Avance Informe Final Micro.!!!! Pasa Justificacion y ...Marco Teroico

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2011

Microbiología Aplicada

Universidad Nacional Mayor de San Ma

20/07/2011

ACTIVIDAD BACTERIANA DE

EXTRACTOS ORGÁNICOS SOBRE LA

FLORA MIXTA DE CARIES DENTAL

Y BOLSA PERIODONTAL



ACTIVIDAD BACTERIANA DE EXTRACTOS ORGÁNICOS SOBRE LA FLORA MIXTA DE CARIES DENTALY BOLSA PERIODONTAL 2011

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INTRODUCCIÓN

La caries dental y la enfermedad periodontal constituyen las

enfermedades de mayor prevalencia que afectan el sistemamasticatorio a nivel mundial; y repercuten en los diferentes grupos

etarios: desde niños hasta ancianos; y ambas tienen la

característica de ser destructivas.

Hoy sabemos que estas enfermedades son causadas por varios

factores; pero, principalmente son de origen microbiano. Esta

comunidad presente en la cavidad oral se organiza en lo que se

llama placa o biofilm dental, donde pueden proliferar y

desarrollarse debido a que encontraron las condiciones apropiadas

para tener actividad bioquímica y metabólica.

Entre los diferentes tipos de microorganismos presentes en la placa

dental, se considera al Streptococcus mutans como la especie más

frecuentemente aislada; y se le atribuye la responsabilidad del

inicio de las lesiones cariosas. Por consiguiente, entre las diversasmedidas preventivas que se toman para evitar el desarrollo de la

caries dental, encontramos el uso de antimicrobianos, para

disminuir o eliminar la carga microbiana, en general.

Aunque la mayor parte de las investigaciones se centran en

antibióticos y quimioterápicos industriales, son cada vez más

numerosos los estudios de laboratorio que revelan el poderantimicrobiano de plantas y/o hierbas. Esto abre una puerta, a la

posibilidad de reemplazar el uso de fármacos y diversas sustancias

que a largo plazo se pueden volver perjudiciales para nuestro




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organismo; y así introducir una medicina natural no dañina y más al

alcance de todas las poblaciones.

1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

a) Formulación del Problema

¿Cuál es la actividad antibacteriana de los extractos orgánicosde manzanilla, anís, orégano, clavo de olor y canela encomparación con la clorhexidina al 0,12% y agua destiladasobre flora mixta de caries dental y bolsa periodontal?

2. OBJETIVOS

a) Objetivo GeneralIdentificar la actividad antibacteriana de diferentesextractos acuosos sobre la flora mixta.

b) Objetivos Específicos

Identificar la actividad antibacteriana del extractoacuoso del anís sobre la flora mixta de caries dental ybolsa periodontal.

Identificar la actividad antibacteriana del extractoacuoso de la manzanilla sobre la flora mixta de cariesdental y bolsa periodontal.

Identificar la actividad antibacteriana del extracto

acuoso del orégano sobre la flora mixta de caries dentaly bolsa periodontal.

Identificar la actividad antibacteriana del extractoacuoso de la canela sobre la flora mixta de caries dentaly bolsa periodontal.




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Identificar la actividad antibacteriana del extractoacuoso del clavo de olor sobre la flora mixta de cariesdental y bolsa periodontal.

Identificar la actividad antibacteriana del extractoacuoso de la clorhexidina al 0,12% sobre la flora mixtade caries dental y bolsa periodontal.

3. JUSTIFICACIÓNEn Lima Metropolitana y Lima provincias existen diferentesproductos que son fácilmente cultivables como lo son lamanzanilla y anís y otros que son rápidamente adquiribles

como el clavo de olor, canela y orégano entre otros.

Dado que estos productos son utilizables en sus diferentesformas dentro de nuestra gastronomía de forma económica ysencilla son productos de interés para estudio de cómo actúadentro del primer medio al que ingresan: la cavidad oral y suspropiedades bacteriostáticas en algunas de las alteracionesque pueda existir dentro de este medio.

4. MARCO TEÓRICO

4.1 PIMPINELLA ANISUM (ANÍS)

4.1.1 Historia. Etimológicamente el término pimpinela es unaalteración de bipinnula o dipinella (doble punta), debido asus hojas bipinadas. Se utilizaba en la antigüedad parapagar impuestos.

4.1.2 Lugar de Origen. Originario de Egipto, Grecia, Creta y elMedio Oriente. Actualmente se cultiva en todos los paísesde clima templado.




