismórfica con micrognatia)– Hipoplasia o aplasia tímicaHipoplasia o aplasia tímica– Paladar Hendido (Cleft)Paladar Hendido (Cleft)– Hipocalcemia (ausencia de paratiroides)Hipocalcemia (ausencia de paratiroides)

• Se le asociado el consumo de alcohol y la diabetes maternaSe le asociado el consumo de alcohol y la diabetes materna


• Tetanía y/o falla cardíaca neonatalTetanía y/o falla cardíaca neonatal• 20% recuento o función de Linfocitos T 20% recuento o función de Linfocitos T

disminuidadisminuida• Los niños que sobreviven pueden adquirir Los niños que sobreviven pueden adquirir

células T funcionales.células T funcionales.– Presencia de tejido tímicoPresencia de tejido tímico– Sitio extratímico (anatómicamente no Sitio extratímico (anatómicamente no

identificadoidentificado

Defectos de Activación y Función de Defectos de Activación y Función de Células TCélulas T

• Se comenzaron a detectar a fines de los 80Se comenzaron a detectar a fines de los 80

• Linfocitos T fenotípicamente normalesLinfocitos T fenotípicamente normales

• Incapaces de proliferar o producir Incapaces de proliferar o producir citoquinascitoquinas– MitógenosMitógenos– AntígenosAntígenos– Otras señales de activación del TCR.Otras señales de activación del TCR.

Defectos de Activación y Función de Defectos de Activación y Función de Células TCélulas T

• Expresión defectuosa del complejo TCR/CD3Expresión defectuosa del complejo TCR/CD3– Deficiencia selectiva de CD3 Deficiencia selectiva de CD3 ..– Mutación en gen CD3Mutación en gen CD3

• Síntesis anormal de CD3Síntesis anormal de CD3• Transducción defectuosa de señales intracelularesTransducción defectuosa de señales intracelulares

• Síntomatología clínica similar a Síntomatología clínica similar a – déficit de células Tdéficit de células T– Déficit de células T y B combindasDéficit de células T y B combindas– Menos severasMenos severas

Defectos Combinados de Células T y BDefectos Combinados de Células T y B

Defectos Combinados de Células T y BDefectos Combinados de Células T y B • Defectos tanto en células B y TDefectos tanto en células B y T• Infecciones severas (potencialmente fatales)Infecciones severas (potencialmente fatales)• Graves anormalidades de la inmunidad mediada por célulasGraves anormalidades de la inmunidad mediada por células• Deficiencia de anticuerposDeficiencia de anticuerpos• Linfopenia (a expensas de linfocitos T)Linfopenia (a expensas de linfocitos T)• Retardo en el crecimientoRetardo en el crecimiento• Infeciones persistentesInfeciones persistentes

– CándidaCándida– CitomegalovirusCitomegalovirus– Pneumocystis cariniiPneumocystis carinii

• Descartar VIHDescartar VIH• Transplante de médula óseaTransplante de médula ósea

Inmunodeficiencia Combinada SeveraInmunodeficiencia Combinada Severa • Primera vez descrita en 1950 en SuizaPrimera vez descrita en 1950 en Suiza• TransmisiónTransmisión

– Ligada a X (50 – 60 %)Ligada a X (50 – 60 %)

– Autosómica recesivaAutosómica recesiva


– Ligada a X (50 – 60 %) (Xq13)Ligada a X (50 – 60 %) (Xq13)• Mutación de la cadena Mutación de la cadena del receptor de IL-2, IL-4, IL-7, del receptor de IL-2, IL-4, IL-7,

IL-11 y IL-15IL-11 y IL-15

• No pueden ser estimuladosNo pueden ser estimulados– Diferenciación de células TDiferenciación de células T

– Fases tardías del desarrollo de células BFases tardías del desarrollo de células B

Inmunodeficiencia Combinada SeveraInmunodeficiencia Combinada Severa


– Autosómica recesivaAutosómica recesiva• Déficit de ADA (50 % de casos)Déficit de ADA (50 % de casos)

– Mutaciones y delecciones en el cromosma 20q13Mutaciones y delecciones en el cromosma 20q13– Acumulación de metabolitos tóxicos (bloquean síntesis de Acumulación de metabolitos tóxicos (bloquean síntesis de

