APLICACIONES CLNICAS DE LA ESPECTROMETRIA DE MASASM Jess Maza CastilloResidente 1 Anlisis ClnicosHospital Universitario de Guadalajara25 Abril 2007

1.Deteccin de Helicobacter pylori

2.Evaluacin de la funcin pancretica exocrina

DETECCIN DE Helicobacter pyloriQU ES?Bacilo gram negativo que se encuentra en la mucosa gstrica asociado a distintas enfermedades digestivas

-Catalasa y oxidasa positivo-Vive en mucosa gstrica antral -Libre en mucus, en la superfcie de las clulas epiteliales o en el intersticio celular NO es invasivo NO se ha aislado en hemocultivosMVILFORMA ESPIRALUREASA POSITIVA

CARACTERISTICAS

2. HISTORIARobin Warren y Barry Marshall-1982 Demuestran que la principal causa de la lcera pptica y gstrica es Helicobacter pylori -2005- Premio Nobel. La bacteria que destron al estrs

3. EL POR QU SE SU IMPORTANCIA TRATAMIENTOLas infecciones por H.pylori afectan aproximadamente a la mitad de la poblacin mundial

DOS RAZONESPATOLOGA

Helicobacter pyloriInfiltrado inflamatorioGastritis atrfica autoinmune (tipo A)Gastritis atrfica multifocal (tipo B)

MALTPMN prominentesLinfomaGastritis central difusaUlcera duodenalGastritis central superficialCncer difusoCncer intestinallcera gstricaVascularesAutoinmuneDermatolgicasEncefalopatiasDiabaetes mellitus

ExtradigestivasRR=3.8

MECANISMOS POR LOS CUALES H. Pylori LESIONA LA MUCOSA GSTRICASustancias externasLipopolisacridoUreasaInduce apoptosisEndotoxinaActividad citotxicaUrea+ H2OCO2 + 2NH4+Daa la microcirculacin

4. DIAGNSTICO

INVASIVOSNO INVASIVOSDIRECTOSINDIRECTOSCULTIVOHISTOLOGATC.MOLECULARES(PCR)TC.MOLECULARES.( Jugo pancretico, saliva o heces)ANTGENO EN HECES-UREASA RPIDA

-PRUEBA DEL ALIENTO(con urea *C13)SEROLOGA

SENSIBILIDAD Y ESPECIFICIDADS(%) E(%)UREASA RPIDAHISTOLOGACULTIVOTEST DE ALIENTOSEROLOGA- ELISAANTGENOS EN HECES 97 94.1 98.2 10077.4 10095.5 93.5 91 50 89.5 77.8

PRUEBA DEL ALIENTO. DETERMINACIN DE 13CO2 EN EL ALIENTOPrueba estndar entre las pruebas diagnsticas no invasivas de infeccin por Helicobacter pylori

Test de la urea marcada

ONH2UREASA*CO2 + 2NH4+ONH2UREASANH2*C

*

*

*

+

(13CO2/CO2)m

(13CO2/CO2)m - (13CO2/CO2)c

d

= ---------------------------------------- x 1000

o/oo

1.PROCEDIMIENTO PARA LA REALIZACIN DEL TESTSobre de cido ctricoComprimido de urea (*C)Tubos de recogida de muestra 2 tapones verde (basal)2 tapones blanco(post)

200ml AGUA + AC.CTRICO10 MIN2.Muestra Posterior125 ml AGUA + UREA (Comprimido)1.Muestra Basal30 MIN+2 tubos2 tubos

2.ANLISIS DE LA MUESTRA

Los valores corresponden a la relaccin 13CO2/CO2 en el aire espirado y el resultado se expresa como enriquecimiento isotpico d (13CO2/CO2)m - (13CO2/CO2)c (13CO2/CO2)c = ---------------------------------------- x 1000o/oo1. Basalo/oo2. Posto/oodo0/ooPost Basalo/ood

RESULTADOSPaciente 1do/oo< 5 NegativoSido/oo> 5 PositivoSi 1. Basal -23.74 2. Post -22.471.27 < 5d do/ooo/ooNegativoPaciente 2. 1. Basal -22.39 2. Post 69.28 91.67 > 5Positivo

Falsos negativos-Realizacin de la prueba antes de 4 semanas de finalizar el tratamiento erradicadorTratamiento con inhibidores de la bomba de protones o sales de Bismuto en el momento de la prueba o dias previosVaciamiento gtrico rpidoRealizacin de la prueba en las 4 h despus de la endoscopiaFalsos positivosProduccin de ureasa por otros bacterias en pacientes aclohdricos.(gastritis crnica atrfica) Recoger las muestras antes de tiempo. Recoger las muestras demasiado tarde. Elevacin por la accin hidroltica sobre la urea de la flora bacteriana.

