OBTENCIN DE CEPAS SILVESTRES DE Pleurotus spp. DEL ESTADO DE MORELOS Y SU CULTIVO SOBRE SUBPRODUCTOS AGROINDUSTRIALES Y

ESQUILMOS AGRCOLAS

Ma. de Lourdes ACOSTA-URDAPILLETA y Francisco Abel MEDRANO-VEGA

Centro de Investigaciones Biolgicas (CIB), Laboratorio de Micologa, Universidad Autnoma del Estado de Morelos (UAEM), Cuernavaca, Morelos, Mxico, Cdigo

Postal 62209, correo electrnico: urdapilletal@yahoo.com, paco15@graffiti.net

Palabras clave: produccin, hongo seta, substratos, eficiencia biolgica

RESUMEN

En la presente investigacin se estudiaron 23 cepas dicariticas de Pleurotus spp. del estado de Morelos las cules estn depositadas en el cepario de hongos del Laboratorio de Micologa del Centro de Investigaciones Biolgicas de la Universidad Autnoma del Estado de Morelos del CIB-UAEM (clave HEMIM Herbario Micolgico de Morelos); la recoleccin de especimenes se realiz en los municipios de Cuernavaca, Tepoztln, Yautepec, Temixco y Tlaquiltenango. Las especies de Pleurotus aisladas y cultivadas son: P. ostreatoroseus (7 cepas), P. ostreatus (4 cepas) y Pleurotus sp. (12 cepas). En cuanto a substratos, 18 especimenes silvestres recolectados se encontraron sobre cazahuate y las cepas HEMIM-D y HEMIM-E sobre ciruelo y laurel de la India, respectivamente. Las cepas se cultivaron en esquilmos agrcolas como: pajas de trigo, avena y arroz; olote, rastrojo y tamo de maz; cascarilla de cacahuate y vaina de frijol, adems se utiliz como substrato agroindustrial el bagazo de caa de azcar y como substrato alternativo el acahual. Se evalu el patrn de produccin por cepa, obteniendo: inicio de fructificacin (en das), nmero de cosechas, caractersticas fenotpicas de los hongos cosechados y eficiencia biolgica (%). El comportamiento de las cepas dependi del substrato empleado y la especie cultivada, la eficiencia biolgica vari de 186% (HEMIM-1 sobre tamo de maz) a 8.6% (HEMIM-K sobre cascarilla de cacahuate), destacando el uso de las pajas de trigo, avena y arroz como substratos convencionales para cultivar Pleurotus spp., por lo que representan una alternativa para producir alimento en las comunidades del estado de Morelos.

INTRODUCCIN

El cultivo de hongos comestibles en Mxico ha adquirido importancia debido al problema de escasez de alimentos que existe en la actualidad en nuestro pas; en especial el cultivo de las setas (trmino aplicado en Mxico para referirse a los hongos del gnero Pleurotus), estos hongos tambin son conocidos popularmente como orejas blancas, orejas de palo, orejas de patancn, orejas de cazahuate y orejas de izote. Mxico es pionero en el cultivo de este gnero en Amrica Latina ya que dicha actividad inici en los aos 70, desde entonces el inters por su propagacin y consumo ha ido en aumento. Actualmente Mxico produce cerca de

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2 mil toneladas de setas anualmente, lo cul equivale aproximadamente al 50 por ciento de la produccin total de Amrica Latina (Gaitn-Hernndez et al., 2002). El estado de Morelos cuenta con una considerable variedad de tipos de vegetacin y por lo tanto, con una gran diversidad de especies fngicas. Sin embargo, la contaminacin, deforestacin, incendios y otras causas han disminuido la produccin de hongos silvestres comestibles. El estudio de cepas silvestres del gnero Pleurotus ocupa hoy en da una posicin relevante tanto en los programas de manejo integrado de recursos como en los de conservacin biolgica, ya que adems de ser una alternativa de produccin de alimentos para las comunidades, las cepas silvestres representan parte del germoplasma silvestre existente en el estado de Morelos. Para impulsar la evaluacin de cepas nativas de Morelos, la autora inici desde 1984 estudios relacionados con el aislamiento y cultivo de cepas de Pleurotus spp. silvestres del estado de Morelos, coadyuvando con la formacin de recursos humanos (tesistas) as como la asesora de diferentes trabajos de investigacin, que dieron como resultado el cultivo de 23 cepas dicariticas de Pleurotus spp. sobre diversos subproductos agroindustriales y esquilmos agrcolas, con el fin de buscar cepas silvestres productivas, resistentes a contaminantes, enfermedades y mejor adaptadas a las condiciones de la regin.

