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Archivo Brasilero de Medicina Veterinaria yZootecniaVersión para imprimir ISSN 0102-0935

Arq Bras. Vet Med Zootecnia. Belo Horizonte vol.57 no.2 abril 2005

http://dx.doi.org/10.1590/S0102-09352005000200002

MEDICINA VETERINARIA

La correlación entre la actividad de laceruloplasmina sérica y el suero y los niveleshepáticos de cobre en las vaquillas

Suero ceruloplasmina correlación de la actividad con lasconcentraciones de cobre en suero y el hígado en lasvaquillas Nelore

Borges como yo , RM Amorim I ; MRG Kuchembuck I , RS Araujo II ; SB

Smith III , HF Smith III , FJ Benesi IV , R. Mirandola IV , M. Morgano V

I Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia - UNESP - Distrito Rubião Jr.,

s / n - 18618-000 - Botucatu, SP II PIBIC Beca / CNPq III PhD - FMVZ - UNESP, Botucatu, San Pablo IV, Facultad

de Medicina Veterinaria y de la USP-Zootercnia São Paulo, SP V del Instituto de Tecnología de los Alimentos -Campinas, SP

RESUMEN

Se evaluó la actividad oxidativa de los niveles de ceruloplasmina sérica como un indicador de cobre en el suero yel hígado y se compararon dos métodos de determinación de ceruloplasmina y la ortodianisidina parafenileno. recogieron 56 muestras de suero y el hígado (biopsia del hígado) de novillas para determinar la actividad de laceruloplasmina suero y la concentración de cobre. Las correlaciones entre los niveles séricos de cobre y laactividad de la ceruloplasmina sérica determinada por métodos paraphenylen y ortodianisidina fueron de 0,75 y0,62, respectivamente. Las correlaciones entre las concentraciones de cobre del hígado y de la actividadceruloplasmina sérica por los métodos citados fueron 0,15 y 0,12. No se observó correlación entre el suero y elcobre del hígado. La correlación entre la actividad ceruloplasmina sérica, parafenileno que usa como sustrato, y elsuero de cobre fue mayor que la correlación entre este elemento y el método utilizado para ortodianisidina.

Palabras clave: ganado, cobre, ceruloplasmina, la biopsia hepática



RESUMEN

La actividad de la oxidasa ceruloplasmina un indicador de los niveles séricos de cobre y el hígado se evaluó dosmétodos diferentes y la determinación de ceruloplasmina (paraphenylen y ortodianisidine) se compararon.Cincuenta y seis muestras de suero y el hígado de las vaquillas Nelore se utilizaron para evaluar la concentraciónde cobre en el suero y la actividad de la ceruloplasmina. Los coeficientes de correlación entre los valores decobre y ceruloplasmina sérica de actividad sérica utilizando ortodianisidine Fueron paraphenylen y 0,75 y 0,62,respectivamente. La correlación entre la actividad de la ceruloplasmina en suero y las concentraciones hepáticasde cobre fueron 00:15 y 12:12, respectivamente, y es ortodianisidine paraphenylen. Entre la relación de losniveles séricos de cobre y el hígado se observó. La determinación en suero por el método de Cooper paraphenylenmostró una mayor correlación con el nivel de hígado de cobre en comparación con la determinación de cobre en elsuero por el método de ortodianisidine.

Palabras clave: bovino, cobre, ceruloplasmina, la biopsia hepática

INTRODUCCIÓN

Las deficiencias de elementos minerales son factores que limitan la productividad de la industria animal. Ladeficiencia de cobre ha sido identificado como el más comúnmente encontrado en el ganado bovino en todo elmundo (McDowell, 1999). Tokarnia et al. (1999), en un artículo de revisión sobre las deficiencias de minerales enel ganado bovino y ovino en Brasil, señaló las deficiencias de cobre, el cobalto y el zinc como el más frecuente.

