Brochuere_Volumenmessung_ES_1110

8/4/2019 Brochuere_Volumenmessung_ES_1110

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F I R S T C L A S S B R A N D

Trabajar con aparatos de laboratorio una gua.

In formac insobre la medic in de l vo lumen


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La medicin de volmenes es de importancia esencial en los la-boratorios. Antes que nada, el usuario tiene que aclarar con quexactitud han de efectuarse las mediciones individuales. Despus,partiendo de esta base, puede elegir el tipo de aparato a utilizar enel caso concreto de medicin.Mediciones exactas exigen aparatos de medicin exactos y un manejocorrecto. Para un mejor entendimiento de los aparatos volumtricosutilizados en el laboratorio y su manejo se presenta a continuacin

una explicacin del concepto ms importante de clasificacin, funciny uso, tomando como ejemplos aparatos de laboratorio BRAND.El folleto 'Informacin sobre la medicin de volumen' tiene porobjeto proporcionar al lector una visin general de los aparatos vo-lumtricos. No substituye de ninguna manera las instrucciones demanejo de los aparatos Liquid Handling descritos. De todos modos,es necesario que Ud. lea las instrucciones de manejo suministradascon cada aparato antes de la puesta en marcha del mismo es parasu propia seguridad y exito.

Si Ud. quiere ms informacin sobre este tema, por favor contc-tenos.

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Conten ido

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21

33

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n Trabajar con aparatos volmtricos en vidrio

Menisco del lquido 10

Tiempos de vertido y de espera 11

Pipetas en general 12

Manejo de pipetas 13

Manejo de matraces aforados 15

Manejo de probetas graduadas 15

Manejo de buretas 16

Manejo de picnmetros 17

Trabajar con auxiliares de pipeteado 18

n Trabajar con aparatos Liquid Handling

Dosificar con dosificadores acoplables a frascos 22

Valorar con buretas acoplables a frascos 24

Pipetear con pipetas con cojn de aire 25

Pipetear con pipetas de desplazamiento directo 29Dosificar con dispensador manual 30

n El control de los medios de anlisis

Procedimiento del control de volumen 34

Software de calibracin 36

Servicio de calibrado 36

n Certificado de conformidad y certificados

n La directiva DVI (Diagnstico In Vitro)

n La limpieza de aparatos de laboratorio

n Normas de seguridad

6n Fabricacin de material volumtrico en vidrio

De la materia prima a los aparatos volumtricos de precisin acabados 6

Codificacin de aparatos volumtricos 8

Aparatos volumtricos y su clasificacin en clases de exactitud 9

32n Sobre la exactitud

39n Gestin de la calidad

n Versin general material volumtrico


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Material volumtrico

La medicin del volumen de un lquido es parte de la rutina diaria en cada laboratorio.El material volumtrico en vidrio, como matraces aforados, pipetas aforadas y graduadas, pro-betas graduadas y buretas, forma por tanto parte del equipo bsico. Se pueden fabricar devidrio o de plstico. Un gran nmero de fabricantes ofrecen aparatos volumtricos en calidades

diferentes. Jarras graduadas, vasos, matraces Erlenmeyer, y embudos de goteo no son aparatosvolumtricos. No estn ajustados de forma exacta, la escala solamente sirve como referencia.Aqu sigue, como ejemplo, una seleccin de aparatos volumtricos de calidad BRAND:

Vis on genera l de l mater ia l vo lumtr ico

Pipeta aforada Pipeta graduadaMatraces aforados Probeta graduada

Para responder a las exigencias cada vez ms es-trictas en las mediciones de volmenes realizadas

en los laboratorios (investigaciones en serie, seriesde ensayos), se desarrollan continuamente nuevosaparatos, por ejemplo para la dosificacin, parael pipeteado y la valoracin. Los aparatos de losdiferentes fabricantes, concebidos para la mismaaplicacin, son parecidos en trminos del principiode funcionamiento. Sin embargo, en los detallesde construccin y en el diseo de los aparatos delos diferentes fabricantes existen en parte grandesdiferencias. Aqu sigue, como ejemplo, una seleccinde aparatos Liquid Handling de BRAND:

Mater ia l vo lumtr ico

en v idr io/en p ls t ico

Aparatos L iqu id Handl ing

Pipetas monocanal

con cojn de aire

Pipetas multicanal

con cojn de aire

Bureta

Pipeta de desplaza-

miento directo

Dispensador manual,

mecnico

Dispensador manual,

electrnico

Dosificador

acoplable a frasco

Bureta

acoplable a frasco

Dosificador

acoplable a frasco


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Material volumtrico en vidrio Fabricacin

Fabr icac on de mater ia l vo lumtr ico en v idr io

Las piezas en bruto

Para la fabricacin de pipetasaforadas y graduadas se utili-zan vidrio de soda (por ej. vi-drio AR-Glas), o bien, para lafabricacin de matraces afora-dos, probetas graduadas y bu-retas, vidrio borosilicato (por ej.DURAN). Estos tipos de vi-drio estn adaptados a las al-tas exigencias del laboratoriorespecto a la resistencia qumi-ca y fsica.

La base para la produccin de

aparatos volumtricos de altaprecisin la constituyen laspiezas en bruto de alta calidady una exigente comprobacinestadstica de las caractersti-cas de calidad requeridas. Porejemplo, las tensiones trmicasexistentes en las piezas enbruto se eliminan mediante uncalentamiento y enfriamientocontrolado de las mismas.

De la mater ia pr ima a los aparatos vo lumtr icos de prec is in acabados

Probetas graduadas piezas en bruto

Ajuste

Cada aparato volumtrico de vi-drio es ajustado individualmen-te por BRAND, o sea, se co-loca una determinada y exac-ta cantidad de agua en el apa-rato volumtrico y se aplica lamarca de ajuste a la altura delpunto ms bajo del menisco.En aparatos volumtricos conescala se realizan dos marcasde ajuste. Sistemas controla-

dos por ordenador aseguran lamxima precisin posible sien-do la fabricacin completamen-te automtica. Un control esta-dstico de procesos (SPC) per-mite la fabricacin de apara-tos volumtricos con la mnimadesviacin posible del valor no-minal (exactitud) y con una m-nima dispersin de los valoresindividuales (coeficiente de va-riacin).

Instalacin de ajuste para las pipetas graduadas

Ajuste por vertido 'Ex':

La cantidad de lquido vertidacorresponde exactamente al vo-lumen indicado sobre el aparato.La cantidad de lquido que per-manece adherida a la pared devidrio, debida a la humectacin,se tuvo en cuenta al realizar el

ajuste. A este tipo de aparatosvolumtricos pertenecen por ej.las pipetas graduadas, las pipe-tas aforadas y las buretas.

Ajuste por contenido 'In':

La cantidad de lquido conteni-da corresponde exactamente alvolumen indicado sobre el apa-rato. A este tipo de aparatosvolumtricos pertenecen porej. las probetas graduadas, losmatraces aforados y las pipetas

capilares hasta 200 l.

Por tanto:Colocar el material de vidriosiempre en la estufa de seca-do o de esterilizacin fra ycalentar despus lentamente.Tras acabar el tiempo de seca-do o de esterilizacin, desco-nectar la estufa de secado o deesterilizacin y dejar enfriar elmaterial lentamente. No colo-car nunca material volumtricosobre una placa calefactora.

La temperatura de

referencia

La temperatura de referencianormalizada, o sea la tempera-tura a la cual el aparato volu-mtrico debe contener o verterel volumen nominal indicado, esde 20 C.

En el caso de que el ajuste ola calibracin se realicen a unatemperatura diferente, los valo-res medidos debern corregirsecorrespondientemente.

Nota:

Debido al pequeo coeficien-te de dilatacin del vidrio, en eluso prctico la temperatura dereferencia tiene escasa impor-tancia, pues las desviacionesde las mediciones causadaspor la dilatacin del volumen delos aparatos de medicin, porregla general son inferiores allmite de error.

Generalmente se diferencia entre ajuste por contenido 'In' y porvertido 'Ex'.

Esta es una condicin indis-pensable para obtener la mejorresistencia mecnica posibley para garantizar que, con lascargas trmicas posteriores, elvolumen permanezca constante.El material volumtricoBLAUBRAND as comoSILBERBRAND se puede ca-lentar por lo tanto en la estufade secado o de esterilizacin

hasta 250 C, sin que hayaque temer una variacin devolumen.Sin embargo, debe tenersesiempre en cuenta que enmaterial de vidrio un calenta-miento irregular o un cambiobrusco de temperatura pro-voca tensiones trmicas quepueden conducir a la rotura.


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La impresin

Tras el ajuste se realiza la im-presin del aforo y la rotulacinen serigrafiado. BRAND utilizaplantillas extensibles para todaslas pipetas graduadas, buretas,probetas graduadas y probetascon tapn. Mediante extensin,las plantillas coinciden exacta-mente con las marcas de ajustey por tanto tambin los volme-nes intermedios tienen mximaprecisin.

Con respecto a pipetas, seaplica en su extremo superioradicionalmente un anillo decolor llamado 'cdigo de color',que sirve para una mejor distin-cin de capacidades de pipetafcilmente confundibles. Estdefinido en la norma ISO 1769qu color se destina para cadavolumen nominal.

Las tintas de impresin

BRAND utiliza solamente tintas de calidad concebidas especialmente para material volumtrico devidrio.

La fusin de la pintura

La fusin de la pintura es elltimo paso en el proceso deconvertir el cuerpo en bruto enun aparato volumtrico.El proceso de fusin cuida-dosamente controlado es,junto a las tintas de calidadespecialmente fabricadas paraeste uso, condicin esencialpara una graduacin duraderasobre el material volumtrico.Esto significa: calentamientoy enfriamiento controlados delmaterial volumtrico graduado.La temperatura mxima seencuentra entre 400 C y550 C, segn el tipo de vidrio

usado.

Impresin sobre matraces aforados, aplicada a mquina

Probetas graduadas con impresin, antes de la fusin

Aseguramiento de la calidad

En BRAND, el aseguramientode la calidad se realiza median-te controles continuos durantela produccin y mediante con-troles estadsticos en la inspec-cin final. (Para informacionesdetalladas vase pg. 39).

Esmalte azul:

Alto contraste de colores, unacombinacin ptima de resisten-cia y legibilidad. Para el materialvolumtrico BLAUBRAND(clase A/AS) se emplea pinturade esmalte azul.

Esmalte blanco:

Para el material volumtricoSILBERBRAND (clase B) seemplea pintura de esmalteblanco.

