BBBBúúúúsqueda de nuevos squeda de nuevos squeda de nuevos squeda de nuevos locilocilociloci asociados aasociados aasociados aasociados aHipercolesterolemia AutosHipercolesterolemia AutosHipercolesterolemia AutosHipercolesterolemia Autosóóóómica mica mica mica

DominanteDominanteDominanteDominante

Zaragoza, 8 de Noviembre de 2010

Ana Cenarro Lagunas

Laboratorio de Investigación Molecular

Hospital Universitario Miguel Servet

---- LaLaLaLa aterosclerosis:aterosclerosis:aterosclerosis:aterosclerosis:

• patologpatologpatologpatologíííía cra cra cra cróóóónica de las arterias nica de las arterias nica de las arterias nica de las arterias

• importantes complicaciones climportantes complicaciones climportantes complicaciones climportantes complicaciones clíííínicas nicas nicas nicas

• cardiovasculares y cardiovasculares y cardiovasculares y cardiovasculares y cerebrovascularescerebrovascularescerebrovascularescerebrovasculares

---- Primera causa de morbiPrimera causa de morbiPrimera causa de morbiPrimera causa de morbi----mortalidad en el mundo occidentalmortalidad en el mundo occidentalmortalidad en el mundo occidentalmortalidad en el mundo occidental

---- Factores de riesgo:Factores de riesgo:Factores de riesgo:Factores de riesgo:

•DislipemiaDislipemiaDislipemiaDislipemia

•TabaquismoTabaquismoTabaquismoTabaquismo

•HipertensiHipertensiHipertensiHipertensióóóón arterialn arterialn arterialn arterial

•Resistencia a la insulinaResistencia a la insulinaResistencia a la insulinaResistencia a la insulina

•ObesidadObesidadObesidadObesidad

Introducción

HIPERCOLESTEROLEMIAS PRIMARIASHIPERCOLESTEROLEMIAS PRIMARIASHIPERCOLESTEROLEMIAS PRIMARIASHIPERCOLESTEROLEMIAS PRIMARIASHIPERCOLESTEROLEMIAS PRIMARIASHIPERCOLESTEROLEMIAS PRIMARIASHIPERCOLESTEROLEMIAS PRIMARIASHIPERCOLESTEROLEMIAS PRIMARIAS

Hipercolesterolemias PrimariasHipercolesterolemias PrimariasHipercolesterolemias PrimariasHipercolesterolemias PrimariasHipercolesterolemias PrimariasHipercolesterolemias PrimariasHipercolesterolemias PrimariasHipercolesterolemias Primarias Gen implicado (Cromosoma)Gen implicado (Cromosoma)Gen implicado (Cromosoma)Gen implicado (Cromosoma)Gen implicado (Cromosoma)Gen implicado (Cromosoma)Gen implicado (Cromosoma)Gen implicado (Cromosoma)

Apo B-100 Defectuosa Familiar (BDF) APOB (2)

FH3 PCSK9 (1)

Hipercolesterolemia Asociada a Sitosterolemia ABCG5/ABCG8 (2)

Déficit de colesterol 7 α hidroxilasa CYP7A1 (8)

Hipercolesterolemia Autosómica Recesiva (ARH) LDLRAP1 (1)

Hipercolesterolemia Asociada a Variantes de Apo E APOE (19)

Hipercolesterolemia Familiar Combinada Desconocidos (??)

Hipercolesterolemia Poligénica Desconocidos (??)

Hipercolesterolemia Familiar (HF)Hipercolesterolemia Familiar (HF)Hipercolesterolemia Familiar (HF)Hipercolesterolemia Familiar (HF) LDLR (19)LDLR (19)LDLR (19)LDLR (19)

Introducción

•Las Las Las Las Hipercolesterolemias AutosHipercolesterolemias AutosHipercolesterolemias AutosHipercolesterolemias Autosóóóómicasmicasmicasmicas Dominantes (HAD) Dominantes (HAD) Dominantes (HAD) Dominantes (HAD) son defectos familiares asociados con cifras elevadas de son defectos familiares asociados con cifras elevadas de son defectos familiares asociados con cifras elevadas de son defectos familiares asociados con cifras elevadas de LDLLDLLDLLDL----c y riesgo elevado de enfermedad coronaria, con un c y riesgo elevado de enfermedad coronaria, con un c y riesgo elevado de enfermedad coronaria, con un c y riesgo elevado de enfermedad coronaria, con un patrpatrpatrpatróóóón de transmisin de transmisin de transmisin de transmisióóóón autosn autosn autosn autosóóóómico dominante.mico dominante.mico dominante.mico dominante.

