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“Estado actual en el diagnóstico
Dra. Segretin Eliana
8 Congreso de Infectología pediátricaJefe de la sección superficie ocular e infectología
Hospital Italiano de Buenos Aires
“Estado actual en el diagnóstico
de las infecciones oculares”
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Fundamentos
� Diagnóstico microbiológico
� Temprano = Vulnerabilidad = Pérdida irreversible visión
� Toma muestra antes de tratamiento� Toma muestra antes de tratamiento
� Tratamiento empírico
• Acceso difícil
• Sensibilidad moderada cultivos
• Lentitud resultados
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Cultivos microbianos
• CULTIVOS KOCH 1880
Limitaciones Limitaciones
• Sensibilidad y tiempo
• 70% Endoftalmitis
• 55-60% Úlcera corneal /conjuntiva
• Acantamoeba bajo
• Virus difíciles
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Bajo rendimiento de las muestras oculares
• Pequeño volumen
material
1 mm
0,6mm
4-5ml
• Medios transporte adecuados eviten •Dilución excesiva
•Deshidratación
•Pérdida de la muestra
• Comunicación efectiva
1,5-2ml
PCR!!!!
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¿Cuáles son las ventajas de la PCR?
�Rapidez
�Sensibilidad y especificidad
�No necesitan microorganismo viable
�Detectan microorganismo difíciles de cultivar
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¿Cuáles son lo inconvenientes?
�Falsos positivos/negativos
� Interpretación clínica de los
resultados
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¿Qué gérmenes podemos buscar
PCR?�Bacterias Universales
�Gram +
�Gram –
�Propionibacterium acnes
� Parásitos
• Acantamoeba
• Toxoplasma Gondii
� Virus:
�Micobacterias
�M. Tuberculosis
�M. Atípicas
�Hongos Universales
�Adenovirus
�VHS tipo 1 y 2
�VHZ
�CMV
�VEB
� Clamidia
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¿De dónde tomamos la muestra?
�Conjuntiva
• Conjuntivitis
�Cornea
�Vitreo
• Endoftalmitis
• Uveítis posteriores
• Retinitis
• Queratitis infecciosas
�Cámara anterior
• Endoftalmitis
• Uveítis anteriores
• Uveítis posteriores
• Retinitis
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¿Qué sospechamos?
�Conjuntiva
�Cornea �Cornea
�Uveitis/retinitis
�Endoftalmitis
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¿De dónde tomamos la muestra?
�Conjuntiva
• Conjuntivitis
�Cornea
�Vitreo
• Endoftalmitis
• Uveítis posteriores
• Retinitis
• Queratitis infecciosas
�Cámara anterior
• Endoftalmitis
• Uveítis anteriores
• Uveítis posteriores
• Retinitis
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¿Cómo tomo la muestra de conjuntiva?
�Fondo de saco conjuntival
�Evitar tocar borde palpebral y pestañas
�Sin anestesia: no es dolorosa
�Hisopo dacron/SF�Hisopo dacron/SF
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Siembra en medios de cultivo
Agar sangre Agar chocolate Agar Sabouraud
AMIES
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¿De dónde tomamos la muestra?
�Conjuntiva
• Conjuntivitis
�Cornea
�Vitreo
• Endoftalmitis
• Uveítis posteriores
• Retinitis
• Queratitis infecciosas
�Cámara anterior
• Endoftalmitis
• Uveítis anteriores
• Uveítis posteriores
• Retinitis
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______________________________________________________
Microorganismos Porcentajes
____________________________________________________
Bacterias 70-90 %
Gram Positivas 55-80
Gram Negativas 20-45
Queratitis bacteriana
Gram Negativas 20-45
Hongos 5-30%
Filamentoso (Fusarium) 60-80
Levadura 20-40
Parásito 1-15%
Polimicrobianas 2-20%
Nicola , F. Queratitis infecciosa no viral: factores predisponentes, agentes etiológico y diagnóstico de laboratorio. Rev. Argent.
Microbiol., out./dez. 2005, vol.37, no.4, p.229-239.
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Difícil de diferenciar
Queratitis bacteriana Queratitis micótica
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• Lámpara de hendidura
• Proparacaína 0.5%
• Jeringa con aguja 30 G o bisturi
¿Cómo tomo las muestras de
cornea?
• Raspado de la lesión bordes y lecho más profundo
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Extendido y siembra
Directo: Gram, Directo: Gram, giemsa, calcofluor
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¿Cómo tomo muestras para PCR?
�Tubo estéril
�Mínimo tiempo abierto
�Bajo medidas de
esterilidad
�Pedido de PCR
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Bacterias y hongos
Cultivos vs PCR
Sensibilidad
bacterias1
Sensibilidad
hongos
Cultivos 57,8% 59,09%
PCR 87,88% 90,91%
�PCR especificidad 94,7%2
• FALSOS + Bacterias (flora normal)
1. Eleinen KG, Mohalhal AA, Elmekawy HE, et al. Polymerase chain reaction-guided diagnosis of infective keratitis - a
hospital-based study. Curr Eye Res. 2012; 37:1005–1011
2. Tananuvat N, Salakthuantee K, Vanittanakom N, et al. Prospective comparison between conventional microbial
work-up vs PCR in the diagnosis of fungal keratitis. Eye (Lond). 2012; 26:1337–1343.
