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FACULTAD DE MEDICINA Y NUTRICIÓN
División de Estudios de Posgrado e Investigación
Maestría en Ciencias de la Salud
ASOCIACIÓN DEL POLIMORFISMO R263G DEL GEN CODIFICANTE DE
LA SUBUNIDAD E1α DEL COMPLEJO PIRUVATO DESHIDROGENASA Y
NIVELES DE TNFα CON ACIDOSIS LÁCTICA TIPO B EN TUMORES
SOLIDOS
DIRECTOR DE TESIS
D.C. ALFREDO TÉLLEZ VALENCIA
CO-DIRECTORA
D.C. EDNA MADAI MENDEZ HERNANDEZ
TESISTA
MIGUEL WONG SERRANO
UNIVERSIDAD JUÁREZ DEL ESTADO DE DURANGO
INTRODUCCION
El desarrollo de acidosis láctica en el paciente con cáncer
representa un marcador de muy mal pronóstico, pues con
la administración de esquemas de tratamiento, el
desenlace con frecuencia resulta fatal, alcanzando tasas de
mortalidad hasta el 95%.
2013 tercera causa de muerte
en México
Las principales causas de muerte por tumores
malignos en mujeres de 20 y más años en 2011
son por cáncer de mama (13.8%) y
cervicouterino (10.4 por ciento).
En 2012 de cada 100 defunciones por
tumores malignos en hombres de 20 y más años, 17 fallecen por
cáncer de próstata, 13 de bronquio y pulmón y
9 de estomago.
ANTECEDENTES
Inegi 2013 ESTADÍSTICAS A PROPÓSITO DEL DÍA MUNDIAL CONTRA EL CÁNCER” INSTITUTO NACIONAL DE ESTADÍSTICA Y GEOGRAFÍA AGUASCALIENTES, AGS., A 4
DE FEBRERO DE 2013
NEOPLASIAS SOLIDAS
ANTECEDENTES
En 2011,
Pacientes con cáncer,
16 de cada 100 hombres de 20 años y
más lo padecen en la próstata
28 de cada 100 mujeres de la misma
edad, en mama.
En 2012,
100 egresos hospitalarios por tumores en
el estado, 44 son por tipo maligno.
En los jóvenes representa 41 de cada 100
,adulta, 45 de cada 100
ESTADÍSTICAS A PROPÓSITO DE… DÍA MUNDIAL CONTRA EL CÁNCER (4 DE FEBRERO)” DATOS DE DURANGO
Ruiz J, Ashok K., Hart P. Type B Lactic Acidosis Secondary to Malignancy: Case Report, Review of Published Cases, Insights into Pathogenesis, and Prospects for Therapy. The Scientific World Journal. 2011; 1
1: 1316–1324
• Uno de los factores de peor pronóstico en el paciente
con diagnóstico de cáncer es el desarrollo de acidosis
láctica.
• Presencia de lactato sanguíneo por encima de 5 mmol/L
• PH menor a 7.3
Gauthier PM, Szerlip HM. Metabolic acidosis in the intensive care unit. Crit Care Clin 2002; 18: 289-308
ACIDOSIS LÁCTICA
ANTECEDENTES
tipo A
tipo B
tipo D
Ruiz J, Ashok K., Hart P. Type B Lactic Acidosis Secondary to Malignancy: Case Report, Review of Published Cases, Insights into Pathogenesis,
and Prospects for Therapy. The Scientific World Journal. 2011; 11: 1316–1324
B1
B2
B3
ACIDOSIS
LÁCTICA
ACIDOSIS LÁCTICA
acidosis láctica tipo B.
Mortalidad 95%.
«El sello distintivo metabólico más común de los tumores malignos, es decir, el "efecto
Warburg" es su propensión a metabolizar la glucosa a ácido láctico a una alta tasa
incluso en la presencia de oxígeno»
Saroj P. Mathupalaa, Young H. Koc, and Peter L. Pedersenb,* Hexokinase-2 bound to mitochondria: Cancer's stygian link to the “Warburg effect” and a pivotal target for effective
therapy☆Semin Cancer Biol. 2009 February ; 19(1): 17–24. doi:10.1016/j.semcancer.2008.11.006.
ANTECEDENTES
COMPLEJO PDH
(Jilka et al. 1986; Patel and Roche 1990; Reed et al. 1992). (Gudi et al. 1995; Bowker–Kinley et al. 1998;
Complejo PDH
1piruvato deshidrogenasa
(E1)
dihidrolipoamida transacetilasa
(E2)
dihidrolipoamida deshidrogenasa(E3)
R263G
R263G
Son numerosas las mutaciones
asociadas a perdida de la
función de la PDH.
Se ha descrito que una de las mas
frecuentes es R263G.
