ANTIBODY COATED BACTERIA EN LAS INFECCIONES URINARIAS

A. PuJoL, F. LrÑAREs, J. MuÑoz, A. RuscoNI, V. OREJAS, N. SERRALLACH, P. ALOMAR

INTRODUCCIÓN.- La pielonefritis es, evidentemente, la infección urinaria que más problemas trae al urólogo, y más repercusión futura en cuanto a sus secuelas, tiene sobre el enfermo.

Desde siempre, cada vez que el urólogo está frente a su paciente con infección urinaria inicia una carrera contra el tiempo para estable­cer si la misma afecta al parénquin1a renal o 110. Para ello cuenta con un amplio repertotlo de métodos de diagnóstico, como son la clínica, las pielografías i. v., el urocultivo, etc ... ¿pero en cuantos casos de infec­ción aguda la pielografía es normal?, ¿en cuántos casos el urocultivo es negativo o escasamente significativo porque el enfermo nos llega con tratamiento antibiótico?, ¿en cuántos el cuadro clínico es indefinido o más aún, si es mixto, se confunde con ÍlÚección urinaria baja, que es siempre mucho más ruidosa?

Ante esta problemática diversos autores 1•

2•

3 han propuesto la de­termÍl1ación de anticuerpos antibacterianos séricos para el diagnóstico de localización de la infección urinaria. Sólo la afectación del parénquima renal desencadena una respuesta de anticuerpos, lo cual no ocu rre en las infecciones urinarias de vías baias.

Para determinar el título de anticuerpos séricos, se emplean antíge­nos obtenidos a partir de la bacteria aislada en la orina del propio en­fermo (antígenos homólogos).

KUNIN y otros estudiaron un antígeno común a todos los miembros de la familia Enterobacteriaceae, el estudio del título de anticuerpos frente a este antígeno heterólogo es de gran valor en los casos de pido­nefritis abacteriúricas.

En marzo de 1974, VIRGINIA TROMAS y col.,4 presentaron un mé­todo sencillo, libre de riesgo y de gran valor para el diagnóstico precoz de la localización de la üúección urinaria. Mediante una técnica de inmunofluorescencia directa detectan en el sedimento urinario los anti­cuerpos que recubren a las bacterias (antibody coated bacteria, abrev. ACB).

848 ANALES DE MEDICINA

Han encontrado que existe una correlación entre la presencia o ausencia de ACB y la localización de la infección en el riñón o en vías urinarias bajas, respectivamente.

Atraídos por las aportaciones de VIRGINIA THOMAS y col., hemos puesto en práctica dicha técnica y la hemos comparado con los métodos tradicionales (clfnica, U. LV., cistografía, título sérico de anticuer­pos, etc.).

MATERIAL Y MÉTODOS.- Se han estudiado 47 pacientes (29 varo­nes y 18 mujeres), adultos, que presentaban una clínica clara de in­fección urinaria (alta o baja). En todos ellos se han comparado los da­tos aportados por el urocultivo, la pielografía i.v. (PND: pielonefritis derecha, PNI: pielonefritís izquierda, PNB: pielonefritis bilateral) y la cistografía (RP: reflujo pasivo, RA: reflujo activo, y residuo).

En 35 de estos pacientes, se estudió el título de anticuerpos séricos (homólogos) mediante la técnica de la hemaglutinación pasiva.

Fig, l.-Bacterias recubiertas de anticue1·pos conjugados con isocianato de fluoresceína.

Los pacientes seleccionados, tenían un cultivo de orina de ;;::;..100.000 col/rol., excepto en 4 casos. La recogida de orina se hizo mediante el mid-stream o por sondaje, en frascos estériles. Las orinas se sembra­ron en medio de C.L.E.D. con asa calibrada de 0,001 ml. La lectura se efectuó a las 24 horas de incubación a 35° C., reaHzándose la identifi­cación y el antibiograma de la cepa correspondiente.

A cada paciente se le efectuaron, como mínimo, 2 determinaciones de ACB, según el método de VIRGINIA THOMAS y col.

11. PUJOL Y COLS. ANTIBODY COATED BACTERJII 849

Detección del antibody coated bacteria: Se centrifugan 0,5 rnl. de orina a 1.500 x g durante 10 minutos, se lava dos veces con tampón PBS (pH 7,3 ). El sedimento se incuba durante 30 minutos a 35° C. con 0,2 mi. de una dilución al 1:5 de antigammaglobulina humana marcada con fluoresceína (globulínas fluorescentes de conejo exenta de anticuer­pos anti-Cándida y anti-Toxoplasma del Instituto Pasteur).

Se vuelve a lavar dos veces con PBS, y se hace una extensión en un porta, se deja secar en la oscuridad y se examina con el microscopio de fluorescencia a 600-800 aumentos, pudiéndose observar indistintamente con objetivo de inmersión o con objetivo seco (fi.gs. 1, 2 y 3 ).

FIG. 2

Lectura: La intensidad de la fluorescencia de la pared bacteriana, se valoró como negativa o positiva con distintos grados de +, + +, +++, ++++.