•Mutaciones en los genes LDLR y APOB son las causas mMutaciones en los genes LDLR y APOB son las causas mMutaciones en los genes LDLR y APOB son las causas mMutaciones en los genes LDLR y APOB son las causas máááás s s s frecuentes de HAD.frecuentes de HAD.frecuentes de HAD.frecuentes de HAD.

•El diagnEl diagnEl diagnEl diagnóóóóstico molecular de pacientes con fenotipo de stico molecular de pacientes con fenotipo de stico molecular de pacientes con fenotipo de stico molecular de pacientes con fenotipo de hipercolesterolemia familiar no detecta una mutacihipercolesterolemia familiar no detecta una mutacihipercolesterolemia familiar no detecta una mutacihipercolesterolemia familiar no detecta una mutacióóóón n n n causal en el 30% de los casos, lo que sugiere que el causal en el 30% de los casos, lo que sugiere que el causal en el 30% de los casos, lo que sugiere que el causal en el 30% de los casos, lo que sugiere que el sustrato sustrato sustrato sustrato gengengengenéééético de la HAD es heterogtico de la HAD es heterogtico de la HAD es heterogtico de la HAD es heterogééééneo y no limitado a neo y no limitado a neo y no limitado a neo y no limitado a estos genes.estos genes.estos genes.estos genes.

Introducción

Familias HAD sin mutaciFamilias HAD sin mutaciFamilias HAD sin mutaciFamilias HAD sin mutacióóóón en LDLR ni APOBn en LDLR ni APOBn en LDLR ni APOBn en LDLR ni APOB

Segregación del fenotipo HAD con una región del cromosoma 1

IdentificaciIdentificaciIdentificaciIdentificacióóóón de PCSK9 como causa de HADn de PCSK9 como causa de HADn de PCSK9 como causa de HADn de PCSK9 como causa de HAD

FAMILIA ZFAMILIA ZFAMILIA ZFAMILIA Z----1111

+ +

+ + ++ + +

+

IIII----1111

IIIIIIII----1111 IIIIIIII----2222 IIIIIIII----3333 IIIIIIII----4444 IIIIIIII----5555 IIIIIIII----6666 IIIIIIII----7777 IIIIIIII----8888 IIIIIIII----9999

IIIIIIIIIIII----1*1*1*1* IIIIIIIIIIII----2222 IIIIIIIIIIII----3333 IIIIIIIIIIII----4*4*4*4* IIIIIIIIIIII----5555

FAMILIAFAMILIAFAMILIAFAMILIAZZZZ----2222

+ +

IIII----1111 IIII----2222 IIII----3333 IIII----4444 IIII----5555

IIIIIIII----2222

FAMILIA ZFAMILIA ZFAMILIA ZFAMILIA Z----3333

+

????

IIII----1111

IIIIIIII----1111 IIIIIIII----2222 IIIIIIII----3333

IIIIIIIIIIII----1111 IIIIIIIIIIII----2222

•Se realizSe realizSe realizSe realizóóóó un anun anun anun anáááálisis masivo delisis masivo delisis masivo delisis masivo de SNPsSNPsSNPsSNPs mediante la plataformamediante la plataformamediante la plataformamediante la plataforma GeneChip GeneChip GeneChip GeneChip

Human mappingHuman mappingHuman mappingHuman mapping 10K10K10K10K Array XbaArray XbaArray XbaArray Xba 131 de131 de131 de131 de AffymetrixAffymetrixAffymetrixAffymetrix....