Colocante marrn por

difusin:

Alta resistencia, por ej. frentea mtodos de limpieza agresi-vos. Se difunde en la superficiey slo puede destruirse porabrasin del vidrio. Se empleapara aparatos volumtricos quese someten a condiciones delimpieza especialmente agre-sivas. El colorante marrn pordifusin se utiliza para aparatosvolumtricos BLAUBRAND-ETERNA (clase A/AS) y tam-bin para aparatos volumtricosSILBERBRAND-ETERNA(clase B).


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Codi f icac in de aparatos vo lumtr icos

Adicionalmente, pueden ser impresas so-bre el aparato las siguientes indicaciones:

l pas de origen

l lmite de error

l marca (aqu BLAUBRAND)

l norma, p. ej. ISO 648

l nmero de lote

Las siguientes codificaciones deben aplicarseen cada aparato volumtrico:

n volumen nominal

n smbolo de unidad: ml o cm

n temperatura de referencia: 20 C

n ajuste: Ex o In

n clase: A, AS o B

n eventualmente tiempo de espera:por ejemplo Ex + 5 s

n nombre o distintivo del fabricante

Ejemplo:Pipetas aforadas BLAUBRAND

Nmero de lote

Marca registrada de BRAND

para aparatos volumtricosde clase A/AS

Fabricante

Volumen nominal

Lmite de error

Unidad de volumen

Denominacin de la norma

Clase 'A' significa que el aparatoes de la ms alta calidad.

'S' = vaciado rpido

Pas de origen

Distintivo de BRAND paracertificar la conformidad de

acuerdo con la norma de con-traste alemana (Eichordnung)

y la norma DIN 12 600

Temperatura de referencia(20 C), tiempo de espera(5 s), ajuste (Ex = vertido)

BH


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Segn DIN EN ISO, los aparatos volumtricos de la clase A y

AS tienen lmites de error idnticos. Por regla general, estos sonalcanzados slo por aparatos volumtricos de vidrio. La excepcinson los matraces aforados de plstico BRAND, fabricados en PFAo en PMP, y las probetas graduadas de plstico BRAND, fabrica-das en PMP, que corresponden a la clase A y que se han conce-bido para mximas exigencias.En los aparatos volumtricos de la clase AS con ajuste por vertido'Ex', la adicin de 'S' significa vaciado rpido.Los aparatos volumtricos de la clase AS se han impuesto deforma generalizada. En las pipetas y buretas con orificio amplio dela punta, el peligro de obstruccin es pequeo. El comportamientode vaciado de lquidos diferentes se compensa cumpliendo conlos tiempos de espera especificados (vase 'Tiempo de vaciado yde espera' en la pg. 11).

El material volumtrico de la clase B est disponibleen vidrio oen plstico. Para la clase B, en general se acepta el doble de loslmites de error que para la clase A/AS. Los aparatos de medicinde la clase B con ajuste por vertido Ex no tienen tiempos deespera especificados.

Clas i f icac in en c lases de exact i tud

La gama de aparatos volumtricos dispone en general de dos clases de exactitud:

No existe un material univer-sal que cumpla con todos losrequerimientos del laboratorio.Se tiene que elegir entre vidrioy plstico segn la aplicacin,el tipo de producto, as comolas propiedades especficas deestos materiales y el aspectoeconmico.Las ventajas decisivas delmaterial volumtrico en pls-tico son su alta resistencia a larotura y su bajo peso.Los materiales que probaron sueficiencia son PP, PMP y PFA.

Clase A/AS

Clase B

Clase A/AS

designa siempre a la mejorclase de exactitud

S significa: vaciado rpido(pipetas y buretas)

solamente la clase A/ASest certificada de confor-midad

Graduacin:Las divisiones largas de laescala abarcan aproximada-mente un 90% del perme-tro del tubo, o eventualmen-te estn aplicadas comomarcas anulares.

Clase B

normalmente el doble de loslmites de error de la claseA/AS

Graduacin:Las divisiones largas de la

escala abarcan aproxima-damente un 20 - 40% delpermetro del tubo.

Decisin a tomar: aparatos volumtricos

de vidrio o de plstico?

Probeta graduada de PMP,clase A

Con PP se producen pipetasaforadas, pipetas graduadas,matraces aforados y probetasgraduadas, cuya exactitud co-rresponde a los lmites de errorde la clase B.Los materiales PMP y PFAtambin se utilizan para apara-tos de medicin cuyos lmitesde error corresponden a los dela clase A, p. ej. matraces afo-rados (PMP/PFA) y probetasgraduadas (PMP). Debido a sualta pureza, el material PFA seutiliza especialmente para an-lisis de trazas.


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Material volumtrico en vidrio Menisco del lquido

Traba jar con mater ia l vo lumtr ico en v idr io

El trmino 'menisco' se utilizapara describir la curvatura de la

superficie del lquido.El menisco adopta forma con-vexa o cncava. La formacinde la curvatura resulta de larelacin de fuerzas entre adhe-sin y cohesin.

Si las molculas del lquidoexperimentan mayor atraccin

hacia la pared de vidrio (fuerzade adherencia) que entre simismas (fuerza de cohesin),el menisco adoptar formacncava. Es decir: hay unpequeo aumento en el ngulode contacto del lquido con lapared. Esto ocurre en el caso

de las soluciones acuosas, porejemplo. Si el dimetro de una

pipeta es adecuadamente pe-queo, por ej. el de una pipetacapilar, la fuerza de adherenciaes suficiente no solamente paraelevar el lquido en los puntosde contacto con la pared, sinotambin para hacer ascender elnivel del lquido (efecto capilar).

Un prerequisito para la medicin exacta de volmenes es el ajuste exacto del menisco.

En el caso de un menisco cn-cavo, la lectura del volumen serealiza a la altura del punto msbajo de la superficie del lquido.El punto ms bajo del meniscodebe tocar el borde superior dela divisin de la escala.

En el caso de un menisco con-vexo, la lectura del volumen serealiza a la altura del punto msalto de la superficie del lquido.El punto ms alto del meniscodebe tocar el borde inferior dela divisin de la escala.

La franja de Schellbach esuna estrecha franja azul en elcentro de una franja blanca. Seaplican en la parte posterior deburetas para mejor legibilidad.Debido a la refraccin de la luz,la franja azul aparece en formade dos puntas de flecha a laaltura del menisco. La lecturase realiza a la altura del puntode contacto de las dos puntas.

Si la fuerza de cohesin entrelas molculas del lquido es

mayor que la fuerza de adhe-rencia que ejercen las molcu-las de la pared de vidrio sobrelas molculas del lquido, elmenisco adoptar forma con-vexa. Esto ocurre en el casodel mercurio, por ejemplo.

Menisco cncavo en una pipetagraduada.

Menisco convexo en una pipetagraduada.

Ajuste e l menisco

Menisco de l qu ido

Lectura del meniscoPara leer el menisco sin errorde paralaje, el aparato volu-mtrico debe estar en posicinvertical y los ojos del operadordeben encontrarse a la alturadel menisco. En esta posicin,el aforo se visualiza como unalnea.

Colocando un papel oscuroinmediatamente por debajo delaforo, o una divisin de la es-cala detrs del aparato, el me-

nisco se observar ms oscuroy podr leerse ms fcilmentecontra un fondo claro.

Figura de menisco en un apa-rato volumtrico con franja de

Schellbach, como por ej. unabureta.

Indicacin importante:

Durante la utilizacin, la tem-peratura del lquido y del entor-no es importante. Mientras quela dilatacin de los aparatos vo-lumtricos de vidrio es despre-ciable, la dilatacin de los l-quidos a distintas temperatu-ras debe tenerse en cuenta.Para mantener el error de vo-lumen lo ms pequeo posible,los volmenes de todos los l-quidos interrelacionados debenmedirse a una temperatura ha-bitual (la que predomine todoslos das). En especial para lapreparacin de soluciones es-tndar, por ejemplo el pipetea-do y la valoracin de la mues-tra deben realizarse a la mismatemperatura. Tambin debernevitarse grandes diferencias detemperatura entre el aparato demedicin y el lquido.

Menisco

Aforo /

Divisin de

la escala


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Material volumtrico en vidrio Tiempos de vertido y de espera

T iempos de ver t ido y de espera

El tiempo de vertido

Como tiempo de vertido sedefine al perodo de tiempo ne-cesario para el descenso libredel menisco (vertido de aguapor la fuerza de la gravedad),desde el aforo superior hastael aforo inferior de volumen, ohasta la punta del aparato. Enlos aparatos volumtricos de laclase AS, a esto debe sumarseel tiempo de espera especifi-cado.

El tiempo de espera comienzaen el momento en el cual elmenisco permanece quieto a laaltura de la marca de volumeninferior o bien a la punta devertido. En el tiempo de esperase escurren restos de lquidode la pared de vidrio.

En los aparatos volumtricos (ajustados por vertido 'Ex'), el volumen de lquido vertido es siempremenor que el volumen contenido en el aparato. Esto se debe a que, debido a la humectacin, en la

superficie interior del aparato de medicin queda una pelcula de lquido retenida. El volumen de estapelcula de lquido depende del tiempo de vertido, el cual fue tenido en cuenta durante el ajuste delaparato de medicin.

Errores de volumen posibles:

El volumen vertido por una pipeta o una bureta ser menor cuando su punta est quebrada (menortiempo de vertido), o mayor cuando la punta no est limpia, dificultando el vertido del lquido (mayortiempo de vertido). El volumen tambin aumenta cuando, despus del pipeteado, el lquido restanteen la punta es soplado equivocadamente. (Manejo correcto de pipetas, vase la pg. 13.)

Ejemplo de tiempos de vertido y de espera

referidos a clases diferentes de pipetas

(pipeta aforada de 25 ml)

Tiempo de espera de laclase AS:El tiempo de espera de 5 sdefinido para las pipetas afo-radas y graduadas de la claseAS es el tiempo que, despusdel aquietamiento aparentedel menisco en la punta devertido, deber aguardarseantes de que la punta puedaretirarse de la superficie interiordel recipiente de depsito. El

fabricante deber indicar sobrela pipeta el tiempo de esperade 5 s (vase la pg. 8).

El tiempo de espera

Clase A (certificada de conformidad)

25 - 50 s tiempo de vertido (sin tiempo de espera)

Clase AS (certificada de conformidad)

10 - 20 s tiempo de vertido +5 s tiempo de espera

Clase B

10 - 50 s tiempo de vertido (sin tiempo de espera)


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Material volumtrico en vidrio Manejo

Traba jar con mater ia l v o lumtr ico

Pipetas en genera l

Las pipetas son aparatos volumtricos normalmente ajustados por vertido Ex para la medicin devolumen del lquido. Estas son medidas volumtricamente en el proceso de fabricacin de formaindividual y se les aplica una o varias marcas de medicin.Se distinguen generalmente los siguientes tipos de pipetas: pipetas aforadas y pipetas graduadas

(ajustadas por vertido 'Ex'), as como pipetas capilares hasta 200 l (ajustadas por contenido 'In').