Moraes et al. (1994) encontraron el pastoreo en las regiones con deficiencia de cobre de Mato Grosso, MatoGrosso do Sul, Acre y Goias. En este estudio, la concentración de este elemento ha sido menor que la requeridapor los animales, alrededor del 50% de los resultados.

La deficiencia marginal de cobre, siendo más frecuente, provoca más daño que el impedimento severo. Lainsuficiencia de las tasas de cobre en la dieta puede causar disminución del crecimiento y las tasas dereproducción de declive, sin signos patognomónicos (McDowell et al., 1993).

La manada nutricional cuando la cubierta se puede evaluar en alimentos, agua, suero y el hígado, o mediante ladeterminación de la actividad de la ceruloplasmina sérica (Hidiroglou, 1980; Vermunt y Occidente, 1994). Laevaluación basada en un solo elemento puede conducir a conclusiones erróneas (Wikse et al., 1992).

Acerca de 40-70% de cobre absorbido se almacena en el hígado, desde donde se libera cuando hay unareducción del consumo (Corah e Ives, 1991). Análisis de hígado es fiable para evaluar la condición de cobreorgánico, cobalto, manganeso selenio, y, opcionalmente, el zinc (Tokarnia et al., 1999).

El suero actividad ceruloplasmina oxidativo se relaciona con la concentración en suero de cobre, es decir, bajaconcentración de este elemento se asocia con ceruloplasmina actividad reducida. Uno de los métodos utilizadospara verificar la actividad de la ceruloplasmina es la oxidación de parafenilendiamina. El producto de esta reacciónes de color púrpura, se puede determinar por espectrofotometría y es el método para la mayoría de lasdeterminaciones (Ravin, 1961). Otro método descrito consiste en la reacción con ortodianisidina ceruloplasminacomo un sustrato (Schosinsky et al, 1974;. Paynter, 1982). Los métodos oxidativos detectar sólo el cobreceruloplasmina enlazado.

Blakley y Hamilton (1985) encontraron que la correlación entre la actividad de la ceruloplasmina suero y laconcentración de cobre en suero fue 0,83 y concluyó que no se puede utilizar como un indicador de cobreorgánico en el ganado. Amer et al. (1973) encontraron en los terneros, la correlación de 0,98 entre las mismasvariables, y se encontró que el 96,5% de las diferencias en la actividad oxidasa ceruloplasmina puede explicarsepor los cambios en la concentración de cobre en plasma. Después de la suplementación con el ganado de cobredeficientes, Kapoor y Mahadevan (1970) encontró una alta correlación entre los valores de cobre plasmático y laactividad de la ceruloplasmina sérica. Cerone et al. (1998) encontró una reducción de la actividad de laceruloplasmina sérica en vacas con deficiencia inducida de cobre secundario, la administración de molibdeno. correlación entre la ceruloplasmina suero y el hígado de cobre es baja, aproximadamente 0,35 (Kincaid, 1986).

Este estudio tuvo como objetivo comparar dos métodos para la evaluación de la concentración sérica deceruloplasmina y estimar la correlación entre éste y los niveles séricos de cobre y el hígado.

MATERIALES Y MÉTODOS

Hemos utilizado 56 novillas, no embarazadas, con un buen rendimiento y el peso corporal de aproximadamente330kg, colocada en el potrero de B. decumbens, en una propiedad privada en el municipio de Paulistania-SP.



pastos fueron sometidos a análisis químicos, obteniendo los siguientes resultados: N = 5g/kg, P = 0,8 g / kg, K =8g/kg, 3g/kg = Ca, Mg = 2,6 g / kg, S = 0,6 g / kg, B = 6mg/kg, 6mg/kg = Cu, Fe = 153mg/kg, Mn = 278mg/kg,23mg/kg y Zn = Mo = 2mg/kg.

20 ml de sangre se recogió en un tubo especial vacío primera , libre de contaminación con el mineral, sinanticoagulante. Después de retracción parcial del coágulo y la centrifugación, el suero se separa por aspiración yse dividió en partes alícuotas y se congelan a -20 ° C para su posterior análisis.

