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CALIFICACiN DEUN SISTEMA DE

CLARDR JUAN CARLOS VAZQUEZ LIRADIPLOMADO HPLC 2014

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VERIFICACION DE DESEMPEO.

El desempeo de un sistema de CLAR se puede evmediante el examen de las funciones clave de los distmdulos que componen el sistema, seguido de pruholsticas que desafan el desempeo de los componede CLAR como un sistema integrado. La prueba holstica

comnmente se conoce como la calificacindesempeo (PQ). La prueba holstica puede ser tan sicomo ejecutar un mtodo frecuentemente utilizado elaboratorio.

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Ensayo modular de varios componentes, que se rea menudo en la calificacin de operacin

puede proporcionar informacin detallada sobfuncionamiento de los componentes individualeCLAR.

Es importante hacer tanto en el ensayo

componentes individuales como la prueba holpara verificar el desempeo del sistema. Los atride desempeo comunes para cada mdulo CLARexpectativas generales para cada atributoenumeran en la Tabla

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MODULO DE BOMBEO

Exactitud de la velocidad de flujo. Uno de lrequisitos de desempeo clave para el mdude la bomba es la capacidad para mantener uflujo exacto y consistente de la fase mvil . Eses necesario para proporcionar interaccionestables y repetibles entre los analitos y la fa

estacionaria.

Exactitud pobre en el flujo afectar el tiempo dretencin y la resolucin de la separacin.

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MDULO DE BOMBEO

La exactitud del flujo de la bomba se puedesimplemente mediante el clculo del tiempo necerecoger un volumen predeterminado de fasediferentes ajustes de flujo. Materiales: Frasco volumtrico de 5 o 10 ml Crono

calibrado Condiciones: Fase mvil: agua desgasificada Sin c

(extremo abierto) * Flujo: ajustado entre 0,5 y 3,0 mexisten sistemas de mezcla de alta presin estn inesta prueba se tiene que hacer en cada canal de* Para algunos equipos, por ejemplo, en el caso dcaudales bajos, la verificacin se realiza medianteuna columna o de un regulador de contrapresin

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MDULO DE BOMBEO

La exactitud del flujo de la bomba se puedesimplemente mediante el clculo del tiempo necesrecoger un volumen predeterminado de fasediferentes ajustes de flujo..

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MODULO DE BOMBEO

Materiales: Frasco volumtrico de 5 o

Cronometro calibrado .

Condiciones: Fase mvil: agua grado Hcolumna (extremo abierto) * Flujo: ajustado en3.0 mL/min. Si existen sistemas de mezcla

presin estn instalados, esta prueba se tiehacer en cada canal de solvente. * Paraequipos, por ejemplo, en el caso de caudalesverificacin se realiza mediante el usocolumna o de un regulador de contrapresin.

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MODULO DE BOMBEO

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MDULO DE BOMBEO

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MDULO DE BOMBEO

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MDULO DE BOMBEO

EXACTITUD Y PRECISION DEL GRADIENTE

Para el anlisis de gradiente, la capacidad de la

suministrar la fase mvil en diversas fuerzas de disolve

del tiempo mediante la variacin de la composicin de

con exactitud es crucial para lograr la separacin cr

adecuada y reproducibilidad. La precisin de funciongradiente puede evaluarse indirectamente mediante el

desviacin estndar relativa de los tiempos de retencin

en los cromatogramas de las inyecciones repetidas.

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MDULO DE BOMBEO

LINEALIDAD DEL GRADIENTE

La exactitud y linealidad del gradiente de disolvente sse puede verificar indirectamente mediante la supecambio de absorbancia cuando la composicin d

disolventes de dos canales diferentes cambia . Gradiepresin se ejecuta por lo general implicando dos sissolventes. Gradiente de baja presin Bombas LC sue

equipados con vlvulas dosificadoras cuaternarias, qmanejar hasta cuatro disolventes.

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MDULO DE BOMBEO

La prueba se realizar para dos canales a la vez, bomgradiente tiene cuatro canales: A, B, C, y D. Canal A s

un solvente puro tal como metanol, mientras que el llena con un disolvente que contiene un trazador UV-

como la cafena (15 mg por litro de disolvente), una m0,5 (v / v) de metanol y acetona se utiliza a menudtrazador tambin.

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MDULO DE BOMBEO

LINEALIDAD DEL GRADIENTE

El perfil de gradiente est programado para variar la compomezcla a partir de 100% A a 100% de B en un corto perodo d

luego volver a cambiar a 100% de A en una manera esca

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LINEALIDAD DEL GRADIENTE

La exactitud y linealidad del gradiente de disolvente sse puede verificar indirectamente mediante la supecambio de absorbancia cuando la composicin d

disolventes de dos canales diferentes cambia . Gradiepresin se ejecuta por lo general implicando dos sissolventes. Gradiente de baja presin Bombas LC sue

equipados con vlvulas dosificadoras cuaternarias, qmanejar hasta cuatro disolventes.