ADN) de las vías de las purinas (desoxiadenosintrifosfato) y ADN) de las vías de las purinas (desoxiadenosintrifosfato) y de la metilación (S-adenosil-homocisteína)de la metilación (S-adenosil-homocisteína)

– Defectos en función de Linfocitos T y BDefectos en función de Linfocitos T y B

• Déficit de PNPDéficit de PNP– Localizado en el cromosoma 14q13.1Localizado en el cromosoma 14q13.1– Acumulación de D-GTP (afecta principalmente a L.T)Acumulación de D-GTP (afecta principalmente a L.T)

Inmunodeficiencia Combinada SeveraInmunodeficiencia Combinada Severa

Inmunodefciencias Asociadas a Otros Inmunodefciencias Asociadas a Otros DefectosDefectos

• Síndrome de Wiskott-AldrichSíndrome de Wiskott-Aldrich– Ligada al cromosoma X (p11.23 = gen WASP)Ligada al cromosoma X (p11.23 = gen WASP)

– EccemaEccema

– Trombocitopenia y plaquetas pequeñasTrombocitopenia y plaquetas pequeñas

– Suceptibilidad a infecciones bacterianasSuceptibilidad a infecciones bacterianas

– Respuesta proliferativa de L.T ausente o disminuidaRespuesta proliferativa de L.T ausente o disminuida

– Déficit de produción de inmunoglobulinas frente a Déficit de produción de inmunoglobulinas frente a antígenos polisacáridosantígenos polisacáridos

Síndrome de Wiskott-AldrichSíndrome de Wiskott-Aldrich

Inmunodefciencias Asociadas a Otros Inmunodefciencias Asociadas a Otros DefectosDefectos

• Ataxia telangiectasiaAtaxia telangiectasia– Autosómico recesivo (afecta varios loscis deIgs y TCR)Autosómico recesivo (afecta varios loscis deIgs y TCR)– Ataxia cerebralAtaxia cerebral– Telangectasias (lóbulos de la oreja y conjuntiva)Telangectasias (lóbulos de la oreja y conjuntiva)– Infecciones sinopulmonares recurrentesInfecciones sinopulmonares recurrentes– Alta incidencia de tumoresAlta incidencia de tumores– Alfa-fetoproteína elevadaAlfa-fetoproteína elevada– Alteraciones variablesAlteraciones variables

• Disminución de IgsDisminución de Igs• Respuesta a anticuerpos específicos deficientesRespuesta a anticuerpos específicos deficientes• LT disminuidoLT disminuido

Ataxia TelangiectasiaAtaxia Telangiectasia

Deficiencia del ComplementoDeficiencia del Complemento

• Se han decrito deficiencias de todos los Se han decrito deficiencias de todos los componentes del complementocomponentes del complemento

• Autosómicos recesivosAutosómicos recesivos• Heterocigotos presentan la mitad del nivel Heterocigotos presentan la mitad del nivel

normal del componentenormal del componente• Deficiencia de C1, C4 o C2 Deficiencia de C1, C4 o C2

– enfermedades autoinmunesenfermedades autoinmunes– Complejos inmunesComplejos inmunes

• Deficiencia de C3 Infecciones recurrentes por Deficiencia de C3 Infecciones recurrentes por bacterias Gram (-) y (+)bacterias Gram (-) y (+)

GRANULOCITOS, FAGOCITOSIS Y ESTRESS OXIDATIVO:

Evaluación por Citometría de Flujo.

Marcelo Castillo N. MsC (c)Juan Luis Castillo MsC

Centro de Diagnóstico Onco-inmunológicoLtda.Laboratorio de Citometría de Flujo

Hospital del Trabajador, Concepción, Chile.

www.oncoinmun.co.cl

INMUNIDADINNATA

INMUNIDADADAPTATIVAINFLAMACION

SISTEMAINMUNE

INFLAMACION

FAGOCITOSIS

HematopoiesisPLURIPOTENT

STEM CELLCOMMITTED

PROGENITORCELL

RECOGNIZABLE BONE MARROW

PRECURSOR CELL

MATURE BLOOD CELL

myeloblastmonoblast

pronormoblast red cellneutrophilmonocyte

basophil

platelet

CFU-Baso

CFU-Eos

CFU-GM

BFU-E/CFU-E

eosinophil

pre-T

pre-B

myeloidprogenitor

cell

lymphoidprogenitor

cell

lymphoblast

lymphoblast

T-cell

B-cell& plasma cell

MIXED PROGENITOR

CELL

CFU-Meg megakaryocytepluripotentstem cell

M.C.N.M.C.N.

