INFORMES DE LABORATORIO MICROBIOLOGÍA

ANALISIS DE COLIFORMES POR RECUENTO EN PLACA

Presentado por:

DIANA CECILIA MUÑOZBLANCA RIVEROS

ANDREA GODOY CRIALESIRMA FRANCO

Ficha: 583801

Instructora:ALEXANDRA CUCAITA

INFORME INFORME

ANALISIS ANALISIS COLIFORMESCOLIFORMES

RECUENTO EN PLACARECUENTO EN PLACASIEMBRA EN SIEMBRA EN

PROFUNDIDADPROFUNDIDAD

MARCO TEORICO

En esta oportunidad desarrollamos las prácticas de laboratorio en las cuales hicimos análisis de coliformes por recuento en placa a profundidad en frutas, verduras y hortalizas.

Para esta ocasión analizamos una lechuga que obtuvimos de los restaurantes del SENA Hotel, las cuales son utilizadas por lo general para la elaboración de sandwich y hamburguesas.

Para este análisis empleamos la Técnica de Siembra en Profundidad, en placas petri y medio de cultivo EMB.

Sabemos que las bacterias Coliformes se encuentran en el sistema digestivo (intestinos) de personas y animales de sangre caliente, que al ser expulsados del organismo se convierte en patógenas .

Al realizar el análisis de posibles coliformes en los alimentos, pretendemos identificar si estos están contaminados, con el fin de poder evitar o prevenir posibles enfermedades al consumir por medio de dichos alimentos y al mismo tiempo controlar la manipulación de los mismos.

A continuación encontraremos un informe detallado de los procedimientos y los resultados obtenidos.

OBJETIVOS

1. Uno de los objetivos básicos es seguir paso a paso las indicaciones dadas por la instructora para obtener los resultados esperados.

2. Otro objetivo muy importante para estas prácticas de laboratorio es aprender a preparar y valorar medios de cultivo y al mismo tiempo realizar un correcto reconocimiento y análisis de los microorganismos allí sembrados .

3. Reconocer y emplear correctamente las herramientas y equipos de laboratorio, para así familiarizarnos con estos y darles el uso adecuado, de forma ágil.

4. Realizar un correcto análisis de los pasos a seguir y elaborar este informe de la manera mas completa y clara.

5. Reconocer las formas y colores de los microorganismos según las normas técnicas.

6. Evaluar que la concentración de los microorganismos se encuentren en los limites permitidos según norma que le aplique.

MATERIALES UTILIZADOS

• Agua Peptonada 0.1%• Asa Bacteriológica• Balanza • Cajas Petri• Cortador de Colonias• Cuchillos y Cucharas • Erlenmeyer • Frascos tapa Azul • Gradillas•Homogenizador • Incubadora• Mechero de Bruchen• Medio de Cultivo EMB• Micropipeta• Pipetas • Pipeteador• Probetas • Tubos de Ensayo

METODOS

En esta Práctica de Laboratorio hicimos análisis de coliformes por recuento en placa y utilizamos la técnica de prueba de sedimentación en placa con siembra en profundidad.

Objetivo:Determinar coliformes totales y fecales en una muestra de hojas de lechuga fresca.

Procedimiento:Para iniciar la practica de laboratorio, hicimos el proceso de limpieza y desinfección de áreas, equipos, herramientas e implementos de trabajo.

En este caso preparamos 6 cajas petri de 20 ml C/U, por esta razón tomamos en una Probeta 120 ml de agua desionizada, la llevamos a un frasco tapa azul y le agregamos 4,5g de Agar EMB.

Tómanos 115 ml de agua desionizada en una probeta y la llevamos a un frasco tapa azul y agregamos 0,9775 ml de Nacl y 0,115 gr de peptona.

Luego de seleccionar los implementos de laboratorio, y de preparar el agar y el agua peptona, autoclavamos junto con las cajas petri, los tubos de ensayo y las puntas de la micropipeta, para esterilizarlos.

Después de autoclavar, tomamos las 6 cajas petri y las marcamos en su parte exterior con un marcador no borrable, indicando el tipo de Agar (EMB) y la dilución correspondiente, (10-1, 10-2 y 10-3).

Nos acercamos al mechero y tomamos el frasco tapa azul con el agua peptonada y le agregamos 10 g de la muestra de Lechuga a analizar, lo volvimos a tapar y agitamos constantemente para que se disuelvan los microorganismo que contiene. Luego tomamos los tubos de ensayo y en el segundo y el tercer tubo hicimos disoluciones de 9 ml C/U, respectivamente, preparando así las disoluciones en base 10-1, 10-2 y 10-3 con una pipeta.

Posteriormente, tomamos las cajas petri ya marcadas con 10-1, 10-2 y 10-3 y utilizamos las micropipeta para agregas 1 ml de muestra en las cajas petri; Después de este paso procedimos a agregar el agar, tapamos las cajas petri y dejamos gelificar.

Para finalizar sellamos las cajas petri con cinta siliconada y las llevamos a incubación a 35º C de 24 a 48 horas.

