4 Informe Aislamiento Por El Metodo de Estriado

“AÑO De la integración nacional del

reconocimiento de nuestra diversidad”

EAP:

INGENIERÍA AMBIENTAL

tema:

Catedra:

MICROBIOLOGIA GENERAL

Catedratico:

Bglo. Mg CORDERO AZABECHE, Jorge

Integrantes:

AGUSTÍN BALDEON GABY HUISA ALTAMIRANO DEISY MOLINA VILCAS IMELDA ORELLANA CERRÓN PAMELA SÁEZ LANASCA RUTH SALAZAR HUÁNUCO JOEL. CAMARGO COLQUE CHAGUA .NEHEMÍAS

CULTIVO DE MICROORGANISMO

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CULTIVO DE MICROORGANISMOS CULTIVO DE MICROORGANISMOS

MICROBIOLOGÍA GENERAL

Este presente trabajo está dedicado a nuestros padres por la abnegada labor que desarrollan en bien de sus hijos y a nuestro docente por brindarnos sus conocimientos.

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Indice:

1. Introducción……………………………………………………………………………………..02

1.1. Objetivos generales……………………………………………………………………….02.

1.2. Objetivos especificos……………………………………………………………………..02

2. Marco teorico / estrillado/………………………………………………………………..02

2.1. Materiales……………………………………………………………………………………….02

2.2. Procedimiento…………………………………………………………………………………02

2.3. Resultado………………………………………………………………………………………..02

2.4. Resultado de discusiones…………………………………………………………………02

2.5. Conclusiones……………………………………………………………………………………02

3. Marco teorico / diseminacion/…………………………………………………………..02

3.1. Materiales……………………………………………………………………………………….02

3.2. Procedimiento…………………………………………………………………………………02

3.3. Resultado…………………………………………………………………………………………02

3.4. Resultado de discusiones…………………………………………………………………02

3.5. Conclusiones…………………………………………………………………………………….02

4. Marco teorico / estrillado/………………………………………………………………….02

4.1. Materiales…………………………………………………………………………………………02

4.2. Procedimiento………………………………………………………………………………..02

4.3. Resultado………………………………………………………………………………………….02

4.4. Resultado de discusiones………………………………………………………………….02

4.5. Conclusiones…………………………………………………………………………………….02

BIOGRAFIAS………………………………………………………………………………………….02

o ANEXOS…………………………………………………………………………………….02


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CULTIVO DE MICROORGANISMOS

INTRODUCCIÓN:

El crecimiento de los microorganismos no se puede estudiar individualmente

debido a su tamaño tan pequeño, por lo que es necesario recurrir a medios

nutritivos artificiales, donde se puedan desarrollar rápidamente y producir

grandes poblaciones. En estas condiciones se pueden manipular y efectuar

las investigaciones sedeadas.

Muchas especies bacterianas son tan parecidas morfológicamente que es

imposible diferenciarlas solo con el uso de microscopio; en este caso, para

identificar cada tipo de bacteria, se estudiaran sus características

bioquímicas sembrándolas en medios de cultivos especiales. Algunos medios

contienen un producto que inhibe el crecimiento de la mayoría de las

especies.

Los medios nutritivos donde se desarrollan y multiplican los

microorganismo contienen nutrientes necesarios para su crecimiento, y se

denominan medios de cultivo, cuyos componentes son muy variados.

En general los medios son ricos en proteínas no específicas, con el fin de

estimular el crecimiento de los microorganismos.


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OBJETIVO GENERAL:

Aislar bacterias por el método de estriado, diseminación y difusión.

OBJETIVO ESPECIFICO:

Emplear la metodología adecuada para cada tipo de muestra. Diferenciar bacterias Gram (+) y Gram (-).

MARCO TEORICO

I. CULTIVO DE MICROORGANISMOS

El cultivo de microorganismo consiste en proporcionarles las condiciones físicas químicas y nutritivas adecuadas para que puedan multiplicarse de forma controlada. En general podemos distinguir cultivos líquidos y sólidos en función a las características del medio y cultivos discontinuos y continuos en función a su disponibilidad de nutrientes.

1.-SIEMBRA Y AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS

Gracias a la aplicación de los medios de cultivo, se ha llegado a conocer ampliamente el comportamiento cultural y fisiológico de la variada flora microbiana que pulula en los ambientes, permitiéndose la identificación específica.

a.- Siembra y Aislamiento de Microorganismos.