PCR 87,88% 90,91%
HONGOS!!!
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Queratitis bacteriana
� PCR BACTERIA
GRAM -
Pseudomona aeruginosa
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Queratitis micótica
� PCR HONGOS +
� TRAUMA CON
PIEDRA
PAECILOMYCES SP
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Queratitis por acantamoeba
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Queratitis por acantamoeba
� 50 % diagnóstico tardío: síntomas y difícil
aislamiento
PCR1 Cultivos
1. Lehmann OJ, Green SM, Morlet N: Polymerase chain reaction analysis of corneal epithelial and tear
samples in the diagnosis of Acanthamoeba keratitis. Invest Ophthalmol Vis Sci 39:1261–5, 1998
Especificidad 95%
Sensibilidad 84% 53%
Lagrimas 66%
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• Quistes hasta descemet
MICROSCOPIA CONFOCAL
Dr. Croxatto
� PCR + acantamoeba
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Microscopía confocal
10-25 um
� Parmar DN y col. Tandem scanning confocal corneal microscopy in the diagnosis of Suspected acanthamoeba keratitis. Ophthalmology 2006;113:538-47.
� Kanavi et al. Sensitivity and specificity of confocal scan in the diagnosis of infectious keratitis. Cornea 2007;26:782-6.
Dr. Croxatto
�Sensibilidad 94%
�Especificidad 78%
Virus: 0,012-0,025 um
Bacterias: 0,5-1,5 um
Hongos: 3-7 um levadura
36 x 5,5 um hifas
Acantamoeba: 10-25 um
Endotelio: 20 um
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Conjuntivitis o queratitis virales
�Dx clínico
• VHS
• VHZ
• Adenovirus• Adenovirus
• Clamidia
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Queratoconjuntivitis
Sensibilidad PCR Cultivos
Adenovirus 98% 53%Adenovirus 98% 53%
Herpes 92% 94,5%
Clamidia 100% 71% (Dot blot test)
Elnifro EM, Cooper RJ, Klapper PE, et al. Multiplex polymerase chain reaction for diagnosis of viral and chlamydial
keratoconjunctivitis. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2000; 41:1818–1822. [PubMed: 10845603]
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Diagnóstico en el consultorio:
Adenovirus
• Adenoplus (Ag: proteína hexón, 2 acs
monoclonales)• 10 minutos
• Sensibilidad: 50-90 % • Sensibilidad: 50-90 %
• Especificidad: 96 %
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¿De dónde tomamos la muestra?
�Conjuntiva
• Conjuntivitis
�Cornea
�Vitreo
• Endoftalmitis
• Uveítis posteriores
• Retinitis
• Queratitis infecciosas
�Cámara anterior
• Endoftalmitis
• Uveítis anteriores
• Uveítis posteriores
• Retinitis
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Indicaciones:
punción de cámara anterior
�Uveítis anteriores severas
�Uveítis posteriores atípicas
�Uveítis recurrentes severas
�Uveítis recalcitrantes al tratamiento
�Sospecha uveítis infecciosa y no se ve fondo de
ojo.
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¿Cómo tomo la muestra de humor acuoso?
Paracentesis de CA�LH o microscopio
�Anestesia tópica
�Profilaxis y antisepsia
• Antibióticos previos
• Iodopovidona 10% y 5%• Iodopovidona 10% y 5%
�Jeringa 27-30 G: 0.1-0.2 ml
�Complicaciones: ninguna grave en 361 pacientes (catarata, queratitis,
endoftalmitis)1
• Hipema 7 casos
1.Van der Lelij A, Rothova A. Diagnostic anterior cham- ber paracentesis in uveitis: a safe procedure? Br J Oph- thalmol 1997;81:976 – 9.
2.Verbraak FD, Galema M, van den Horn GH, et al. Serological and polymerase chain reaction-based anal- ysis of aqueous humour samples in patients with
AIDS and necrotizing retinitis. AIDS 1996;10:1091–9.
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Uveítis anteriores 60%
No infecciosas: >50%
• HLA B27+
• Espondiloartropatías
• Sarcoidosis
• Behcet
Infecciosas 20-30%: VHS, VHZ > frecuentes en
occidente 1.Bloch-Michel E, NussenblattRB. International Uveitis Study Group recommendations for the evaluation of intraocular
inflammatory disease. Am J Ophthalmol 1987;103(2):234–235.
2.Wakefield D, Chang JH. Epidemiology of uveitis. Int Ophthalmol Clin 2005;45(2):1–13.