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4.1.3 Nombre Científico. Pi mpi nella Ani sum L.

4.1.4 Sinónimos. Ani sum off i ci narum Moench, Ani sum vulgare

Gaertn, Carum ani sum Bail, S

i son an

i sum Spreng.

4.1.5 Clasificación botánica. Familia Apiaceae/umbeliferae.

4.1.6 Descripción. Planta herbácea anual, con raíz leñosa, olorintensamente aromático, tallo estriado, erecto, rojizo,ramificado en lo alto y muy frágil; hojas inferioresredondeadas, dentadas y las superiores angostosas y

filamentosas; flores blancas, pequeñas, en umbelascompuestas de largos pedúnculos, con cinco pétalosradiales obovados.

4.1.7 Compuestos químicos:

y Aceite volátil: constituido por trans-anetol,chavicol metil éter, aldehído de anís.

y Derivados de ácido cúfico, ácido clorogénico ycafeoil.

y Flavonoides

y Ácidos grasos

y Sustancias proteicas

y Furanocoumarinas, esteroles.

4.1.8 Parte utilizada. Hojas, frutos y semillas.

4.1.9 Usos medicinales empíricos. Para facilitar la digestión,disminuir la formación de gases y facilitar la expulsión delos mismos.




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4.1.10 Usos aprobados. Problemas dispépsicos, catarros deltracto respiratorio, dolor de espalda, lumbago, antiflatulento.

4.2 MATRICARIA CHAMOMILLA (MANZANILLA)

4.2.1 Clasificación botánica

Phylum: EuphytaDivisión: AngiospermaeClase: DicotyledonesOrden: Synandrae

Familia: Asteraceae (Compositae)Género: MatricariaEspecies: Matricaria camomilla o Matricaria recutita

4.2.2 Características. Existen 3 especies diferentes de plantasherbáceas denominadas genéricamente como manzanilla,todas ellas pertenecientes a la familia de las asteráceas ycon similares virtudes

4.2.3 Composición. Aceite esencial (0,3%-1,5%): Es elcomponente más importante que se obtiene de lascabezuelas de la planta y constituyen el grupo lipofílico dela droga. De acuerdo con la Farmacopea Argentina, ladroga no debe contener más de 10% de otras partes de laplanta, ni más de 2% de materia orgánica extraña. LaFarmacopea Británica exige un contenido de aceiteesencial entre 0,25-0,70%. La Farmacopea Brasilera al igualque la Española, Alemana y Europea, exige un tenor deaceite esencial no menor al 0,4%. Más del 50% del total dela esencia se compone de la siguiente manera: Azulenos




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(26-46%): Principalmente camazuleno (6-15%) y en menormedida guajazuleno. Se trata de un aceite volátil que lebrinda el color azulado a la esencia y que aparece poracción del calor durante el proceso de extracción. Por ellono están presentes en las infusiones tradicionales. Elcamazuleno no está preformado en la planta sino quederiva (por saponificación, deshidratación ydescarboxilación) de un proazuleno incoloro e hidrosolubledenominado matricina, el cual es una lactonasesquiterpénica del grupo de los guayanólidos.

Sesquiterpenos: a -bisabolol (10-25%) y derivados(bisabolóxidos A, B y C, bisabonlonóxido A). También seidentificó el antecotúlido (trazas). Lactonassesquiterpénicas: matricina, matricarina ydesacetilmatricarina. La matricina sería también precursoradel camazuleno. Carburos terpénicos: farneseno, cadineno,cis-espiroéter y transespiroéter.

Flavonoides (1-3%): Constituyen junto a los mucílagos elgrupo hidrofílico de la droga. Fueron identificadasnumerosas flavonas y flavonoles metoxilados, entre ellosapigenina (0,25-42%) y quercetina con suscorrespondientes glucósidos (7 - glucosil - apigenina y 7-glucosil quercetina). También luteolina, patuletina,lisorhamnetol, apiína, rutina y otros.

Cumarinas: dioxicumarina, umbeliferona y herniarinaOtros: ácido valeriánico, taninos, ácido ascórbico, ácidosgrasos, mucílagos urónicos (10%), ácido salicílico,esteroides derivados del estigmasterol, ácidos fenólicos,ácido angélico, mucopolisacáridos, principio amargo (ácido




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antémico), xiloglucuranos, sales minerales (8-10%),triacontano y fitosterina (resinas).