Las biopsias de hígado se realizaron segunda junior Chapman et al. (1963).

La actividad de suero ceruloplasmina en el suero sanguíneo se determinó utilizando dos métodos. El primero fue

utilizado oparafenilenodiamino 2 como sustrato, según descripción Ravin, (1961). En este método, la actividadceruloplasmina fue determinada por la velocidad de oxidación de parafenilenodiamino a 37 ° C y pH 6,0. Se midióen la apariencia púrpura espectrofotómetro como resultado de la oxidación. La corrección se realiza debido a lacatálisis oxidativa por Cu y Fe presentes en las muestras usando un blanco que fue inhibida por ceruloplasmina

azidasódico 3 . Una unidad de actividad se define como un aumento de 0,001 en la absorbancia a 530 nm despuésde 30 minutos de reacción. La reacción de oxidación se incrementa por la exposición a la luz por lo tanto, elprocedimiento se realizó en la oscuridad.

El segundo método consistió en determinar la concentración usando el ortodianisidina 4 como sustrato(Schosinsky et al., 1974). Ambos procedimientos se realizaron por duplicado y el resultado final expresó que ellossignifican.

Para la cuantificación de cobre en muestras de hígado y el suero se utilizó la técnica de la fuente de emisión

óptica con plasma acoplado inductivamente espectrometría espectrómetro de Simultánea 5 .

Antes de las pruebas de análisis se realizaron para verificar el método de preparación de hígado de bovino. Hemos

llevado a cabo el análisis de muestras húmedas (bloque digestor). Una muestra de hígadocertificada 6 , se secóen un horno a 110 ° C durante 12 horas, se utilizó para validar la metodología.

Para la determinación de cobre se utilizó el método de la digestión ácida en el bloque digestor 7 (Asp y Lund,1992) como sigue: pesaje 0,2000 ± 0,0011 g de muestra de hígado de bovino en tubos de vidrio y la adición de15 ml de ácido nítrico concentrado; calefacción bloque digestor de 50 ° C , un aumento de 10 ° C a intervalos de30 minutos hasta 160 ° C, calentando a alcanzar aproximadamente 5 ml de volumen, transferencia de la muestraa 25 ml matraces volumétricos, completando el volumen con ácido clorhídrico al 5% v / v

Para la determinación de cobre en el suero, el método de preparación se basó en el procedimiento descrito porEvenson y Warren (1975), es decir, la colocación de 400 m l de la muestra de suero en 10ml matracesvolumétricos y se completa el volumen con ácido clorhídrico 5N % v / v Las mediciones se realizaron también porespectrometría de emisión óptica con plasma acoplado inductivamente argón.

Se realizó un análisis descriptivo y se estimó la correlación de Pearson entre la actividad de la ceruloplasminasérica y el suero y los niveles hepáticos de cobre (Zar, 1984).

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

La Tabla Una muestra de los medios, desviaciones estándar y medianas de la actividad de la ceruloplasmina sérica(métodos y parafenileno ortodianisidina) en cobre en el suero (mg / l) e hígado (mg / kg / materia seca).

La media de cobre en el hígado se encuentra dentro del rango considerado normal para el ganado, de 100 a300mg/kg/MS segundo Fick et al. (1979) 100 o el segundo McDowell 400mg/kg/MS (1992). Los valoresencontrados 545mg/kg/MS 132 para mostrar la variación individual de los animales, ya que se mantienen unidosbajo la misma dirección en los últimos dos años, un hecho que también ha señalado Suttle (1986). Los resultadosson similares a Lisboa et al. (1996).



El cobre suero media está dentro del rango normal, 0,7 a 1,4 mg / l segundo Fick et al. (1979) o 0,6 a 1,5 mg / lMcDowell segundo (1992). El cobre del hígado están más cerca del límite superior y el cobre en el suero seencuentran en el límite inferior citado por estos autores.