COMPONENTES PRINCIPALES DE LOSGRANULOS PRIMARIOS DE LOS NEUTROFILOS

•Agentes microbicidas (lisosima, mieloperoxidasa, defensina, proteínas catiónicas, agente microbicida permeabilizante)

• Proteasas (elastasa, catepsina G, otras)

• Hidrolasas Acidas (N-acetilglucuronidasa, catepsina B y D, -glucuronidasa, -glicerofosfatasa)

• Otras (enzima generadora de kininas, factor inactivador de C5a)

•SECUNDARIOS•Agentes microbicidas (Lisosima)•Proteasas (Colagenasa)•Otras (Lactoferrina, proteína ligante de vitamina B12, activador del plasminógeno, citocromo b558, complejo CD11/CD18, receptor fMLP, histaminasa, receptor de C3bi)

COMPONENTES PRINCIPALES DE LOSGRANULOS SECUNDARIOS Y TERCIARIOSDE

LOS NEUTROFILOS

•TERCIARIOS•Proteasas (gelatinasa)

Fisiología de la Fagocitosis

• Proteínas de fase aguda

• Migración leucocitaria

• Proceso fagocítico

Fisiología de la Fagocitosis• Proteínas de fase aguda.

– Actúan • Como factores quimiotácticos

• Algunos como opsoninas (factores del complemento)

• Uno de los mas útiles por su aumento considerable es la proteína C reactiva (CPR)

• Actúa como opsonina mediando la fagocitosis en monocitos,

• Activa la vía clásica de complemento a través del C3,

• Activa la actividad tumoricida de macrófagos,

• Protege contra las proteínas de shock séptico y

• Aumenta la producción de citoquinas por monocitos.

Journal of Leukocyte Biology, vol 67 Abril 2000

PROTEINA C REACTIVA

COMPLEMENTO

OPSONIZACION

Ca2+

Fisiología de la Fagocitosis• Migración leucocitaria

• Adhesión Leuco-endotelial• Migración Tisular• Quimiotaxis Intra-vascular• Migración Tisular

Fisiología de la Fagocitosis• Proceso Fagocítico

• Reconocimiento Receptor-Opsonina• Formación de Fagosoma

– Liberación de gránulos Primarios

• Mecanismo No Oxidativo– Enzimas Líticas

• Mecanismo Oxidativo– Estallido Respiratorio– Formación de Haluros

Fisiología de la Fagocitosis

• La NADPH Oxidasa, es un sistema multicomponente de membrana

• Contiene dos subunidades en la membrana,– gp91phox,– p22phox.

Seminars in Hematology, Vol 34, 1997

Fisiología de la Fagocitosis• Para la actividad de la NADPH oxidasa es necesario

componentes citoplasmáticos imprescindibles – p47 phox, – p67 phox– p21 rac

• Se ha descrito un cuarto componente citoplasmático la p40 phox– Debe estar fosforilada (por PKC)– Sería fundamental en el proceso de translocación de los

componentes citosólicos hacia la membrana

M.C.N.Journal of Leukocyte Biology, vol 66 Nov 1999

1O2

1O2

O2 O2- H2O2 OH• H2O

L-Argininina

Xantina

NO•

ONOO- HNO3

NO2•

NO3-

OH•

GSH

GSSG

NADP

NADPH

HOCl

Glutation Peroxidasa

GlutationReductasa

NOS

H+ -H+

XO

NADPHOXidasa

SuperoxidoDismutasa

MPO +

Halu

ro

e- e- e- e-

Fe2+ Fe3+

Catalasa

REDUCCION DEL OXIGENO VIA NADPH OXIDASA

Phagocyte function, 1998, Wiley-Liss

Disfunción Fagocítica

• Extrínsecas• Intrínsecas - primarias

- secundarias

Disfunción Fagocítica• Extrínseca

• Opsonización defectuosa– Deficiencias anticuerpos

– Deficiencias complemento

• Supresión fagocítica– Medicamentosa

– Autoanticuerpos

• Quimiotaxis alterada– Deficiencia complemento

Disfunción Fagocítica• Intrínsecas primarias

– Enfermedad Granulomatosa crónica– Deficiencia de glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G-6-P deshidrogenasa)– Defecto de adhesión Leucocitaria tipo-1 (LAD-1)– Defecto de adhesión Leucocitaria tipo-2 (LAD-2)– Síndrome Chédiak-Higashi– Deficiencia de Mieloperoxidasa– Síndrome Hiper-IgE (síndrome de Job)– Síndrome de Shachman– Síndrome de Periodontitis recurrente– Deficiencia de Tapsina– Otros