Polimorfismo R263G:
Cuadros neurodegenerativos
Retraso mental
Sx Leigh
Acidosis láctica
Magner M.1, Vinšová K.1, Tesařová M.1, Hájková Z.1, Hansíková H.1, Wenchich L.1, Ješina P.1, Smolka V.3, Adam T.3, Vaněčková M.2, Zeman J.1, Honzík T. Prague Medical Report / Vol. 112 (2011) No. 1, p. 18–28 Two Patients with
Clinically Distinct Manifestation of Pyruvate Dehydrogenase Deficiency Due to Mutations in PDHA1 Gene
José Manuel Fragoso Lona1, Mónica Sierra Martínez2, Gilberto Vargas Alarcón1,3, Angélica Barrios Rodas1
y Julián Ramírez Bello4*El factor de necrosis tumoral α (TNF-α) en las enfermedades cardiovasculares: biología molecular y genética Gaceta Médica de México. 2013;149:521-30
(Arend WP et al, 1995; Dealtry GB et al, 1987)
TNF α
Elevadas
concentraciones de
TNF α inhiben la
actividad del complejo
Piruvato
deshidrogenasa
Ruiz J, Ashok K., Hart P. Type B Lactic Acidosis Secondary to Malignancy: Case Report, Review of Published Cases, Insights into Pathogenesis, and Prospects for Therapy. The
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Neoplasias Solidas
Morbimortalidad
Calidad de vida
Repercusiones sociales
Repercusiones económicas
• Impacto psicológico.
• Pérdida de habilidades
sociales
•Independencia
• La incapacidad laboral
• Tratamiento
- Medicamentos
• Cuidadores
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
Ruiz J, Ashok K., Hart P. Type B Lactic Acidosis Secondary to Malignancy: Case Report, Review of Published Cases, Insights into Pathogenesis, and Prospects for Therapy. The
Scientific World Journal. 2011; 11: 1316–1324
Las Neoplasias Solidas implican :
costo económico,
economía familiar
diminución en la calidad de vida de los pacientes,
La tercera causa de muerte en el país
La acidosis láctica tipo b se considera un factor de mal pronostico,
Justificación
INEGI Panorama Epidemiológico y Estadístico de la Mortalidad en México 2010 http://www.mexicomaxico.org/Voto/MortalidadCausas.htm
importante estudiar los mecanismos que influyen en la aparición de acidosis láctica
para mejorar la calidad de vida del paciente diagnosticado con
alguna neoplasia e incluso prevenir el desarrollo de esta
complicación y mejorar el pronóstico del paciente
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ANTECEDENTES.
INEGI Panorama Epidemiológico y Estadístico de la Mortalidad en México 2010
NEOPLASIAS SOLIDAS
¿EXISTE ASOCIACIÓN DEL POLIMORFISMO R263G DEL GEN CODIFICANTE DE LA SUBUNIDAD E1α DEL COMPLEJO PIRUVATO
DESHIDROGENASA Y LOS NIVELES DE TNFα CON LA PRESENCIA DE ACIDOSIS LÁCTICA TIPO B EN PACIENTES CON TUMORES SOLIDOS?
PREGUNTA DE INVESTIGACIÓN
OBJETIVO GENERAL
DETERMINAR SI EXISTE ASOCIACIÓN DEL POLIMORFISMO R263G
DEL GEN CODIFICANTE DE LA SUBUNIDAD E1α DEL COMPLEJO
PIRUVATO DESHIDROGENASA Y LOS NIVELES DE TNFα CON LA
PRESENCIA DE ACIDOSIS LÁCTICA TIPO B EN PACIENTES CON TUMORES SOLIDOS
OBJETIVOS ESPECIFICOS
IDENTIFICAR A PACIENTES QUE PRESENTEN NEOPLASIAS SOLIDAS CON Y SIN ACIDOSIS LÁCTICA
EVALUAR LA PRESENCIA DEL POLIMORFIMO R263G DE LA SUBUNIDAD E1α DEL COMPLEJO PIRUVATO DESHIDROGENASA Y LOS NIVELES DE TNFα EN LOS GRUPOS DE ESTUDIO
ANALIZAR LAS FRECUENCIAS ALELICAS Y GENOTIPICAS DEL POLIMORFISMO EN LOS GRUPOS DE ESTUDIO
EVALUAR LA ACTIVIDAD DEL COMPLEJO PIRUVATO DESHIDROGENASA EN AMBOS GRUPOS
OBJETIVOS ESPECIFICOS
EVALUAR LA RELACION DE LOS NIVELES DE TNFα CON LA ACTIVIDAD DEL COMPLEJO PDH
EVALUAR LA RELACION ENTRE LOS NIVELES DE ACIDO LÁCTICO CON LA ACTIVIDAD DEL COMPLEJO PDH Y CON LOS NIVELES DE TNFα
CALCULAR LA FUERZA DE ASOCIACION ENTRE EL POLIMORFISMO R263G DE LA SUBUNIDAD E1α DEL COMPLEJO PIRUVATO DESHIDROGENASA CON LA PRESENCIA DE ACIDOSIS LACTICA EN PACIENTES CON TUMORES SOLIDOS
HIPÓTESIS ALTERNATIVA
