Biotecnología aplicada al desarrollo de ensayos rápidos y fiables para detectar

alérgenos en alimentos

Cristina Romero Gonzalo

Investigación de productos biotecnológicos orientados hacia

la salud humana, animal y de plantas

Desarrollo, producción y comercialización de ensayos

para sanidad animal y seguridad alimentaria

ACTIVIDADES

Los productos comerciales están basados en nuestros proyectos de I+D

Participación de todos los Departamentos de la empresa: Investigación, Desarrollo, Producción, Ventas, QC…

EMPRESA

LÍNEAS COMERCIALES

SANIDAD ANIMAL

SEGURIDAD ALIMENTARIA

GRAN ANIMAL PEQUEÑO ANIMAL

ENSAYOS PROPIOS

KITS DE DISTRIBUCIÓN

ALÉRGENOS

ALÉRGENOS

GLUTEN CASEÍNA BLG OVOALBÚMINA

FORMATOS

ELISAS INMUNOCROMATOGRAFÍAS

INMUNOENSAYOS

Especificidad

Sensibilidad

Multi-matriz

Ensayos basados en reacciones antígeno-anticuerpo

ELISA (Sándwich)PLACAS TAPIZADAS CON

EL AcM

AÑADIR CONTROLES Y MUESTRAS

INCUBAR

LAVAR LA PLACA

AÑADIR EL CONJUGADO

LAVAR LA PLACA

AÑADIR SUBS Y SOLUCIÓN DE FRENADO

POSITIVONEGATIVO

INCUBAR

GLUTEN

ORIGEN• Colaboración con el Centro Nacional de

Biotecnología

PRODUCTOS• INGEZIM GLUTEN• INGEZIM GLUTEN QUICK• INGEZIM GLUTEN SEMIQ• INGEZIM GLUTEN HIDROLIZADO

INGEZIM GLUTEN (Cuantificación)

CURVA CON 5 PUNTOS (ng/mL)