Disfunción Fagocítica

• Intrínsecas secundarias– Alteración Quimioquinésica

• Diabetes Mellitus

• Malnutrición

• Quemaduras (>15%)

• Prematuros

• Esplenectomizados

• Otros

Disfunción Fagocítica Post Trauma

• En una primera etapa se produce una respuesta hiperinmune, que incluye

– Síndrome de respuesta inflamatoria sistémica (SIRS),

– Síndrome de disfunción multiorgánica, – Que puede conllevar a una falla

multiorgánica.

Phagocyte Function, 1998,Wiley-Liss


• Durante este proceso se liberan– Sustancias como IL-4 que produce un aumento de

respuesta tipo Th2 y– PGE2, que produce un decrecimiento en la

producción de GM-CSF

• Esta disminución de GM-CSF, se acompaña de– Alteraciones en las capacidades funcionales de los

neutrófilos, • Incluyendo disminución en la respuesta fagocítica y• Estallido respiratorio

Phagocyte Function, 1998, Wiley-Liss


• Por otra parte los neutrófilos inmaduros de la médula ósea– Permanecen por más días en ella sin

diferenciarse normalmente, – Observación obtenida debido a que

presentan una marcada disminución en la expresión de CD11b.



• Todo esto conlleva – Un incremento en la tasa de infecciones en

estos pacientes.– Lo que sugeriría que el GM-CSF y el G-CSF

podrían ser utilizados para restablecer los mecanismos defensivos del paciente, especialmente en neutrófilos a un nivel normal.


M.C.N. - O.V.R.

Medición de Fagocitosis

• Permite determinar la capacidad de las células fagocíticas de responder frente a sustancias opsonizadas

•Se requiere •Partícula opsonizada (beads con c3b), o bien•Bacterias opsonizadas (anticuerpos)•Además esta partícula o bacteria debe encontrarse marcada

Medición de pH Intracelular

• Las células activas mantienen el pH intracelular dentro de un rango estrecho.• Se presentan cambios en procesos biológicos importantes

•División celular, •Respuesta a señales extracelulares

Current Protocols in Cytometry, 1998

Medición de pH Intracelular

•Requiere láser de Argón 488 nm.•Marcadores más utilizados:

•SemiNaphthoRhodaFluor acetoxymethyl ester (SNARF-1)•2’,7’-bis(2-carboxyethil)-5-(and -6)-carboxyfluorescein acetoxymethyl ester (BCECF)


Opsono-Fagocitosis

•Permite determinar la capacidad de un anticuerpo de actuar como opsonina•La partícula a fagocitar debe estar marcada con un fluorocromo•Tiene utilidad al evaluar la calidad de los anticuerpos producidos contra un antígeno•Permite evaluar la calidad de los anticuerpos producidos post vacunación

Metabolismo Oxidativo

•Permite determinar •El grado de activación celular, y•Si responden a la estimulación.

• Los principales marcadores son:•Diclorofluoresceina diacetato (DCFH-DA)•Didrorodamina 123 (DHR 123)•Hidrohetidina•Acido Parinárico•Monobromobimano


Indicadores Fluorescentes de la Oxidación Intracelular

• DICLOROFLUORESCEINA DIACETATO (DCFH-DA)

• Se ha usado en la medición de H2O2

• Atraviesa libremente por la membrana celular (esterificada)• En el citoplasma es deacetilada a diclorofluoresceína (DCFH) no fluorescente• La DCFH es convertida a diclorofluoresceína fluorescente por oxidantes intracelulares• Tiende a salir de la célula y presenta menor sensibilidad que la DHR 123• Requiere láser de argón (488 nm), emite a 520 nm


•DIHIDRORODAMINA 123•Es la prueba más usada para la medición de H2O2

• DHR 123 es oxidada directamente a rodamina 123, fluorescente• Entra a la célula libremente y se oxida a rodamina 123, localizándose en la mitocondria• La rodamina 123 permanece esencialmente dentro de la célula• Mejor sensibilidad que la DCFH-DA (3 a 10 veces)• Requerimientos similares a la DCFH-DA



• HIDROETIDINA• Se ha propuesto para la medición del O2-• Ingresa libremente a la célula y es deshidrogenado a bromuro de etidio.• La ventaja es que distingue del O2- y el H2O2

• Emite fluorescencia a 600 nm. y requiere láser argón.