Controles: A todas las orinas estudiadas, se le hicieron simultánea­mente dos controles:

1.° Control de especifidad de la fluorescencia. Se demuestra blo­queando la fluorescencia con una antigammaglobulina humana no conjugada . La lectura ha de dar una fluorescencia ne­gativa.

2.0 Demostrar que la antigammaglobulina humana marcada con fluoresceína está libre de a1tticuerpos contra la bacteria aislada en el Ul'ocultivo. Para ello se incuba el germen obtenido del urocultivo con la antigammaglobulina marcada con fluores­ceína. La lectura ha de dar una fluorescencia negativa.

850 ANALES DE ~IEDICINA

REsuLTADOS.- Hemos visto 47 enfermos con infección urinaria, de los cuales 36 tenían clfnica de pielonefritis (22 pielonefritis crónica y 14 pielonefritis aguda, tablas I y II) y 11 sintomatología de infec­ción urinaria baja (tabla III).

Nuestros resultados coinciden con los de VIRGINIA THOMAS, pues en 36 pielonefritis 35 tuvieron ACB positivo y sólo 1 ACB negativo. En 33 pacientes la U.I.V. fue patológica y en 3 fue normal, lo que nos hizo pensar en un posible reflujo que se confirmó en la cis tografía. Esto da un especial valor a esta técnica, pues ante imágenes no patológicas de la U.I.V. el reflujo pasaría desapercibido.

En 12 casos se observó reflujo en la cistografía.

FIG. 3

En 43 pacientes el urocultivo fue posltlvo con > 100.000 col/ml. Los cuatro casos restantes fueron de 35.000 col/ml., 10.000 col/ml., 5.000 col/ml., y 3.000 col/mi., respectivamen te. Estos 3 últimos casos presentaban clínica y radiológicamente lesiones pielonefríticas, pero por hallarse bajo tratamiento antibiótico los urocultivos no eran significati­vos, ante lo cual para obtener concentraciones valorables de gérmenes en el sedimento urinario, hemos centrifugado volúmenes de orina va­riable ( 1 O ml.) con lo que hemos conseguido ACB positivos en los 3 casos.

En los 11 casos de infección urinaria de vías bajas las U.I.V. y las cistografías fueron normales y el ACB negativo en todos ellos, lo que nos demuestra la especificidad del método.

TABLA I.-Comparación del Urocultivo, UIV, Cistografía, ACB y títulos séricos de anticuerpos en 22 pacientes con pielonefrit is crónica

Urocultivo UIV Cistografía ACB Tit. antic.

-l. > 100.000 col./ml. de Providencia stuartii PND Normal +++ 1/640 2. > 100.000 col./ml. de Proteus mirabilis PNB Normal ++++ 1/320 3. > 100.000 col./ml. de E. coli PNB RAD + +++ 1/320 4. > 100.000 col./ml. de Pseudomonas aeruginosa PND Normal + +++ 1/80 5. > 100.000 col./ml. de Pseudomonas aeruginosa PNB Residuo ++++ 1/160 6. 100.000 col./ml. de Pseudomonas aeruginosa PNB RPB +++ 1/2560 7. > 100.000 col./ml. de Pseudomonas aeruginosa PNI RPI ++++ 1/640 8. > 100.000 col./rnl. de E. coli PND Normal +++ 1/640 9 . > 100.000 col. /ml. de Providencia stuartii PNB RPB ++ ++ 1/1280 10. 100.000 col./ml. de E. coli PNB Normal ++++ 1/320 11. 100.000 col./ml. de Pseudomonas aeruginosa PNB Normal ++ ++ 1/2560 12. > 100.000 col./ml. de Pseudomonas aeruginosa PNB Normal + ++ 1/80 13. 100.000 col./ml. de Providencia stuartii PNB Normal +++ + 1/640 14. 100.000 col./ml. de Klebsiella pneumoniae PND RAD +++ 1/640 15. 100.000 col./ml. de E. coli PNB Normal + ++ 1/320 16. 100.000 col./ml. de Enterobacter oloacae PNB Residuo + ++ 17. 100.000 col./ml. de Pseudomonas aeruginosa PNB RPD +++ 18. > 100.000 col/mi. de Proteus mirabilis PNB Residuo +++ 19. > 100.000 col./ml. de Proteus rettgeri ·, . PNB RAI +++ 20. 100.000 col./ml. de E. coli ...

PND Normal + + + 21. 100.000 col./ml. de E. coli PNI RPI ++ ++ 22. 100.000 col./ml. de E. coli PND Normal - 1/80

TABLA II. - Comparación del Urocultivo U.I.V., Cistografía, A.C.B. y Títulos de Anticuerpos Séricos en 14 pactentes con P.N.A.