EXISTE ASOCIACIÓN DEL POLIMORFISMO R263G DEL GEN CODIFICANTE DE LA SUBUNIDAD E1Α DEL COMPLEJO PIRUVATO DESHIDROGENASA Y LOS NIVELES DE TNFΑ CON LA PRESENCIA DE ACIDOSIS LÁCTICA TIPO B EN PACIENTES CON TUMORES SOLIDOS
HIPÓTESIS NULA
NO EXISTE ASOCIACIÓN DEL POLIMORFISMO R263G DEL GEN CODIFICANTE DE LA SUBUNIDAD E1Α DEL COMPLEJO PIRUVATO DESHIDROGENASA Y LOS NIVELES DE TNFΑ CON LA PRESENCIA DE ACIDOSIS LÁCTICA TIPO B EN PACIENTES CON TUMORES SOLIDOS
MATERIAL Y METODOS
Diseño:
Casos y controles
Grupos de Estudio:
Definición de caso: Pacientes con diagnóstico de tumor sólido
que presenten acidosis láctica tipo B
Definición de control: Pacientes con diagnostico de tumor
sólido sin presencia de acidosis láctica B
MATERIAL Y MÉTODOS
Criterios de
Inclusión
Sexo indistinto
Mayores de 18
años de edad
Con diagnóstico
de tumor sólido
Con y sin acidosis
láctica tipo B
Que acepten
participar en el
estudio
Criterios de
Exclusión
Mujeres
embarazadas
Población
indígena o
extranjera
Criterios de
Eliminación
Muestras de
ADN degradado
o contaminado
Pacientes que
deseen retirarse
del estudio en
cualquier etapa
del mismo
MATERIAL Y MÉTODOS
Variable
dependiente:
Acidosis láctica
tipo B
Variable
independiente:
Polimorfismo
R263G de la
subunidad E1α
del complejo
Piruvato
Deshidrogenasa
Niveles de Factor
de Necrosis
Tumoral α
Variables
independientes:
Sexo, edad,
localización del
tumor primario,
presencia de
metástasis,
tiempo de
evolución,
esquemas de
tratamiento.
Variables de estudio:
TAMAÑO DE
MUESTRA
Todos los pacientes que cumplan los criterios de inclusión y acudan a la
consulta del CECAN de mayo del 2014 a mayo del
2015
MATERIAL
y METODOS
PROCEDIMIENTOS
Toma de muestra sanguínea en tubo
heparinizado
Determinación del nivel de lactato
utilizando el método
colorimétrico
Determinación de los niveles de TNFa
por quimioluminiscencia
Análisis de polimorfismo
R263G del PDHA1 por PCR en tiempo
real
ANALISIS ESTADISTICO
La prueba t de Student en el caso de variables cuantitativas
prueba Ji cuadrada en el caso de variables categóricas.
Para los análisis de correlación serán utilizados el coeficiente de correlación de Pearson y de Spearman según corresponda.
Para el caso de la medición de la fuerza de asociación, se efectuará un análisis de regresión logística binaria. Se considerará un valor de p <0.01 para determinar la significancia estadística.
La información será procesada en el paquete estadístico SPSS versión 19.0 para Windows.
Fecha Feb-jun
2014
Agosto dic
2014
Feb-jun
2015
agosto-dic
2015
Redacción y
revisión de
protocolo
x
Aprendizaje
de técnicas de
laboratorio
x x
Toma de
muestras x x xProcesamient
o de
muestras
x x x
Análisis de
muestras x xAnálisis
estadístico x xResultados
x x
INSUMO PRECIO
UNITARIO
CANTIDAD
TOTAL
2 Kits para determinación de
lactato por método
colorimétrico
$10176.50 $20353.00
Sondas para evaluar el
polimorfismo del gen de pdha1
$7000.00 $35,000
1 Universal Master Mix. $13,000 $13,000
Se adquirirán tubos vacutainer,
pipetas de transferencia,
microtubos ependorff, puntas
para micropipeta
Costo variable $5647.00
TOTAL: $80,000.00 aprox
Con el recurso solicitado al Fondo de
Investigación del Instituto de
Investigación Científica se destinaría
específicamente a efectuar las
mediciones de lactato y el análisis de la
expresión de los genes que codifican
para las enzimas concentraciones
L-lactato
Niveles TNFα
Pdha1
DESGLOSE FINANCIERO
CONSIDERACIONES ÉTICAS.
El protocolo será puesto a evaluación y se espera sea aprobado por el Comité de Ética de la Investigación del
Hospital General Del estado de Durango
• Hospital Regional de Zona No. 1 IMSS
• Según La Ley General de Salud en Materia de Investigación para la Salud, se clasifica la investigación como Investigación con riesgo mínimo.
• Atiende los principios de la declaración de Helsinki.
Se someterá a revisión del comité
de ética
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