MATERIALES Y MTODOS

La recoleccin del material biolgico se realiz en distintas zonas del estado de Morelos, para el aislamiento de cepas se utiliz tanto el mtodo vegetativo (para los especimenes recin recolectados) como el multiesprico (para las esporas almacenadas en refrigeracin). El aislamiento vegetativo consisti en tomar un fragmento del contexto del cuerpo fructfero de aproximadamente 2 a 4 mm el cul se inocul en cajas Petri con medio de cultivo estril, las cajas se incubaron a 25 C en oscuridad para favorecer el crecimiento micelial (Acosta et al., 1988). Para el aislamiento multiesprico se obtuvo primero la esporada sobre papel filtro estril, para posteriormente tomar un fragmento de aproximadamente 1 cm2, que se sumerge en 100 ml de agua destilada estril fra, agitndose para que las esporas se disuelvan en el lquido. De esta dilucin, con una pipeta, se toman 0.5 ml y se colocan en cajas Petri con medio de cultivo. La caja se mueve ligeramente para distribuir homogneamente el agua con las esporas en todo el medio. Las cajas se incuban a 25 C en oscuridad durante 5 a 8 das (Gaitn-Hernndez et al., 2002). Para la preparacin de inculo o semilla de cada cepa obtenida se utiliz granos de trigo previamente lavados y hervidos en agua durante 20 minutos aproximadamente, posteriormente se dren el exceso de humedad y se le adicion 0.5% de Ca(OH)2 (cal) y 2% de CaSO4 . 2H20 (yeso) colocndose en bolsas de polipapel 500g de trigo ya preparado, ste se esteriliz a 121 C por 1 hora. Una vez que alcanzaron la temperatura ambiente, las bolsas fueron inoculadas con 50g de trigo colonizado por cada una de las cepas a evaluar, el material sembrado se incub a 25 C hasta su total colonizacin. Los substratos utilizados para el cultivo de las cepas de hongos fueron fraccionadas para mejorar su tamao de partcula. Las pajas de trigo, avena y arroz se cortaron con machete en secciones de 10 a 15 cm aproximadamente. El olote de maz y el acahual se fragmentaron con una picadora mecnica; los substratos tamo de maz, bagazo de

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caa de azcar, vaina de frijol y cascarilla de cacahuate no se les modific su tamao de partcula. Los substratos fueron pasteurizados por inmersin en agua a 80 C durante una hora y sembrados con las cepas silvestres en bolsas de plstico de 40 x 60 cm (Martnez-Carrera et al., 1984). Durante el proceso de fructificacin se evaluaron las siguientes variables:

1. Aparicin de la primera, segunda, tercera y cuarta cosecha (segn el caso), en das.

2. Nmero de cosechas. 3. Caractersticas fenotficas de los hongos cosechados. 4. Eficiencia biolgica (EB) determinada siguiendo a Tschierpe y Hartmann

(1977) con la siguiente frmula:

EB = Peso fresco de los hongos producidos x 100 Peso seco del substrato empleado al momento de la inoculacin

RESULTADOS La recoleccin de especimenes silvestres se realiz en el estado de Morelos en los municipios de Cuernavaca, Tepoztln, Yautepec, Temixco y Tlaquiltenango (Fig. 1).

Figura 1. Sitios de recoleccin de especimenes silvestres de las 23 cepas cultivadas de Pleurotus spp.