•ACIDO PARINARICO•Es un ácido graso fluorescente.• Pierde su fluorescencia, cuando 4 dobles enlaces conjugados son blanco de la peroxidación de lípidos• Su excitación es a 325 nm., por lo que se requiere espectrofluorometría o citómetros de flujo con láser de cadmio-helio (rango UV).



• MONOBROMOBIMANO•Puede usarse para medir niveles de glutation reducido.•Aún no se ha sido completamente aceptada por el alto background que presenta la técnica.•Su excitación es 325 nm., por lo que se requiere de espectrofluorometría o citómetros de flujo con láser de cadmio-helio.



DCFH-DA DCFH DCFDCF

Fluorescent

Hydrolysis

Oxidation

2’,7’-dichlorofluorescin

2’,7’-dichlorofluorescin diacetate

2’,7’-dichlorofluorescein

Cellular Esterases

H2O2

DCFH-DA

DCFH-DADCFH-DA

DCFHDCFH

DCF

H OH O 2 22 2Lymphocytes

Monocytes

Neutrophils

log FITC Fluorescence

.1 1000

100

10

1

0

20

40

60

cou

nts

PMA-stimulated PMNControl

80

CYTOMETRY (CCC), 18(3):147-155, 1994

ESTALLIDO REPIRATORIOCitometría de Flujo

Autofluorescencia celular (no estimul.)

Patológico Estimulado: E.G.C. lig.-X

Fisiológico Estimulado

Patológico Estimulado: E.G.C. Autosm.Patológico Estimulado: E.G.C. Autosm.

Núm

ero

de E

vent

os

101

Canales104103102100

•Adulto normal•No estimulado :•Estimulado con PMA :

25.86 %76.98 %

Estallido respiratorio en Granulocitos

No estimulado

Estimulado

• Paciente sexo femenino

• 8 años

• Infecciones dérmicas recurrentes por S. aureus

• Granulomas fríos en cara y piernas

• Déficit parcial de IgA

Inicio de terapia antibiótica con claritromicina 250 mg/12 horas por 30 días

Estallido Respiratorio en Granulocitos

Mujer, 37 años

Mastitis crónica por Stenotrophomona maltophilia

Escala log de calidad de vida: 5

29 Enero 2004

Granulocitos

Monocitos

No estimulado

29.55 %

71.32 %

Estimulado

50.25 %

77.32 %

3 meses con: Bion 3 (1/día), Imuran (50 mg/día), rofecoxib (25 mg(día)

17 de junio 2004

Granulocitos

Monocitos

No estimulado

42.59 %

81.03 %

Estimulado

62.39 %

96.27 %

Escala log de calidad de vida: 10

07 de Octubre 2004

Granulocitos

Monocitos

No estimulado

21.18 %

38.07 %

Estimulado

80.89 %

86.12 %



• Neutrófilos• Fisiología de la Fagocitosis:

• Proteínas de Fase Aguda• Migración Leucocitaria• Proceso Fagocítico

• Disfunción Fagocítica extrínseca e intrínseca• Evaluación de:

• Fagocitosis• pH intracelular• Opsono fagocitosis• Metabolismo oxidativo• Estallido respiratorio:

• Casos clínicos



Marcelo Castillo N. MsC (c)Juan Luis Castillo MsC

Centro de Diagnóstico Onco-inmunológicoLtda.Laboratorio de Citometría de Flujo

Hospital del Trabajador, Concepción, Chile.

www.oncoinmun.co.cl

INMUNODEFICIENCIAS INMUNODEFICIENCIAS PRIMARIASPRIMARIAS

Marcelo Castillo Navarrete, TM MsC (c)Marcelo Castillo Navarrete, TM MsC (c)Facultad de MedicinaFacultad de Medicina

Dpto. Especialidades MédicasDpto. Especialidades Médicas

Carrera Tecnología MédicaCarrera Tecnología Médica

26 de Mayo de 200526 de Mayo de 2005

Clasificación OMS de Inmunodeficiencias Primarias

Technology

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