Post on 01-Nov-2018
Validación de métodos en microbiología industrial y
ambiental a la luz de la ISO 17025
2
Dios mío nos llego la auditoría !!
5.4.5
VALIDACIÓN DE LOS MÉTODOS
La validación es la confirmación, a través del examen y el aporte de evidencias objetivas, de que se
cumplen los requisitos particulares para un uso especifico previsto.
• Los métodos no normalizados
• Los métodos que diseña o desarrolla.
• Los Métodos normalizados
• En el caso en que utilice métodos oficiales, métodos normalizados ométodos de organismos nacionales o internacionales reconocidos, obasados en ellos, antes de analizar cualquier muestra, los laboratoriosdeberán verificar su capacidad para cumplir de forma satisfactoriatodos los requisitos establecidos en dichos métodos
¿Qué se valida?
Método analítico:Desarrollado por un
organismo de normalización u otro organismo reconocido
cuyos métodos son generalmente aceptados
por el sector técnico correspondiente.
(Ref. ILAC-G18).
Método analítico:Desarrollado por un tercero oque ha sido adaptado por el
laboratorio a partir de un método normalizado.
(Ref. ILAC-G18).
METODONORMALIZADO
METODONO
NORMALIZADO
• El laboratorio que va a utilizar un método normalizado debe verificarlo contra sus
especificaciones de validación, atendiendo los requisitos para el aseguramiento de la calidad, y no
necesita validarlo.
• El laboratorio que va a modificar un método normalizado debe revalidarlo
para demostrar que las especificaciones del método original no se ven afectadas
por la modificación introducida. •
METODO NORMALIZADO
CAMBIO MENOR
CAMBIO MAYOR
El laboratorio debe validar todos los métodos que utiliza para confirmar que son
aptos para el fin previsto.
La validación debe ser tan amplia como sea necesario para satisfacer las necesidades de
aplicación.
Se debe registrar los resultados obtenidos, el procedimiento utilizado para la validación
y una declaración sobre la aptitud del método para el uso previsto.
CUANDO REVALIDAR UN METODO
Definir los requerimientos analíticos
Planeación y y ejecución de ensayos
Emplear los datos
Análisis estadístico
Comparación con requisitos de uso previsto
GENERAR EL INFORME DONDE SE DECLARE EL
CANCE DE LA VALIDACION Y SU ACPETACION
Como VALIDAR UN METODO
MUY IMPORTANTE !!!
NO EXISTE UNA RECETA , FORMULA O PROTOCOLO GENERAL PARA VALIDAR UN METODO ANALITICO
SOLO LINEAMINETOS GENERALES O GUIAS !!!!
BASADOS EN EVIDENCIA
EJEMPLO : CALIDAD EN AGUA ISO/TR 13843:2000
CONDICIONES DE ACEPTACIÓN
CONDICIONES QUE EL METODO DEBE CUMPLIR PARA SER VÁLIDO
DEFINIDAS POR EL CLIENTE
DEFINIDAS POR EL MISMO METODO
ESTANDAR
DEFINIDAS POR EL MISMO LABORATORIO
• Ej Ejecución del Protocolo
• Obtención recolección y tabulaciones los datos
• Manejo estadístico de los datos
• Definir los Métodos a validar
• Las matrices
• Establecer el protocolo
• Asignar responsables
• Fechas de ejecución
• Asignación de recursos
• Análisis de la información Generación del concepto
A P
HV
TIPOS DE VALIDACION
VALIDACION PRIMARIA
VALIDACION SECUNDARIA
ESTABLECE
VERIFICA
MANUFACTURAGRUPOS
CIENTIFICO
USUARIO DEL METODO
ESPECIFICACIONES NUMERICAS Y DESCRIPTIVAS
REUNE EVIDENCIA OBJETIVA DE
CUMPLIMIENTO
ESPECIFICACIONES DE DESEMPEÑO
PRECISION
EXACTITUD
CONCORDANCIA
CORRESPONDENCIA
CONDICIONES(r) Repetibilidad
(R) Reproducibilidad
METODO DE REFERENCIA
ERROR ALEATORIODS
DSR CV%
% RECUPERACION
RESPUESTA METODO EN
ESTUDIO
MUESTRAS IDENTICAS
ESPECIFICACIONES DE DESEMPEÑO
ROBUSTEZ
SELECTIVIDAD
INSENSIBILIDAD FRENTE AL CAMBIO
DIFERENCIA DE SEÑALES
INTERFERENCIAS
ESPECIFICACIONES DE DESEMPEÑO
SENSIBILIDAD
ESPECIFICIDAD
VP
VN
MUESTRAS ADICIONADAS CON LA
CEPA PURA
MUESTRAS BLANCO
TABLAS DE 2 X 2
ESPECIFICACIONES DE DESEMPEÑO