ESTADO DE GUERRERO

ESTADO DE MXICO

0 10 20 KM

ESTADO DE PUEBLA

ESTADO DE MXICO

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Las especies de Pleurotus aisladas son: P. ostreatoroseus (7 cepas), P. ostreatus (4 cepas) y Pleurotus sp. (12 cepas). De los especimenes de Pleurotus recolectados en campo, 18 se encontraron sobre cazahuate, uno sobre ciruelo (Prunus domestica) y otro sobre laurel de la India (Tabla I). Tabla I. Especie, clave de la cepa y sitios de recoleccin de especimenes

silvestres de Pleurotus spp. en el estado de Morelos

Especie Clave HEMIM Sitio de recoleccin Substrato silvestre

Pleurotus ostreatus 1 Cuernavaca, Mor. Cazahuate P. ostreatoroseus 12a Estado de Morelos Cazahuate P. ostreatus 32 Estado de Morelos Cazahuate P. ostreatus 41 Estado de Morelos Cazahuate P. ostreatus 42 Estado de Morelos Cazahuate P. ostreatoroseus 101 Santa Catarina, Tepoztln, Mor. Esquilmo P. ostreatoroseus 102 Santa Catarina, Tepoztln, Mor. Paja de arrozP. ostreatoroseus 103 Tepoztln, Mor. Cazahuate P. ostreatoroseus 104 Tepoztln, Mor. Esquilmo P. ostreatoroseus 105 Tepoztln, Mor. Cazahuate P. ostreatoroseus 106 Santa Catarina, Tepoztln, Mor. Cazahuate Pleurotus sp. A Santa Catarina, Tepoztln, Mor. Cazahuate Pleurotus sp. B Santa Catarina, Tepoztln, Mor. Cazahuate Pleurotus sp. C Santa Catarina, Tepoztln, Mor. Cazahuate Pleurotus sp. D Cocoyoc, Yautepec, Mor. Ciruelo Pleurotus sp. E Palmira, Temixco, Mor. Laurel de la

India Pleurotus sp. F Huautla, Tlaquiltenango, Mor. Cazahuate Pleurotus sp. G Ocotitln, Tepoztln, Mor. Cazahuate Pleurotus sp. H Norte de la UAEM, Cuernavaca, Mor. Cazahuate Pleurotus sp. I Norte de la UAEM, Cuernavaca, Mor. Cazahuate Pleurotus sp. J Unidad Biomdica de la UAEM,

Cuernavaca, Mor. Cazahuate

Pleurotus sp. K Norte de la UAEM, Cuernavaca, Mor. Cazahuate Pleurotus sp. L Norte de la UAEM, Cuernavaca, Mor. Cazahuate P. = Pleurotus HEMIM = Herbario Micolgico de Morelos UAEM = Universidad Autnoma del Estado de Morelos Los esquilmos agrcolas evaluados son: paja de trigo, paja de avena, paja de arroz, olote de maz, rastrojo de maz, tamo de maz, cascarilla de cacahuate y vaina de frijol. El subproducto agroindustrial utilizado fue bagazo de caa de azcar, adems se evalu el acahual (Titonia tubaeformis) como substrato alternativo para el cultivo del hongo. En la tabla II se muestra la produccin de las siete cepas de P ostreatoroseus cultivadas sobre vaina de frijol, olote de maz y pajas de avena, arroz y trigo. La primera cosecha se obtuvo a los 12 das a partir

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de la siembra (cepa HEMIM-12a sobre paja de avena y la ms tarda a los 28 das (cepa HEMIM-12a sobre vaina de frijol), el resto de las cepas presentaron la primera cosecha entre los 14 y 25 das (Tabla II). La eficiencia biolgica tuvo una variacin de 28.9% (cepa HEMIM-102 sobre paja de trigo) a 77.3% para la cepa HEMIM-12a cultivada sobre paja de avena (Tabla II), el resto de las cepas variaron entre 36.4% y 75%. Las cepas cultivadas de P. ostreatoroseus presentaron 4 cosechas a excepcin de la cepa HEMIM-12a con 3 cosechas. Tabla II. Produccin de hongos sobre distintos substratos con las 7 cepas

de P. ostreatoroseus cultivadas y sus eficiencias biolgicas. Cosechas (g)