La evaluación individual de cobre en el suero encontrado 22 animales con valores inferiores a 0,7 mg / l citado porFick et al. (1979) y si se considera cuatro 0,6 mg / l se refiere a McDowell (1992). Según él, los valores pordebajo de 0,6 mg / l sería indicativo de la deficiencia en ovinos y bovinos. Sin embargo, la concentración deanimales suero por debajo de 0,6 mg / l mostraron niveles normales de cobre del hígado.

Según Claypool et al. (1975), los niveles sanguíneos son sólo acompañado por valores bajos hepáticas cuandohay menos de 0,5 mg / l. 101 de las observaciones realizadas por estos autores, en los que los nivelesplasmáticos estaban por debajo de 0,5 mg / l, sólo cuatro presentaron valores por encima del hígado40mg/kg/MS. En el presente estudio sólo un perro con un suero estaba por debajo de 0,5 mg / l, sin embargo, elvalor de cobre en el hígado fue normal. Hubo correlación negativa entre los niveles séricos de cobre y el hígado (r= -0,1), según ha informado Fichtner et al. (1988).

El menor hígado no fueron acompañados por la disminución de los niveles séricos, ya que la homeostasis impideque esto suceda hasta que las reservas del hígado son muy bajos. Por lo tanto, se puede sugerir que los valoresdel hígado son más confiables que los valores séricos para evaluar el estado nutricional del cobre en el cuerpo.

Las desviaciones estándar de los medios y los obtenidos para la actividad de la ceruloplasmina en suero pormétodos y ortodianisidina parafenileno fueron 250,09 ± 51,27 UI / L y 15,93 ± 9,44 UI / l, respectivamente. fin de los métodos de citación, la correlación entre la actividad de la concentración sérica de ceruloplasmina ycobre en suero fue de 0,75 y 0,62. En este orden, la correlación entre la actividad de la ceruloplasmina sérica yconcentración hepática de cobre fue de 0,15 y 0,12. Los resultados son similares a Kincaid (1986). La correlaciónfue menor que el indicado por Amer et al. (1973) y Blakey y Hamilton (1985), utilizando como sustrato de lareacción parafenileno. Esto surge debido a cero correlación entre los valores de concentración de cobre en elsuero y el hígado.

Los resultados de este experimento muestran que es posible indicar que los animales con mayor o menor valor decobre suero basado en la determinación de la actividad ceruloplasmina suero, lo que confirma las observacionesde Hamilton y Blakey (1985) y Kincaid (1986). La correlación entre la actividad observada por el método deceruloplasmina y cobre ortodianisidina suero fue menor que la correlación entre este elemento y la actividad de laobtenida por el método de parafenileno ceruploplasmina. Esto se debió a la presencia de un valor extremo único.La técnica para determinar la actividad de la ceruloplasmina utilizando el sustrato como ortodianisidina es másfácil de realizar, ya que la reacción es inhibida por la adición de azida de sodio (Scosinsky et al., 1974), quefacilita el procedimiento de lectura. Además, esta reacción puede realizarse con reactivos preparados deantemano, lo cual no ocurre con el otro método. Sin embargo, la reacción con el resultado ortodianisidina muestramuy baja en su lectura final, lo que dificulta la percepción de las pequeñas variaciones. Otra desventaja de estatécnica es el uso de reactivos tóxicos dos: una ortodianisidina y 50% de ácido sulfúrico.

CONCLUSIONES

La correlación entre el método de determinación de la actividad ceruloplasmina suero utilizando el sustrato comoparafenileno y la concentración de cobre en suero es mayor que la correlación entre este elemento yortodianisidina metodología. La actividad de suero ceruloplasmina es un indicador indirecto de cobre en el suero, loque le permite ser usado como un método de cribado para el diagnóstico de la deficiencia de cobre marginal en elganado.

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Recibido para publicación 13 de mayo 2003 Recibido para su publicación, después de las modificaciones, 23 de junio 2004 Patrocinador: Fundación para el Desarrollo de la Investigación en la UNESP y la Fundación de Apoyo a laInvestigación de São Paulo



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