Pipetas aforadas

n Ajuste:Clase AS: 'Ex + 5 s'Clase B: 'Ex'

n Normalmente de mayorexactitud de medicin quelas pipetas graduadas

n Modelos de pipetas afora-das:El modelo ms importantees la pipeta aforada con1 solo aforo (vertido com-pleto).

Los modelos con 2 aforosson menos usuales (vertidoparcial).

Pipetas graduadas

n Ajuste:Clase AS: 'Ex + 5 s'Clase B: 'Ex'

n La escala permite leer vol-menes parciales

n Tipos de pipetas graduadas:

tipo 2 volumen nominalarriba, vaciado totaltambin para vol-menes parciales

tipo 1 volumen nominalabajo, vaciado par-cial para todos losvolmenes

tipo 3 volumen nominalabajo, vaciado totalsolamente para elvolumen nominal

Pipetas capilares

por ej. intraMARK

BLAUBRAND

n ajustadas por contenido 'In'

n una marca de aforo anular

n volumen limitado por unextremo y por el aforo

Pipetas capilares

por ej. intraEND

BLAUBRAND

n ajustadas por contenido 'In'

n sin aforo

n volumen limitado por ambosextremos(Capilares end-to-end)

pipeta aforada con 1 aforo pipeta graduada tipo 2,volumen nominal arriba


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Manejo de p ipetas

Tipo 1 y tipo 3Para la utilizacin de pipetasgraduadas de tipo 1 3 (puntocero arriba), el menisco debe:

1.) en primer lugar, ajustarseen el punto cero y, a conti-nuacin vaciarse el lquidohasta un poco por encimadel volumen parcial desea-do.

2.) Despus de un tiempo deespera de 5 s el meniscodebe ajustarse una segun-

da vez.

Llenado

1. Llenar la pipeta utilizando unauxiliar de pipeteado, hastasobrepasar la marca del volu-men deseado aprox. 5 mm.

2. Limpiar el exterior de la pun-ta de la pipeta con un paode celulosa.

3.Ajustar el menisco.

4. Quitar la gota restante en la

punta.

Vaciado

5. Mantener la pipeta en posi-cin vertical, colocar la puntade la pipeta contra la paredinterna de un recipiente derecogida que se mantieneinclinado y dejar salir el con-tenido. No apartar la puntade la pipeta de la pared!

6. Tan pronto como el menisco

permanezca quieto en lapunta, empieza el tiempo deespera de 5 s (solamente enpipetas, clase AS).

7. Una vez transcurrido el tiem-po de espera, llevar la puntade la pipeta aprox. 10 mmhacia arriba contra la pareddel recipiente y desprenderla gota. Al hacerlo, se ver-ter un poco ms de lquidoresidual.

Pipetas ajustadas por vertido 'Ex'

Pipeteado correcto con pipetas aforadas de 1 aforo (ejemplo con volumen nominal de25 ml) y pipetas graduadas tipo 2, clase AS (ejemplo con volumen parcial de 3 ml).

Dispositivo auxiliar: auxiliar de pipeteado (vase pg. 18)

Vaciado

parcial,

punto 0

arriba

Vaciado

total,

punto 0

arriba

Tipo 3

Ajustar elmenisco2 x


Tipo 1



Tipo 2

El trabajo con pipetas gradua-das de tipo 2 es mucho msrpido y sencillo. En las pipetasde tipo 1 y en las hasta ahorahabituales de tipo 3, existeadems el peligro de que,debido a la necesidad de unsegundo ajuste del menisco,se vierta lquido en exceso yla muestra deba prepararse

nuevamente (como tambinsucede con pipetas aforadasde dos aforos).

Vaciado

total,

volumen

nominal

arriba

Pipeta

aforada,

de 1 aforo

Aspirar Escurrir Ajustar elmenisco

Vaciar

Nota:

La pequea cantidad delquido que permanecedentro de la punta nodebe aadirse a la mues-tra, por ej. por soplado,ni tampoco ingresar alrecipiente: la pipeta hasido ajustada teniendo encuenta este volumen delquido residual.


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Manejo de p ipetas

Pipetas ajustadas por contenido 'In'

Pipetas capilares son pipetas con un dimetro interior muy pequeo. La aspiracin del volumende lquido se realiza mediante un auxiliar de pipeteado o automticamente por la capilaridad.Tras el vaciado, tiene que enjuagarse la pipeta capilar varias veces con la solucin de dilucin.

Pipeteado correcto con pipetas capilaresDispositivo auxiliar: auxiliar de pipeteado (vase pg. 18)

Llenado

n Aspirar el volumen de lquidolo ms exactamente posiblehasta la marca deseada.

n

Mantener el capilar en po-sicin horizontal y escurrirlocuidadosamente con unpao de celulosa.

Vaciado

n Para vaciar el lquido, soplarutilizando un auxiliar depipeteado y enjuagar 2 a 3veces con diluyente (ya quese trata de un capilar ajusta-do por contenido In).

n Frecuentemente los capila-res end-to-end se colocandirectamente en la solucinde dilucin y se lavan porvibracin.

Soporte concapilare end-to-end

Aspirar Escurrir Vaciar


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Manejo de matraces a forados

Los matraces aforados, clase Ay B, son aparatos volumtricosajustados por contenido In,empleados principalmente parapreparar soluciones exactas,como por ej. soluciones patrn

y estndar, y diluciones.Los nuevos mtodos de an-lisis exigen matraces aforadosde pequeo volumen. Losmatraces aforados con formaestndar de esta gama de vo-lumen (hasta aprox. 50 ml) sevuelcan fcilmente debido a laposicin desfavorable del cen-tro de gravedad y a su relativa-mente pequea superficie deapoyo. Los matraces aforadoscon forma trapezoidal propor-cionan una estabilidad muchomayor. El centro de gravedadest ms bajo y la superficiede la base tiene ms del doblede tamao que en los matracesaforados con forma estndardel mismo volumen.

Uso de un matraz aforado para la preparacin de una solucinpatrn:

Manejo de probetas graduadas y con tapn

Probetas graduadas

Las probetas graduadas, claseA y B, son aparatos volum-tricos ajustados por contenidoIn o sea, indican el volumencontenido de forma exacta.

1. Pasar al matraz aforado la cantidad exactamente pesada desustancia o un concentrado lquido estndar.

2.Llenar el matraz con agua destilada hasta la mitad aproxima-damente y agitar el matraz para facilitar la disolucin o bien elmezclado.

3.Adicionar agua destilada hasta llegar casi al aforo.

4. Llenar el resto del volumen utilizando un frasco lavador (o unapipeta) hasta que el menisco se ajuste exactamente a la alturade la marca. Importante: la lectura tiene que efectuarse a laaltura de los ojos! La pared de vidrio por encima del aforo nodebe mojarse.

5.A continuacin, tapar el matraz y agitarlo invirtindolo variasveces para facilitar el mezclado.

Las probetas graduadas contapn pueden utilizarse, deigual forma que los matracesaforados, para preparar solu-ciones estndar y diluciones.

n Despus de la medicin de,p. ej., distintos volmenesde lquido, estos puedenmezclarse directamente poragitacin en una probetacon tapn.

Manejo:n Llenar con lquido.

n Ajustar el menisco al aforodeseado (realizar la lecturaa la altura de los ojos!).

n No se debe mojar la paredde vidrio por encima delaforo.

n El volumen ledo correspon-de a la cantidad de lquidocontenida.

Probetas con tapn

Las probetas graduadas contapn, al igual que las probetasgraduadas, tienen ajustadaspor contenido In. Adicional-mente estn provistas con untapn esmerilado.

Nota:

En el laboratorio, las probetasgraduadas se utilizan a menudocomo un aparato de medicinajustados por vertido Ex.Las mediciones con agua die-ron como resultado que, debidoa los restos por humectacin,el volumen vertido se redujo enaproximadamente el valor dellmite de error de la probetagraduada. Condicin necesa-ria: el lquido debe verterse

lentamente sin interrupcin y,para el escurrimiento total delmismo, la probeta debe man-tenerse inclinada durante 30segundos adicionales.

Nota:Al mezclar dos lquidos puedeproducirse una modificacin delvolumen.


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Buretacon llave lateral

Bureta de ceroautomticosegn Pellet

Bureta de ceroautomticosegn Dr. Schilling

Manejo de buretas

Buretas son aparatos volumtricos en vidrio ajustados por vertido'Ex', que sirven para la valoracin en el anlisis de patrn.

Diferentes versiones de buretas:

Nota sobre el tiempo de espera:Contrariamente a las pipetas, en la aplicacin prctica las buretasno se utilizan de igual forma que para la calibracin. Tpicamen-te, durante la valoracin se consume un volumen menor que elnominal y, cerca del punto de cambio de color, la solucin patrnse adiciona gota a gota para evitar una sobrevaloracin.

Esta adicin gota a gota requiere un tiempo igual, o inclusomayor, que el tiempo de espera establecido. De esto se concluyeque en la aplicacin prctica de las buretas clase AS, no es nece-sario cumplir con el tiempo de espera estipulado de 30 segundos.

Manejo

1. Enjuagar la bureta con la solucin patrn a utilizar y alinearlade manera que el tubo de la bureta quede vertical. Al hacerlo,tener en cuenta que slo pueden utilizarse soluciones patrntotalmente homogneas. No debe haber ni turbiedades, ni flo-culaciones, ni depsitos (control visual).

2. Llenar la bureta hasta sobrepasar ligeramente la marca cero.Para desairear la llave de bureta, dejar salir el lquido hasta lle-gar, como mximo, al volumen nominal. Si apesar de ello per-manece una pequea burbuja de aire en la bureta, mantener labureta inclinada y golpear con el dedo ligeramente en el lugardonde se encuentre la burbuja.

3. Aspirar la solucin patrn sin formacin de burbujas de airehasta sobrepasar en aprox. 5 mm la marca cero. No debe mo-jarse la pared de vidrio por encima de este nivel.

4. Al dejar salir el lquido ajustar exactamente el punto cero. Lalectura debe efectuarse a la altura de los ojos (nivel sin para-laje). Las buretas de cero automtico se llenan tambin hastasobrepasar en aprox. 5 mm el punto cero. Tras la aireacin serealiza el ajuste automtico del punto cero.

5. Eliminar la gota eventualmente adherida a la punta de salida.

6. Abrir la llave de bureta y aadir lentamente la solucin patrna la solucin con el analito (con indicador). Al hacerlo, la llavede bureta no debe tocar la pared de vidrio. Durante la adicingota a gota agitar ligeramente el recipiente de recogida con lamuestra, o colocarlo sobre un agitador magntico.Para mejor visualizacin del cambio en color, el recipiente derecogida debera estar colocado sobre una base blanca. La va-loracin ha finalizado.