4.2.4 Principios activos y propiedades. Los principios activoscontenidos en sus flores son varios y pueden ser denaturaleza liposoluble o hidrosoluble. Los liposolubles estánconcentrados en los aceites esenciales y se emplean encompuestos de uso extemo. Los hidrófilos, liberados en lasinfusiones, tienen sobre todo efecto antiespasmódico. En lainfusión sólo se libera un 10 a 15% del contenido total de suaceite esencial. El aceite esencial contenido en sus flores

oscila entre 0.4 -1 % del peso seco. Compuestoprincipalmente por farneseno, spathulenol, (pro)camazufen, (-)-alfa bisabolol, (-)alfa bisabololoxide y (-)-alfabisabolonoxide. La proporción de procamazulen o matricinen las flores es alta, pero durante el proceso de destilación,por arrastre con vapor de agua, es transformado encamazulen. La esencia de manzanilla recién destilada es decolor azul, esto se debe a la presencia de sesquiterpenosconocidos como azuleno. En parte es el responsable delefecto antiinflamatorio.

El contenido de azuleno en el aceite varía entre 1 y 18%. Loscon alto contenido son producidos por determinadasvariedades cultivadas. La ausencia de matricin en la plantaestá regido por un gen dominante presente en laspoblaciones de manzanilla silvestre del Sureste Europeo yalgunos sectores reducidos de Asia. Otras de las sustanciasexistentes en su aceite esencial es un grupo derivado de lossesquiterpenos, los bisaboloides. En la manzanilla seencuentra el (-)-alfa bisabolol como componente natural.Por medio de procesos oxidativos el (-)-alfa bisabolol pasa,




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dentro de la planta, a formas oxidadas, que son alcoholessecundarios denominados óxido de bisabolol, de éstos en lamanzanilla se han detectado tres tipos. El óxido debisabolol, en un paso siguiente, puede ser oxidado a óxidode bisabolon. La oxidación está regida por un gendominante. En base al contenido de las distintas formas debisaboloides y su relación de concentraciones ha sidopostulada la existencia de distintos tipos químicos demanzanilla. El contenido de bisaboloides en el aceiteesencial puede variar entre O y 50% según los tipos yvariedades. El gen que inhibe la producción de matricin no

está ligado naturalmente a ninguno de los distintos tiposproductores de bisaboloides. El tipo camazulenlibre-bisabolonoxide se ha encontrado en Europa al Sureste,como nativo. El tipo camazulen bisabololoxide en EuropaCentral, y sólo un tipo en camazulen bisabolol han sidoencontrado en España. Este tipo mencionado finalmente esrecesivo múltiple (aa bb nn).

Los grupos acetilénicos, conforman un 20-30%. Lassustancias solubles en agua están constituidas porflavonoiglicósidos. Junto a éstos se han encontradodistintos compuestos terpénicos, pectinas y variosoligosacáridos.

Como se decía anteriormente, el valor medicinal de unaplanta reside en una sustancia (principio activo). Estos

principios activos se clasifican según su composiciónquímica y son los siguientes: alcaloides, glucósidos, aceitesesenciales, mucílagos, ácidos orgánicos, minerales yvitaminas.

4.3 ORIGANUM VULGARE (ORÉGANO)




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4.3.1 Clasificación botánica.

Reino: Vegetal

Clase: AngiospermaeSubclase: DicotiledoneaeOrden: TubifloraeFamilia: LabiateaeGénero: OreganumEspecie: Vulgare

4.3.2 Descripción Botánica. Arbusto perenne. La planta

alcanza una altura de 2 metros, se caracteriza por sererecta, de hojas delgadas estrechas, de aspecto brillante,fuertemente perfumado, tallos resinosos y levementeamargos. Flores llamativas de color variante de azul pálidoa blancas.

4.3.3 Propiedades. La esencia de Romero está compuesta porderivados terpénicos, carburos pineno, canfeno, bormeol,alcanfor y otras sustancias como taninos, principiosamargos, saponina ácida, elementos minerales, entreotros. Las hojas poseen ácidos fenólicos, flavonoides yalrededor de un 2% de aceite esencial.

4.3.4 Usos. Se utiliza para controlar la anemia y para detenerel flujo menstrual, fortalece la circulación (debido al

alcanfor), fortifica la memoria, es estimulante (debido alaceite esencial), espasmódico y ligeramente diurético.También se utiliza para afecciones hepáticas, anímicas,reumatismo, lumbalgias, tos y muchas otras afecciones.