INCERTIDUMBRE (U)
TIPO A
TIPO B
• ESTANDAR O TIPICA
• RELATIVA• COMBINADA• EXPANDIDA • RELACION DE
EXACTIUTD
OTROS : INTERVALO DE VALIDACION
INTERVALO DE RECUENTOS CONFIABLES
CUANTITATIVO
CUALITIATIVO PRESENCIA AUSENCIA
ININTERVALO DE CONCENTRACION OPTIMO PARA LA VALIDACION INTERVALO DE CONCENTRACION PARA LA APLICACION
DETECTORES SOLIDO
LIQUIDO
OTROS : CONTROL DE CALIDAD
CEPAS ATCC : evidencia de recuperación
R Y r : duplicados precisión
GRAFICOS DE CONTROL
CONTROL DE CALIDAD INTERNO
ESQUEMA DE EVALUACION EXTERNO PRUEBAS DE
APTITUD
API ERA
PICAP
PREMISAS
• Analito Microbiológico
• Interacciones del detector
VIVO
VARIABLE DISCRETA
Medio liquido Cohabitación por micro flora en el mismo tubo
Medio solido Apiñamiento enmascaramiento
ROBUSTEZ
ESTRESS BIOLOGICO
ESTRESS TERMICO
EFECTOS DE MATRIZ
COMPOSICION DE LA FLORA MICROBIANA DE LA MUESTRA
CALIDAD DE LOS SUBSTRATOS
IDONEIDAD DE LOS ANALISTAS
PREMISAS
VARIACION
1.MUESTRAS: MATRIZ PROPIEDADES FISICOQUIMICAS Y SU FLORA MICROBIANA
2.EL TALENTO HUMANO (PERSONAL)
3.PREANALITCA : PREPARACION DE LA MUESTRA, ALMACENAMIENTO REFRIGERACION, HOMEGENIZACION
4.CONDICIONES DE INCUBACION: TEMPERATURA, TIEMPO, HUMEDAD, ATMOSFERA,
5. MEDIO DE DETECCION Liquido /solido
PREMISAS
LA VARIACION ESTADISTICA BASICA DE LOS RECUENTOS PUEDE MODELARSE MATEMATICAMNTE POR DISTRIBUCION DE POISSON
En medios líquidos NMP, factor e dilución número de tubos , se puede trabajar con la formula de COCHRAN
Se pueden realizar transformación logarítmicas y trabajar con estadística paramétrica , media , DSR,
PREMISAS
PREMISAS
• LA VALIDACION DEBE SIMULAR LA RUTINA TANTO COMO SEA POSIBLE
• LAS MUESTRAS NATURALES CONSTITUYEN EL MATERIAL DE ENSAYO OPTIMO
• METODO VALIDO MEJOR RECUPERACIONMENOR % FPMENOR % FN
MUESTRA S
• LAS MUESTRAS NATURALES CONSTITUYEN EL MATEIRAL DE ENSAYO OPTIMO
• MATERIAL DE REFERENCIA CERTIFICADO
• MUESTRAS ADICIONADAS
• MUESTRAS BLANCO ( MUESTRAS NATURALES QUE NO CONTENGAN EL ANALITO OBJETO FP
CONVINCENTE
SUFICIENTE
REPRESENTATIVO
ESTADISTICA PARAMETRICA
NUMERO DE MUESTRAS
ESPECIFICACIONESPRECISION
RECUPERACION LIMITE DE DETECCION
LIMITE DE CUANTIFICACION
SELECTIVIDADSENSIBILIDADESPECIFICIDAD
EXPRESION NUMERICA
CARACTERISITCAS DEL DESEMPEÑO QUIMIOMETRICAS
ESPECIFICACIONES
Identificación morfológica del objetoDeclaración de temperatura de incubación
Tiempo , gas, humedadMedios de cultivo : características, Ph,
Limites de trabajo Expresión de la incertidumbre
ESPECIFICACIONES DESCRIPTIVAS
LIMITE DE DETECCION LOD
CUALITATIVO P/APROBABILIDAD DE TENER UN RESULTADO
POSITIVO CUANDO ESTAMOS FRENTE A UNA DITRIBUCION DE POISSON
P(+) = 1 –e-m
LoD LIMITE DETECCION
RECUENTO
Es la concentración en la cual el método tiene la probabilidad de detectar la
presencia del analito con un nivel de confianza del 95 %
P/A
TEST DE RECUPERACION RECOVERY TEST
SELECTIVIDAD
METODO QUE PROPORCIONA RESPUESTAS PARA UN NUMERO DE COMPUESTOS QUIMICOS QUE PUEDEN O NO DISTINGUIRSE SI LA REPUESTA ES DISTINGUIBLE EL METODO ES SELECTIVO
ESPECIFICIDAD
METODO QUE PROPORCIONA UNA RESPUESTA PARA UN SOLO ANALITOMETODO QUE REPONDE UNICAMANTE AL ANLITO EN ESTUDIO
VERIFICACIÓN DE LA INCERTIDUMBRE FRENTE A LA TOLERANCIA ESPECÍFICA DE LOS MÉTODOS DE ENSAYO DE ACUERDO A LA MATRIZ EMPLEADA
INFORME DE VALIDACION
• OBJETIVO • ALCANCE • TRAZABILIDAD DE EQUIPOS• DETALLES DE INSUMOS REACTIVOS , MATERIALES DE REFERENCIA • DURACION DEL ESTUDIO • ACONDIONAMIETO DE LA MUESTRAS• CONDICIONES AMBIENTALES DE OPERACIÓN • PARAMETROS DE VALIDACION EVALUADOS • PROTOCOLO DE EVALUACION • RESULTADOS Y GRAFICOS• ANALIS DE LOS DATOS• INCERTIDUMBRE• PERSONAS QUE PARTICIPARON • CRITERIOS DE ACPTACION RECHAZO• CRITERIOS DE REVALIDACION