7. La lectura del volumen valorado se efecta a la altura de losojos. Con el tiempo de la duracin de la valoracin, normal-mente ya se ha cumplido el tiempo de espera (clase AS: 30 s).Deber tenrsela en cuenta durante la calibracin del aparatode medicin.

8. Una gota eventualmente adherida a la punta de salida de la lla-ve se escurre tocando la punta con la pared interna del reci-piente de recogida para adicionar la gota, ya que forma partedel volumen valorado.

n Antes de proceder a una nueva valoracin, ajustar de nuevo elpunto cero, ya que la valoracin siempre tiene que comenzarsedesde el punto cero.

Para efectuar valoraciones, adems de buretas se necesitan:matraz aforado, pipetas aforadas, matraz Erlenmeyer.

Ajuste

Clase AS: 'Ex + 30 s'Clase B: 'Ex'


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Manejo

1. Determinar el peso del picnmetro seco sin carga.

2.Llenar el picnmetro con lquido de ensayo sin formacin deburbujas. Debe llenarse el cuello esmerilado hasta un tercioaproximadamente.

3.Ajustar la temperatura del picnmetro y del lquido en un baomara a 20 C.

4.Ajustar el tapn o bien el termmetro del picnmetro sobre elcuerpo de acuerdo con la marca e introducirlo cuidadosamen-

te. Al hacerlo, el tubo del capilar se llena y el lquido desplaza-do se desborda.

5.Limpiar y secar cuidadosamente con un pao de celulosa la su-perficie del tapn o bien del capilar lateral, as como la superfi-cie exterior del picnmetro.

ATENCIN:no se debe extraer con el pao lquido del capilar. Debe coinci-dir exactamente con la altura del borde superior del capilar.

6.Determinar el peso del picnmetro con carga.

Se calcula la densidad a partir de la masa (peso) y el volumen del

lquido. El volumen est grabado sobre el aparato. Se aplica lasiguiente ecuacin:

Densidad () = masa (m) / volumen (V)

Al efectuar la pesada debe tenerse en cuenta el empujeaerosttico.

Picnmetro contapn

Picnmetro contermmetro y capilarlateral

(recomendada paralquidos con presinde vapor ms alta)

Manejo de p icnmetros

Los picnmetros sirven principalmente para determinar la densidad de lquidos de una viscosidadmoderada. No se cuentan entre los aparatos volumtricos, no obstante, su ajuste es tipo In, comop.ej. el de los matraces aforados.

Se distinguen dos tipos de picnmetros:

Nota:

Cada uno de los picnmetros ajustados tiene un nmero deaparato, el cual est indicado tambin en todos los componentes.Slo pueden utilizarse juntos componentes con el mismo nmero.


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Material volumtrico en vidrio Auxiliares de pipeteado

Auxiliares de pipeteado a motor

por ej. el accu-jetpro de BRAND

El ajuste variable de la velocidad de giro del motor y un sistema

especial de vlvulas permiten una alta sensibilidad en el trabajocon pipetas de 0,1 a 200 ml.Una vlvula antirretorno incorporada ofrece, junto con un filtro de

membrana, una proteccin eficaz contra la entrada de lquidos.

Para proteger el aparato contra corrosin, los vapores de lquidose impelen hacia el exterior mediante compensacin de presinactiva.

Se selecciona el modo de

expulsin segn la aplicacin.En el laboratorio analtico porejemplo se trabaja principal-mente en el modo 'vaciadolibre' para alcanzar la exacti-tud de volumen exigida. Paraobservar la exactitud indicadasobre las pipetas, es imprescin-dible el vaciado libre del medioteniendo en cuenta los tiemposde vertido y de espera.

En el campo de la microbiolo-

ga, por contra, la exactitud devolumen tiene menor importan-cia. En el centro de inters seencuentra la medicin uniformey rpida de soluciones de cul-tivo etc. Por lo tanto, en estecampo de aplicacin se prefieretrabajar en el modo 'vaciadoporsoplado'.

Expulsin del lquido: vaciado libre o vaciado por soplado?

Manejo

El pipeteado se controla mediante dos botones grandes:

Trabajar con aux i l i a res de p ipeteado

Aspiracin

Pulsar el botn de pipetea-do superior para aspirar ellquido a pipetear.

Cuanto ms se oprime elbotn, ms rpidamente sellena la pipeta.

Se distinguen dos tipos de auxiliares de pipeteado:

n Auxiliares de pipeteado manuales

n Auxiliares de pipeteado a motor

Para trabajar con pipetas es indispensable utilizar auxiliares depipeteado.

Auxiliares de pipeteado a motor especialmente son adecuado parael pipeteado de largas series (por ej. en el cultivo de clulas).

El pipeteado a boca, o bien con tubo de goma y boquilla,

est prohibido. Por lo tanto, es indispensable utilizar un

auxiliar de pipeteado. Este contribuye significativamente

a la reduccin del peligro de infecciones y de lesiones.

Expulsin

La velocidad de expulsinaumenta continuamente amedida que se oprime el

botn en el aparato. A eleccin:

Vaciado libre

o

Vaciado por soplado con

asistencia del motor


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A

S

E

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Atencin!

No conservar la pera de pi-peteado en estado de vaco, noaspirar lquido hacia la pera.

Auxiliares de pipeteado manuales

Auxiliar de pipeteado estndar clsico para pipetas aforadas y pipetas graduadas.

Manejo

1. Colocar la pipeta

2. Mediante presin sobre 'A'comprimir la pera(generar vaco)

3. Mediante presin sobre'S' aspirar el lquido hastasobrepasar ligeramente lamarca deseada

4. Mediante presin sobre 'E'dejar salir el lquido hasta lamarca deseada o bien vaciarla pipeta

Es adecuado para el rango completo de pipetas aforadas y gra-duadas de 0,1 a 200 ml. Un sistema especial de vlvulas permiteajustar el menisco de forma sensible y exacta.

Manejo

Generar vaco

Comprimir la pera de aspiracin.

Aspiracin

Desplazar hacia arriba la palan-ca de pipeteado.Cuanto ms se desplace haciaarriba la palanca, tanto msrpido se llenar la pipeta.

Ajuste del menisco /

Expulsin por 'vaciado libre'

Desplazar lentamente la palan-ca de pipeteado hacia abajo. Elmenisco desciende al soltarla palanca el menisco permane-ce quieto.Para vaciar la pipeta, despla-zar la palanca completamentehacia abajo.Para mantener la exactitud dela clase A, el lquido residual nodebe soplarse!

Soplado

Frecuentemente, durante elpipeteado de medios viscosos,el vaciado libre de las puntasde las pipetas no permite quese vacen totalmente. En estoscasos, cuando se utiliza el auxi-liar de pipeteado macro, soplarel resto residual ejerciendopresin sobre la pera de goma.

Un filtro de membrana hidrfobo protege el sistema frente a unaposible entrada de lquido.

Por ej. el auxiliar de pipeteado macro de BRAND

La pera de goma

Los auxiliares de pipeteado manuales se utilizan sobre todo en loslaboratorios qumicos para pipetear series pequeas.

Soplado

Para el soplado de medios vis-cosos, debe cerrarse la abertu-ra lateral y presionarse la bolapequea.


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Auxiliares de pipeteado manuales para pipetas

de pequeo volumen hasta 1 ml

Por ej. el auxiliar de pipeteado micro de BRAND

Manejo

Manejo

Aspiracin / Expulsin

Al girar el botn de aireacin,el lquido se aspira o bien seexpulsa.Las pipetas ajustadas porcontenido In se limpian me-diante la repeticin del llenadoy vaciado con la solucin de

dilucin.

Expulsin

Con la tecla grande puedenexpulsarse las pipetas utiliza-das, sin tocarlas.

Expulsin por vaciado libre

Para la expulsin del lquidode las pipetas ajustadas porvertido Ex, oprima el botnde aireacin (eventualmenteobservar el tiempo de espera).

El pipeteado a boca, o bien con tubo de goma y boquilla,

est prohibido. Por lo tanto, es indispensable utilizar un

auxiliar de pipeteado. Este contribuye significativamente

a la reduccin del peligro de infecciones y de lesiones.

Aspiracin

Girar la rueda de ajuste haciaatrs hasta que el lquido al-cance exactamente el aforodeseado.

Expulsin

Al utilizar pipetas ajustadas

por contenido 'In':

girar la rueda de ajuste haciadelante hasta que el lquidohaya salido. Enjuagar la pipetacon solucin de dilucin 3 vecescomo mnimo.

Al utilizar pipetas ajustadaspor vertido 'Ex':

para el vaciado libre oprimir elbotn de aireacin hasta que el l-quido haya salido (eventualmente,aguardar el tiempo de espera).

Colocar la pipeta

Insertar la pipeta siempre por elextremo corto, o sea, sujetar lapipeta por el cdigo de color eintroducirla cuidadosamente enel adaptador.

Por ej. el auxiliar de pipeteado micro-classic de BRAND

Gracias a su diseo angulado es especialmente adecuado para traba-jos bajo el microscopio en el laboratorio IVF y en el laboratorio clnico.

Para estas pipetas se desarrollaron auxiliares de pipeteado es-peciales que, entre otros usos, se utilizan en el rea mdica conpipetas capilares, pipetas mezcladoras de sangre y pipetas paraglucosa en sangre de hasta 1 ml como mximo.


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Aparatos Liquid Handling

Las exigencias cada vez ms estrictas respecto a la calidad de los resultados de anlisis y el aumentode las muestras a analizar en los laboratorios requieren aparatos de medicin con los cuales puedanrealizarse lo ms eficientemente posible los trabajos de rutina en la preparacin de las muestras.Para atender a esta necesidad, los fabricantes de aparatos de laboratorio han desarrollado los aparatosLiquid Handling. stos son el perfeccionamiento de los aparatos volumtricos en vidrio y plstico yposibilitan un trabajo racional con un mximo de precisin y confort de manejo.Los aparatos Liquid Handling de la mayora de los fabricantes funcionan segn un principio similar. Sinembargo, entre los distintos fabricantes se observan en parte diferencias en los detalles de construcciny en los materiales utilizados.Para la explicacin del principio de funcionamiento y uso de aparatos Liquid Handling sigue a conti-nuacin la descripcin de algunos aparatos de BRAND, que sirven de ejemplo.

