Práctica N° 1.

Hidrolisis ácida de carbohidratos y valoración de azucares reductores.

1. Fundamento:

La hidrólisis ácida de los carbohidratos se fundamenta en la destrucción de los enlaces glucosídicos de los alimentos sólidos por acción del ClH que permite la liberación de azucares simples en forma de glucosa oxidable, la que puede valorarse con una solución de NaOH, en presencia de la solución reductora de Fellings y un indicador como el azul de metileno.

2. Objetivo:

Verificar el rompimiento de los enlaces glucosídicos del carbohidratos valorando la glucosa liberada en una muestra de harina.

3. Materiales y reactivos:Vaso de precipitación de 250 mlErlenmeyer de 250 mlBuretaPipetas graduadas y volumétricasProbeta de 100 mlBaño de MariaClH al 10%NaOH al 10% y 0,1 NReactivo de FellingsSolución de patrón de glucosa 10 %Indicador azul de metilenoIndicador rojo de metilo

4. Procedimiento:1. Sometemos a calentamiento en baño de Maria a 50ºC por 60 minutos, 10 g de muestra carbohidratada (harina) pesada previamente en un erlenmeyer de 250 ml, donde se adiciona 175 ml de agua destilada y 25 ml de ClH.

2. Se enfría la solución en el chorro de agua se filtra y se lleva a neutralidad con 25 ml de NaOH al 10%, en presencia de rojo de metilo.

3. Se adiciona 25 ml de solución de Fellings y 10 ml de solución patrón de glucosa, y se somete nuevamente en baño de Maria por 15 minutos.

4. Se enfría la solución y se adiciona 0.5 ml de azul de metileno diluido y desde una bureta se deja caer en la solución gota a gota NaOH 0,1 N. Hasta obtener una leve decoloración o cambio del mismo.

5. Se registra el volumen de hidróxido consumido en la valoración y se calcula el porcentaje de glucosa oxidada a partir de la siguiente relación.

(ml Fellings – ml NaOH 0,1N) x 0.32 x 100 % G O = --------------------------------------------------------- Peso de muestra

5. ConclusionesNuestro grupo no pudo realizar la respectiva valoración, pues no usamos el reactivo correcto en la valoración.

Grupo N° 1.

Preparación de reactivos:

1. 50 ml de Cl H al 10%Mezclamos 5 ml de ClH en 45 ml de agua destilada.

2. 75 ml de NaOH al 10%Mezclamos 7,5 g de NaOH en 75 ml de agua destilada.

3. 20 ml de H2SO4

Mezclamos 0,2 ml de H2SO4 en 18,8 ml de agua destilada.

PRÁCTICA 2.

ACTIVIDAD DIASTÁTICA DE LOS CARBOHIDRATOS

Fundamento:La técnica se fundamenta en la capacidad fermentativa que poseen los carbohidratos debido a la reacción enzimática que se desarrolla durante el proceso de la oxidación para la liberación de azucares simples.

Objetivo:Determinar la capacidad diastática de los principales azucares oxidados

Materiales y reactivos: ErlenmeyerPipeta graduada y volumétricaProbeta de 100 mlBuretaBaño de MaríaSolución buffer pH 4.2; 6.2Solución de ácido acético Cloruro de potasioSulfato de ZincÁcido SulfúricoFerricianuro de potasioTungstato de sodioIoduro de potasioAlmidón solubleSolución de Tiosulfato de sodio 0.1 N.

Procedimiento:;1. En un erlenmeyer de 250 ml se pesa 10 gramos de muestra carbohidratada, se adiciona 100 ml de solución buffer y se agita fuertemente hasta obtener una emulsión.

2. Se somete a baño de María por 60 minutos a 50ºC, se enfría la solución y se adiciona 10 ml de SO4H2 1%; 10 ml de Tugnstato de sodio 12 %; se agita y se filtra.

3. Con una pipeta volumétrica se transfiere a otro erlenmeyer 10 ml del extracto filtrado, se agrega 10 ml de Ferricianuro de potasio 1.5%. y somete nuevamente a baño de María por 15 minutos

4. Se enfría la solución, se adiciona 25 ml de solución ácida, 10 ml de IK y 1 ml de almidón soluble y se valora la glucosa liberada con S2O3Na2 01 N.

5. Se registra la actividad diastática para los diferentes azucares oxidables a partir del consumo de Tiosulfato multiplicado por el factor diastático por cien para referirnos a porcentaje, sobre el peso de la muestra:

Factores diastático:

Glucosa 2.4 gr/mlLactosa 1.6 gr/mlFructosa 0.8 gr/ml