Fisiologa del pncreas Digestin de carbohidratros, protenas, lpidos

conversin en molculas absorbiblesEVALUACIN DE LA FUNCIN PANCRETICA EXOCRINAPNCREAS1. Endocrino2. Exocrino- Porcin enzimtica- Porcin acuosa

Pancreatitis crnica - Proceso inflamatorio progresivo e irreversible caracterizado por la fibrosis de la glndula con destruccin del parnquima exocrino en la primera fase y en una segunda fase del parnquima endocrinoMalabsorsin por afectacin del pncreas exocrino, (esteatorrea, creatorrea), y en fases avanzadas , diabetes mellitus

1.Clasificacin: ( Marseille Rome)1. Pancreatitis Crnica calcificante2. Pancreatitis crnica obstructiva Obstruccin del conducto pancretico principal

3.Pancreatits inflamatoriaFibrosis densa e infiltrado inflamatorio mononuclearAlcohol

3. Sintomatologa: Dolor crnico (80%): Dolor continuo abdominal de intensidad moderada. Diarrea y prdida de peso: Inadecuada digestin de los alimentos y la imposibilidad del organismo para asimilarlos.

Desnutricion progresiva

4. Diagnstico:

-Pruebas de imagen: Radriografa, Ecografa, Ultrasonidos,...

-Pruebas de funcin pancretica exocrina.Mtodos con intubacin duodenal: Jugo pancreticoMtodos sin intubacin duodenal:- Niveles de enzimas en suero- CUANTIFICACIN DE LA GRASA FECAL(VAN DE KAMER) ( S y E)- Cuantificacin de quimiotripsina fecal- Cuantificacin de elastasa fecal- Prueba del pancreolauril- Prueba de bentiromina- TEST DE TRIGLICRIDOS MIXTOS.TEST DE ALIENTO

APLICACIONES CLNICASDetectar decrementos en la actividad de la lipasa intraduodenal.Seguimiento de la evolucin de la enfermedad pancretica ( este test es ms sensible que el estudio de esteatorrea, ya que esta no se produce hasta que la produccin de lipasa es menor del 10%.Monitorizacin del efecto del tratamiento

Fundamento: Se basa en marcar con 13C distintos sustratos que requieren la participacin de enzimas pancreticas para su escisin y absorcin. Los niveles de 13CO2 en aire espirado nos permitirn valorar la actividad enzimtica del pncreas.

REPRESENTACIN DEL TEST DE ALIENTO CON TG MIXTOS MARCADOSGLICEROL C201,3 diesteraril-2-13C-carboxil-octanoil glicerol13C8 C20Lipasa pancreticaGLICEROL C2013C8 C20Absorcin intestinal13C8+GLICEROLOxidacin heptica13CO2Respiracin

COMIDA DE PRUEBA (13C-Triglicridos Mixtos)

IngredientesMantequilla (20 gramos)Biscottes (15 gramos)Agua (200 mL)

Modo de preparacinUntar la mantequilla en ambos biscottesAadir los 250 mg de 13C-Triglicridos en la mantequilla50 tubos: 2 basales + 48 posteriores

PROTOCOLO DEL TEST DEL ALIENTO1.+ 10mg METOCLOPRAMIDA10 min2 tubosBASALES2.CADA 15 MINUTOSCOMIDA DE PRUEBA: Biscotes, mantequilla, 13C-TG mixtos48 tubos POSTERIORESDURACIN: 6HORAS

ANLISIS DE LAS MUESTRASd o/oo = ---------------------------------------- x 1000 (13CO2/CO2)m - (13CO2/CO2)c (13CO2/CO2)cResultados: % de 13C-recovery/h y valores acumulados durante 6 h. Se calcula utilizando un programa matemtico que calcula el porcentaje de sustracto recuperado como 13CO2

Los valores corresponden a la relaccin 13CO2/CO2 en el aire espirado y el resultado se expresa como enriquecimiento isotpico

NEGATIVONEGATIVO

MTG

HOSPITAL GENERAL UNIVERSITARIO DE GUADALAJARA

UNIDAD DE INVESTIGACIN

Test de Funcin Pancretica Exocrina13C-Mixed-Triglyceride-Test (13C-MTG)

Nombre:Calvino Fernndez, Miryam

N Laboratorio:7 Diagnstico:CONTROL

Tiempo (min)Delta%13C% Dosis/h% Dosis acumDosis:250mg

0-25.681.083010.000.00Peso:55.00kg

15-24.171.084672.450.61Talla:170.00cm

30-22.691.086294.862.44BSA:1.60m2

45-22.541.086465.104.93

60-22.511.086495.157.49

75-22.011.087045.9610.27

90-21.231.087907.2313.57

105-20.571.088628.3017.46

120-18.501.0909011.6722.45

135-17.181.0923513.8128.82

150-16.621.0929714.7235.95

165-17.301.0922213.6243.03

180-17.801.0916712.8049.64

195-18.081.0913612.3555.93

210-19.011.0903410.8461.72

225-19.591.089709.9066.91

240-20.101.089149.0771.65

255-20.481.088728.4576.03

270-20.981.088177.6480.05

285-21.051.088107.5283.84

300-21.531.087576.7487.40

315-22.011.087045.9690.58

330-22.041.087015.9193.55

345-22.401.086615.3396.36

360-22.711.086274.8398.90

Resultado:Pico:14.7%

Tmax:150min.