Traba jar con aparatos L iquid Handl ing

Dispensette seripettor Titrette Transferpette S(mecnica)

TransferpetteS -8/-12(mecnica)

Transferpettor HandyStep

(mecnico)HandyStep electronic

Dosificador

acoplable a frasco

Bureta

acoplable a frasco

Dosificador

acoplable a frasco

Pipeta monocanal

con cojn de aire

Pipeta multicanal

con cojn de aire

Pipeta de desplaza-

miento directoDispensador manual Dispensador manual

Transferpette electronic Transferpette-8/-12electronic

Pipeta monocanal

con cojn de aire

Pipeta multicanal

con cojn de aire


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Aparatos Liquid Handling Dosificacin

Dosificadores acoplables a frascos con mbolo flotante

Dosi f icar con dos i f icadores acoplab les a f rascos

Este sistema funciona sin junta de mbolo, siendo por tanto muy robusto y de fcil mantenimiento. Elmbolo est integrado en el cilindro de dosificacin sin tener contacto con el mismo. Entre mbolo ycilindro de dosificacin existe una ranura de slo unas pocas milsimas de milmetro llena con lquido.Esta pelcula de lquido acta como un lubricante. Por ello se desliza el mbolo con muy poca friccin.

Principio comn del funcionamiento

de los dosificadores acoplables a frascos

Qu se entiendo por 'dosificacin'?

Por dosificacin se entiende dosificar una cantidad definida.

Para una dosificacin sencilla, rpida y precisa de reactivos, se utilizan con frecuencia dosificado-res acoplables a frascos. stos se acoplan directamente o mediante adaptadores a los frascos dereactivo usuales. Con ello se hace innecesario el trasvase de productos qumicos (sustitucin de las

probetas graduadas) lo que facilita notablemente el trabajo, sobre todo la dosificacin en serie.

Se distinguen dos tipos de dosificadores acoplables a frascos:dosificadores con mbolo flotante y dosificadores con mbolorascador.

Al desplazarse el mbolo ha-cia arriba, se va aspirando lacantidad ajustada de lquidodirectamente desde el frascode reactivo hacia el cilindrodel aparato. Al desplazarse acontinuacin el mbolo hacia

abajo, se va expulsando el l-quido mediante un sistema devlvulas a travs de la cnulade dosificacin.Ya no es necesario ni ajustarel menisco ni tener en cuentatiempos de espera.

Campos de aplicacin

Para dosificar reactivos agre-sivos, por ej. cidos fuertescomo H3PO4, H2SO4, solu-ciones alcalinas como NaOH,KOH, soluciones salinas, ascomo un gran nmero dedisolventes orgnicos:Dispensette III

Para dosificar disolventesorgnicos, por ej. hidrocarburosclorados y fluorados, comotriclorotrifluoroetano y dicloro-metano, o cidos como HCl yHNO3 concentrados fumantes,as como cido trifluoroactico(TFA), tetrahidrofurano (THF) yperxidos:Dispensette Organic

Para la dosificacin de cidofluorhdrico (HF) hasta una

concentracin max. del 52%:Dispensette HF

Materiales

Dependiendo del modelo, laspiezas que entran en contactocon lquidos estn fabricadasde diversos materiales espe-cialmente resistentes, comop. ej. cermica, platino-iridio,tantalio, ETFE o PFA.

por ej. la Dispensette de BRAND


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por ej. el seripettor de BRAND

El sistema completo est construido de tal forma que permita elintercambio de la unidad de dosificacin completa. Las fuerzas de

accionamiento algo altas durante el llenado se minimizan medianteun resorte con accin de levantamiento automtico.

Dosificadores acoplables a frascos con mbolo rascador

Para la seleccin de dosifi-cadores acoplables a fras-cos deben comprobarse losdispositivos de seguridad del

aparato. Por ejemplo, cmose reduce el peligro de lesionesen el caso de que se produzcauna rotura del frasco de vidrio?Cmo se evita un salpicadoaccidental durante la desai-reacin del aparato? Cmose reduce el contacto con elmedio durante el cierre de lacnula de dosificacin?

Seguridad en primer lugar!

El usuario tambin debe veri-ficar la adecuacin del dosifi-cador respecto al medio a do-sificar. Por regla general, en el

captulo 'Funcin y limitacionesde empleo' de las instruccionesde manejo existen indicacionesal respecto. En caso de dudas,consultar directamente con elfabricante.En las instrucciones de manejotambin deben existir indicacio-nes sobre el mantenimiento ysobre el control de los mediosde anlisis.

En el marco del control de losmedios de anlisis segn ISO9001 y segn las directivasBPL, los aparatos volumtri-

Control de los medios de anlisis / Calibracin

El campo de aplicacin est enla rutina diaria para la dosifi-cacin de soluciones alcalinas,cidos de baja concentracin,tampones biolgicos, mediosde cultivo, detergentes biolgi-cos y disolventes polares.

cos exigen una comprobacinperidica de su exactitud y,en caso necesario, un ajuste(vase pgina 33).

Campos de aplicacin y materiales

El dosificador seripettor pro esadecuado para la dosificacinde cidos, p. ej. HCl concen-trado, disolventes polares (porej. acetona), aceites esen-ciales y medios sensibles ala radiacin UV. A diferencia

del dosificador seripettor

, eneste aparato se utilizan p. ej.vlvulas de materiales msresistentes.

El sistema completo est construido de tal forma que permita elintercambio de la unidad de dosificacin entera. Las fuerzas de

accionamiento algo altas durante el llenado se minimizan medianteun resorte con accin de levantamiento automtico.

Adems del 'mbolo flotante', tambin se utiliza el principio de funcionamiento de la 'junta de mbo-lo que desplaza el lquido'. En estos sistemas se observan frecuentemente fuerzas de accionamientoms altas y un desgaste de la junta del mbolo debido al rozamiento.


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Aparatos Liquid Handling Valoracin

Valorar con buretas acoplab les a f rascos

por ej. la Titrette de BRAND

Qu se entiende por 'valoracin'?

La valoracin es un mtodo de anlisis volumtrico para la determinacin cuantitativa de una sustan-cia disuelta.

Lectura del volumen

El volumen valorado se lee di-rectamente en el display de lasburetas acoplables a frascos:se evitan errores de lectura delmenisco, no hay que tener encuenta tiempos de espera.

Las buretas acoplables a fras-cos se acoplan directamente alfrasco de reserva. Al despla-zarse el mbolo hacia arriba, seva aspirando el lquido desdeel frasco de reactivo hacia elcilindro del aparato.


de las buretas acoplables a frascos

Seguidamente, al desplazar-se el mbolo hacia abajo, seaade lentamente el lquido atravs de la cnula de valora-cin a la solucin con el analitohasta que se completa la reac-cin (por ej. cambio en el colorde la solucin).

Girando la rueda, el mbolose mueve y provoca la aspira-cin o la expulsin del lquido.El sistema electrnico del apa-rato reconoce automticamen-te el sentido de giro, o sea, si laaccin a realizar es llenar o va-lorar.El lquido puede aspirarse rpi-damente, no obstante, puededosificarse gota a gota de for-

ma muy lenta y exacta. Durantela aireacin, una vlvula de pur-ga permite que el lquido retor-ne al frasco. De esta manera esposible eliminar las burbujas deaire prcticamente sn prdidasdel medio. Para su limpieza, elaparato puede desmontarse f-cilmente en el laboratorio.

Campos de aplicacin

Aplicable en muchos campos

para soluciones acuosas ysoluciones no acuosas (por ej.KOH alcohlica) hasta 1 M.

Materiales

La piezas que entran en con-tacto con lquidos se fabricande materiales especialmenteresistentes, como p. ej. vidrioborosilicato, PTFE, platino-iridio o cermica Al2O3.

Cmo funciona esto?

En un matraz Erlenmeyer se coloca mediante una pipeta aforada una cantidad definida de unamuestra (lquido con una sustancia disuelta de concentracin desconocida, p. ej. cido actico).Despus de diluir con agua, se aaden aprox. 3 gotas de una solucin indicadora. A continuacin,empleando una bureta y con agitacin continua, se adiciona un medio de valoracin adecuado deconcentracin conocida (p. ej. NaOH 0,1 M), hasta que el cambio de color del indicador seale elpunto final de la valoracin.Mediante el consumo del medio de valoracin y conociendo la ecuacin de la reaccin qumica, esposible calcular la cantidad de sustancia disuelta en la muestra.


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Aparatos Liquid Handling Pipeteado

Pipetear con p ipetas con co j n de a i re

vstago de pipeta

punta desechable

cojn de aire

reactivo

Al desplazar hacia arriba yabajo el mbolo en el vstagode la pipeta, se produce unvaco parcial o bien una sobre-presin en el vstago. De esta

manera se aspira el lquido ha-cia la punta, o bien se expulsa.El lquido queda separado delmbolo mediante un cojn deaire.


por ej. la Transferpette Sde BRAND

Pipetas monocanal mecnicas

Tanto en el laboratorio de rutina como en la investigacin, la precisin y la funcionalidad deben serlas caractersticas estndar de las pipetas de mbolo con cojn de aire.

Aspirar el reactivo

1. Presionar el pulsador de pi-peteado hasta el primer tope,sumergir la punta1-2 milmetros en el lquido.

2. Soltar lentamente el pulsadorde pipeteado, para aspirar ellquido.

Expulsar la punta

Presionar hacia abajo elexpulsor.

Qu se entiende por 'pipeteado'?El pipeteado es la nica operacin exacta de aspiracin y expulsin de lquidos.Las pipetas con cojn de aire se emplean para pipetear lquidos acuosos en el rango de microlitros amililitros. Funciona segn el principio de cojn de aire (air interface).

Ventaja

Ninguna humectacin delaparato, ya que el lquido sloentra en la punta siendo stadesechable. Esto garantiza un

trabajo libre de residuos un

factor especialmente impor-tante en campos en los cualesdebe realizarse el trabajo deforma estril o libre de conta-

minacin.

Calibracin

En el marco del control delos medios de anlisis segnISO y las directivas BPL seexige una calibracin (o seacomprobacin) de la exactitudde los aparatos volumtricos aintervalos peridicos y, en casonecesario, su ajuste (vasepgina 33).

Expulsar el reactivo

1. Apoyar la punta en la pareddel recipiente y presionarlentamente el pulsador depipeteado con velocidad uni-forme hasta el primer tope ymantenerlo as.

2. Despus presionar hasta elsegundo tope para vaciar

completamente la punta ydurante este tiempo escurrirla punta de la pipeta contra lapared del recipiente deslizn-dola una distancia de aprox.10 mm.

Manejo


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Pipetas multicanales mecnicas

por ej. las TransferpetteS -8/-12 de BRAND

Expulsar las puntas

Presionar hacia abajo elexpulsor.

Campos de aplicacin

n diagnstico clnico

n analtica de alimentos

n Iinmunologa

n bioqumica

n cultivo de clulas

Tcnicas de anlisis

n tcnica de inmunofluorescencia (IF)

n mtodo de prueba deradioinmunidad (RIA)

n mtodo inmunoenzimtico(EIA, ELISA)

n dilucin de cultivos de clulas

Las pipetas multicanales funcionan tambin segn el principio de cojn de aire.Con ellas se pueden realizar 8 bien 12 pipeteados simultneos.