Concepto de Siembra: acondicionamiento de un microorganismo en un medio de cultivo

Aislamiento: permite la separación de microorganismos al estado de pureza a partir de una MUESTRA PROBLEMA.

Trasplante: la separación primaria de !a cepa a un medio de cultivo apropiado en tubo, que puede ser líquido o sólido. Se conserva la cepa pura y por tanto trasplantes en medios especiales, se logran conocer las propiedades culturales y bioquímicas y como resultado, la identificación específica.

Los trasplantes pueden ser:

De líquido a líquido De líquido a sólido De sólido a líquido De sólido a sólido

Referencias bibliográficas manual de microbiología Cultivos de Micro organismo


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Cultivo microbiano Un cultivo es el crecimiento de poblaciones microbianas de forma controlada en un medio artificial.

Medio de cultivo Soporte que va a contener los nutrientes necesarios, así como unas condiciones óptimas de pH y humedad que permite el desarrollo y crecimiento de microorganismos.

Clasificación de los medios de cultivos

En función de su consistencia

Sólidos: al medio de cultivo sólido se le añade un agente gelificanté o solidificante. Se preparan en Erlenmeyer, se dejan enfriar y luego se pueden pasar o bien a una placa o bien a un tubo.

Los gelificantés más habituales son:

Agar Agar: es un alga que se caracteriza por ser inerte frente a los microorganismos y porque es líquido a la temperatura de ebullición y solidifica entre los 45-50ºC.

Líquidos o caldos: contiene los nutrientes y, en lugar de añadir el agar, tienen el agua que se utiliza para diluir el medio de cultivo. Se preparan en tubo.

Semisólidos: contienen agar (<5-10%). Se utilizan cuando queremos observar movilidad bacteriana. Se hace en tubo y se utiliza la siembra en picadura con asa recta.

Caldo nutritivo: extracto de carne + peptona + agua

Agar nutritivo: extracto de carne + peptona + agua + agar.

En función del uso que se le da

Enriquecidos: son aquellos medios en los cuales a un medio base se le añaden determinadas sustancias nutritivas que son necesarias para el crecimiento de un microorganismo exigente. Ejemplo: agar-sangre.

De enriquecimiento: se utilizan solamente cuando se sospecha que el microorganismo de la muestra se encuentra en un número muy pequeño. Se le aporta los nutrientes y se espera que crezcan de 6 a 8 horas. Esto se utiliza, por ejemplo, cuando se sospecha la contaminación en alimentos por Salmonella.

Diferenciales: incorpora determinadas sustancias que nos permiten diferenciar entre dos tipos de microorganismos. Ej. El agar de sal y manitol: nos permite diferenciar en el caso de los staphylococos, los que utilizan el manitol en su metabolismo de los que no. Si lo utilizan originan ácidos, con lo que el pH disminuye y el indicador cambia de color.

Selectivos: llevan incorporadas determinadas sustancias que inhiben el crecimiento de un microorganismo y facilita el crecimiento del microorganismo que nos interesa. Ej. Agar de sal y manitol: el NaCl (5%) inhibe el crecimiento de ciertos m.o y facilita el desarrollo de otros que crecen mejor en ese medio.


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Transporte y mantenimiento: se utilizan cuando la muestra no se puede procesar inmediatamente después de haberla tomado.

Condiciones de almacenamiento de los medios de cultivo

La mayoría de los medios de cultivo se encuentran deshidratados y éstos se deben conservar de la siguiente forma:

http://Informe-3-Bioquimica-Medios-de-Cultivo

Método de estriado:

Es el método más fácil y la más usada pata obtener cultivos. Para ello, con una aza de siembra se toma una muestra de la población mixta y a continuación se hacen estrías sobre la superficie de un medio solido preparado en placa Petri. Conforme se van haciendo zigzag con el asa, debe tener una separación unas de otras de 1-3 mm para que cada vez se deposite en la superficie del medio menos microorganismo. La distribución puede ser por estrías simples/ un solo plano por todo el medio/ el número de estrías depende la cantidad de inoculo.