Especie Clave HEMIM Substrato evaluado

1 cosecha

(das) 1 2 3 4 EB (%)

Vaina de frijol 28 474.0 208.0 68.0 - 75.0Paja de avena 12 290.0 300.0 183.0 - 77.3Paja de arroz 14 239.0 229.0 148.0 - 61.6

Pleurotus ostreatoroseus

12a

Olote de maz 15 305.0 118.0 82.0 - 50.5P. ostreatoroseus 101 Paja de trigo 25 329.5 112.2 161.9 148.1 71.6P. ostreatoroseus 102 Paja de trigo 24 108.5 46.5 84.5 215.3 28.9P. ostreatoroseus 103 Paja de trigo 22 450.4 128.7 116.4 152.6 72.2P. ostreatoroseus 104 Paja de trigo 17 334.2 52.1 58.8 31.8 41.6P. ostreatoroseus 105 Paja de trigo 19 231.3 87.9 82.7 49.0 36.4P. ostreatoroseus 106 Paja de trigo 19 275.1 124.8 96.6 141.7 61.2EB = Eficiencia biolgica HEMIM = Herbario Micolgico de Morelos En cuanto a las caractersticas fenotpicas de los hongos cosechados, se pudo apreciar que P. ostreatoroseus conserv su caracterstico color rosa (Fig. 2), cabe destacar que estos hongos son apreciados por su excelente presentacin y sabor caracterstico a hongo silvestre en el mercado. Figura 2. Cuerpo fructfero de Pleurotus ostreatoroseus sobre paja de trigo

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El patrn de produccin de las 4 cepas de P. ostreatus se muestra en la tabla III, la primera cosecha la obtuvo la cepa HEMIM-41 sobre paja de trigo a los 15 das despus de la siembra y la cepa con ms das para iniciar la fructificacin fue la HEMIM-1 cultivada sobre tamo de maz (45 das). Las cuatro cepas de P. ostreatus presentaron un total de 3 cosechas por bolsa. La produccin expresada en EB vari de 15.7% para la cepa HEMIM-1 cultivada sobre bagazo de caa de azcar, a 186% de EB para la misma cepa creciendo sobre tamo de maz (Tabla III). Tabla III. Eficiencia biolgica obtenida por las 4 cepas de P. ostreatus

cultivadas sobre distintos substratos. Cosechas (g) Especie Clave HEMIM

Substrato evaluado

1 cosecha (das) 1 2 3

EB (%)

Tamo de maz 45 549.0 259.0 122.0 186.0Olote de maz 25 305.0 118.0 32.0 50.5

Pleurotus ostreatus 1

Bagazo de caa 18 55.0 60.0 42.0 15.7P. ostreatus 32 Paja de trigo 15 129.2 57.2 111.0 34.1P. ostreatus 41 Paja de trigo 18 236.8 236.4 173.2 74.2P. ostreatus 42 Paja de trigo 18 109.3 36.0 34.0 20.6EB = Eficiencia biolgica HEMIM = Herbario Micolgico de Morelos Las caractersticas morfolgicas de los carpforos cosechados de las cepas silvestres de P. ostreatus fueron las caractersticas de la especie y en general son adecuadas para la produccin comercial (Fig. 2). El patrn de produccin que presentaron las cepas de Pleurotus sp. silvestres cultivadas sobre los distintos substratos muestra que la cepa HEMIM-F creciendo sobre paja de trigo present fructificacin temprana obteniendo la primera cosecha a los 15 das despus de la siembra, esta misma cepa present fructificacin tarda (39 das) cuando se utiliz la cascarilla de cacahuate como substrato (Tabla IV). Todas las cepas y substratos evaluados obtuvieron hasta una cuarta cosecha a excepcin de la cepa HEMIM-K cuando se cultiv sobre cascarilla de cacahuate. La eficiencia biolgica de las cepas de Pleurotus sp. silvestres vari de 97% (cepa HEMIM-K sobre paja de trigo) a 8.6% para la misma cepa pero cultivada sobre cascarilla de cacahuate (Tabla IV).