% Dosis acumulada:98.9%Guadalajara a 24 de junio de 2003

NORMAL

MTG

&F

Seite &P

% Dosis/h

% Dosis acum

Minutos

% Dosis/h

% cum Dosis

MBD009C212A.bin

MBD009C332D.bin

POSITIVO

MTG

HOSPITAL GENERAL UNIVERSITARIO DE GUADALAJARA

UNIDAD DE INVESTIGACIN

Test de Funcin Pancretica Exocrina13C-Mixed-Triglyceride-Test (13C-MTG)

Nombre:NHC:NO CONSTA Fecha de nacimiento: NO CONSTA

N Laboratorio:16 Diagnstico:Pancreatitis alcohlica

Tiempo (min)Delta%13C% Dosis/h% Dosis acumDosis:250mg

0-23.441.085470.000.00Peso:65.00kg

15-23.681.08520-0.42-0.10Talla:160.00cm

30-23.711.08517-0.47-0.33BSA:1.71m2

45-23.731.08515-0.50-0.57

60-23.711.08517-0.47-0.81

75-23.691.08519-0.43-1.04

90-23.701.08518-0.45-1.26

105-23.511.08539-0.12-1.40

120-23.361.085560.14-1.40

135-23.311.085610.23-1.31

150-23.401.085510.07-1.23

165-23.461.08545-0.03-1.22

180-22.201.086832.15-0.69

195-23.271.085660.30-0.08

210-23.441.085470.00-0.01

225-22.841.086131.040.25

240-22.871.086090.990.76

255-22.891.086070.951.25

270-22.651.086341.371.83

285-23.121.085820.562.31

300-21.941.087122.603.10

315-22.091.086952.344.33

330-23.521.08538-0.144.89

345-22.171.086862.205.40

360-21.951.087112.596.60

Resultado:Pico:2.6%

Tmax:300min.

% Dosis acumulada:6.6%Guadalajara a 10 de julio de 2003

PATOLGICO

Valores normales: %Dosis acumulada > 58%

MTG

&F

Seite &P

% Dosis/h

% Dosis acum

Minutos

% Dosis/h

% cum Dosis

MBD009C212A.bin

MBD009C332D.bin

POSITIVOTRAS TTO CON KREN

MTG

HOSPITAL GENERAL UNIVERSITARIO DE GUADALAJARA

UNIDAD DE INVESTIGACIN

Test de Funcin Pancretica Exocrina13C-Mixed-Triglyceride-Test (13C-MTG)

Nombre:

N Laboratorio: 6B La Palma Diagnstico:Tratamiento con Kren

Tiempo (min)Delta%13C% Dosis/h% Dosis acumDosis:250mg

0-22.331.086690.000.00Peso:65.00kg

15-22.351.08667-0.03-0.01Talla:160.00cm

30-22.411.08660-0.14-0.05BSA:1.71m2

45-21.921.087140.710.09

60-20.951.088212.390.87

75-19.781.089494.432.57

90-19.361.089955.154.97

105-19.461.089844.987.50

120-20.051.089203.969.74

135-19.921.089344.1811.77

150-19.81.089474.3913.91

165-20.191.089043.7115.94

180-20.141.089103.8017.82

195-20.341.088883.4519.63

210-20.511.088693.1621.28

225-20.161.089073.7723.02

240-20.231.089003.6424.87

255-20.241.088993.6326.69

270-20.451.088763.2628.41

285-20.491.088713.1930.02

300-20.241.088993.6331.73

315-20.421.088793.3133.46

330-20.591.088603.0235.05

345-20.561.088633.0736.57

360-20.741.088442.7638.03

Resultado:Pico:%

Tmax:min.

% Dosis acumulada:38.0%Guadalajara a 17 de Noviembre de 2003

PATOLGICO

Valores normales: %Dosis acumulada > 58%

MTG

&F

Seite &P

% Dosis/h

% Dosis acum

Minutos

% Dosis/h

% cum Dosis

MBD009C212A.bin

MBD009C332D.bin

BUENA ALTERNATIVA A LAS TCNICAS TRADICIONALES

- No invasivoRecogida de muestrasencilla No radioactivo (13C) PACIENTEINVESTIGADORFcil conservacinManejoAnlisis de las muestras VENTAJASRealizacin del test en mujeres frtiles, embarazadas, nios y ancianosNo instalaciones especiales: Espectrometria de masas (13CO2)

FALSOS POSITIVOS: Vaciamiento gstrico retrasado Dao extenso de la mucosa intestinal (celacos, enfermedad de Crohn)

Tiempo de contacto corto entre la comida de prueba y las secreciones pancreato-biliares (pacientes gastrectomizados)

Diabetes y enfermedad heptica severa FALSOS NEGATIVOS: Enfermedad pancretica moderada

Este test es capaz de detectar disfuncin pancretica incluso en ausencia de esteatorrea, as como de diferenciar si la esteatorrea est asociada o no a enfermedad pancretica(La esteatorrea se produce si la lipasa cae por debajo de 40KU/h. )