Estriado simple: esteriliza el filamento del aza de siembra y toma la parte de la caja de Petri que contiene el medio de cultivo sembrando. Cercas del mechero espera que se enfrié el aza y toma una colonia de la placa. Regresa la caja a su tapadera, ahora, toma un placa con agar estéril y con cuidado de no romper el gar, inocula la muestra en un extremo de la placa y con el aza en posición ligeramente horizontal realiza las estrías muy juntas.


http://Informe-3-Bioquimica-Medios-de-Cultivo/

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SIEMBRA DE MICROORGANISMOS


Para la siembra de estos microorganismos utilizamos la técnica del ISO PAGO,

BUCAL los materiales que utilizamos son un Isopo esterilizado, una placa Petri y nuestra muestra a sembrar “bacterias que se encuentra en la zona bucal”

Técnica de la siembre la bacterias bucales, realizamos el paso del Isopo en forma de sic sac en tres partes de la placa Petri 1 junto 2 semi junto y el 3 de manera separada

Muestra de bacterias bucales, rotuladas y debidamente aislada para su respectivo crecimiento

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MATERIALESHisopos

Placas petri con agar

Lápiz graso o plumón

MATERIALES PARA REALIZAR EL AISLAMIENTO POR EL METODO DE ESTRIADO


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PROCEDIMIENTO (AISLAMIENTO POR EL METODO DE ESTRIADO)

Recopilar las muestras respectivas de los diversos microorganismos existentes:

en la mano, cara y zona bucal; con hisopos respectivamente.

Tomar con la mano izquierda la placa Petri con agar, descansando la base sobre

los dedos, medio, angular o meñique; el índice actúa de bisagra y con el pulgar;

levantar la tapa lo suficiente para el paso del hisopo cargado. esta operación se

realiza a la altura del mechero encendido.

Con los hisopos se distribuye el inoculo por estrías en ZIGZAG con escasa

separación unas de otras.


Recopilación de las muestras

Cogiendo la placa petri

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Dejar caer la tapa con el control de los dedos pulgar e índice.

Rotular los datos sobre el dorso de la placa petri sembrada así numero de

grupo tipo de siembra y fecha.

Rotulando


Distribuyendo el inoculo

Muestra

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Incubar a 37°C por 24 horas. Colocar las placas en la estufa en posición

invertida.

RESULTADOS (FALTA)


Incubar a 37°C

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AISLAMIENTO POR DISEMINACION (LECHE)

Se practica mediante la pipeta de Pasteur estéril para la toma del inoculo. Esta por capilaridad permite el ascenso del inoculo a discreción el cual es depositado sobre el medio solido contenido en la placa , una asada o una gota de la muestra a sembrar que luego se extenderá por toda la superficie del medio de cultivo con una espátula de Drigalsky.

La placa Petri del cultivo debe destaparse lo suficiente como para permitir la estrecha penetración de la espátula de siembra, así se evite la contaminación.

MATERIALES:

INSTRUMENTOS DE LABORATORIO

ESPATULA DE DRIGALSKY

PIPETA PASTEUR

PLACA PETRI

MUESTRA


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LECHE

PROCEDIMIENTO:

AISTLAMIENTO POR DISEMINACION (LECHE)


Desechar la espátula en el frasco bacteriano. Tomar el inoculo de la muestra problema

con la pipeta Pasteur y depositar una gota sobre el medio de la placa Petri, que descansa en posición normal sobre la mesa.

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Introducir la espátula de drigalsky y diseminar la gota por la superficie del medio, no pasando dos veces por el mismo plano.

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AISLAMIENTO POR DIFUSION

El método que vamos a utilizar consiste en realizar diluciones sucesivas de la muestra

en condiciones de esterilidad con objeto de sembrar después cantidades conocidas de

las mismas en una serie de placas de Petri. Considerando que alguna de las diluciones

será tal que al distribuir una parte de ella en la placa, originará colonias aisladas.

Contando el número de colonias, el volumen sembrado en la placa y la dilución

correspondiente, podremos calcular el número de unidades formadoras de colonias

presentes en la muestra inicial.

Técnica que consiste en obtener una suspensión de la mezcla de microorganismos y

hacer diluciones seriadas que se vierten en una placa Petri hasta conseguir colonias

aisladas. Se debe trabajar, como siempre, en condiciones estériles, flameando la boca

de los tubos antes y después de introducir la pipeta, en las proximidades del mechero.