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4.4 CINAMONUM ZEYLANICUM (CANELA)

4.4.1 Historia. El término C i nnamomun proviene de lacomposición de ci na(canela de la china) y amos (deriva deuna planta de familia del jengibre con olor similar a canela).Es originario de China ; crece de forma espontánea en losbosques de ese país y en el sur de la India. Hoy se hanaturalizado en diversas zonas de América tropical.

4.4.2 Compuestos químicos.

y Aceites volátiles: cinamaldehido, cinamil-alcohol.

y Diterpenos: cinnzelanoly Proantociandinas oligoméricas

y Hasta 10 % de aceites volátiles.

y Taninos

y Mucilago y azúcar.

4.4.3 Actividad farmacológica. Antibacteriano, fungistático,promotor de la motilidad, presenta reacción estrogénica

suave sobre el sistema genital (en animales deexperimentación).

En condiciones experimentales, unida a nisina, disminuyeel crecimiento de Salmonella typhi mur i um, Li ster i a

monoci togenes y Escher i a col i . Inhibe el crecimiento dehongos micotóxicos como Aspergi llus flavus, A. parasi t i cus,

A. ochraceus y Fusar i um moni l i forme. Estudios realizados

muestran resultados positivos de la canela sobreHel i cobacter pi lory. Ha mostrado disminución de la glucosa,triglicéridos. LDL y colesterol total en pacientes diabéticostipo2.




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4.5 CARYOPHYLLUS AROMATICUS (CLAVO DE OLOR)

4.5.1 Descripción. Planta mirtácea tropical, que produce losbotones florales aromáticos que se usan como especia, deolor típico y sabor picante. Contiene esencia, eugenol.

4.5.2 Propiedades. Al interior, como estimulante general,afodisiaco, aperitivo estomacal.

4.5.3 Uso externo. Preparados odontológicos, por su acciónantiséptica y analgésica.

Aparte de su empelo como condimento alimenticio, serecomienda para los decaimientos apáticos, inapetencia,flatulencias, etc. Se prepara una infusión con mediogramo por taza de agua hirviendo, para tomar antes de lascomidas.

5. METODOLOGÍ A

5.1 Materiales y recursos

5.1.1 Recursos humanos 02 Odontólogos Asesores 04 Estudiantes de Pregrado de Odontología

UNMSM 01 Consultora de Microbiología

02 Asistentes del Laboratorio de Microbiología

5.1.2 Recursos materiales 01 Agar Mitis Salivarius (con Bacitracina) en placa

petri tamaño regular.




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01 Agar Mitis Salivarius (sin Bacitracina) en placapetri tamaño regular.

02 Agar Schadler en placa petri tamaño regular. 01 Medio BHI para transporte de muestra. 01 Medio Tioglicolato para transporte de muestra. 01 Reactivo para condiciones de Anaerobiosis. 01 Kit de material de Diagnóstico Odontológico

básico. 01 Cureta para dentina. 01 Sonda periodontal 11.5. 06 Conos de papel Nº 30.

05 Papel filtro 50 gr de la planta de manzanilla. 50 gr de la planta de Anís. 50 gr de la planta de Orégano. 50 gr de Clavo de olor. 50 gr de Canela. 100 ml de Clorhexidina al 0,12%. 100 ml de Agua destilada.

05 Tubos de ensayo grandes. 02 Tubos de ensayo pequeños. 01 Mechero grande 01 Asa de siembra 01 Vortex. 01 Mortero. 01 Bagueta. 01 Kit de coloración Gram.

10 ml de Suero fisiológico 01 Frasco de Aceite de inmersión 04 Portaobjetos. Campos, guantes, mascarillas y gorros en

cantidades suficientes.




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5.2 Método

5.3 Procedimiento5.3.1 Selección de paciente

Paciente a recibir terapia de operatoria dental en laClínica de la Facultad de Odontología de UNMSM, quiendebía presentar pieza(s) dentaria(s) con diagnóstico decaries profunda y enfermedad periodontal; lo cual fuedeterminada clínicamente mediante la observación:o Para Caries Dental

Presencia de cavitación.

Ausencia de dolor a la exploración.o Para Bolsa Periodontal

Profundidad al sondaje mayor a 7 mm. Presencia de sangrado al sondaje. Presencia de sarro supragingival.

