Validación de métodos en microbiología industrial y

ambiental a la luz de la ISO 17025

2

Dios mío nos llego la auditoría !!

5.4.5

VALIDACIÓN DE LOS MÉTODOS

La validación es la confirmación, a través del examen y el aporte de evidencias objetivas, de que se

cumplen los requisitos particulares para un uso especifico previsto.

• Los métodos no normalizados

• Los métodos que diseña o desarrolla.

• Los Métodos normalizados

• En el caso en que utilice métodos oficiales, métodos normalizados ométodos de organismos nacionales o internacionales reconocidos, obasados en ellos, antes de analizar cualquier muestra, los laboratoriosdeberán verificar su capacidad para cumplir de forma satisfactoriatodos los requisitos establecidos en dichos métodos

¿Qué se valida?

Método analítico:Desarrollado por un

organismo de normalización u otro organismo reconocido

cuyos métodos son generalmente aceptados

por el sector técnico correspondiente.

(Ref. ILAC-G18).

Método analítico:Desarrollado por un tercero oque ha sido adaptado por el

laboratorio a partir de un método normalizado.

(Ref. ILAC-G18).

METODONORMALIZADO

METODONO

NORMALIZADO

• El laboratorio que va a utilizar un método normalizado debe verificarlo contra sus

especificaciones de validación, atendiendo los requisitos para el aseguramiento de la calidad, y no

necesita validarlo.

• El laboratorio que va a modificar un método normalizado debe revalidarlo

para demostrar que las especificaciones del método original no se ven afectadas

por la modificación introducida. •

METODO NORMALIZADO

CAMBIO MENOR

CAMBIO MAYOR

El laboratorio debe validar todos los métodos que utiliza para confirmar que son

aptos para el fin previsto.

La validación debe ser tan amplia como sea necesario para satisfacer las necesidades de

aplicación.

Se debe registrar los resultados obtenidos, el procedimiento utilizado para la validación

y una declaración sobre la aptitud del método para el uso previsto.

CUANDO REVALIDAR UN METODO

Definir los requerimientos analíticos

Planeación y y ejecución de ensayos

Emplear los datos

Análisis estadístico

Comparación con requisitos de uso previsto

GENERAR EL INFORME DONDE SE DECLARE EL

CANCE DE LA VALIDACION Y SU ACPETACION

Como VALIDAR UN METODO

MUY IMPORTANTE !!!

NO EXISTE UNA RECETA , FORMULA O PROTOCOLO GENERAL PARA VALIDAR UN METODO ANALITICO

SOLO LINEAMINETOS GENERALES O GUIAS !!!!

BASADOS EN EVIDENCIA

EJEMPLO : CALIDAD EN AGUA ISO/TR 13843:2000

CONDICIONES DE ACEPTACIÓN

CONDICIONES QUE EL METODO DEBE CUMPLIR PARA SER VÁLIDO

DEFINIDAS POR EL CLIENTE

DEFINIDAS POR EL MISMO METODO

ESTANDAR

DEFINIDAS POR EL MISMO LABORATORIO

• Ej Ejecución del Protocolo

• Obtención recolección y tabulaciones los datos

• Manejo estadístico de los datos

• Definir los Métodos a validar

• Las matrices

• Establecer el protocolo

• Asignar responsables

• Fechas de ejecución

• Asignación de recursos

• Análisis de la información Generación del concepto

A P

HV

TIPOS DE VALIDACION

VALIDACION PRIMARIA

VALIDACION SECUNDARIA

ESTABLECE

VERIFICA

MANUFACTURAGRUPOS

CIENTIFICO

USUARIO DEL METODO

ESPECIFICACIONES NUMERICAS Y DESCRIPTIVAS

REUNE EVIDENCIA OBJETIVA DE

CUMPLIMIENTO

ESPECIFICACIONES DE DESEMPEÑO

PRECISION

EXACTITUD

CONCORDANCIA

CORRESPONDENCIA

CONDICIONES(r) Repetibilidad

(R) Reproducibilidad

METODO DE REFERENCIA

ERROR ALEATORIODS

DSR CV%

% RECUPERACION

RESPUESTA METODO EN

ESTUDIO

MUESTRAS IDENTICAS

ESPECIFICACIONES DE DESEMPEÑO

ROBUSTEZ

SELECTIVIDAD

INSENSIBILIDAD FRENTE AL CAMBIO

DIFERENCIA DE SEÑALES

INTERFERENCIAS

ESPECIFICACIONES DE DESEMPEÑO

SENSIBILIDAD

ESPECIFICIDAD

VP

VN

MUESTRAS ADICIONADAS CON LA

CEPA PURA

MUESTRAS BLANCO

TABLAS DE 2 X 2

ESPECIFICACIONES DE DESEMPEÑO

INCERTIDUMBRE (U)