• Se identificSe identificSe identificSe identificóóóó un SNP rs965814 G/A en un intrun SNP rs965814 G/A en un intrun SNP rs965814 G/A en un intrun SNP rs965814 G/A en un intróóóón del gen ADCY8, n del gen ADCY8, n del gen ADCY8, n del gen ADCY8,

cromosoma 8, que se asociaba a la hipercolesterolemia en la famicromosoma 8, que se asociaba a la hipercolesterolemia en la famicromosoma 8, que se asociaba a la hipercolesterolemia en la famicromosoma 8, que se asociaba a la hipercolesterolemia en la familia Zlia Zlia Zlia Z----1.1.1.1.

•Se realizSe realizSe realizSe realizóóóó un estudio de asociaciun estudio de asociaciun estudio de asociaciun estudio de asociacióóóón cason cason cason caso----control del SNP rs965814 en control del SNP rs965814 en control del SNP rs965814 en control del SNP rs965814 en

200 ADH y 198 controles.200 ADH y 198 controles.200 ADH y 198 controles.200 ADH y 198 controles.

•Se realizSe realizSe realizSe realizóóóó un un un un mapeo mapeo mapeo mapeo detallado de la detallado de la detallado de la detallado de la citobanda citobanda citobanda citobanda 8q24.22 donde est8q24.22 donde est8q24.22 donde est8q24.22 donde estáááá el el el el

SNP con 24 marcadores: 8 SNP con 24 marcadores: 8 SNP con 24 marcadores: 8 SNP con 24 marcadores: 8 microsatmicrosatmicrosatmicrosatéééélites lites lites lites y 16 y 16 y 16 y 16 SNPsSNPsSNPsSNPs....

Resultados

Estudio de asociaciEstudio de asociaciEstudio de asociaciEstudio de asociacióóóónnnn

Familia ZFamilia ZFamilia ZFamilia Z----1111

Edad: 77 añosEdad: 77 añosEdad: 77 añosEdad: 77 añosCT: 204 mg/dLCT: 204 mg/dLCT: 204 mg/dLCT: 204 mg/dLLDL-c: 149 mg/dLLDL-c: 149 mg/dLLDL-c: 149 mg/dLLDL-c: 149 mg/dL

41414141239239239239154154154154

14141414

51515151240240240240159159159159

46464646307307307307239239239239

30303030234234234234176176176176

5656565612112112112165656565

50505050354354354354283283283283

38383838216216216216153153153153

FAMILIA F-1FAMILIA F-1FAMILIA F-1FAMILIA F-1

Edad, añosEdad, añosEdad, añosEdad, añosCT, mg/dLCT, mg/dLCT, mg/dLCT, mg/dLLDL-c:, mg/dLLDL-c:, mg/dLLDL-c:, mg/dLLDL-c:, mg/dL

Edad, añosEdad, añosEdad, añosEdad, añosCT, mg/dLCT, mg/dLCT, mg/dLCT, mg/dLLDL-c:, mg/dLLDL-c:, mg/dLLDL-c:, mg/dLLDL-c:, mg/dL

55555555355355355355271271271271

34343434189189189189116116116116

69696969182182182182114114114114

60606060294294294294215215215215

40404040244244244244180180180180

67676767237237237237181181181181

65656565250250250250195195195195

58585858301301301301219219219219

26262626223223223223168168168168

50505050195195195195120120120120

27272727216216216216123123123123

30303030289289289289194194194194

FAMILIA F-2FAMILIA F-2FAMILIA F-2FAMILIA F-2

FAMILIA F-3FAMILIA F-3FAMILIA F-3FAMILIA F-3

58585858448448448448347347347347

63636363255255255255166166166166

41414141229229229229159159159159

77777777186186186186115115115115

75757575209209209209130130130130

N.A.N.A.N.A.N.A.