En el mtodo de microtitulacin se pipetea en placas microtiter de 8 x 12 pocillos (placa microtiterde 96 pocillos), cuyas distancias estn normadas. Esta tcnica posibilita, por ejemplo, la deter-minacin de pequesimas cantidades de protenas (de la gama micro) y slo se puede aplicar de

forma racional con pipetas multicanales. Las pipetas multicanales son especialmente adecuadaspara la transferencia racional de muestras y para diluciones en serie y son ideales para el lavadode placas microtiter.

Manejo

Aspirar el reactivo

1. Presionar el pulsador depipeteado hasta el primertope, sumergir las puntas1-2 milmetros en el lquido.

2. Soltar lentamente el pul-sador de pipeteado, paraaspirar el lquido.


1. Apoyar las puntas en lapared del recipiente ypresionar lentamente elpulsador de pipeteado convelocidad uniforme hasta elprimer tope y mantenerloas.

2. Despus presionar hasta elsegundo tope para vaciarcompletamente las puntasy durante este tiempo

escurrir las puntas de lapipeta contra la pared delrecipiente deslizndola unadistancia de aprox. 10 mm.


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Teclas deprogramacin

Tecla de expuls inde puntas

Tecla de pipeteado

El estndar de las pipetas electrnicas mono y multicanal debe in-cluir un diseo que se adapte a la mano, una distribucin adecua-da del peso, un software intuitivo y sobre todo una documentacintcnica clara y comprensible.

Pipetas electrnicas mono y multicanal

por ej. la Transferpette electronic mono

y multicanal de BRAND

El trabajo intenso y repetitivo con aparatos mecnicos que no sean lo suficientemente ergonmicospuede provocar, debido a los esfuerzos continuos necesarios, una serie de problemas musculares, cono-cidos como RSI (Repetitive Strain Injury). Las reas musculares particularmente expuestas son la nuca,los hombros, los brazos y el dedo pulgar. Por esta razn, al trabajar en el laboratorio frecuentemente seproducen, entre otras molestias, la tendovaginitis y el sndrome del tnel carpiano. En especial para eltrabajo con micropipetas, el requisito de un manejo sin esfuerzo est entonces en primer plano.

Ergonoma y esfuerzos

Principio de funcionamiento

Al accionarse la tecla depipeteado se pone en marchael mecanismo de aspiracin ode vertido (incluso de sobreem-bolada). El mbolo de la pipetase mueve mediante un motor,

y el volumen de aspiracin ode vertido se controla medianteun microprocesador. Medianteteclas de mando es posibleintroducir diversos programasde pipeteado.

Manejo


Pulsar nuevamente la tecla de pi-

peteado: el lquido se verter. Lasobreembolada continuar au-tomticamente. Al final escurrirlas puntas de la pipeta contra lapared del recipiente deslizndolauna distancia de aprox. 10 mm.

Expulsar las puntas

Presionar la tecla de expulsion

de puntas.

Aspirar el reactivo

Sumergir las puntas en el

reactivo y pulsar una vez latecla de pipeteado el volumenajustado se aspirar.

Ventajas de las pipetas electrnicas

La combinacin entre elpipeteado asistido por motor yun diseo ergonmico permiterealizar un trabajo distendido yfcil, evitando el esfuerzo conti-nuo del pulgar durante la reali-zacin de series largas (peligro

del sndrome RSI). Otra ventaja

adicional es la ejecucin deprogramas de pipeteado, comop. ej. el modo de electroforesisen gel (con indicacin precisadel volumen vertido), y el modode dispensador, los cualesno son posibles con pipetas

mecnicas.



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Manejo (similar al de pipetas con cojn de aire)

Medios de alta viscosidad,como por ej. soluciones pro-tenicas muy concentradas,aceites, resinas y grasas.

Campos de aplicacin

Por ej. el Transferpettor de BRAND

capilar de vidrio

mbolo dedesplazamiento

directo

reactivo

All donde las pipetas con cojn de aire llegan a sus lmites fsicos, se manifiestan las ventajas de laspipetas de desplazamiento directo. Son especialmente adecuadas para lquidos de alta y baja visco-sidad, lquidos espumosos o lquidos de alta presin de vapor.

Al contrario que en las pipetascon cojn de aire, el mbolo dela pipeta de desplazamientodirecto tiene contacto directocon el lquido a pipetear. Elmbolo deja siempre limpias lasparedes de los capilares/pun-tas: hasta la ltima gota saleclaramente visible del orificio.Gracias a este principio se ob-tienen resultados exactamentereproducibles independiente-

mente de las caractersticas dellquido.


Los capilares o bien las pun-tas no tienen que echarse trascada paso de pipeteado, yaque la humectacin residual esmnima y puede despreciarsenormalmente. Sin embargo:donde no se permita ningnarrastre, como con mediosinfecciosos o radioactivos, serecomienda utilizar una pipetacon cojn de aire, para un tra-bajo con puntas desechables.

Medios que tiendan a producirespuma, como por ej. solucio-nes de tensioactivos.

Medios de alta presin devapor, como por ej. alcoholes,teres e hidrocarburos.

Ventaja

Mxima precisin y trabajorpido. Las puntas o bien ca-pilares pueden utilizarse variasveces.

Aspiracin

Oprimir el mbolo hasta eltope, sumergir la punta enel lquido y absorber dejandoque el pulsador de pipeteadoretroceda lentamente.

Expulsin

Colocar el capilar/la puntatocando la pared del recipientey oprimir por 2 vez el pulsadorde pipeteado hasta el tope. Laspipetas de desplazamiento di-recto no tienen sobreembolada.

Ajuste del volumen

Ajustar el volumen deseadogirando el pulsador.

Pipetear con p ipetas de desplazamiento d i recto


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Dosi f icar con d ispensadores manua les

Dispensadores manuales mecnicos

por ej. el HandyStep

de BRAND

Pasos y gamas de volumen

Ejemplo de las diversas posibilidades de combinacin

con puntas PD diferentes de BRAND

Uno de los trabajos ms importantes y ms frecuentes en los laboratorios clnicos, farmacuticos ybiolgicos es la distribucin de lquidos. Tcnicas de trabajo usuales y muy empleadas son la dosifi-cacin y el pipeteado. Dosificacin es la expulsin repetitiva de cantidades idnticas de lquido.Tiene una gran ventaja sobre el pipeteado: se puede lograr un ahorro significativo de tiempo, ya queno es necesario realizar la aspiracin repetidas veces. Como la tcnica de dosificacin es muy utiliza-da, juegan un papel importante la ergonoma y, con ella, el diseo de los aparatos.Trabajos de dosificacin se efectan en el laboratorio raras veces con sistemas completamenteautomticos con los cuales no son necesarios manejos manuales. Normalmente se utilizan para estostrabajos de rutina dispensadores manuales.

Se distinguen dos tipos de dispensadores manuales

n Dispensadores manuales completamente mecnicos

n Dispensadores manuales electrnicos a motor

El dispensador manual simplifica el pipeteado en serie mediantela expulsin en etapas de un lquido antes aspirado. Dependiendodel tamao de las puntas del dosificador correspondiente, conun solo llenado pueden realizarse hasta 49 etapas de pipeteado,variables entre 2 l y 5 ml. Estos datos resultan de la combinacinde la posicin ajustada del mando deslizante (1-5) con el tipo depunta utilizado.Las puntas de dosificacin de BRAND estn disponibles en10 capacidades diferentes, sin esterilizar o esterilizadas. Se pue-den utilizar tambin puntas compatibles de otros fabricantes


En los dispensadores manua-les mecnicos el volumen se

ajusta mediante una cremalleraque se mueve gradualmente,en combinacin con puntasde dosificacin. Por tanto,estos aparatos slo permitenun nmero determinado depasos de dosificacin clara-mente definidos. No es posible

ajustar volmenes intermedios.La ventaja principal de estos

aparatos est en su robustez,su desventaja es que su usoresulta a menudo fatigante.El principio de funcionamientodel dispensador manual es elprobado sistema de desplaza-miento directo.

Medios crticos, como por ej.soluciones de alta presin de

vapor, de alta viscosidad omedios espumosos no repre-sentan ningn problema para eldispensador manual. Segn losrangos de volumen necesarios,el dispensador manual puedeutilizarse con puntas PD dediferentes tamaos.

Posicin mbolo 1 2 3 4 5

Nmero pasos 49 24 15 11 9

Punta PD ml Volumen de dosificacin l

0,1 2 4 6 8 10

0,5 10 20 30 40 50

1 20 40 60 80 100

1,25 25 50 75 100 125

2,5 50 100 150 200 250

5,0 100 200 300 400 500

10 200 400 600 800 1000

12,5 250 500 750 1000 1250

25,0 500 1000 1500 2000 2500

50,0 1000 2000 3000 4000 5000


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Dispensadores manuales electrnicos accionados por motor

por ej. el HandyStep electronic de BRAND

Dosificacin automtica

El aparato calcula el valor me-

dio de los intervalos entre trespasos de dosificacin y siguetrabajando automticamente eneste ritmo.

Pipeteado

Se trabaja de igual manera

como con una pipeta de des-plazamiento directo.Un volumen antes definidose aspira y se expulsa.

Modos de trabajo seleccionables:

Los trabajos repetitivos de forma intensiva con aparatos manuales pueden ocasionar un sin nmerode distintas molestias musculares. Se pone en riesgo especialmente la musculatura a nivel de la nuca,los hombros, los brazos y pulgares. Especialmente para dispensadores manuales es muy importantela exigencia de un manejo economizando esfuerzo, ya que estos aparatos se emplean casi exclusiva-mente para dosificaciones en serie. Sobre todo al realizar largas series en la misma posicin, juegan unpapel decisivo la ergonoma y el diseo de los aparatos.

Las puntas PD de BRAND es-tn provistas de un cdigo decapacidad incoporado en sumbolo. Una vez colocada lapunta, la capacidad identificadade la misma aparece autom-ticamente en la pantalla. Esto

Ergonoma y diseo

Contrariamente a los dispensadores manuales mecnicos, con loscuales por razones constructivas slo pueden dosificarse volme-nes parciales de nmeros enteros, con los dispensadores manua-les electrnicos es posible dosificar tambin volmenes parciales,como por ej. 1,01 ml.

evita errores y permite que elvolumen a dosificar y el progra-ma de trabajo deseado puedanseleccionarse sencillamente. Elajuste del aparato se conservaal colocar una nueva punta dela misma capacidad.

Dosificacin

Modo estndar

Una vez aspirado el lquido,

ste se dosifica repetidasveces en volmenes parcialesajustados por el usuario.