TIPO A

TIPO B

• ESTANDAR O TIPICA

• RELATIVA• COMBINADA• EXPANDIDA • RELACION DE

EXACTIUTD

OTROS : INTERVALO DE VALIDACION

INTERVALO DE RECUENTOS CONFIABLES

CUANTITATIVO

CUALITIATIVO PRESENCIA AUSENCIA

ININTERVALO DE CONCENTRACION OPTIMO PARA LA VALIDACION INTERVALO DE CONCENTRACION PARA LA APLICACION

DETECTORES SOLIDO

LIQUIDO

OTROS : CONTROL DE CALIDAD

CEPAS ATCC : evidencia de recuperación

R Y r : duplicados precisión

GRAFICOS DE CONTROL

CONTROL DE CALIDAD INTERNO

ESQUEMA DE EVALUACION EXTERNO PRUEBAS DE

APTITUD

API ERA

PICAP

PREMISAS

• Analito Microbiológico

• Interacciones del detector

VIVO

VARIABLE DISCRETA

Medio liquido Cohabitación por micro flora en el mismo tubo

Medio solido Apiñamiento enmascaramiento

ROBUSTEZ

ESTRESS BIOLOGICO

ESTRESS TERMICO

EFECTOS DE MATRIZ

COMPOSICION DE LA FLORA MICROBIANA DE LA MUESTRA

CALIDAD DE LOS SUBSTRATOS

IDONEIDAD DE LOS ANALISTAS

PREMISAS

VARIACION

1.MUESTRAS: MATRIZ PROPIEDADES FISICOQUIMICAS Y SU FLORA MICROBIANA

2.EL TALENTO HUMANO (PERSONAL)

3.PREANALITCA : PREPARACION DE LA MUESTRA, ALMACENAMIENTO REFRIGERACION, HOMEGENIZACION

4.CONDICIONES DE INCUBACION: TEMPERATURA, TIEMPO, HUMEDAD, ATMOSFERA,

5. MEDIO DE DETECCION Liquido /solido

PREMISAS

LA VARIACION ESTADISTICA BASICA DE LOS RECUENTOS PUEDE MODELARSE MATEMATICAMNTE POR DISTRIBUCION DE POISSON

En medios líquidos NMP, factor e dilución número de tubos , se puede trabajar con la formula de COCHRAN

Se pueden realizar transformación logarítmicas y trabajar con estadística paramétrica , media , DSR,

PREMISAS

PREMISAS

• LA VALIDACION DEBE SIMULAR LA RUTINA TANTO COMO SEA POSIBLE

• LAS MUESTRAS NATURALES CONSTITUYEN EL MATERIAL DE ENSAYO OPTIMO

• METODO VALIDO MEJOR RECUPERACIONMENOR % FPMENOR % FN

MUESTRA S

• LAS MUESTRAS NATURALES CONSTITUYEN EL MATEIRAL DE ENSAYO OPTIMO

• MATERIAL DE REFERENCIA CERTIFICADO

• MUESTRAS ADICIONADAS

• MUESTRAS BLANCO ( MUESTRAS NATURALES QUE NO CONTENGAN EL ANALITO OBJETO FP

CONVINCENTE

SUFICIENTE

REPRESENTATIVO

ESTADISTICA PARAMETRICA

NUMERO DE MUESTRAS

ESPECIFICACIONESPRECISION

RECUPERACION LIMITE DE DETECCION

LIMITE DE CUANTIFICACION

SELECTIVIDADSENSIBILIDADESPECIFICIDAD

EXPRESION NUMERICA

CARACTERISITCAS DEL DESEMPEÑO QUIMIOMETRICAS

ESPECIFICACIONES

Identificación morfológica del objetoDeclaración de temperatura de incubación

Tiempo , gas, humedadMedios de cultivo : características, Ph,

Limites de trabajo Expresión de la incertidumbre

ESPECIFICACIONES DESCRIPTIVAS

LIMITE DE DETECCION LOD

CUALITATIVO P/APROBABILIDAD DE TENER UN RESULTADO

POSITIVO CUANDO ESTAMOS FRENTE A UNA DITRIBUCION DE POISSON

P(+) = 1 –e-m

LoD LIMITE DETECCION

RECUENTO

Es la concentración en la cual el método tiene la probabilidad de detectar la

presencia del analito con un nivel de confianza del 95 %

P/A

TEST DE RECUPERACION RECOVERY TEST

SELECTIVIDAD

METODO QUE PROPORCIONA RESPUESTAS PARA UN NUMERO DE COMPUESTOS QUIMICOS QUE PUEDEN O NO DISTINGUIRSE SI LA REPUESTA ES DISTINGUIBLE EL METODO ES SELECTIVO

ESPECIFICIDAD

METODO QUE PROPORCIONA UNA RESPUESTA PARA UN SOLO ANALITOMETODO QUE REPONDE UNICAMANTE AL ANLITO EN ESTUDIO

VERIFICACIÓN DE LA INCERTIDUMBRE FRENTE A LA TOLERANCIA ESPECÍFICA DE LOS MÉTODOS DE ENSAYO DE ACUERDO A LA MATRIZ EMPLEADA

INFORME DE VALIDACION

• OBJETIVO • ALCANCE • TRAZABILIDAD DE EQUIPOS• DETALLES DE INSUMOS REACTIVOS , MATERIALES DE REFERENCIA • DURACION DEL ESTUDIO • ACONDIONAMIETO DE LA MUESTRAS• CONDICIONES AMBIENTALES DE OPERACIÓN • PARAMETROS DE VALIDACION EVALUADOS • PROTOCOLO DE EVALUACION • RESULTADOS Y GRAFICOS• ANALIS DE LOS DATOS• INCERTIDUMBRE• PERSONAS QUE PARTICIPARON • CRITERIOS DE ACPTACION RECHAZO• CRITERIOS DE REVALIDACION

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