63636363312312312312217217217217

29292929238238238238165165165165

27272727231231231231153153153153

45454545325325325325245245245245

34343434290290290290194194194194

70707070201201201201136136136136

Edad, añosEdad, añosEdad, añosEdad, añosCT, mg/dLCT, mg/dLCT, mg/dLCT, mg/dLLDL-c:, mg/dLLDL-c:, mg/dLLDL-c:, mg/dLLDL-c:, mg/dL

Edad, añosEdad, añosEdad, añosEdad, añosCT, mg/dLCT, mg/dLCT, mg/dLCT, mg/dLLDL-c:, mg/dLLDL-c:, mg/dLLDL-c:, mg/dLLDL-c:, mg/dL

•No se ha identificado ningNo se ha identificado ningNo se ha identificado ningNo se ha identificado ningúúúún SNP asociado a hipercolesterolemia n SNP asociado a hipercolesterolemia n SNP asociado a hipercolesterolemia n SNP asociado a hipercolesterolemia (afecto/no afecto) en estas 3 familias en su conjunto(afecto/no afecto) en estas 3 familias en su conjunto(afecto/no afecto) en estas 3 familias en su conjunto(afecto/no afecto) en estas 3 familias en su conjunto

•Se estSe estSe estSe estáááá analizando cada familia por separadoanalizando cada familia por separadoanalizando cada familia por separadoanalizando cada familia por separado

•TambiTambiTambiTambiéééén se estn se estn se estn se estáááá realizando el anrealizando el anrealizando el anrealizando el anáááálisis con variables cuantitativas lisis con variables cuantitativas lisis con variables cuantitativas lisis con variables cuantitativas (CT, (CT, (CT, (CT, LDLcLDLcLDLcLDLc…………))))

•Se han seleccionado los 50 Se han seleccionado los 50 Se han seleccionado los 50 Se han seleccionado los 50 SNPs SNPs SNPs SNPs mmmmáááás informativos para dises informativos para dises informativos para dises informativos para diseññññar un ar un ar un ar un chip de chip de chip de chip de genotipado genotipado genotipado genotipado y analizarlos en 200 sujetos ADH y 200 sujetos y analizarlos en 200 sujetos ADH y 200 sujetos y analizarlos en 200 sujetos ADH y 200 sujetos y analizarlos en 200 sujetos ADH y 200 sujetos controlcontrolcontrolcontrol

Resultados

Resultados

AnAnAnAnáááálisis del lisis del lisis del lisis del exomaexomaexomaexoma

Criterios de inclusiCriterios de inclusiCriterios de inclusiCriterios de inclusióóóón:n:n:n:

•Sujetos no relacionadosSujetos no relacionadosSujetos no relacionadosSujetos no relacionados•Origen espaOrigen espaOrigen espaOrigen españñññolololol•Con al menos 2 familiares adicionales disponiblesCon al menos 2 familiares adicionales disponiblesCon al menos 2 familiares adicionales disponiblesCon al menos 2 familiares adicionales disponibles•Aumento extremo de LDLAumento extremo de LDLAumento extremo de LDLAumento extremo de LDL----c > percentil 99, con TG < 300 mg/c > percentil 99, con TG < 300 mg/c > percentil 99, con TG < 300 mg/c > percentil 99, con TG < 300 mg/dLdLdLdL•TransmisiTransmisiTransmisiTransmisióóóón dominante, codominante o recesivan dominante, codominante o recesivan dominante, codominante o recesivan dominante, codominante o recesiva•LipoChip LipoChip LipoChip LipoChip y secuenciaciy secuenciaciy secuenciaciy secuenciacióóóón del LDLR negativosn del LDLR negativosn del LDLR negativosn del LDLR negativos•Genotipo de APOE normalGenotipo de APOE normalGenotipo de APOE normalGenotipo de APOE normal

Nº Sujeto Sexo Edad CT (mg/dL) TG (mg/dL) HDL (mg/dL) LDLc (mg/dL) apoA1 (mg/dL) apoB (mg/dL) APOE

4 V 53 396 116 52 320 179 210,0 E3/462 M 58 448 111 79 347 137 206,0 E3/4320 M 55 513 60 82 419 132 175,0 E2/4353 M 68 490 110 58 410 147 150,0 E3/4405 M 43 419 111 63 334 178 152,0 E3/41671 V 46 386 57 69 305 149 216,0 E3/3