Al accionar una tecla, se poneen marcha el mecanismo deaspiracin o bien expulsin.El mbolo de las puntas sedesplazamiento con ayuda deun motor, la expulsin del volu-men y el nmero de pasos son

controlados por un micro-pro-

cesador. Esta combinacin deergonoma y diseo permite untrabajo relajado. El mbolo dejasiempre limpias las paredesinteriores de las puntas, porlo que se obtienen resultadosexactamente reproducibles

independientemente de las

influencias de un cojn de aire.Las puntas de desplazamientodirecto permiten la dosificacinde lquidos de alta densidad,lquidos muy voltiles o de altapresin de vapor y lquidos quetiendan a producir espuma.


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Exactitud

Exact i tudQu significan en la medicin de volumen lmite de error,

exactitud, coeficiente de variacin y precisin?

Mala exactitud:Los resultados estn lejosdel centro.

Mala reproducibilidad:

Los resultados estn muydispersos.

Resultado:

Estos aparatos volumtricosson de mala calidad.

Buena exactitud:Los resultados estn en trmi-no medio repartidos regular-mente alrededor del centro.

Mala reproducibilidad:

No hay grandes errores, perolos resultados estn muydispersos.

Resultado:

Todas las desviaciones tienenla 'misma' probabilidad. Losaparatos cuyos valores so-brepasan los lmites de errordeben separarse.

Mala exactitud:A pesar de que todos los resul-tados estn muy juntos entres, la meta (valor nominal) nose ha alcanzado.

Buena reproducibilidad:

Todos los resultados estn muyjuntos entre s.

Resultado:

Produccin mal orientada,con desviacin sistemtica.Los aparatos cuyos valoressobrepasan los lmites de errordeben separarse.

Buena exactitud:Todos los resultados estn muyprximos al centro, o sea muycerca del valor nominal.

Buena reproducibilidad:

Todos los resultados estn muyjuntos entre s.

Resultado:

La fabricacin est perfecta-mente orientada mediante uncontrol de calidad a lo largodel proceso de fabricacin.Mnima desviacin sistemti-ca y estrecha dispersin. Ellmite de error permitido no sealcanza. No es necesaria unaclasificacin.

Representacin grfica de precisin y exactitud

La diana representa el rango de volumen alrededor del valor nominal que est en el centro.Los puntos negros son los valores obtenidos de diferentes medidas de un volumen definido.

Estn permitidos diferentes trminos para la descripcin de la exactitud: para material volumtricoen vidrio se utiliza el trmino 'reproducibilidad', mientras que se han establecido para aparatosLiquid Handling los trminos estadsticos 'exactitud [%]' y 'coeficiente de variacin [%]'.

Como buena aproximacin,es posible calcular el lmite de

error (LE) del aparato, por ej.para el volumen nominal (VN), apartir de los valores de exacti-tud y coeficiente de variacin.

n Coeficiente de variacinn Exactitudn Limite de error

El lmite de error (LE) fijado en

las normas correspondientesindica la desviacin mximaadmisible del aparato con res-pecto al valor nominal.

La exactitud (E) indica hasta

qu punto los valores medidosse acercan al valor nominal,quiere decir la desviacinsistemtica.

Exactitud es la diferencia entrevalor medio (V

_) y valor nomi-

nal (Vnominal), referida al valornominal en %.

LE E% + 2CV%

100 % V

N

El coeficiente de variacin (CV)

indica, hasta qu punto losvalores medidos individuales seacercan el uno con respecto alotro, quiere decir la desviacinaleatoria.

El coeficiente de variacin estdefinido como desviacinestndar en %, referida al valormedio.

n Lmite de error

de E y CV

LE Vreal

- Vnominal

n Reproducibilidad

Si se indica la dispersin de losresultados de medicin indivi-

duales alrededor del valormedio V

_en unidades de volu-

men, se utiliza el trmino repro-ducibilidad.

nVolumen parcial

E y CV estn por lo generalreferidos al volumen nominal(VN ). Estos valores indicadosen % deben convertirse para elcontrol de volmenes parciales(VP ).

En cambio, no se realizar laconversin para los volmenesparciales si E y CV se indicanen unidades de volumen (porej. ml).

(de forma analga para CVP %)

E [%] =V - Vnominal

Vnominal 100

s 100

VCV [%]=

VN

VP

EP[%] = E

N%


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Control de medios de anlisis

En cada laboratorio analtico debe ser evidente la exactitud de los medios de anlisis utilizados paraalcanzar resultados de anlisis fiables. Esta exigencia es vlida sobre todo para los laboratorios quetrabajen segn las directivas BPL, que estn acreditados segn DIN EN ISO/IEC 17 025, o certifi-cados segn DIN EN ISO 9001. Estas directivas exigen la existencia de instrucciones escritas quedescriben el procedimiento detallado del control del los medios de anlisis.Para todos los medios de anlisis tambin se deben indicar los lmites de error, o bien la exactitud yel coeficiente de variacin y se debe determinar el procedimiento en caso de que se sobrepasen losvalores lmite.

Medios de anlisis son todos los sistemas de medida utilizados para la comprobacin de caractersti-cas aseguradas de productos.

Cundo y con qu fre-

cuencia se debe efectuar el

control?

En el marco del control de losmedios de anlisis se exigenel conocimiento y la docu-mentacin de la exactitud eincertidumbre de medicin detodos los sistemas de medidaantes de autorizar su empleo.Adems se deben someter acontroles peridicos en interva-los definidos (vase DINISO 10 012)

El motivo:Pueden producirse variacionesen la exactitud de medicinde material volumtrico porej. debido a la utilizacin deproductos qumicos agresivosy segn los procedimientos yla frecuencia de la limpieza.Como la exactitud de medicinexigida depende de maneraconsiderable de las condicionesde aplicacin, el usuario mismodebe determinar los intervalosde control. Los intervalos de

control tpicos para apara-tos Liquid Handling y para elmaterial volumtrico de plsticoson de 3 - 12 meses, y para elmaterial volumtrico de vidrio,de 1 - 3 aos.

Cul es el procedimiento de

comprobacin segn el cual

se efecta el control?

El control del material volum-trico se efecta gravimtrica-mente, en el caso de los apara-tos Liquid Handling segn ISO8655, y en el caso del materialvolumtrico en vidrio segnISO 4787.Durante la ejecucin deben ob-servarse varios factores de in-fluencia.Por este motivo, BRAND ponea disposicin instrucciones de

calibrado para todos los apara-tos volumtricos, que describenexplcitamente el procedimien-to de control. Adems BRANDofrece un software que reali-za todos los clculos necesa-rios, los almacena en una basede datos e imprime los resulta-dos en un informe de verifica-cin segn sea deseado.

Gastos del control?

El control de los medios deanlisis no debe convertirse enla tarea principal en el labo-ratorio analtico, sino debe delimitarse a un gasto razonable.Esto significa: manejo sencilloy, con ello, realizacin rpida yeconmica.Las instrucciones de calibra-do y el software EASYCALespecialmente desarrolladopara este fin, en combinacin

con aparatos volumtricos concertificado individual o de lote,son adecuados para lograr unadisminucin considerable en losgastos del control.

Es necesario comprobar

tambin aparatos volumtri-

cos certificados de confor-

midad?

Al igual que todos los mediosde anlisis, tambin los apa-ratos volumtricos certificadosde conformidad segn la nor-ma DIN 12 600 estn someti-dos al control de los medios deanlisis.La norma no determina inequ-vocamente si es obligatorio ono efectuar el ensayo prelimi-nar en estos aparatos. Es res-ponsabilidad del usuario decidir

cmo proceder.Sin embargo, por seguridad,es recomendable realizar el en-sayo preliminar en una mustraaleatoria representativa. stedocumenta, al mismo tiempo,para controles futuros el estadoinicial. Una alternativa son, enel mejor de los casos, aparatosvolumtricos con certificado delfabricante.

Calibracin

Se entiende por 'calibracin' ladeterminacin del volumen real.

Para que la calibracin pue-da realizarse de forma rpiday sencilla y evitarse fuentesde errores, BRAND pone adisposicin sin coste adicionalinstrucciones de calibrado de-talladas para todos los aparatosvolumtricos.

Se entiende por 'ajuste' lacorreccin de la desviacin delvalor medido respecto al valorverdadero.

Ajuste

Por regla general y dependien-do del fabricante, en los apara-tos Liquid Handling el ajuste serealiza haciendo girar un tornillode ajuste. Despus del ajustedebe realizarse una nuevacalibracin de control. Este

procedimiento debe repetirselas veces necesarias hasta queel volumen se encuentre dentrode los lmites de error.

El contro l de los medios de an l is is

Trminos tcnicos

Qu se ent iende por 'medios de an l is is '?


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Procedimiento del cont ro l de vo lumen

1. Averiguar el tipo de aparato y el volumen nominal.2. Leer el nmero de serie.3. En caso de suciedades, desmontar eventualmente el aparato

y limpiarlo (vase instrucciones de manejo).4. Efectuar un control de daos (carcasa, punta del vstago

de la pipeta, expulsor, mbolo, junta) y, en caso de daos,proporcionarse los recambios correspondientes.

5. Depositar la Transferpette con sus accesorios por lo menos2 horas en la sala de ensayos sin embalaje para atemperar.

1. Colocar una nueva punta de pipeta.2. Enjuagar previamente la punta de pipeta una vez con el lqui-

do de ensayo (agua destilada/desionizada).3. Mantener el aparato con la punta de pipeta llena en posicin

vertical y observar aprox. 10 s para comprobar si se formauna gota en la punta de la punta de pipeta. Al hacerlo, vigilarde que la punta no se caliente, por ej. por el efecto del sol osimilares. Despus expulsar el lquido de ensayo.En volmenes pequeos inferiores a aprox. 50 l no seforma una gota ni siquiera en caso de falta de hermeticidad(tensin superficial).

Un consejo: Dejar salir una gota pequea de la punta llena,

de modo que abajo se forme un pequeo cojn de aire (bur-buja de aire). Si la burbuja de aire desciende, existe falta deestanqueidad.

1. Determinar la temperatura del agua de ensayo.2. Colocar una nueva punta de pipeta.3. Acondicionar la pipeta: aspirar el lquido de ensayo cinco

veces y expulsarlo. Este procedimiento aumenta la exactituddel control.

4. Enjuagar previamente la nueva punta de pipeta una vez.5. Colocar el recipiente de pesar sobre la balanza y tararla.6. Retirar el recipiente de pesar de la balanza.7. Expulsar la muestra en el recipiente de pesar. Al hacerlo,

vaciar completamente la punta de pipeta mediante sobre-embolada.

8. Colocar el recipiente de pesar sobre la balanza; apuntar el

valor obtenido de la pesada.9. Volver a tarar la balanza.