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Tabla IV. Eficiencia biolgica obtenida de las 12 cepas silvestres de Pleurotus sp. cultivadas en distintos substratos.

Cosechas (g) Especie Clave HEMIM Substrato evaluado

1 cosecha (das) 1 2 3 4

EB (%)

Pleurotus sp. A Paja de trigo 16 245.0 116.8 270.8 268.8 90.2Pleurotus sp. B Paja de trigo 17 144.4 323.4 252.0 145.2 86.5Pleurotus sp. C Paja de trigo 17 195.2 259.6 221.2 276.8 95.2Pleurotus sp. D Paja de trigo 25 242.8 98.0 156.0 27.6 52.4Pleurotus sp. E Paja de trigo 20 149.6 163.6 181.6 114.0 60.8

Paja de trigo 15 277.2 218.0 233.2 182.0 91.0Acahual 26 339.0 173.0 139.6 116.0 82.5

Cascarilla de cacahuate

39 108.6 63.0 127.0 94.0 12.9

Pleurotus sp. F

Rastrojo de maz 35 218.8 139.4 85.5 76.5 53.6Pleurotus sp. G Paja de trigo 16 346.8 179.2 195.2 169.2 89.0Pleurotus sp. H Paja de trigo 16 310.0 156.0 222.6 65.4 75.4Pleurotus sp. I Paja de trigo 17 364.4 180.2 192.6 112.8 85.0Pleurotus sp. J Paja de trigo 18 208.0 166.8 175.2 160.0 71.0

Paja de trigo 16 350.8 215.6 247.6 156.0 97.0Acahual 32 181.0 106.0 174.0 95.0 41.5

Cascarilla de cacahuate

27 99.0 35.2 21.0 - 8.6

Pleurotus sp. K

Rastrojo de maz 27 395.4 147.6 190.6 85.5 95.0Pleurotus sp. L Paja de trigo 16 333.2 211.0 209.4 86.4 84.0EB = Eficiencia biolgica HEMIM = Herbario Micolgico de Morelos Los cuerpos fructferos de Pleurotus spp. silvestres presentaron consistencia tanto suave como correosa, destaca en todas las cepas evaluadas el caracterstico olor fngico de los hongos silvestres (Fig. 3). Figura 3. Espcimen silvestre de Pleurotus sp. creciendo sobre cazahuate

(cepa HEMIM-K)

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DISCUSIN Es importante destacar la evaluacin del germoplasma silvestre del estado de Morelos, una de las ventajas de utilizar cepas silvestres de la regin es que dicho material biolgico est ms adaptado a las condiciones ambientales locales; cabe mencionar que todas las cepas evaluadas presentaron fructificacin entre 15 y 38 das despus de la siembra (a excepcin de 2 cepas HEMIM-I y HEMIM-K cuando se cultivaron sobre tamo de maz y cascarilla de cacahuate), considerndose como cepas de fructificacin temprana con base en lo propuesto por Paredes et al. (1996). Cabe destacar que al cultivar cepas silvestres con fructificacin temprana se reducen los ciclos de cultivo, esto constituye una ventaja debido a que se obtendran por lo tanto ms cosechas por ao. Algunas de las cepas evaluadas produjeron hasta la cuarta cosecha siendo la primera y segunda cosecha las de mayor peso, disminuyendo en la tercera y cuarta cosecha, como lo mencionan otros autores (Mata y Gaitn-Hernndez, 1995., Gutirrez et al., 1996 y Cedano et al., 1993). Estos datos adquieren relevancia en el cultivo comercial, ya que sera poco rentable mantener una muestra despus de tres cosechas. El patrn de produccin de las cepas silvestres fue adecuado (Guzmn et al., 1993), ya que 18 evaluaciones de EB superaron el 70%. Los mejores substratos para el cultivo de cepas de Pleurotus spp. silvestres del estado de Morelos fueron: las pajas de trigo y avena, la vaina de frijol y el rastrojo de maz. En base a los resultados obtenidos del cultivo de diversas cepas silvestres de Pleurotus spp. del estado de Morelos se puede apreciar que dichas especies se desarrollaron favorablemente sobre material econmicamente accesible tales como esquilmos y subproductos agroindustriales, tal como lo reportan Martnez-Carrera et al. (1984), por lo que representa una alternativa para la produccin de alimento en algunas comunidades del estado de Morelos.