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� En pacientes con clínica sugestiva de infección viral
• Atrofia de iris o PK pigmentados
• Se justifica prueba empírica con antivirales
� Casos no responda al tto empírico:
Punción de CA en uveítis anterior
� Casos no responda al tto empírico:
• Punción de CA:
• PCR HSV, VZV, and CMV
• Si es necesario rotar el antiviral o dosis
� 24 % se alteró el tratamiento secundario a la punción
+ PCR
� Anwar, Galor et al. Am J Ophthalmol 2013;155:781–786.
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Uveítis posteriores
�Punción de CA: humor acuoso
• Uveítis activa con resultados negativos de screening inicial
• Uveítis severa: diagnóstico y tratamiento temprano es esencial (retinitis virales)esencial (retinitis virales)
• Opacidad de medios (catarata, vitreo denso)
• Toxoplasmosis atípicas
• Uveítis no responde con curso de corticoides
• Endoftalmitis
• Inmunosuprimidos
1. Harper. Am J Ophthalmol 2009;147: 140–147.
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Uveítis posteriores
�Biopsia o punción vitrea
• Punción HA Negativa y/o falta de respuesta
clínicaclínica
• Endoftalmitis
• Sospecha malignidad
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¿Cómo tomo la muestra de vitreo?
Punción vitrea
•Microscopio quirúrgico
•Profilaxis ATB y antisepsia•Profilaxis ATB y antisepsia
•Anestesia local o subtenoniana
•Jeringa 21-23 G: 0,2 ml
•Directamente enviar jeringa
•Cultivos
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¿Cómo tomo la muestra de vitreo?
Vitrectomía diagnóstica
• Sindrome de enmascaramiento
• Uveitis posteriores que no responden al tto/vitreo denso
• Endoftalmitis• Endoftalmitis
•Biopsia seca: 0.5-0.7 ml sin diluir
•Casette de infusión
•Complicaciones: DR
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PCR: Uveítis posteriores
�Toxoplasmosis
• Sensibilidad:
• 77% PCR + IGG intraocular
• 91% PCR + IGA
�Sífilis: VDRL, Ftabs, PCR
�TBC: PCR 35% sensibilidad (1-2% TBC)
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TOXOPLASMOSIS: dx clínico
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TOXOPLASMOSIS
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TOXOPLASMOSIS ATIPICAS
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Atípicas inmunosuprimidos
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Retinitis necrotizantes herpéticas
3 entidades:
�NRA
�NREP
�CMV �CMV
PCR
humos
acuoso1,2
Sensibilidad Especificidad
VHZ , VHS, CMV
>90% 95%
1. Abe T, Sato M, Tamai M. Correlation of varicella-zoster virus copies and final visual acuities of acute retinal necrosis
syndrome. Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 1998; 236:747–752.
2. Mitchell SM, Fox JD, Tedder RS, et al. Vitreous fluid sampling and viral genome detection for the diagnosis of viral retinitis in
patients with AIDS. J Med Virol. 1994; 43:336–340.
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Vitreítis x/xxxx NRA
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PORN
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CMV
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CMV
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Endoftalmitis exógena
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Endoftalmitis
Agudas
�Endophtalmitis vitrectomy study: cultivos + 70%
�PCR > 90% + bacterias o hongos
�Endoftalmitis crónicas�Endoftalmitis crónicas
• Propionibacterium acnes
• Staphylococcus epidermidis
• Hongos universales
Cultivos PCR
H. acuoso 0% 84%
Vitreo 24% 92%Lohmann CP, Linde HJ, Reischl U. Improved detection of microorganisms by polymerase chain
reaction in delayed endophthalmitis after cataract surgery. Ophthalmology. 2000; 107:1047–
1051. discussion 1051–1042.
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Endoftalmitis endógena
OD OI
FUSARIUM
SOLANI
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Algoritmo: saber lo que está
buscando!!!
Muestra ocular (Humor acuoso/vitreo)
Consentimiento informado
Extracción ADN y cultivos
Multiplex
• VHS-1 y 2
• CMV
• VHZ, VEB
• Toxoplasma
Bacterias universales
• Gram +
• Gram –
• Propionibacterium
Hongos universales
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Conclusión
�Todos los resultados de LABORATORIO deben �Todos los resultados de LABORATORIO deben
ser considerarse en un contexto clínico
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MUCHAS GRACIAS
MUCHAS GRACIAS
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MUCHAS GRACIAS
MUCHAS GRACIAS
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• PCR
• Real Time PCR: PCR + sondas fluorescentes
• Cuantifica ácidos nucleicos
• Más rápida y simple
• Reacción 1 hora
¿Qué tipos de PCR conocemos?
• Reacción 1 hora
• Variantes:
• Nested PCR: amplicon nueva PCR • Aumenta sensibilidad y especifidad
• Multiplex: > de 2 primers
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Infecciones micóticas
�Sensibilidad cultivos hongos
• Endoftalmitis < 70%
• Queratitis 75-80%
� PCR:� PCR:
Pro• Alta sensibilidad • Horas • Instauración precoz
antifúngicos • Evita efecto tóxico uso
empírico• Identificar especie
Contras•No permite estudio sensibilidad•PCR universales: No permite identificación especie