Mediante una pipeta estéril, tomar una muestra del cultivo mixto, y depositar 1ml en

el primer tubo (dilución 10-1). Agitar hasta conseguir una suspensión homogénea.

Tomar otra pipeta estéril, y transferir de esta primera dilución 0,1ml al siguiente (10-

2), y así sucesivamente. A partir del tubo con dilución 10-2 y 10-4, con una pipeta

estéril, inocular en placa Petri tras incubar se podrán obtener colonias aisladas.


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MATERIALES:

EQUIPOS:

HORNO

son dispositivos eléctricos utilizados para esterilización que forman parte del equipamiento de laboratorio

BALANZA ELÉCTRICA

Se utiliza para pesar pequeñas cantidades de masa, en este caso para determinar el la masa de la tierra agrícola.

VORTEX Es un dispositivo simple que se usa comúnmente en los laboratorios para agitar pequeños tubos o frascos de líquido

MATERIALES DE VIDRIO:

LUNA DE RELOJ

Este instrumento en este caso nos ayudó para poder pesar la muestra.

VARILLA DE VIDRIO

La varilla de vidrio es de gran grosor y de vidrio que sirve para mover, remover, en este caso nos sirvió para homogenizar la muestra con la peptona.


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PLACAS PETRICajas cilíndricas, se emplean como recipientes de medios de cultivo.

TUBOS DE ENSAYO

Son de forma cilíndricas de vidrio por lo general, cerrado por un extremo, hay de varios tamaños; en este caso nos sirvió para la soluciones de(10-1,10-2,10-3,10-4)

PIPETAS ESTERILES

Tubos cilíndricos delgados terminados se emplean en la medición de pequeñas cantidades de líquidos, en este caso nos sirvió para tomar muestra y así depositarlas a cada soluciones que se encuentran en los tubos d ensayo

VASO PRECIPITADO

Es un recipiente que está hecho de vidrio graduado. Se usan principalmente para la preparación de disoluciones, en este caso utilizamos para la mezcla.

Solución:

• PEPTONA

Muestra:


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TIERRA AGRÍCOLA

• Traer 100 gramos

PROCEDIMIENTO


1 .- P e sa r e n la b a la n za a n a líti c a 1 0 g d e ti e rra a g r íc o la

2 .- C o lo c a r e n e l v a so d e p re c ip ita c ió n u n p o c o d e p e p to n a y lu e g o e c h a r la ti e rra a g r íc o la 1 0 g y d iso lv e r.

3 .- C o n a y u d a d e u n a p ip e ta e ste r il sa c a m o s d e l v a so d e p re c ip ita c ió n (m u e stra o r ig in a l) 1 m l d e lo d isu e lto y e c h a r a u n o d e lo s tu b o s d e e n sa y o q u e se e n c u e n tra c o n la p e p to n a d e 9 m l y h o m o g e n iz a r (1 0 -1) .

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4.- Agitamos bien el tubo de 10 -1 con la ayuda del vórtex y con una nueva pipeta estéril transferir 1ml a un segundo tubo con

9ml de la solucion 10 -1. marcarndo como la dilución 10 -2

5.- Agitamos bien el tubo 10 -2 con la ayuda del vórtex y con una nueva pipeta estéril transferir 1 ml a un tubo con 9 ml de la

solcuión 10 -2. M arcando con la dilución 10 -3

6.- Finalmente agitamos bien el tubo 10 -3 con la ayuda del vórtex y con una nueva pipeta esteril transferir 1ml a un tubo

con 9ml de la solucion 10 -3. marcando con la dilucion 10 -4

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Resultados:


7 .- P re n d e r e l M e ch e ro d e B u n se n y a b rir la p la ca P e tri co n te n id o e l a g a r n u tr ic io y co lo ca r 2 g o ta s d e la d ilu c ió n 1 0 -3 y 1 0 -4 y e sp a rc ir lo co n la e sp á tu la p a ra lu e g o se r

in cu b a d a p o r 2 4 - 4 8 h o ra s.

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CONCLUSION:

Esta técnica consiste en obtener una suspensión de la mezcla de microorganismos y hacer diluciones seriadas que se vierten en una placa Petri hasta conseguir colonias aisladas.

Tras incubamos podremos obtener colonias aisladas. El recuento de estas colonias nos permitirá conocer el número de células existentes en el cultivo original.


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