5.3.2 Toma de muestrao Para Caries Dental

Con una cureta para dentina se cureteó la zona decavitación y se obtuvo una muestra de la lesión lacual fue introducida cuidadosamente en el Mediode transporte del Caldo de Tioglicolato para suposterior cultivo en Agar Mitis Salivarius.

o Para Bolsa PeriodontalCon una sonda periodontal se introdujo en la bolsaperiodontal y se colocó los conos de papel a nivel

vestíbulo-mesial y vestíbulo-distal; 02 en cada sitiomencionado dejándolo por 30 segundos. Luego seretiro y cuidadosamente fue introducida en elMedio de transporte BHI para su posterior cultivoen el Agar Schadler.




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5.3.3 Protocolo procesamiento de muestra

6. RESULTADOS

Transcurrido 7 días, que es el tiempo que duró la incubación de

la muestras a una temperatura de 37 °C, se analizó muestras

para para ver las actividad que tienen

los extractos usados, sobre las

muestras de caries dental y de bolsa

periodontal.

6.1 Muestra de caries dental, enmedio agar MitisSalivarius

Se observó la formación de halo de

inhibición enlos discos que




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contenían manzanilla, orégano y clavo de olor, siendo los

diámetros de los halos 8mm, 10mm y 11 mm

respectivamente.

Se observó que el halo de inhibición de la Clorhexidina fue de6 mm.

En el caso del anís y canela no se observó cambio.

6.2 Muestra de bolsaperiodontal, en medio agar

Shadler.

En esta muestra se observó que el

halo de inhibición de la

Clorhexidina fue de 15 mm.

En el disco que contenía orégano

se observó la formación delhalo de

inhibición cuyo diámetro medía 13

mm.

En cuanto a los discos que contenían anís, manzanilla, clavo

de olor y canela no hubo cambio.

Se pudo notar que el cultivo tenia un olor carcteristico.




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contenía Clorhexidina, en la en la muestra de bolsa

periodontal. Los halos de inhibición que se pudo observar, en

el cultivo de caries dental, fueron de los discos que contenían

Clorhexidina, Manzanilla y Clavo de olor.y Las acciones inhibitoria que se esperaba puede que no se

haya producido por la forma como se adquirió alguno de los

productos, ya que fueron adquiridos en un mercado, donde

no existe un ambiente limpio o libre de bacterias.

y En la investigación se utilizó los extractos de los productos,

que se pudo obtener tras haberles colocado en agua por el

lapso de tiempo de una semana, existe la posibilidad que por

el tiempo que se mantuvo en estas condiciones, las acciones

inhibitorias se hayan perdido en aquellas especies donde no

se pudo observar acción alguna.

y Las especies que se utilizaron no eran plantas frescas, ya que

no se le había cosechado en ese instante, por lo tanto la

acciónla acción inhibitoria que presentan el orégano, la

manzanilla y el clavo de olor frente a las bacterias de la caries

dental y bolsa periodontal, puede quesea distinto si serian

cultivos frescos.

y La acción inhibitoria del orégano sobre la flora mixta de labolsa periodontal es significativa, ya que se pudo compararcon el halo de inhibición de la Clorhexidina, que es un fármacoque se utiliza en tratamiento de la periodontitis, y se notó que

el diámetro sus halos eran similares, siendo 15mm el de laClorhexidina y 13 mm del orégano.

8. CONCLUSIONES




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y Lo que se llegó a observar al final de esta investigación es quehay plantas, que tienen una acción inhibitoria sobre la floramixta de caries dental y bolsa periodontal, como es el caso de

la manzanilla, el orégano y el clavo de olor.y Se observó que el orégano tiene acción inhibitoria, tanto en

caries dental, como en la flora de la bolsa periodontal, por loque se pude concluir que, se podría utilizar el extracto deorégano como componente de colutorios y pastas dentalespara prevenir la caries dental asimismo emplear en eltratamiento de las enfermedades periodontales.

y La Manzanilla y el clavo de olor son dos especies importantes

que se pueden utilizar también en la prevención de la cariesdental ya que se observó que tienen una acción inhibitoriasobre la flora mixta de la caris dental.

y Se pudo observar que la Clorhexidina no tiene un buen efectoinhibitorio sobre la flora mixta de la caries dental, ya que suhalo de inhibición era demasiado pequeño, por lo que nopodemos considerar como un fármaco capas de prevenir lacaries dental. Pero el efecto que tiene ante la flora mixta de la

bolsa periodontal es significativa, por lo que se puede concluirque es un fármaco recomendado para el tratamiento de laenfermedad periodontal.




Integrantes

y Gejaño Heredia Rosay Huarag Gómez Percy

y Latorre López Michel

y Llufire Mendoza Sergio

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