Urocultivo UIV Cistografía ACB Tít. antic.

l. 100.000 col./ml. de Proteus retrgeri PND Normal ++++ 2. 3.000 col./ml. de E . coli PND Normal ++++ 1/40 3. 10.000 col./ml. de E. coli PNI Normal ++++ 1/1280 4. 100.000 col./ml. de E. coli PND RPD ++++ 1/40 5. 100.000 col./ml. de Pseudomonas aeruginosa Normal RPD +++ 6. 100.000 col./ml. de Klebsiella pneumoniae PNB Normal +++ + 7. 100.000 coL/mil. de E. coli PND Residuo +++ + 1/320 8. 100.000 col./ml. de E. coli PNI Normal +++ 1/640

RPB 9. 100.000 col./ml. de Pseudomonas aeruginosa Normal RAB +++

10. 100.000 col. /ml. de E. coli PND Normal ++ 1/320 11. 35.000 col./ml. de Proteus vulgaris Normal RAI ++ ++ 12. 5.000 col./ml. de E. coli PND Normal ++++ 13. 100.000 col./ml. de E. coli PNB Normal +++ 1/40 14. 100.000 col./ml. de E. coli PNI Normal +++ 1/640

TABLA III. - Comparación del Urocultivo, U. l. V., Cistografía, A.C.B. y Título de Anticuerpos Séricos en 11 pacientes con Infecciones urinarias bajas

Urocultivo UIV Cistografía ACB Tít. antic. -

l. 100.000 col./ml. de Proteus mirabilis Normal Normal - 1/20 2. 100.000 col./ml. de Pseudomonas aeruginosa Normal Normal - 1/10 3. 100.000 col./ml. de E. coli Normal Normal - 1/10 4. 100.000 col./ml. de Pseudomonas aeruginosa Normal Normal - 1/10 5. 100.000 col./ml. de E. coli Normal Normal - 1/20 6. 100.000 col./ml. de Pseudomonas aeruginosa Normal Normal - 1/10 7. 100.000 col./ml. de E. coli Normal Normal - 1/40 8. 100.000 col./ml. de Citrobacter sp Normal Normal - 1/10 9. 100.000 col./ml. de E. coli Normal Normal - 1/20

10. 100.000 col./ml. de E. coli Normal Normal - 1/20 11. 100.000 col. /ml. de Proteus rettgeri Normal Normal - 1/40

TABLA IV. - Títulos Séricos de 35 pacientes con infección urinaria (ACB positivos y negativos)

Títulos séricos 1/10 1/20 1/40 1/80 1/160 1/320 1/640 1/208 1/2560 T.

ACB Positivos o o 3 3 1 6 7 2 2 24 ACB Negativos 5 4 2 o o o o o o 11

Total 5 4 5 3 1 6 7 2 2 35

854 ANALES DE MEDICINA

Los títulos de anticuerpos sencos realizados en 35 pacientes se muestran en la tabla IV los títulos (frente a los gérmenes aislados en orinas de los enfermos) estudiados en 15 personas sanas fueron ~ 1/160.

Los gérmenes aislados en los urocultivos aparecen en la tabla V. En 18 casos hemos observado una fluorescencia de + + + +, en 16 de + + +,y en 1 de++ (fig. 3).

TABLA V.- Gérmenes aislados en los urocultivos de pacientes con pielonefritis crónica (PNC), pielonefritis aguda (PNA) e in-

lección urinaria ba¡a (IUB)

PNC PNA IUB Total

E. coli 7 9 5 21 Providencia stuartii 3 o o 3 Proteus rettgeri 1 1 1 3 Proteus mirabilis 2 o 1 3 Proteus vulgaris o 1 o 1 Klebsiella pneumoniae 1 1 o 2 Enterobacter cloacae 1 o o 1 Citrobacter sp o o 1 1 Pseudomonas aeruginosa 7 2 3 12

Total 22 14 11 47

DISCUSIÓN.- El estudio de estos 47 pacientes ha demostrado la eficacia de la determinación del ACB en el diagnóstico de la pielonefri­tis en su fase inicial.

Este método lo utilizamos de rutina en nuestro servicio por su viabi­lidad, exactitud y por la presencia temprana de ACB en orina.

La aparición de los anticuerpos séricos es más lenta que la de los ACB los cuales se detectan al comenzar la bacteriuria. Por contrapar­tida los títulos de anticuerpos séricos descienden de una forma paula­tina sin guardar una cronología inmediata con la curación del proceso.

Quizá la ventaja más sobresaliente de este método frente a los anteriores consiste en que algunos pacientes con pielonefritis no tienen una respuesta inmunológica humoral y no obstante el ACB es positivo, lo que pone en evidencia la producción local de anticuerpos, confirma­da por los trabajos de CoTRA, 5 LEHMANN y col. 6 y BÉGUÉ. 7

A lo largo del estudio de este método hemos introducido variantes a la técnica original, hacia las que encauzaremos nuestras futuras expe­riencías.

A. PUJOL Y COLS. ANTIBODY COATED BACTERIA 855

CoNCLUSIÓN. -Nuestros resultados confirman los de VIRGINIA THOMAS en cuanto a que el A CB es un método sencillo, rápido y eficaz para el diagnóstico de las infecciones utinarias agudas o crónicas, siem­pre y cuando se puedan visualizar los gérmenes en el sedimento urinario.

Sesión del día 13 de mayo de 1975

Servicio de Urología de la C. S. «Príncipes de España» J. LIÑARES, P. ALOMAR (Servicio de Microbiología).

BffiLIOGRAFIA

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