10. Repetir los puntos 2 - 9 diez veces y apuntar en el protocolode ensayo los valores obtenidos de las pesadas del 100 %,50 % y 10 % del volumen nominal.

Los valores de las pesadasobtenidos del control gravi-mtrico son slo la masa delvolumen pipeteado. Para ob-tener el volumen real se debeefectuar un clculo correctortomando en consideracin latemperatura (vase abajo).Las instrucciones detalladasde calibracin para todoslos aparatos volumtricos deBRAND pueden descargarsedel sitio web www.brand.de.

Por ej. la micropipeta Transferpette Tipo Digital, 20 - 200l

Recomendamos una calibracin de la Transferpette cada 3-12 meses, como descrito a continuacin.En funcin de la frecuencia de uso y de los medios utilizados, el usuario tambin puede establecerotros intervalos de control.

V

=200,2 +199,6 +199,49 + ... + 199,19

10

1,0032

V

= 199,513 1,0032

V

= 200,1514

V

= x Z

V

=x

1+ x

2+ x

3+... + x

10

n Z

E [%] = 0,076

E [%] =V

- Vnominal

Vnominal

100

E [%] =200,1514 - 200

200 100

Temperatura

C

Factor Z

ml/g

18 1,00245

18,5 1,00255

19 1,00264

19,5 1,00274

20 1,00284

20,5 1,00294

21 1,00305

21,5 1,00316

22 1,00327

22,5 1,00338

23 1,00350

23,5 1,00362

24 1,00374

24,5 1,00386

25 1,00399

25,5 1,00412

26 1,00425

Extracto de la tabla 'Factor Z para

aparatos de Liquid Handling'

Valores del control gravimtrico

a 21,5 C (Z = 1,0032)

Vol. controlado: (l) 200,0000

Valor verdadero: (mg) 199,3620

x1

200,2000

x2

199,6000

x3

199,4900

x4 199,7000x

5199,7000

x6

199,2900

x7

199,3500

x8

199,4100

x9

199,2000

x10

199,1900

El clculo se realiza mediante multiplicacin del promedio de losvalores de las pesadas (x

_) por el factor Z (l/mg), que lleva en

consideracin la densidad del agua, la temperatura de control

y la presin atmosfrica. Z es igual a 1,0032 l/mg, referido a21,5 C, 1013 mbar (hPa).

Preparacin: Control gravimtrico:

Comprobacin de funcin:

A

B

C

1. Clculo del volumen medio: 2.Clculo de la exactitud:


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Nota:

En caso de un control devolmenes parciales, debenconvertirse los valoresindicados para E

N[%] y CV

N

[%] referidos al volumennominal VN.

Para un volumen parcial de20 l se aplica:

El clculo de CV20 l seefecta de forma anloga.


1. Comprobar que todos lospuntos del SOP se hanseguido correctamente.

2. Tener en cuenta las notas'Qu hacer en caso de

avera?' de las instruccionesde manejo.

3. Ajustar el aparato segn lasindicaciones de las instruc-ciones de manejo.

Para el ejemplo calculado se obtiene el resultado siguiente:

Qu hacer en caso de que los valores de un aparato

controlado se siten fuera de los lmites de error?

Evaluacin del controlgravimtrico:

El aparato est en orden!

Si los valores calculados deexactitud (E [%]) y el coefi-ciente de variacin (CV [%])son menores que los lmites deerror o iguales a stos, enton-ces el aparato est en orden.

s = Z (x

1- x )2 + (x

2- x )2 +(x

3- x )2 +... +(x

10- x )2

n - 1

s = 1,0032 (200,2 - 199,51)2 + (199,6 - 199,51)2 +(199,49 - 199,51)2 +... +(199,19 - 199,51)2

9

s = 1,0032 0,8393

9

s = 0,306

CV [%] =s 100

V

CV [%] =0,306 100

200,1514

CV [%] = 0,153

E20 l[%] =VN

V20 l R N [%]

E20 l[%] =200 l

20 l 0,5%

Vol. controlado: (l) 200,0000

Vol. medio: (l) 200,1514

E [%] 0,076

CV [%] 0,153

E [%] nominal* 0,600

CV [%] nominal* 0,200

* lmites de error de lasinstrucciones de manejo

Si estas medidas no ofrecen elresultado deseado, por favorcontacte al fabricante parapoder aclarar el procedimientoa seguir.

3. Para poder calcular el coeficiente de variacin, calcular primero la desviacin estndar

4. Se obtiene luego el coeficiente de variacin a partir del siguiente clculo:

E20 l

[%] = 5%


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El software de calibracinEASYCAL facilita el controlde los medios de anlisis segnlas directivas BPL as comolas normas EN ISO 9001 paraaparatos Liquid Handling yaparatos volumtricos en vidrioy en plstico. El software defcil manejo se puede manipu-lar de forma intuitiva. Una vezdeterminado el tipo de aparatoa controlar aparato LiquidHandling o aparato volumtricoen vidrio o plstico se intro-ducen en la pantalla 'Anotacinde los valores medidos' paso apaso los datos necesarios.

Para la introduccin de los va-lores obtenidos de las pesadasse puede elegir entre dos op-ciones: introduccin manual delos valores obtenidos de las pe-

El control de los medios de anlisis segn BPL e DIN EN ISO 9001 a veces no es tan sencillo. Adems deque uno se puede equivocar fcilmente con las complejas frmulas, tambin la documentacin de los resul-tados puede presentar a veces dificultades. Para facilitarle a usted este trabajo a menudo laborioso y difcil,algunos fabricantes de aparatos de laboratorio han desarrollado un software de calibracin especial.

por ej. EASYCAL, el software de calibracin de BRAND

sadas e importacin automticade los datos. A continuacinse realiza la evaluacin auto-mtica. Una vez introducidoslos valores lmite, EASYCALrealiza todos los clculos auto-mticamente. Mediante un clicen un botn se puede imprimirun informe claro.Todos los resultados se alma-cenan en una base de datos.El historial de los controlesadministra y pone a disposicinlos datos almacenados de apa-ratos ya controlados facilitandoas el control de los medios deanlisis. Los intervalos de con-

trol determinados en funcin delas instrucciones de calibrado(SOPs) pueden definirse indivi-dualmente.

Control de los medios de anlisis facilitado

EASYCAL realiza los cl-culos para usted y emite ladocumentacin necesariaautomticamente. Para ello,Ud. necesita slo una balanzaanaltica, un ordenador, una im-presora (opcional) y el softwareEASYCAL.

n Control del aparato sinimportar el fabricante.

n Datos bsicos de muchosaparatos ya depositados.

n Control segn las normasISO 4787, ISO 8655 yotras.

Informe de verificacin impreso

Una versin de demostra-cin del software est asu disposicin en Internet(www.brand.de) a ser descar-gada (download) o puede sersolicitada gratuitamente enCD-ROM.

Serv ic io de ca l ibradode aparatos de L iqu id Handl ing

BRAND ofrece un servicio completo, incluyendo la calibracin y,

en caso necesario, tambin la reparacin y el ajuste de medios demedicin, a las personas para las cuales la calibracin significauna inversin de tiempo demasiado grande.

Sof tware de ca l ibrac in


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Certificado de conformidad y certificados

Cert i f icado de conformidad y cer t i f icados

Certificado de calibrado oficial

Este certificado de calibrado se expide por la oficina de contrastealemana y se reconoce en Alemania y muchos otros pases. Elaparato de medicin y el certificado de calibrado estn provistosde un nmero de serie individual y del ao de expedicin paraidentificacin.

Cer t i f i cado de conformidad Cer t i f i cados de ca l ib rado

Se diferencia entre:

certificados de conformidad

certificados de calidad (certificados de control del fabricante)

certificados de calibrado (oficina de contraste alemana, DKD)

Certificado de lote

Todos los aparatos de medi-cin y certificados de un lotede fabricacin estn provistosdel mismo nmero de lote. Elcertificado indica, para este

lote, el valor medio, la des-viacin estndar y la fecha deexpedicin.

Certificado individual

El aparato de medicin y elcertificado estn provistosadems del nmero de lote deun nmero de serie individual.El certificado indica el volumen

medido, la incertidumbre demedicin y la fecha de expe-dicin.

Cer t i f i cados de ca l idad

El control y la garanta de calidad realizados de acuerdo con lanorma DIN EN ISO 9001 constituyen la base para la expedicinde certificados de calibrado del fabricante como por ejemplo loscertificados de calidad. Estos certificados de control del fabricanteestn disponibles como certificado de lote o certificado individual.

Todos los resultados de control se documentan y se archivandurante 7 aos como mnimo. De esta manera, si se conoce elnmero de lote o bien el nmero de serie, se tiene acceso, encada momento, a los resultados individuales obtenidos a partir demedidas efectuadas en la fabricacin.

Norma de contraste y certificado de conformidad

La norma de contraste alemana del 12 de agosto de 1988 exigecertificado de conformidad en vez de calibrado para el materialvolumtrico previsto y ya utilizado para mediciones en el sectorregulado por la ley, como tambin en el mbito de la medicina yde la farmacia (fabricacin y control de medicamentos). Esto seaplica tambin en el caso de accesorios relevantes de la tcnicade medicin (por ej. puntas de pipeta para pipetas de mboloaspirante).

Nota:

Entre otros artculos, las pipetas de mezclado de sangre, las

cmaras de conteo de clulas de sangre, los termmetros y lospicnmetros no reciben certificados de conformidad, sino que soncalibrados oficialmente.

Quin certifica la conformidad?

Conformidad quiere decir: concordancia de un aparato con la nor-ma de homologacin para el sector regulado por la ley segn lanorma de contraste alemana (apartado 12). El proceso detalladode la certificacin de conformidad est descrito en la normaDIN 12 600.Mediante el smbolo H y el smbolo del fabricante en nuestrocaso B para BRAND el fabricante (y a peticin tambin laautoridad de calibracin con su propio smbolo de conformidad)

certifica que el aparato correspondiente cumple con las exigen-cias de la norma alemana de contraste y las de las restantesnormas pertinentes. Normalmente el distintivo de conformidadest impreso directamente sobre los aparatos y, en el caso de losproductos desechables complementarios, sobre el embalaje. (Eneste caso los productos no vienen acompaados de un certificadode conformidad por escrito.

Smbolo deconformidad de BRAND

Certificado de calibrado DKD* (servicio alemn de calibrado)

El servicio alemn de calibrado (Deutscher Kalibrierdienst, DKD)*fue fundado en el ao 1977 como institucin comn del estado yde la economa. Representa el eslabn de unin entre los mediosde medicin de los laboratorios de la industria, la investigacin,los institutos de control y los organismos oficiales, con los patro-nes nacionales del Physikalisch-Technische Bundesanstal

Brochuere_Volumenmessung_ES_1110

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