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MDULO DE BOMBEO

LINEALIDAD DEL GRADIENTE

El cambio de absorbancia a partir de 100% A (lnea de100% de B se mide y se expresa como la altura H en laabsorbancia frente a tiempo .Como el porcentaje de B disminuye en la mezcla de disolventes, la absorbancde la mezcla debe disminuir en consecuencia. Si la code la mezcla 20% A y 80% de B es exacta, la altura B1,corresponde a la absorbancia a 80% de B, debe estar80% de la altura H. Del mismo modo, las verificacin dpuede ser determinada en 60%, 40%, 20%, y 0% B.

MDULO DE BOMBEO

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MDULO DE BOMBEO

LINEALIDAD DEL GRADIENTE

La linealidad del gradiente de entrega puede ser verel trazado de la absorbancia a diferentes composiciomvil, en comparacin con la composicin terica, Ecompleto puede repetirse para los canales C y D.

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MDULO DE BOMBEO

Condiciones: Capilar de acero Inoxidable, por eje

2000 x 0,12 mm instalado en lugar de una columna

Deteccin: UV-Detector ajustado a 265 nm Fase mvil A: agua grado HPLC. Fase mvil B: agua desgasificada que contiene

de acetona Velocidad de flujo: 1,0 ml / min

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MDULO DE BOMBEO

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MDULO DE BOMBEO

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MDULO DE BOMBEO

Empezar la prueba mediante el bombeo de agua dur

menos 10 min para equilibrar el sistema. El valor de c

al principio de la prueba es la lnea base. Todas las e

se miden al comienzo de la parte horizontal de la lne

sea por software o manualmente en el papel de impre

utilizando una regla

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MDULO DE BOMBEO

Ondulacin de la composicin de gradiente

Es el porcentaje de ruido de la lnea de 50% desdeprograma de gradiente.

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MDULO DE INYECCIN

Precisin .

La capacidad del inyector para extraer la misma cantidad de minyecciones repetidas es crucial para la precisin y la exactitud

del pico o altura del pico para la cuantificacin por comparaci

patrn externo. Si la variabilidad de la muestra y el estndar qu

inyectan en la columna no se controlan estrictamente, el princi

de cuantificacin por estndar externo est seriamente comproNinguna comparacin significativa entre las respuestas de la m

estndar se pueden hacer. La exactitud absoluta del volumen d

inyeccin no es crtico, siempre que la misma cantidad de est

muestra sea inyectada.

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MDULO DE INYECCIN

Precisin.

La precisin del volumen del inyector se puederealizando al menos seis inyecciones repetidasmuestra. La desviacin estndar relativa (RSDrespuesta de las inyecciones se calcula a continua

evaluar la precisin.

MDULO DE INYECCIN

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MDULO DE INYECCIN

CARRY OVER ( REMANENTES ).

Pequeas cantidades de analito pueden arrastrainyeccin anterior y contaminar la muestra siguieinyectada. El arrastre afectar a la cuantificacin exmuestra subsiguiente. El problema es ms grave cumuestra diluida se inyecta despus de una muestra co

Para evitar la contaminacin cruzada de la inyeccmuestra anterior, todas las partes del inyector quecontacto con la muestra (el circuito de inyeccin, lainyeccin, y el asiento de la aguja) tienen que seeficazmente despus de la inyeccin.

MDULO DE INYECCIN

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MDULO DE INYECCIN

CARRY OVER ( REMANENTES ).

El arrastre se puede evaluar mediante la inyeccin deen blanco despus de una muestra que contieneconcentracin de analito. La respuesta del analito encla muestra blanco expresada como un porcentaje de la

de la muestra concentrada se puede utilizar para denivel de contaminacin por arrastre. La cafena puedepara la prueba de arrastre de sistema para evaluar el dde un inyector y sirve como un estndar comn para cdesempeo de los diferentes inyectores.

MDULO DE INYECCIN

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MDULO DE INYECCIN

Linealidad.

Muchos inyectores LC automatizados son capaces dvolumen de inyeccin. Un volumen variable de mucolocado en un bucle de inyeccin de la muestrauna jeringa u otro dispositivo de medicin. La uniforbucle de muestra y la capacidad del dispositivo depara depositar diferentes cantidades de muestrproporcin adecuada afectar a la linealidad del vinyeccin.

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MDULO DE INYECCIN

Linealidad.

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Linealidad.

MDULO DE DETECCIN

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UV-V

Exactitud de la Longitud de ondaSe define como la desviacin de la lectura de longiten una banda de absorcin o emisin de la longituconocida de la banda. Los efectos perjudiciadesviacin de la longitud de onda en la evaluacin c

cuantitativa de UV-Vis son las que se revisaronespectrofotmetro UV-V. La exactitud y la sensibimedicin se vern comprometidas si hay un prexactitud de longitud de onda.