AGRADECIMIENTOS

Los autores agradecen a los compaeros del Laboratorio de Micologa y tesistas por la recoleccin de especimenes de hongos y su apoyo desinteresado en el trabajo; del mismo modo un reconocimiento especial a la Universidad Autnoma del Estado de Morelos, principal institucin promotora de la Investigacin.

REFERENCIAS Acosta L., Bustos G. y Portugal D. (1988). Aislamiento y caracterizacin de cepas de Pleurotus ostreatus y su cultivo en residuos agroindustriales en el Estado de Morelos. Rev. Mex. Mic. 4,13-20. Cedano M., Martnez M., Soto-Velazco C. y Guzmn-Dvalos L. (1993) Pleurotus ostreatoroseus (Basidiomycotina, Agaricales) in Mxico and its growth in agroindustrial wastes. Crypt. Bot. 3,297-302. Gaitn-Hernndez R., Salmones D., Prez R., y Mata G. (2002). Manual prctico del cultivo de setas, aislamiento, siembra y produccin. Instituto de Ecologa. p. 56.

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Gutirrez I., Prez Y., Klibansky M., Altuna B., y Gonzlez L. (1996). Aplicacin de fitohormonas al cultivo de Pleurotus. Micol. Neotrop. Apl. 9,107-115. Guzmn G., Mata G., Salmones D., Soto-Velazco C. y Guzmn-Dvalos. L. (1993). El cultivo de los hongos comestibles. Instituto Politcnico Nacional, Mxico D.F. p. 245. Mata G. y Gaitn-Hernndez R. (1995). Cultivo de Pleurotus en hojas de caa de azcar. Rev. Mex. Mic. 11,17-22. Martnez-Carrera D., Quirarte M., Soto C., Salmones D. y Guzmn G. (1984). Perspectivas sobre el cultivo de hongos comestibles en residuos agroindustriales en Mxico. Bol. Soc. Mex. Mic. 19,207-219. Paredes P., Leal H., Ramrez R., y Arias-Garca A. (1996) Criterios de seleccin de cepas de Pleurotus spp. para mejorar la competitividad de la produccin comercial. Micol. Neotrop. Apl. 9,67-79. Tschierpe H. J. y Hartmann K. (1977). A comparison of different growing methods. Mushroom Journal 60,404-416.

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RESULTADOS Sitio de recoleccinPleurotus ostreatus1 cosecha (das)Cosechas (g)1234

1 cosecha (das)Cosechas (g)123El patrn de produccin que presentaron las cepas de Pleurotus sp. silvestres cultivadas sobre los distintos substratos muestra que la cepa HEMIM-F creciendo sobre paja de trigo present fructificacin temprana obteniendo la primera cosecha a los 15 das despus de la siembra, esta misma cepa present fructificacin tarda (39 das) cuando se utiliz la cascarilla de cacahuate como substrato (Tabla IV). Todas las cepas y substratos evaluados obtuvieron hasta una cuarta cosecha a excepcin de la cepa HEMIM-K cuando se cultiv sobre cascarilla de cacahuate. La eficiencia biolgica de las cepas de Pleurotus sp. silvestres vari de 97% (cepa HEMIM-K sobre paja de trigo) a 8.6% para la misma cepa pero cultivada sobre cascarilla de cacahuate (Tabla IV).

1 cosecha (das)CCosechas (g)

E1234DISCUSIN REFERENCIAS