Análisis de mutaciones de EGFR en DNA circulante como ... · Análisis de mutaciones de EGFR en...

M Ó N I C A M A C Í A S C O N D E

D E P A R T A M E N T O D E B I O Q U Í M I C A C L Í N I C A

C L Í N I C A U N I V E R S I D A D D E N A V A R R A

Análisis de mutaciones de EGFR en DNA

circulante como biomarcador de seguimiento en

pacientes con cáncer de pulmón

independientemente del tipo de tratamiento.

Congreso Nacional Laboratorio Clínico 2018

Chan, B.A. et al (2015) Transl Lung Cancer Res.

Cáncer de pulmón

EGFR


Epidermal

growth factor

receptor

(EGFR)

ErlotinibGefitinibAfatinib

Sharma, S.V. et al (2007) Nat Rev Cancer

Osimertinib


Novello, S. et al (2016) Ann Oncol.

Metastatic non-small-cell lung cancer:

ESMO Clinical Practice Guidelines for

diagnosis, treatment and follow-up.

La biopsia líquidarepresenta una alternativa

válida a la rebiopsia tisular

cfDNA


Cobas EGFR Mutation test v2

• Ensayo multiplex basado en la tecnología ARMS (amplificación pot

PCR de alelos específicos)

• 42 mutaciones en exones 18, 19, 20, and 21 de forma simultánea

• Técnica estandarizada y aprobada para uso clínico (FDA)

• Resultados expresados en Plasma Semi-Quantitative Index (SQI)

▫ Una serie de valores aporta información sobre la tendencia en el número de

copias mutadas

▫ Permite un análisis dinámico durante el seguimiento de la terapiaCongreso Nacional Laboratorio Clínico 2018

ObjetivosCongreso Nacional Laboratorio Clínico 2018

Analizar las mutaciones en el gen EGFR en DNA circulante en pacientes con NSCLC con mutaciones previamente conocidas en tejido

Valorar la utilidad del kit multi-target Cobas EGFR Mutation Test v2 como una técnica complementaria en el seguimiento de pacientes tratados con TKIs y/o quimioterapia.

Comparar los resultados semicuantitativos obtenidos por cobas con el número de copias mutadas/mL obtenido por digital droplet PCR (ddPCR).Congreso Nacional Laboratorio Clínico 2018

Material y métodosCongreso Nacional Laboratorio Clínico 2018

Pacientes

• 19 adenocarcinoma

• 2 carcinoma escamoso

21 pacientes con NSCLC

estadios III-IV

• 13 hombres (58 ± 12 años)

• 8 mujeres (63 ± 11 años) Edad y sexo

• 17 pacientes con del19

• 4 pacientes con p.L858R

• 1 paciente con p.T790M

21/21 con mutaciones en EGFR en tejido

• 52% nunca fumadoresHábito tabáquicoCongreso Nacional Laboratorio Clínico 2018

Recogida de muestras

Basal

Mejor Respuesta

Progresión

• Todos los pacientes

fueron tratados con

TKIs (20 tratamientos)

y/o quimioterapia

clásica (10

tratamientos).


Plasma obtention

• Doublecentrifugation

• 2 mL EDTA-plasma

CfDNAextraction

• Cobas DNA Sample Preparation Kit

• MagMAX Cell-Free DNA Isolation kit

CfDNAquantification

• Qubit 2.0 Fluorometer

CfDNAfragment size

analysis

• Agilent 2100 BioAnalyzer

EGFRmutationanalysis

• Cobas® EGFR Mutation test v2

• 42 mutations in exons 18, 19, 20 and 21

• Digital DropletPCR

• L858R, del19, T790M

Workflow


ResultadosCongreso Nacional Laboratorio Clínico 2018

Concentración y caracterización de

cfDNA

175,2 ± 8,78 bp

Ausencia de DNA

genómico

[cfDNA]= 280 ± 190 µg/L


Cobas EGFR Mutation test v2

N e g a t iv e P o s it iv e

0 .0

0 .2

0 .4

0 .6

1 .0

1 .5

2 .0

M u ta t io n in c fD N A a n d c o n c e n tra t io n

cfD

NA

(n

g/u

L)

21 pacientes EGFR

positivos

12 pacientes positivos

(57%)

12/12 concordancia con el patrón observado en

tejido

9 pacientes negativos

Tejido

Sangre


SQI durante el tratamiento

B a s a l B e s t

R e s p o n s e

P ro g re s s io n

0

5

1 0

1 5

2 0

S Q I

p < 0 .0 1 p < 0 .0 1

B a s a l

T K I

B .R .

T K I

P ro g re s .

T K I

B a s a l

C h e m o

B .R .

C h e m o

P ro g re s .

C h e m o

0

5

1 0

1 5

2 0

S Q I

p < 0 .0 1 p < 0 .0 1 p < 0 .0 1 p < 0 .0 1

E G F R -T K I C h e m o th e r a p yCongreso Nacional Laboratorio Clínico 2018

Concentración de cfDNA durante la

terapia

B a s a l B e s t

R e s p o n s e

P r o g e s s io n

0

1 0 0

2 0 0

3 0 0

4 0 0

5 0 0

c fD N A a n d re s p o n s e


p.T790M durante el tratamiento

• 2/21 fue detectada a nivel basal y continuó siéndolo durante la terapia

• 4/21 (21%) negativos a nivel basal pero aparición durante el tratamiento

▫ 3 durante la quimioterapia

▫ 1 en tratamiento con EGFR-TKIs


Cobas vs ddPCR

Cualitativa Cuantitativa

d d P C R

P o s it iv e

d d P C R

N e g a t iv e

0

5

1 0

1 5

2 0

Nu

mb

er o

f s

am

ple

s

C o b a s : P o s it iv e

C o b a s : N e g a tive

9

2

6

1 8

R² = 0,1424

0

100

200

300

400

500

600

700

800

900

0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20

cop

ies/

mL

SQICongreso Nacional Laboratorio Clínico 2018

ConclusionesCongreso Nacional Laboratorio Clínico 2018

Conclusiones1. El análisis del gen EGFR en DNA circulante presenta utilidad en pacientes con

mutaciones previamente conocidas en tejido.

2. El análisis de cfDNA de manera secuencial permite evaluar el estado mutacional

en tiempo real del paciente, monitorizando la eficacia de la terapia así como la

detección temprana de resistencias.

3. Se demuestra la aparición de la mutación de resistencia p.T790M tanto durante el

tratamiento con EGFR-TKIs como en pacientes tratados con quimioterapia

clásica.

4. La medición seriada del SQI presenta utilidad en la monitorización de la terapia ,

sin embargo, no encontramos correlación entre este índice y la cuantificación

absoluta del número de copias mutadas obtenida por ddPCRCongreso Nacional Laboratorio Clínico 2018

•González, Álvaro•Alegre, Estibaliz•Sendino, Teresa•Mateos, Beatriz

Laboratorio de Bioquímica. Clínica Universidad de Navarra

•Patiño, Ana•Alkorta, Gorka

Unidad de Genómica. CIMA LAB Diagnostics

•Gil-Bazo, Ignacio•Perez-Gracia, Jose Luis•Andueza, Mapi

Departamento de Oncología. Clínica Universidad de Navarra

• Roche Diagnostics España• DIANA

FinanciaciónMuchas Gracias


Análisis de mutaciones de EGFR en DNA circulante como ... · Análisis de mutaciones de EGFR en...

Documents

Transcript of Análisis de mutaciones de EGFR en DNA circulante como ... · Análisis de mutaciones de EGFR en...