Recuento en placa para coliformes

RESULTADOS

Recuento en placa para coliformes •120 ml H20 Desionizada•4,5 gr de Agar EMB

Agua Peptona•115 ml H20 Desionizada•0,9775 g de NaCl•0,115 g de Peptona

Aun no podemos describir estas características ya que debemos hacer una tinción de gram para poder ver su morfología.

10-1: Se observa diferente tamaño, diferente color colonias puntiformes algunas presentan halo, algunas son irregulares y no hubo buena homogenización.

10-2: Colonias mas pequeñas uniformes y con halos.

10-3: son mas pocas colonias de tamaño pequeño.

RESULTADOS

NÚMERO DE

COLONIAS

CAJAS 10-1 CAJAS 10-2 CAJAS 10-3

4020 UFC/g 1600 UFC/g 5000 UFC/g

Cajas 10-1

Cajas 10-2

RESULTADOS

Cajas 10-3

Analizando el resultado de la hortaliza (lechuga), se evaluará cada procedimiento que influye en el crecimiento bacteriano, que se obtuve en recuento por placa de coliformes totales.

Revisando cada factor influyente a este resultado se deduce que:Las actividades de fabricación, procesamiento, envase, almacenamiento de hortalizas procesadas, deben dar cumplimiento de las Buenas Prácticas de Manufactura –BPM.

La contaminación cruzada desde la producción primaria hasta su disposición, allí deben reducirse al mínimo los peligros microbianos, por conducto de los insumos agrícolas, un medio de contaminación es el agua utilizada para el riego contaminada con heces fecales de humanos y animales; esta debe ser potable tanto para su riego como para su limpieza y si aplica una desinfección por parte del productor, el personal que está en contacto directo o indirecto con las frutas y hortalizas frescas, debe aplicar las (BPF).

Otro factor influyente son las cajas utilizadas para el transporte de los vegetales deben ser solo uso o bien de materiales fáciles de lavar y desinfectar, debiendo descartar la madera en el caso de ser reutilizable.Prácticas deficientes de desinfección; condiciones inapropiadas durante empaque; higiene deficiente de los trabajadores; y el mal manejo durante almacenamiento y transporte Aunado a esto, una vez que ocurre la contaminación, muchos microorganismos patógenos poseen la capacidad de sobrevivir por largos períodos de tiempo en frutas y hortalizas frescas.

Discusión de Resultados

Algunos microorganismos son también capaces de sobrevivir a procesos de desinfección, e incluso de multiplicarse en el producto durante almacenamiento de 3,8ºC. Entre las bacterias patógenas que han sido asociadas con el consumo de hortalizas frescas se pueden mencionar Escherichia.coli, enterotoxigénica, E.coli enterohemorrágica, especies de Shigella, Salmonella, Listeria,ampilobacter, Clostridium y Staphylococcus, entre otras.

El almacenamiento de las materias primas en la fábrica debe mantenerse en condiciones que estén protegidas contra la contaminación e infestación y donde las posibilidades de alteración se reduzcan a un mínimo. Evitar que el producto esté en contacto directo con el suelo al igual realizar inspección y selección, las materias primas, antes de ser utilizadas en el proceso de elaboración deben someterse a inspección, clasificación o selección, esto para evitar una contaminación con productos que están en mal estado.

Discusión de Resultados

Al hacer el análisis de coliformes en una hoja de lechuga, la cual había sido manipulada por las personas del punto de venta de los restaurantes del SENA hotel, pudimos encontrar un alto numero de colonias, en especifico 97 de ellas en la primera caja petri.

Para tener un mayor control en el momento de utilizarla en la fábrica, en el restaurante y en casa se debe:

• Utilizar sólo productos vegetales de primera calidad, sin signos de deterioro, tales como golpes, manchas, mohos o restos de parásitos.

• Lavar bien los vegetales con agua potable, eliminando todo resto de suciedad, tierra o partes deterioradas.

• Utilizar superficies e instrumentos de corte debidamente limpios y desinfectados.

• Mantener un alto grado de higiene personal.

• En caso de consumirse en crudo (ensaladas), desinfectar los vegetales sumergiéndolos en agua potable a la que se habrá añadido unas gotas de desinfectantes o hipoclorito de uso alimentario y aclararlos posteriormente con abundante agua potable.

Conclusión

BIBLIO Y CIBERGRAFIA

CIBERGRAFÍA:

http://books.google.com.co/books?id=Nxb3iETuwpIC&pg=PA181&lpg=PA181&d=cual+es+el+signiicado+de+nmp+microbiologia&source=bl&ots=z84kuJb0hB&sigovNwtJcdewV0hKiaw60CJ0UnOU&hl=es&sa=X&ei=LwRfUoulGoza8AST8YCgDQ&vd=0CDsQ6AEwAw#v=onepage&q=cual%20es%20e%20significado%20de%20nmp20microbiologia&f=false

http://www.anmat.gov.ar/alimentos/Guia_de_interpretacion_resultados_microbologicos.pdf

http://www.ecologia.unam.mx/laboratorios/evolucionmolecular/documentos/ClseProcariontes/Alejandra/Práctica%204%20%20Medios%2

BIBLIOGRAFÍA:

Microbiología de los Alimentos – Guía de Laboratorio Mónica María Simanca 2004

Introducción a la Microbiología Torca – Funke – Case 9na Edición