MDULO DE DETECCIN

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UV-V

Para los ensayos de impurezas, el analito principimpurezas relacionadas puede tener un perfil UV mu

cambio en la longitud de onda de deteccin configuracin ptima requerida por el mtodo pued

gran efecto en la cuantificacin de las impurezas enpico principal.

MDULO DE DETECCIN

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UV-V

Para los detectores con una funcin de verificacin deonda, la lnea de deuterio a 656 nm o las bandas de360, 418, 453, y 536 nm en un filtro de xido de holmiomenudo. La lnea de deuterio y de las bandas de xidson fciles de usar, pero se limita al rango visible. La ver

longitud de onda del rango UV, donde se realizan la mde anlisis cuantitativos, se puede realizar llenando unflujo con una solucin de un compuesto con un eabsorcin UV bien caracterizado . La solucin se ebusca de la absorcin mxima y la

MDULO DE DETECCIN

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UV-V

El valor max o min del espectro se compara entovalor conocido o max min del compuesto para dexactitud de longitud de onda. Solucin acuosa de cmg / ml), que es fcil de preparar y manejar, con ma

nm y min a 244 nm , se puede utilizar. Aceptacin.rango UV (200 a 380 nm ).

MDULO DE DETECCIN

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UV-VSi estn incorporados en los procedimientos de ens

determinacin y el ajuste de exactitud de longitud dlas instrucciones del manual del instrumento. En todocasos usar el procedimiento descrito a continuacin.

Condiciones: Fase mvil: 15% de acetonitrilo en agu

RP18, 5 m 30-50 x 2,1-4.6 mm o capilar 2,0 m xTemperatura del horno: 40 C Velocidad de flujo:(ajustado mediante el uso de 15% de acetonitriDeteccin: anlisis de 230 nm a 290 nm (DAD)inyeccin: 20 l

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UV-V

Mtodo: DAD: Inyectar 20 l de la solucin de cafenaespectro. El mximo es a 272 nm y el mnimo a 244 nm

llenar la celda con la solucin de antraceno y cambiade onda de 248 a 254 nm en pasos de 1 nm ; grabar e

absorcin. El valor terico es de 251 nm . Lmites:

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Linealidad de la respuesta.

Dado que el analito en las muestras de inters puede

concentracin, la capacidad de un detector para pro

respuesta lineal al variar la concentracin dentro de

razonable, es importante para la exactitud de rea de

para comparacin entre estndares y muestras. La lineal

respuesta del detector puede ser comprobado con una

soluciones estndar de varias concentraciones. Las s

acuosas de cafena son convenientes para la med

linealidad.

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Linealidad de la respuesta.

El intervalo de concentracin normalmente deberespuestas desde cero a 1,5 UA. Absorbancia supeUA son ms propensos a la desviacin por luzDesde la grafica de respuesta frente a la concentralas soluciones, el coeficiente de correlacinconcentracin de la muestra y la respuesta secalcular para determinar la linealidad

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Linealidad de la respuesta.

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Linealidad de la respuesta.

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El ruido y la deriva electrnica

La bomba y el ruido fotomtrico; intensidad baja de launa celda de flujo sucia, y la inestabilidad trmica contruido global y la deriva en el detector. El ruido excesivreducir la sensibilidad del detector y por lo tanto afecuantificacin de los analitos de bajo nivel. La precisidatos est relacionada con la relacin de seal a ruido.

La deriva del detector puede afectar la determinaclnea base y la integracin del pico La mayora delcromatogrficos son capaces de calcular el ruido del dla deriva. Las fluctuaciones de temperatura se debdurante la prueba.

MDULO DE TERMOSTATIZACIN

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La eficiencia de una columna de CLAR varatemperatura de la columna. La retencin se reduc3% por cada aumento de 1 C [17]. La capacmantener estable y exacta la temperatura de la cofundamental para lograr el tiempo de retencin delos requerimientos de resolucin en la seconsistentemente. Incluso para la separacin reatemperatura ambiente, el termostato de latambin se puede utilizar para mantener una temde la columna estable para evitar que el tieretencin de pico se desplaza debido a la variatemperatura en el tiempo debido al aire acondicciclos de calefaccin / refrigeracin.

MDULO DE TERMOSTATIZACIN

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La exactitud de la temperatura del calentador de se evala colocando un termmetro calibrado en compartimento de la columna para medir la tempreal del compartimiento. Las lecturas del termmetcomparan a la temperatura predefinida en 40 y 60Muchos fabricantes de equipos LC tiene los requerifijados a 2 C.

MDULO DE TERMOSTATIZACIN

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Exactitud de la termostatizacion

Materiales: Termmetro calibrado Mtodo: Estatemperatura del horno de columna a 40 C, esperminutos para equilibrar el sistema, poner un tecalibrado en el horno y leer la temperatura despminutos. Lmites: 38 - 42 C.