1,56

25y = 15,154x2 - 6,4417x + 2,4497R2 = 0,9974

05

1015202530

0,0 0,5 1,0 1,5 2,0

Abs 450nm

ng/ml

LÍMITE DE DETECCIÓN

Gráfico4

1.4445

1.0795

0.729

0.4695

0.3185

Abs 450nm

ng/ml

25

12.5

6.25

3.12

1.56

Recta 0302

Curva patrón

Abs 450nmng/ml

1.5425

0.9112.5

0.436.25

0.313.12

0.271.56

Placa 0302

CONJ 0302PAN 1PAN 2PAN 5PAN 6PAN 7

Dilución2001001002525Dilución

Abs1.180.901.131.251.43Abs

ng/ml18.3413.3517.3619.5222.78ng/ml

ppm293.43106.81138.8639.0345.56ppm

Dilución4002002005050Dilución

Abs0.750.770.770.980.97Abs

ng/ml10.6510.9511.1214.7714.53ng/ml

ppm340.92175.27177.9659.0758.11ppm

Media317.18141.04158.41100100Dilución

Teoricos2901311600.660.71Abs

9.1610.04ng/ml

73.2780.35ppm

57.1261.34Media

5369Teoricos

Recta 0302

1.5395

0.9085

0.4335

0.3115

0.2735

Abs 450 nm

ng/ml

25

12.5

6.25

3.12

1.56

Poli 0302

PRELAVADO

LOTE 0302CURVA RING TEST

Puntos ng/mlNORMALNORMALNORMALPan 1Pan 5Pan 7

1002.4812.4312.1991.4131.3081.592

502.1881.9811.9061.3841.3721.569

251.7341.5621.5450.9940.9521.115

12.51.2391.1021.0760.960.9451.13

6.250.8230.7451.2031.6060.323

3.120.5230.4920.4721.211.6560.33

1.560.3720.3230.3120.8791.1710.246

Sur Select0.1370.1280.1310.881.2090.266

Pan 2Pan 6Pan 4817

Curva patrón

Abs 450nmng/ml

1.5525

1.0912.5

0.756.25

0.483.12

0.321.56

Placa 0302

CONJ 0302PAN 1PAN 2PAN 5PAN 6PAN 7PAN 4817

Dilución200100100252525Dilución

Abs1.401.211.341.631.580.33Abs

ng/ml20.3515.3118.7427.4625.821.72ng/ml

ppm325.66122.47149.9054.9251.653.44ppm

Dilución400200200505050Dilución

Abs0.980.880.951.191.120.26Abs

ng/ml10.268.439.7014.9113.341.31ng/ml

ppm328.17134.89155.2359.6453.345.23ppm

Media326.91128.68152.5757.2852.504.33Media

Teoricos2901311605369

INGEZIM GLUTEN QUICK

• Reducción en los tiempos de extracción y del ELISA

Validado vs INGEZIM GLUTENDILUTION Theoretical ppm Gluten Quick Gluten

Spike 0 ppm 50 0

INGEZIM GLUTEN SEMIQ

Detección SEMI cuantitativa Tiempos de incubación cortos Realización sencilla (sin curva estándar) Posibilidad de interpretación visual

LÍMITE DE DETECCIÓN

INGEZIM GLUTEN HIDROLIZADO

EL ELISA SANDWICH NO FUNCIONA CON GLUTEN HIDROLIZADO

ELISA SANDWICH R5

INGEZIM GLUTEN HIDROLIZADO

ELISA R5 DIRECTO

INGEZIM GLUTEN HIDROLIZADO (Matrices)

CERVEZAS SIROPESPAPILLAS

INFANTILES

ALÉRGENOS

LECHE• Ingezim Caseína• Ingezim Beta-lactoglobulina

HUEVO• Ingezim Ovoalbúmina

Ingezim BLG

ALÉRGENOS

ELISA tipo sándwich Estándares directamente en ppm Cuantificación con ajuste lineal Posibilidad de interpretación visual

Ingezim Caseína

Ingezim BLG

IngezimOvoalbúmina

Límites de Detección

ALÉRGENOS: Int. de resultados

β-Lac

Abs 450 ppm

1,196 0.8

0,789 0.4

0,549 0.2

0,406 0.1

0,233 CN

y = 0,8946x - 0,2825R2 = 0,9961

0

0,2

0,4

0,6

0,8

1

0,0 0,5 1,0 1,5Abs.

ppm

Muestra 1 Muestra 2 Muestra 3

Abs. 3,335 0,950 0,200

ppm 2,70 0,567

INMUNOCROMATOGRAFÍA Técnica in situ

Ensayo en una sola etapa. Adición directa de la muestra

T C

Soporte: nitrocelulosa

AcM anti-Alérgeno

Pt controlAcM anti-pt control

T CFLOW

T C

T C

Resultado CUALITATIVO:POS: 2 bandas coloreadasNEG: 1 banda coloreada

INMUNOCROMATOGRAFÍA Técnica in situ

Interpretación de Resultados

POSITIVO NEGATIVO NO VÁLIDO

ENSAYOS INGEZIM CROM DISPONIBLES

NOMBRE DEL KIT LÍMITE DE DETECCIÓN (ppm)

INGEZIM CROM CASEÍNA 2.5

INGEZIM CROM BLG 2.5

INGEZIM CROM OVOALBÚMINA 1.25

OBJETIVOS LÍNEA ALIMENTARIAExperiencia en el desarrollo de ensayos INMUNOLÓGICOS

Ampliación de la gama de productos propios

Menor dependencia productos

distribución

Mayor control de los productos

Mayor flexibilidad en los formatos

Mayor rapidez de respuesta en el soporte técnico

Posibilidad de comercialización en el extranjero

GRACIAS POR SU ATENCIÓN

Biotecnología aplicada al desarrollo de ensayos rápidos y fiables para detectar alérgenos en alimentosNúmero de diapositiva 2Número de diapositiva 3Número de diapositiva 4Número de diapositiva 5Número de diapositiva 6Número de diapositiva 7Número de diapositiva 8Número de diapositiva 9Número de diapositiva 10Número de diapositiva 11Número de diapositiva 12Número de diapositiva 13Número de diapositiva 14Número de diapositiva 15Número de diapositiva 16Número de diapositiva 17Número de diapositiva 18Número de diapositiva 19Número de diapositiva 20Número de diapositiva 21Número de diapositiva 22Número de diapositiva 23